缺氧对肺腺癌细胞HIF-α1、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达变化情况.方法对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTY法检测缺氧对A549细胞增殖的影响;Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力;分别采用RT-PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF-1α和GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强.正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和、GLUT-1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P＜0.01).结论氯化钴诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平,加速肺癌细胞的生长和转移,使之进一步耐受缺氧.     

HIF-1α基因干扰对大鼠CBRH-7919肝癌细胞HIF-1α与VEGF表达影响的研究

目的:探讨沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对肝癌细胞在缺氧状态下表达HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:选用大鼠CBRH-7919肝癌细胞株作为研究对象,利用氯化钴(CoCl2)模拟缺氧状态,构建3组特异性较强的HIF-1α siRNA表达载体,采用小分子RNA干扰技术沉默细胞HIF-1α的基因表达,分别利用real time RT-PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞HIF-1α和VEGF在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:在不同浓度CoCl2模拟缺氧条件下,随着CoCl2浓度的增高及时间的推移,肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达(mRNA及蛋白水平)较常氧对照组(0 μmol/L CoCl2)显著增多,差异均有统计学意义,P＜0.05.应用3组不同HIF-1α和siRNA表达载体转染缺氧条件下的肝癌细胞后,细胞的HIF-1α和VEGF的基因(mRNA)表达量与未转染HIF-1α siRNA表达载体对照组相比较明显减少,同步检测两者的蛋白表达亦明显减少,与对照组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:缺氧可以诱导肝癌细胞HIF-1α和VEGF的表达,siRNA沉默HIF-1α能显著抑制缺氧状态下诱导的VEGF表达.     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响

目的：研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响。方法：AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）48h后Westernblot法测定A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组、AG49050μmol/L、AG490100μmol/L、CoCl2、CoCl2＋AG49050μmol/L和CoCl2＋AG490100μmol/L组）。IL-6（3.85nmol/L）处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组,IL-6组）。结果：JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显。缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著。IL-6能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。结论：在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达。JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用。     

缺氧条件下电离辐射与肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的关系

目的：探讨缺氧条件下，电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子HIF-1α及血管生成因子VEGF表达的影响。方法：将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组。缺氧组：氯化钴处理细胞模拟缺氧条件；单纯照射组：按照射率4Gy／min、总共8Gy的剂量，用x线射线照射细胞；缺氧加照射组：氯化钴处理细胞一定时间后，按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞。利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况，MTT法分析细胞存活分数，RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况。结果：细胞凋亡情况：对照组未观察到细胞凋亡的情况，缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡，单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡，但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少（P〈0．05）；MTT检测细胞存活分数排列顺序为：对照组〉缺氧组〉缺氧加照射组〉单纯照射组。HIF-1α表达情况：缺氧加照射组〉缺氧组〉对照组（P〈0．05），单纯照射组与正常组无明显差异。VEGF表达变化情况：缺氧加照射组〉缺氧组〉单纯照射组〉对照组（P〈0．05）。结论：本研究提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用，从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性。     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响

目的:研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α、VEGF蛋白表达的影响.方法:AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下(CoCl2 200μmol/L)48h后Western blot法测定A549细胞中HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组、AG490 50μmol/L、AG490 100μmol/L、CoCl2、CoCl2+AG49050μmol/L和CoCl2+AG490 100μmol/L组).IL-6 (3.85nmol/L)处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达变化(分组为对照组,IL-6组).结果:JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显.缺氧条件下(CoCl2200μmol/L)能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1α、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著.IL-6能够上调HIF-1α、VEGF的蛋白表达.结论:在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达.JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用.     

缺氧对肺腺癌细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达影响的研究

目的：探讨人肺腺癌细胞株A549在缺氧条件下HIF-1α、GLUT—1、MMP-2的表达变化情况。方法：对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟缺氧培养，采用MTT法检测缺氧对A549细胞增殖的影响；Transwell侵袭小室测定法评价缺氧下A549细胞的侵袭力；分别采用RT—PCR法和western blot、免疫组化法测定缺氧不同时间HIF—1α和GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果：A549细胞在缺氧条件下增殖能力和侵袭力较正常时增强。正常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF—1α、GLUT—1、MMP-2的表达，随着缺氧时间的延长，HIF—1α和、GLUT—1、MMP-2 mRNA和蛋白水平呈升高趋势，与正常对照组比较，各缺氧组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：氯化钴诱导缺氧可以上调HIF—1α、GLUT—1、MMP-2蛋白在肺腺癌细胞中的表达水平，加速肺癌细胞的生长和转移，使之进一步耐受缺氧。     

金水鲜胶囊联合放射治疗对肺腺癌A549细胞HIF-1α和 EGFR mRNA表达的影响

摘 要：［目的］ 研究金水鲜胶囊联合放疗对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用以及HIF-1α和 EGFR mRNA表达的影响。［方法］将处于对数期生长的A549细胞随机分为4组（空白对照组、放射治疗组、金水鲜胶囊组和放疗治疗+金水鲜胶囊组）,MTT法计算细胞生长抑制率,RT-PCR技术检测HIF-1α和EGFR mRNA的含量变化。［结果］各组肺腺癌A549细胞生长受到不同程度的抑制,以金水鲜胶囊联合放疗组最明显,差异有统计学意义（P<0.05）。除放疗组外,各组HIF-1α和EGFR mRNA表达均下降。48h时,金水鲜胶囊组及金水鲜胶囊联合放疗组与空白对照组、放疗组相比,HIF-1α和EGFR mRNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。［结论］ 金水鲜联合放疗可抑制肺腺癌细胞增殖,下调HIF-1α和EGFR mRNA的表达。     

地塞米松对低氧小鼠缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子表达的影响

背景与目的业已发现缺氧与肿瘤发生、发展关系密切。本研究的目的是观察地塞米松对低氧小鼠肺组织中缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响，探讨缺氧与血管新生的关系及地塞米松的作用机制。方法实验用雄性昆明小鼠，随机分为对照组和三个实验组（缺氧3天组、缺氧6天组、缺氧＋激素组）。用免疫组织化学技术检测小鼠肺组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达。结果缺氧组小鼠HIF-1α和VEGF蛋白表达均较对照组显著增加（P〈0．05）；缺氧＋激素组与缺氧组比较，HIF-1α和VEGF蛋白表达显著下降（P〈0．05）。HIF-1α与VEGF表达呈正相关（r=0．730，P=0．007）。结论缺氧可以上调小鼠肺组织中VEGF和HIF-1α的表达，而地塞米松可抑制低氧小鼠VEGF和HIF-1α的表达，具有抗血管生成的作用。     

缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞增殖和缺氧诱导因子-1α、血红素氧合酶-1基因表达的影响

目的构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系生长和缺氧诱导因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1alpha,HIF-1α),血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)表达的影响。方法利用氯化钴(cobaltchloride,CoCl2)构建缺氧诱导模型,以MTT试验观察不同程度缺氧条件对SW480细胞生长曲线的影响;利用RT-PCR方法测定氯化钴缺氧诱导与SW480细胞HIF-1α和HO-1基因mRNA表达的时效和量效关系。结果适度缺氧(CoCl2浓度<200μmol/L)可刺激肿瘤细胞增殖,过度缺氧(CoCl2浓度>250μmol/L)则抑制其生长;HIF-1α、HO-1基因mRNA表达与氯化钴缺氧呈明显的量效关系和时效关系;HIF-1α与HO-1基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系(相关系数r=0.786,P<0.05)和时效关系(相关系数r=0.863,P<0.05)中均存在显著的正相关性。结论缺氧可以刺激SW480细胞增殖;HIF-1α和HO-1基因的表达与肿瘤缺氧程度密切相关;HO-1的适量表达对缺氧细胞具有细胞保护作用,其过度表达可能导致细胞损伤和凋亡。     

紫云英苷通过上调PHD2抑制缺氧诱导的卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的 探索紫云英苷(ATG)抑制卵巢癌细胞HIF-1α表达及细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法 分别给予缺氧条件培养的OVCAR-8和SK-OV-3细胞ATG(ATG组)或ATG联合PHD2抑制剂IOX2(ATG+IOX2组)处理24h,并以仅缺氧培养24h的细胞为空白对照。采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组细胞HIF-1α、PHD2、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白和mRNA表达变化;以正常条件培养的细胞为阴性对照,采用缺氧试剂盒检测ATG处理后细胞缺氧状态变化;采用Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;采用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖活力。分别以梯度浓度的ATG联合梯度浓度的卡铂或顺铂处理OVCAR-8和SK-OV-3细胞72h后采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力,并进行联合效应分析。结果 缺氧培养条件下,与空白对照组相比,ATG组OVCAR-8和SK-OV-3细胞PHD2蛋白及mRNA表达均升高,细胞增殖和侵袭能力均降低,HIF-1α蛋白表达均减少,PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA表达均降低,但HIF-1α的mRNA水平以及细胞缺氧状态无明显变化;而与ATG组相比,ATG+IOX2组OVCAR-8和SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力均增加,PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA表达及HIF-1α蛋白表达均升高,但HIF-1α的mRNA水平无明显变化。此外,ATG可明显增强OVCAR-8和SK-OV-3细胞对顺铂和卡铂的敏感性,具有较好的联合效应。结论 ATG可通过上调PHD2表达,促进缺氧诱导的HIF-1α降解,进而抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。     

低氧环境下肺腺癌A549细胞对顺铂化疗抵抗的实验研究

目的:探讨低氧对肺癌A549细胞顺铂化疗抵抗作用,并分析可能机制.方法:将A549细胞分为常氧、常氧顺铂、低氧、低氧顺铂组.在常氧顺铂组和低氧顺铂组,加入不同浓度顺铂(10、40、80、100、200 μmol/L)后,采用CCK8法测定半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)和抑制率.流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡率.RT-PCR和Western Blot检测各组缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)的转录和蛋白表达变化.结果:常氧顺铂组IC50为25.82nmol/L,低氧顺铂组为39.98 nmol/L,常氧顺铂组和低氧顺铂组之间各个浓度顺铂抑制率有统计学差异(P＜0.05).低氧顺铂组的细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞较常氧顺铂组减少.RT-PCR和Western Blot显示,低氧组HIF-1α、VEGF、ERCC1转录和表达水平较常氧组明显上升(P＜0.01),顺铂作用后表达均下降,在常氧顺铂组和低氧顺铂组之间有显著差异性(P＜0.01).相关分析显示HIF-1α、VEGF、ERCC1之间有显著正相关关系(P＜0.01).结论:低氧诱导A549细胞对顺铂化疗抵抗,与低氧激活HIF-1α、VEGF及ERCC1高表达有关.     

慢性心理应激对小鼠肿瘤新生血管形成影响的观察

目的:通过建立慢性心理应激C57/B6小鼠荷瘤模型,观察应激反应对肿瘤生长、转移和血清血管内皮生长因子(VEGF)水平及肿瘤组织MVD、KDR和HIF-1α表达的影响.方法:C57/B6雄性小鼠40只分为A组(16只)、B组(16只)和C组(8只),A组移植肿瘤后每天行束缚应激;B组移植肿瘤后未行应激诱导;C组为正常对照.2周后检测肿瘤大小、质量、肺部和肝脏转移病灶数量,免疫组化(IHC)检测肿瘤新生血管局部CD31阳性细胞,计数微血管密度(MVD);ELISA法检测VEGF水平;蛋白质印迹法检测肿瘤组织局部VEGFR2(KDR)表达水平;RT-PCT检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)转录水平.结果: A组荷瘤小鼠的肿瘤质量和体积与B组相比,差异有统计学意义,P<0.05;转移病灶数量上A、B组差异无统计学意义,P>0.05.A组肿瘤局部MVD与B组相比,差异有统计学意义,P<0.05;血清VEGF水平A组较B组、B组较C组均明显升高,差异均有统计学意义,P<0.01;A、B组肿瘤组织KDR表达水平及HIF-1α转录水平,差异均有统计学意义,P<0.05.结论:长期慢性心理应激能诱导肿瘤新生血管形成,促进肿瘤增长.     

缺氧条件下YC-1对人胰腺癌细胞VEGF和GPI基因的抑制效应

目的探讨缺氧条件下3-(5’-hydroxymethyl-2’-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)基因的调控作用及其机制。方法缺氧条件下体外培养胰腺癌PC-3细胞株,免疫细胞化学染色法检测常氧和缺氧条件下缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)的表达。半定量RT-PCR检测YC-1对PC-3细胞VEGF、GPI、HIF-1αmRNA表达的调节作用。Western blot检测YC-1对PC-3细胞HIF-1α蛋白表达的调节作用。MTT法检测YC-1对缺氧PC-3细胞恶性增殖的影响。结果缺氧条件下,HIF-1α主要表达于PC-3细胞胞核内。随着YC-1浓度升高,VEGF和GPI mRNA表达、HIF-1α蛋白表达逐渐受抑,并呈明显的剂量依赖性;实验组HIF- 1αmRNA均呈强表达,其表达水平不随YC-1作用浓度的升高而降低。缺氧条件下,实验组细胞增殖抑制率均增高,100μmol／L YC-1组细胞增殖抑制率达73．28%±2．01％。结论缺氧状态下,YC-1抑制人胰腺癌PC-3细胞VEGF和GPI基因转录与其抑制HIF-1α蛋白的表达有关,YC-1能够抑制PC-3细胞生长和增殖。     

氯化钴诱导化学性低氧对经HIF-1α基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的:探讨氯化钴（CoCl2）诱导的化学性低氧对经低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） 基因转染后的大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）生物学特性的影响。方法:第3代BMSCs以及转染有HIF-1α全长基因的第 3 代BMSCs,根据低氧诱导方式不同分为4组。BMSCs组、BMSCs-HIF-1α组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在H-35低氧工作站诱导的物理性低氧环境下培养;BMSCs-CoCl2组、BMSCs-HIF-1α-CoCl2组:BMSCs或经HIF-1α基因转染后的BMSCs在CoCl2诱导的化学性低氧环境下培养。低氧培养8天后,Western blot 测定各组内HIF-1α蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期内G1/G2/S期细胞比例,统计增殖指数（PI）和凋亡率。MTT法绘制细胞生长曲线,比较细胞数目。结果:与BMSCs-HIF-1α组和BMSCs-CoCl2组比较,BMSCs-HIF-1α-CoCl2组内HIF-1α蛋白表达上调（P<0.05）,细胞周期内处于G2期和S期的细胞数目增多（P<0.05）,PI升高（P<0.05）,细胞凋亡率下降（P<0.05）。BMSCs-HIF-1α-CoCl2组细胞在培养的3~8天内,细胞数目均多于其他三组细胞（P<0.05）。结论:CoCl2诱导的化学性低氧上调了经基因转染后BMSCs内HIF-1α的蛋白表达,提高了细胞增殖能力,降低了细胞凋亡率。     

siRNA 沉默HIF-1α在缺氧状态下对食管鳞癌细胞VEGF表达的影响

 目的 观察体外乏氧培养条件下食管鳞癌细胞系EC9706中HIF-1α和VEGF的表达，探讨HIF-1α在低氧条件下对食管鳞癌血管生成的调控作用。方法 CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT-PCR、免疫组化法和免疫印迹法分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染EC9706细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果 低氧条件下，EC9706细胞HIF-1amRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而VEGFmRNA和蛋白的表达均显著升高。SiRNA转染EC9706后能够显著下调HIF-1α的基因表达，同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论 缺氧促使EC9706细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并通过转录激活VEGF的机制调控食管鳞癌血管生成。     

缺氧状态下人胰腺癌细胞对吉西他滨反应的实验研究

目的:观察缺氧状态对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响并分析其相关机制。方法:将人胰腺癌细胞SW1990分为常氧组、缺氧组、常氧+吉西他滨组和缺氧+吉西他滨组。MMT法检测各组细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Real-time PCR和Western blot分别检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、多药耐药基因(MDR-1)mRNA和蛋白的表达。结果:与常氧+吉西他滨组相比,低氧+吉西他滨组的细胞增殖率明显增加,细胞凋亡率显著下降(P<0.05);低氧组和低氧+吉西他滨组HIF-1α蛋白表达分别显著高于常氧组(P<0.05或P<0.01);与常氧组相比,低氧组和低氧+吉西他滨组的MDR1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:缺氧状态可增加人胰腺癌细胞SW1990对吉西他滨的化疗抵抗,其机制与缺氧环境可诱导HIF-1α和MDR1基因表达有关。     

CTX小剂量化疗在抗肺癌血管生成中的作用

目的：研究小剂量环磷酰胺（CTX）对肺癌血管生成的影响及其机制。方法：培养人肺腺癌A549细胞，建立裸鼠移植瘤模型，随机分为小剂量CTX组、大剂量CTX组和对照组进行化疗，观察裸鼠体重变化和抑瘤效果，免疫组化检测肿瘤微血管密度（MVD）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1 alpha，HIF-1α）和VEGF的表达。结果：小剂量组肿瘤生长缓慢，体重减轻等副作用明显小于大剂量组和对照组（P〈0．01或P〈0．05）；与大剂量组、对照组比较，小剂量组MVD、HIF-1α和VEGF表达均明显减少（P〈0．01），且小剂量组移植瘤中HIF-1α和VEGF、HIF-1α和MVD、VEGF和MVD之间均有相关性。结论：与大剂量组和对照组相比，小剂量CTX化疗组能更显著地抑制肺癌血管生成，抑瘤效果更明显，其机制可能与下调HIF-1α蛋白表达有关。     

羟基喜树碱对缺氧诱导的SiHa细胞HIF-1α及VEGF基因表达的影响

目的:研究羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)对缺氧诱导的宫颈癌SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达的影响。方法:在缺氧条件下(37℃,5%CO2,1%O2饱和度)体外培养宫颈癌SiHa细胞株,经不同浓度HCPT处理24 h后,用半定量RT-PCR法和Western印迹法分别检测细胞HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白表达变化,并设立药物处理常氧组和缺氧对照组进行比较。结果:HCPT对常氧组与缺氧组细胞的细胞毒性作用无明显差异。在常氧条件下,SiHa细胞内无HIF-1α蛋白表达,VEGF有低水平表达,HCPT处理对SiHa细胞HIF-1α和VEGF基因表达无影响;但缺氧可诱导细胞HIF-1α和VEGF基因表达明显上调;HCPT对缺氧细胞HIF-1α蛋白和VEGF mRNA及蛋白表达有明显抑制作用,其效应呈剂量依赖性,而对HIF-1αmRNA表达无明显抑制作用。结论:HCPT可抑制缺氧诱导的SiHa细胞内HIF-1α蛋白及其下游VEGF基因的高表达。     

低氧对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响及其机制

背景与目的低氧作为实体瘤的特征和重要的生存微环境,可能与化疗耐药相关.我们认为低氧与卵巢癌化疗耐药可能相关.本研究建立低氧模型,探讨低氧、低氧诱导因子1 α(HIF-1α)对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡的影响.方法体外培养的A2780细胞中加入化学性低氧诱导剂氯化钴(CoCl2),诱导并制作低氧模型.将细胞分为4组A组(对照)、B组(常氧培养加紫杉醇)、C组(低氧培养加紫杉醇)、D组(低氧培养加Decoy加紫杉醇).用诱骗法(Decoy)阻断HIF-1α功能,Western blot、RT-PCR、TUNEL和流式细胞术分别检测各组细胞HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平及细胞凋亡情况.结果CoCl2能明显增加A2780细胞HIF-1α蛋白的表达,而对其mRNA的表达无明显影响,Decoy法阻断HIF-1α的功能,对其蛋白和mRNA的表达无明显影响.TUNEL检测发现,B组凋亡指数[AI(41.12±25.65)%]显著高于C组[AI(24.12±15.19)%](P＜0.05);低氧阻断了HIF-1α功能后,D组凋亡指数[AI(35.19±21.73)%]较C组明显增加(P＜0.05).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果与TUNEL检测结果类似.结论低氧能保护A2780细胞抵抗化学治疗,HIF-1α可能在紫杉醇诱导的细胞凋亡中发挥重要的抗凋亡作用.     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF表达的影响

目的：观察缺氧诱导因子HIF—1α反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF—1α和血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法：设计针对HIF—1α RNA亚基模板序列的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynucleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α和VEGF的表达的影响。RT-PCR方法检测HIF-1α和VEGF mRNA水平，免疫组化和免疫印迹方法检测HIF-1α和VEGF蛋白表达情况。结果：与常氧组比较。单纯缺氧组及SODN缺氧组的HIF-1α转录水平未见明显改变。蛋白表达水平却随缺氧时间延长明显升高：而VEGF mRNA以及蛋白的表达水平较常氧组均显著增强。然而在ASODN缺氧组。HIF-1α、VEGFmRNA活性以及蛋白的表达水平明显减弱，且HIF-1α蛋白水平与VEGF转录活性有明显的相关性。结论：在缺氧环境下，转染HIF-1α反义寡核苷酸能够抑制HIF-1α活性。从而使VEGF mRNA和蛋白的表达水平明显下降。