豚鼠进展性近视眼巩膜中Smad3和Ⅰ型胶原的动态表达变化

背景 巩膜重塑过程中导致眼轴的伸长是轴性近视进展的主要病理机制之一.研究证实转化生长因子β1(TGF-β1)参与巩膜重塑过程,而Smad3是TGF-β1的下游信号转录基因之一,探讨其在近视眼巩膜重塑过程中的作用对于近视发病机制和防治研究具有重要意义. 目的 研究近视眼巩膜重塑过程中Smad3和Ⅰ型胶原的表达情况,探讨TGF-β1-Smad3-Collagen Ⅰ信号途径在近视巩膜胶原重塑中的作用.方法 将出生后7d的豚鼠75只任意分为空白对照组(25只)和形觉剥夺性近视(FDM)组(50只).FDM组豚鼠采用半透明乳胶遮盖左眼的方法制备单眼FDM模型,右侧未遮盖眼作为自身对照.FDM组分别遮盖2、4、6周,另一组动物遮盖4周后去遮盖1周,分别于遮盖前及上述时间点采用检影法测量各组豚鼠双眼屈光度,采用A型超声手动模式测量豚鼠眼轴长度.于上述时间点分别处死5只豚鼠并制备巩膜组织切片,分别采用免疫组织化学法及逆转录PCR法检测各组豚鼠巩膜组织中Smad3和Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA的相对表达量.结果 遮盖前空白对照组与FDM组豚鼠屈光度均为远视状态,差异无统计学意义(P＞0.05),空白对照组豚鼠远视屈光度逐渐下降,而FDM组豚鼠在遮盖前,遮盖2、4、6周及遮盖4周后去遮盖1周屈光度从(+2.09±0.31)D逐渐改变为(-1.23±0.69)、(-4.17±0.59)、(-7.07±0.56)和(-4.30±0.58)D,眼轴长度从(5.93±0.39)mm逐渐改变为(6.62±0.36)、(7.30±0.34)、(7.99±0.32)和(7.21±0.36) mm,与空白对照组比较,遮盖后各时间点FDM组豚鼠近视度明显升高,眼轴测量值明显增加,差异均有统计学意义(均P＜0.01).与自身对照组比较,遮盖2周、4周、遮盖4周后去遮盖1周及遮盖6周时FDM组近视度均明显升高,眼轴明显增长,差异均有统计学意义(均P＜0.05).遮盖前空白对照组与FDM组豚鼠后极部巩膜组织中Ⅰ型胶原和Smad3蛋白及其mRNA相对表达量的差异均无统计学意义(均P＞0.05),FDM组豚鼠遮盖2、4、6周及遮盖4周后去遮盖1周巩膜组织中Ⅰ型胶原和Smad3蛋白及其mRNA相对表达量均明显低于空白对照组和自身对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).豚鼠巩膜组织中Ⅰ型胶原蛋白与Smad3蛋白及其mRNA相对表达量均呈明显正相关(蛋白:r=0.993,P＜0.05;mRNA:r =0.954,P＜0.05). 结论 FDM豚鼠模型眼随着遮盖时间的延长近视度明显增加,眼轴明显增长,豚鼠巩膜组织中Smad3和Ⅰ型胶原的表达相应减弱,且Smad3和Ⅰ型胶原表达量的变化趋势高度一致.Smad3和Ⅰ型胶原可能通过TGF-β1-Smad3-Collagen Ⅰ信号途径参与近视眼巩膜重塑过程的调控.     

转录活性蛋白1在实验性近视眼豚鼠巩膜重塑中对I型胶原表达的调控作用

目的　研究近视巩膜重塑中转录活性蛋白1（specificity protein 1,Sp1）作为转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）下游信号转录因子的表达情况和调节I型胶原（Collagen Ⅰ）表达的作用。方法　出生7 d的有色豚鼠75只,随机选取50只左眼使用6号无色半透明乳胶气球作为头套诱导形觉剥夺性近视（form deprivation myopia,FDM）动物模型为FDM组,右眼作为自身对照组,另外25只不作处理为正常组。记录各组豚鼠屈光度及眼轴长度变化。Western blot和RT-PCR检测正常组和FDM组豚鼠遮盖后0周（遮盖前）、2周、4周、6周及遮盖4周去遮盖1周（4/-1周）时巩膜中Sp1和Collagen Ⅰ蛋白和mRNA的表达变化,并分析两者的关系。结果　FDM组豚鼠眼随着遮盖时间延长,由遮盖前远视状态逐渐变为近视状态,眼轴长度也逐渐增长。与正常组相比,FDM组巩膜内Sp1和Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达均下调,且随遮盖时间的延长,其表达不断减弱。正常组及FDM组遮盖后0周、2周、4周、4/-1周、6周,Sp1蛋白相对表达量分别为1.864±0.014、1.856±0.016、1.215±0.016、0.752±0.013、0.945±0.017、0.518±0.012;Collagen Ⅰ蛋白相对表达量分别为2.922±0.005、2.836±0.001、2.336±0.002、1.500±0.003、1.754±0.006、1.082±0.001;Sp1 mRNA:0.599±0.025、0.557±0.024、0.510±0.013、0.349±0.013、0.457±0.009、0.168±0.012;Collagen Ⅰ mRNA:1.071±0.014、1.010±0.021、0.947±0.006、0.626±0.010、0.770±0.020、0.331±0.004。遮盖2周后各时间点与正常组相比,Sp1和Collagen Ⅰ蛋白和mRNA表达差异均有统计学意义（均为P<0.05）。Sp1与Collagen Ⅰ的蛋白和mRNA表达均呈明显正相关（均为r=1.00,P<0.05）。结论　Sp1作为TGF-β1的下游信号转录因子可能参与了近视巩膜重塑中Collagen Ⅰ的调控,提示Sp1信号转录因子可能通过TGF-β1-Sp1-Collagen Ⅰ信号通路在近视巩膜重塑中发挥重要作用。     

视黄醇脱氢酶5在豚鼠形觉剥夺性近视眼中的表达变化

目的　探讨形觉剥夺性近视（FDM）和正常豚鼠的视网膜色素上皮（RPE）细胞中的视黄醇脱氢酶5（RDH5）基因在转录水平和蛋白水平的表达差异。方法　30只豚鼠随机分为:实验组（15只）,其中,右眼进行遮盖为FDM组（15眼),左眼不遮盖为自身对照组（15眼）;空白对照组（15只）双眼不做任何干预。分别于遮盖前,遮盖1周、2周、3周和4周后检查豚鼠屈光度和眼轴长度。采用免疫荧光染色法检测各组豚鼠RPE细胞中RDH5表达,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组豚鼠RPE细胞中RDH5 mRNA和蛋白的表达变化。结果　遮盖前、遮盖1周后,FDM组、自身对照组、空白对照组三组间豚鼠的屈光度、眼轴长度差异均无统计学意义（均为P>0.05）;遮盖2周、3周、4周后,三组间豚鼠的屈光度、眼轴长度差异均有统计学意义（均为P<0.05）。遮盖2周、3周、4周后,FDM组豚鼠屈光度分别为（1.47±1.41）D、（3.32±1.39）D、（4.63±1.04）D,眼轴长度分别为（7.69±0.24）mm、（7.92±0.09）mm、（8.34±0.15）mm,与空白对照组和自身对照组相比,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。遮盖4周后,与空白对照组和自身对照组相比,FDM组豚鼠RPE细胞中RDH5 mRNA水平和蛋白水平均明显下调（均为P<0.05）。免疫荧光染色结果显示,RDH5主要表达于豚鼠RPE层,与空白对照组和自身对照组相比,FDM组豚鼠RPE层RDH5蛋白的平均荧光强度最低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　FDM豚鼠近视眼RPE细胞内RDH5基因在转录和蛋白水平的表达均下调,提示RPE 细胞内RDH5可能在近视的发生发展中扮演了一定的角色。     

姜黄素在三色豚鼠近视发生发展中的作用

目的研究姜黄素在三色豚鼠近视发展中的作用。方法实验研究。将111只正常三色豚鼠（3周龄）随机分为正常给药组（N）和形觉剥夺组（FDM）两大组,每大组又分为空白对照组（N：n=13,FDM：n=12）、溶剂对照组（N：n=13,FDM：n=13）和姜黄素给药组（低剂量组15 µg;N：n=17,FDM：n=17;高剂量组150 µg;N：n=15,FDM：n=15）。其中溶剂对照组每天球旁注射二甲基亚枫（DMSO） 100 µl（10%）,姜黄素给药组每天球旁注射相应剂量姜黄素100 µl。实验前、实验后2周和4周分别检测屈光度、眼轴等参数。实验2周后,采用Western Blot方法检测巩膜胶原蛋白表达量。屈光度、眼球相关参数组内双眼间比较采用配对t检验,组间比较采用单因素方差分析（Bonferroni校正）。结果实验前,各组间的屈光度和眼轴等参数差异均无统计学意义。空白对照组和溶剂对照组的屈光度和眼轴等参数在实验前后各时间点差异也无统计学意义。注射4周后,姜黄素剂量依赖性诱导正常豚鼠产生近视 [N+DMSO组vs. N+15 µg组 vs. N+150 µg组：（-0.37±0.38）D vs. （-1.62±1.63）D vs. （-3.90±1.79）D,F=21.510,P＜0.001],并伴有眼轴延长[N+DMSO组vs. N+15 µg组 vs. N+150 µg组：（0.01±0.03）mm vs. （0.04±0.05）mm vs. （0.07±0.06）mm,F=4.992,P=0.011]。同时姜黄素加剧了豚鼠形觉剥夺性近视 [FDM+DMSO组 vs. FDM+15 µg组 vs. FDM+150 µg组：（-7.81±3.24）D vs. （-8.99±3.12）D vs. （-10.93±1.96）D,F=4.425,P=0.018],眼轴有相应延长,但差异无统计学意义。同时,姜黄素150 µg注射眼巩膜胶原蛋白Ⅰ的表达量下降（对侧眼vs.处理眼：0.33±0.08 vs. 0.18±0.03,t=-2.305,P=0.043）。结论姜黄素能诱导正常豚鼠出现近视并加剧形觉剥夺性近视,其机制可能是通过降低巩膜内的胶原含量。     

形觉剥夺性高度近视豚鼠巩膜形态改变及缺氧诱导因子-1α和氧自由基在高度近视中的作用

目的　观察形觉剥夺性高度近视（form deprivation high myopia，FDHM）豚鼠巩膜形态变化，探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）及氧自由基在高度近视中的作用。方法　将豚鼠适应性饲养1周后，随机分为空白对照组（25只）和模型组（25只）。模型组豚鼠右眼行眼睑缝合，所有模型组豚鼠均选择右眼作为FDHM组，对侧眼为自身对照组。空白对照组豚鼠不做任何处理。于造模前及造模后8周采用检影镜测量屈光度，A超进行生物测量。形觉剥夺8周以后处死豚鼠，观察巩膜形态和超微结构的变化，测定巩膜HIF-1α相对表达量，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结果　豚鼠形觉剥夺8周以后，FDHM组屈光度从（+3.59±0.33）D变为（-7.96±0.55）D，明显高于空白对照组（+0.89±0.32）D、自身对照组（-0.55±0.49）D（均为P<0.05）；玻璃体腔深度为（4.12±0.13）mm明显高于空白对照组（3.71±0.23）mm和自身对照组（3.93±0.04）mm（均为P<0.05）；眼轴长度为（8.93±0.22）mm明显长于空白对照组（7.95±0.37）mm和自身对照组（8.01±0.15）mm（均为P<0.05）。巩膜组织明显变薄，细胞外基质增多，成纤维细胞密度降低，胶原纤维平均直径减小。FDHM组巩膜中HIF-1α相对表达量、MDA含量明显高于空白对照组和自身对照组，SOD活力明显低于空白对照组和自身对照组（均为P<0.05）。结论　形觉剥夺8周后，豚鼠FDHM眼近视度数明显增加，玻璃体腔深度增加，眼轴延长，巩膜形态发生病理性变化；HIF-1α、SOD、MDA可能参与了FDHM的形成。     

单眼形觉剥夺对豚鼠后极部巩膜整合素β1表达的影响

目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视模型中巩膜整合素β1的表达及其与形觉剥夺的关系。方法40只出生后1周花色豚鼠,右眼遮盖作为形觉剥夺组,左眼不作处理作为对照组。遮盖2、4、8周和遮盖8周去遮盖1周后测量屈光度,眼科A超测定眼轴长度;对两组4个时间点眼球后壁行SP法免疫组织化学染色和RT-PCR检测巩膜整合素β1蛋白和mRNA水平的动态变化。结果与对照组相比,形觉剥夺组4个时间点眼球后壁巩膜整合素β1表达明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）,去遮盖1周后,表达上调,但仍低于对照组（P〈0.05）;而对照组间相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;形觉剥夺组和对照组屈光度、眼轴长度比较,差异有显著的统计学意义（P〈0.05）。结论豚鼠形觉剥夺时,后极部巩膜整合素β1表达减少,去遮盖后表达上调,提示整合素β1可能参与了形觉剥夺性近视的发生,其影响巩膜重塑的机制有待进一步研究。     

Cochlin及其编码基因凝血因子C同源物（COCH）在形觉剥夺性近视豚鼠眼球后极部组织的表达

目的　探讨Cochlin及其编码基因凝血因子C同源物（coagulation factor C homology，COCH）在形觉剥夺性近视（form-deprived myopia，FDM）豚鼠眼球后极部组织的表达。方法　选取3周龄的雄性健康三色豚鼠46只，随机分为2组，每组23只，饲养6周。正常对照组的双眼不予任何处理，FDM组的右眼为实验眼，左眼为自身对照，遮盖FDM组豚鼠的右眼，但不压迫右眼角膜和眼睑，保证右眼能自由瞬目。在遮盖后0周、2周、4周及6周时，分别测量两组豚鼠的屈光度、眼轴长度和角膜曲率半径；HE染色观察两组豚鼠后极部巩膜的厚度及形态变化；进行高通量蛋白质组学分析；实时荧光定量PCR检测COCH mRNA的表达量；Western blot检测Cochlin的蛋白表达水平。结果　遮盖前，两组豚鼠眼球的屈光度和眼轴长度双眼间差值（右眼-左眼）差异均无统计学意义（均为P>0.05）。遮盖后2周，相比对侧的左眼，FDM组右眼诱导出近视，眼轴相对延长；与正常对照组相比，FDM组右眼的屈光度下降，眼轴长度增加，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。遮盖后4周和6周，FDM组的右眼相对左眼近视进一步加深，眼轴相对更加延长，近视度数和眼轴长度双眼间差值较正常对照组差异进一步加大，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。遮盖前，遮盖后2周、4周及6周，两组豚鼠眼球的角膜曲率半径双眼间差值差异均无统计学意义（均为P>0.05）。遮盖后6周，HE染色结果显示，正常对照组右眼后极部巩膜的厚度正常，胶原纤维排列致密规则，未见断裂现象。然而FDM组右眼的后极部巩膜变薄，胶原纤维变细，变稀疏，间隙变大，且部分纤维出现断裂现象。蛋白质组学分析结果显示，正常对照组和FDM组间表达差异在1.3倍以上的蛋白共221种，其中100种上调，121种下调。其中Cochlin在FDM组豚鼠眼球后极部组织的表达量是正常对照组的3.77倍，升高趋势最明显。实时荧光定量PCR检测结果显示，遮盖后6周，在正常对照组和FDM组右眼后极部组织中，COCH mRNA的相对表达量分别为0.38±0.15和1.86±0.35。FDM组的相对表达量明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示，在正常对照组和FDM组右眼后极部组织中，Cochlin与GAPDH的灰度比值分别为0.37±0.14和0.73±0.15。FDM组Cochlin的表达水平显著高于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论　FDM豚鼠眼球后极部组织中可检测到COCH mRNA和蛋白Cochlin的表达上调，提示COCH可能在FDM的发生发展中起到重要作用。     

转化生长因子-β2在豚鼠形觉剥夺性近视中的表达

目的 观察形觉剥夺性近视（FDM）形成中视网膜转化生长因子-β2（TGF-β2）水平的变化,对FDM的发病机制做进一步的探讨.方法 出生3 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月建立FDM模型,左眼作为对照,视网膜检影检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学分析TGF-β2的表达,RT-PCR检测TGF-β2 mRNA的表达.结果 形觉剥夺使近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比差异有统计学意义（P＜0.01）,遮盖眼视网膜光感受器细胞层TGF-β2蛋白表达减少（P＜0.01）,TGF-β2 mRNA的表达下调.结论 TGF-β2参与调控FDM形成.     

形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中神经生长因子及其受体的表达

目的 探讨视网膜神经生长因子（NGF）及其受体（TrkA）在豚鼠形觉剥夺性近视（FDM）视网膜中的表达.方法 对出生7 d豚鼠以半透明眼罩遮盖右眼2个月制备FDM动物模型,左眼作为对照.遮盖前及遮盖2、4、8周后,检影验光检测双眼屈光度,A型超声测量双眼眼轴长度.免疫组织化学和逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）检测视网膜NGF和TrkA的表达变化.结果 形觉剥夺使豚鼠眼轴增长,近视屈光度增加,遮盖眼与对照眼相比屈光度差异有统计学意义（P＜0.01）.遮盖眼NGF与TrkA免疫活性逐渐降低,NGF与TrkAmRNA表达下调,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 NGF和TrkA可能参与调控FDM的形成.     

PPARy受体激动剂罗格列酮对形觉剥夺性近视和正常豚鼠屈光度的影响

目的　探讨过氧化物酶体增殖物激活受体y（PPARy）激动剂罗格列酮在豚鼠形觉剥夺性近视（FDM）中的作用。方法　选取40只3周龄豚鼠（均为右眼）,随机分成4组:正常组、FDM组、正常+罗格列酮组、FDM+罗格列酮组,其中正常组豚鼠不做处理,FDM组豚鼠使用头套法造模,正常+罗格列酮组豚鼠每天腹腔注射罗格列酮5 mg·kg^-1,FDM+罗格列酮组豚鼠每天戴头套并腹腔注射罗格列酮5 mg·kg^-1,持续28 d。实验前和实验后28 d测量豚鼠屈光度,实验后28 d测量豚鼠眼轴长度,保留眼球,免疫组织化学及Western blot测量豚鼠I型胶原蛋白(COL-I)、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）蛋白的分布与表达,HE染色观察巩膜形态变化。结果　与正常组相比,FDM组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度均增加,形成相对近视,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;巩膜明显变薄,胶原纤维排列紊乱,断裂明显,分布不规则。与正常组相比,正常+罗格列酮组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度变化差异均无统计学意义（均为P>0.05）;巩膜形态没有明显变化。与正常组相比,FDM+罗格列酮组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度变化差异均无统计学意义（均为P>0.05）。与FDM组相比,FDM+罗格列酮组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度均减少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;巩膜胶原纤维排列松散,分布略紊乱。Western blot检测结果显示,与正常组相比,FDM组豚鼠巩膜中COL-I、TGF-β1、TIMP-2蛋白表达量均减少,MMP-2蛋白表达量增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;与正常组相比,正常+罗格列酮组豚鼠巩膜中,COL-I、TGF-β1蛋白表达量均增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）,TIMP-2和MMP-2蛋白表达量差异均无统计学意义（均为P>0.05）;与正常组相比,FDM+罗格列酮组豚鼠巩膜中COL-I蛋白的表达接近正常组,差异无统计学意义（P>0.05）,TGF-β1、TIMP-2蛋白表达量均增加,MMP-2蛋白表达量减少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;与FDM组相比,FDM+罗格列酮组豚鼠巩膜中COL-I、TGF-β1、TIMP-2蛋白表达量均增加,MMP-2蛋白表达量减少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。豚鼠巩膜中COL-I、TGF-β1、TIMP-2、MMP-2蛋白免疫组织化学表达趋势与Western blot检测结果一致。结论　PPARy受体激动剂罗格列酮可能通过调节TGF-β1、COL-I、TIMP-2和MMP-2蛋白的表达水平抑制FDM,对正常豚鼠的屈光影响不大。     

电针对透镜诱导型近视豚鼠视皮层中M1受体表达的抑制作用

背景 近视的进展中视皮层M受体是否有变化,针灸治疗后视皮层M受体如何变化至今鲜见报道. 目的 观察电针对透镜诱导型近视(LIM)豚鼠视皮层中M1受体表达的影响. 方法 采用随机数字表法将48只3周龄三色短毛豚鼠随机分为正常对照组、近视模型组和近视电针组.正常对照组豚鼠未进行任何干预,近视模型组和近视电针组豚鼠右眼配戴-10 D负性透镜共4周,近视电针组豚鼠造模即日开始每日针灸太阳穴和合谷穴30 min,共持续4周.分别于造模前和造模后4周采用检影法和A型超声仪测定各组豚鼠的屈光度和眼轴长度.测量完毕后采用过量麻醉法处死豚鼠并获取两侧视皮层组织,采用荧光定量PCR法检测各组豚鼠视皮层中M1受体mRNA的相对表达量;采用ELISA法检测各组视皮层上清液中M1受体蛋白质量浓度.结果 造模后4周正常对照组、近视模型组和近视电针组豚鼠右眼的屈光度分别为(0.83±0.36)、(-3.24±0.28)和(-3.30±0.45)D,近视模型组和近视电针组豚鼠右眼的近视屈光度均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(均P=0.000),近视模型组和近视电针组豚鼠右眼的近视屈光度差异无统计学意义(t=0.200,P=0.659).正常对照组、近视模型组和近视电针组豚鼠右眼的眼轴长度分别为(8.33±0.08)、(8.67±0.14)和(8.60±0.06)mm,其中近视模型组和近视电针组豚鼠右眼的眼轴明显长于正常对照组,差异均有统计学意义(均P=0.000).正常对照组、近视模型组和近视电针组豚鼠左侧视皮层M1受体mRNA的相对表达量分别为0.79±0.18、1.36±0.23和1.13±0.13,近视模型组豚鼠左侧视皮层M1受体mRNA的相对表达量均明显高于正常对照组,而近视电针组豚鼠左侧视皮层M1受体mRNA的相对表达量明显高于正常对照组而低于近视模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).正常对照组、近视模型组和近视电针组豚鼠左侧视皮层M1受体蛋白质量浓度分别为248.00±33.31、455.17±42.40和396.17±47.57,其中近视模型组M1受体蛋白质量浓度明显高于正常对照组而明显低于近视模型组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 电针刺激对近视豚鼠的屈光度和眼轴长度无明显影响,近视豚鼠模型视皮层中M1受体表达增高,电针治疗可能通过降低其表达而对近视眼发挥治疗作用.     

电针干预对透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中MMP-3、TIMP-3及Col3α1表达的影响

目的　探讨电针干预对透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中基质金属蛋白酶（MMP）-3、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-3和III型胶原α1（Col3α1）表达的影响。方法　2周龄三色豚鼠90只随机分为正常对照（NC）组、透镜诱导型近视（LIM）组以及LIM+电针干预（LIM+EA）组;其中,NC组豚鼠不作任何干预,LIM组和LIM+EA组豚鼠右眼均配戴-6.00 D透镜作为造模眼,左眼不戴镜作为自身对照;LIM+EA组豚鼠右眼戴镜的同时在太阳、合谷穴给予电针刺激。各组豚鼠于造模后1周、2周和4周均进行屈光度和眼轴长度测量,制备病理组织切片观察各组豚鼠睫状肌的形态变化,并应用q-PCR和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测各组豚鼠睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1的 mRNA及蛋白表达。结果　造模后1周、2周和4周,与NC组相比,LIM组豚鼠造模眼与自身对照眼近视屈光度和眼轴长度的差值均显著增加（均为P<0.001）;与LIM组相比,LIM+EA组造模眼与自身对照眼近视屈光度和眼轴长度的差值均减小（均为P<0.05）。病理组织切片结果发现,NC组豚鼠睫状肌纤维排列均匀、紧密有序;LIM组豚鼠睫状肌纤维排列松散混乱、有机纤维溶解断裂;LIM+EA组豚鼠睫状肌纤维排列相较于LIM组更为有序,相对完整。q-PCR和ELISA检测结果显示,造模后1周和2周,与NC组相比,LIM组豚鼠造模眼睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白相对表达水平均明显升高（均为P<0.05）;与LIM组相比,LIM+EA组豚鼠造模眼睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白相对表达水平均明显下降（均为P<0.05）。造模后4周,与NC组相比,LIM组豚鼠造模眼睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白相对表达水平均降低（均为P<0.05）;与LIM组相比,LIM+EA组豚鼠造模眼睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1 mRNA及蛋白相对表达水平均升高（均为P<0.05）。结论　近视发展初期,电针干预可显著下调透镜诱导型近视豚鼠睫状肌中MMP-3、TIMP-3和Col3α1的表达,明显延缓近视的发生发展。     

骨形态发生蛋白在形觉剥夺性近视眼后巩膜中表达的变化

背景眼球伸长过程伴随着巩膜的广泛重塑,而这种重塑受多种生长因子的调控。以往的研究证实转化生长因子-β（TGF-β）在近视形成和发展过程中发挥作用。骨形态发生蛋白（BMPs）属于TGF-β超家族,其在近视的发生中是否发挥作用及如何发挥作用尚不清楚。目的观察豚鼠形觉剥夺性近视（FDM）眼后巩膜中BMPs的表达变化,探讨其在近视后巩膜重塑中的作用。方法1～2周龄花色豚鼠30只,以随机数字表法随机分为实验组和正常对照组,每组15只。任意选择实验组豚鼠的一侧眼作为实验眼,应用半透明眼罩连续遮盖14d以建立FDM动物模型,另一侧眼作为对照眼。形觉剥夺前后所有动物眼经检影验光获得屈光度,用A型超声法测量眼轴长度。造模后第15天取豚鼠后巩膜组织,分别用逆转录PCR（RT—PCR）和Westernblot法检测各组豚鼠后巩膜中BMPsmRNA及其蛋白的表达。结果实验14d后,豚鼠遮盖眼的屈光度为（一0．48±0．51）D,与对侧眼的（3．22±0．34）D比较,差异有统计学意义（t=-12．814,P=0．000）,与正常对照眼的（2．97±0．70）D比较,差异有统计学意义（t=-11．878,P=0．000）。豚鼠遮盖眼的眼轴长度为（8．30±0．05）mm,明显长于对侧眼的（8．11±0．06）mm和正常对照组（8．06±0．06）mm,差异均有统计学意义（t=7．230、9．084,均P=0．000）。正常豚鼠后巩膜可表达BMP-2、BMP-4、BMP-5mRNA,豚鼠遮盖眼后巩膜中BMP-2mRNA和BMP-5mRNA的相对表达值分别为0．41-±0．11和0．65±0．06,较对侧眼的0．62-±0．07和0．84±0．03分别下降了34．48％和23．67％,差异均有统计学意义（t=2．838,P=0．017;t=2．524,P=0．028）;豚鼠遮盖眼后巩膜中BMP-2和BMP-5蛋白表达的相对值分别为0．44±0．06和0．70-±0．05,较对侧眼的0．61±0．05和0．824-0．03分别下降了23．42％和15．21％,差异均有统计学意义（t=2．465,P=0．030;t=2．445,P=0．031）,而形觉剥夺眼与对侧眼后巩膜中BMP-4mRNA及其蛋白相对表达量的差异均无统计学意义（mRNA：t=0．704,P=0．460;蛋白：t=0．987,P=0．365）。结论FDM眼后巩膜中BMP-2和BMP-5的表达下调,提示BMPs在实验性近视后巩膜重塑中可能发挥作用。     

形觉剥夺性近视豚鼠巩膜形态学观察

目的观察形觉剥夺性近视豚鼠眼后极部巩膜的改变。方法4周龄豚鼠14只,随机分为正常对照组(Ⅰ组),形觉剥夺(FD)组(Ⅱ组)。Ⅱ组豚鼠右眼采用半透明眼罩遮盖的方法建立形觉剥夺近视模型,2周后检测其屈光度、眼轴长,并观察后极部巩膜组织的光镜、电镜改变。结果2周后剥夺眼屈光度相对于对照眼及年龄匹配对照组分别为-3.1 D±1.60 D,-3.2 D±1.72 D(P<0.01)。剥夺眼眼轴相对于对照眼(7.90 mm±0.13 mm、7.87 mm±0.17 mm,P<0.01)和正常眼(7.90 mm±0.13 mm、7.70 mm±0.16 mm,P<0.05)明显延长。剥夺眼后极部巩膜组织变薄,胶原纤维直径变小,纤维间空间增大。结论形觉剥夺刺激豚鼠眼巩膜组织变薄,其改变与人类近视巩膜组织改变相似。     

针刺对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜形态及组织中HIF-1α、SOD、MDA水平的影响

目的 探究针刺对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜组织形态特点及巩膜组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法 选取普通级3周龄健康三色豚鼠72只,随机分为空白组、模型组和针刺组(各24只)。用半透明气球作为眼罩分别固定于模型组和针刺组豚鼠右眼及头面部建立FDM模型,左眼充分暴露作自身对照;针刺组在豚鼠模型建立当天起,于每日相同时间对豚鼠进行针刺和电针干预治疗,空白组豚鼠不做任何干预。记录每组豚鼠造模前、造模后2周及4周的眼轴长度和屈光度。造模后4周处死豚鼠,光学显微镜下观察巩膜形态变化,Western blot检测各组豚鼠巩膜中HIF-1α蛋白表达,比色法测定各组豚鼠巩膜中SOD活力和MDA含量。结果 造模后2周和4周,与空白组比较,模型组及针刺组豚鼠遮盖眼近视屈光度及眼轴长度均明显增加(均为P<0.05);与模型组比较,针刺组豚鼠遮盖眼近视屈光度减小,眼轴增长明显减缓(均为P<0.05)。造模后4周,与空白组比较,模型组豚鼠巩膜厚度明显变薄,胶原纤维分布稀疏,有明显纤维空隙且排列不规则;与模型组相比,针刺组豚鼠巩膜层...     

TIMP-2基因转染后豚鼠形觉剥夺眼后极部巩膜Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达

背景细胞外基质（ECM）蛋白和酶参与眼球后极部巩膜主动的重塑过程,主要通过影响I型胶原蛋白（Col-Ⅰ）纤维连接蛋白（FN）发挥作用。目的通过对形觉剥夺性近视（FDM）豚鼠经脉络膜上腔注入转染有TIMP-2基因的脂质体,观察基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）对细胞外基质中Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）和FNmRNA表达的影响。方法半透明眼罩遮盖36只豚鼠的右眼14d建立FDM动物模型,用随机数字表法分组后分别于右眼脉络膜上腔注入5p,1TIMP-2脂质体质粒、空质粒和生理盐水,每组12只眼,左眼为自身对照。另12只豚鼠持续遮盖右眼为模型对照组。分别于脉络膜上腔注药后的2、7、14d过量麻醉处死豚鼠,获取眼球后极部巩膜组织,用RT-PCR法分别检测各组豚鼠眼巩膜组织中Col-Ⅰ和FNmRNA的表达。结果TIMP-2组豚鼠后极部巩膜Col-Ⅰ mRNA表达降低,FNmRNA表达升高,与自身对照相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。注入TIMP-2后,Col-I mRNA表达水平从第2天开始升高,第7天达到高峰,第14天时有所回落;FNmRNA表达水平则呈相反变化。二者在第7天、第14天的表达与其他3组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。C01．ImRNA和FNmRNA表达水平在注射后第7天与第2天或第14天比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论TIMP-2注入FDM豚鼠脉络膜上腔可上调Col-I mRNA表达,下调FNmRNA表达,早期可有减缓豚鼠FDM巩膜重塑的作用。     

康柏西普对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及相关机制分析

目的　探讨抗新生血管生长因子融合蛋白康柏西普（Conbercept）球结膜下注射对豚鼠形觉剥夺性近视的干预作用及其可能的作用机制。方法　普通级3周龄断乳花色豚鼠48只随机分为空白对照组、单纯手术组、生理盐水组、Conbercept组,每组各12只。其中空白对照组豚鼠不作处理,单纯手术组、生理盐水组、Conbercept组使用眼睑缝合法遮盖右眼,生理盐水组、Conbercept组分别在缝合时、缝合后7 d右眼球结膜下注射0.05 mL生理盐水、0.5 mg（0.05 mL）Conbercept。记录各组眼睑缝合前及缝合后7 d、14 d时的眼轴长度、屈光度,并取后极部巩膜组织采用RT-PCR、Western blot方法检测各组豚鼠巩膜中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）、转化生长因子（TGF）-β1、TGF-β2 mRNA和蛋白表达情况。结果　眼睑缝合后7 d、14 d,单纯手术组较空白对照组豚鼠右眼眼轴长度、屈光度均增加,MMP-2、TGF-β2 mRNA和蛋白相对表达量均增加,TGF-β1、TIMP-2相对表达量均减少,差异均具有统计学意义（均为P<0.05）;单纯手术组与生理盐水组各指标相比差异均无统计学意义（均为P>0.05)。眼睑缝合后7 d,与生理盐水组相比,Conbercept组眼轴长度、屈光度及TIMP-2、TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量差异均无统计学意义（均为P>0.05）,MMP-2、TGF-β2 mRNA和蛋白相对表达量均减少,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;眼睑缝合后14 d时,与生理盐水组相比,Conbercept组眼轴长度、屈光度及MMP-2、TGF-β2、TGF-β1 mRNA和蛋白相对表达量差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　0.5 mg Conbercept球结膜下注射可延缓豚鼠形觉剥夺性近视形成,且可能是通过调节巩膜中的MMP-2、TGF-β1、TGF-β2表达而发挥作用。     

RARβ在豚鼠形觉剥夺性近视眼中的表达

目的检测视黄酸受体β（RARβ）在视网膜、脉络膜和巩膜中的表达，探讨RARβ和视黄酸（RA）对哺乳类动物形觉剥夺性近视的作用。方法采用形觉剥夺的方法建立豚鼠眼近视模型。选用1～3d龄健康三色豚鼠45只，随机分为3组，Ⅰ组为持续遮盖8周组，Ⅱ组为遮盖7周后去遮盖1周组，Ⅲ组为遮盖1周组。右眼为遮盖眼，左眼为开放对照眼。测量双眼实验前后的屈光状态及眼轴。应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测RARβ的蛋白和mRNA表达水平。结果Ⅰ组诱导出了豚鼠明显的近视改变（P〈0．05）。Ⅱ组去遮盖眼近视度明显降低，眼轴较Ⅰ组短（P〈0．05）。Ⅲ组遮盖眼屈光度和眼轴与对照眼相比差异无显著统计学意义（P〉0．05）。Ⅰ组和Ⅲ组遮盖眼视网膜内核层RARβ蛋白表达高于对照眼（P〈0．05）。Ⅲ组遮盖眼视网膜、脉络膜和巩膜RARβmRNA表达增强（P〈0．05）。结论去除形觉剥夺可以抑制近视。形觉剥夺眼视网膜RARβ蛋白的高表达早于屈光度和眼轴的改变。RARβ在形觉剥夺眼视网膜、脉络膜和巩膜中的表达增强。     

双调蛋白抗体对双眼诱导型近视豚鼠眼部的影响

目的　探讨双调蛋白抗体对双眼诱导型近视豚鼠眼轴长度、屈光度及后极部巩膜厚度等的影响。方法　60只三色短毛豚鼠随机分为5组:正常对照组、近视模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只。豚鼠双眼戴-10 D透镜诱导近视:正常组不作任何处理,戴镜2周后,低、中、高剂量组豚鼠右眼玻璃体内注射低、中、高剂量双调蛋白抗体,同时左眼玻璃体内注射同等剂量的乳酸钠林格注射液（buffer组）,注射抗体前后持续戴镜。于戴镜前、戴镜后2周、注射3次抗体后测量豚鼠的屈光度和眼轴长度。注射3次抗体后,过碘酸雪夫染色法检测豚鼠眼球后极部视网膜、脉络膜及巩膜的厚度,实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测视网膜中双调蛋白及表皮生长因子受体mRNA、蛋白的表达。结果　透镜诱导2周后,近视模型组与正常对照组比较眼轴长度增长、屈光度缩短,差异均有统计学意义（均为P<0.01）。注射3次抗体后,与buffer组相比,低、中、高剂量组眼轴长度均缩短,屈光度均上升,后极部巩膜厚度均明显增加,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。各组后极部视网膜厚度无明显变化。实时荧光定量PCR结果和免疫荧光检测结果显示近视模型组及buffer组视网膜中双调蛋白mRNA和蛋白表达增加,高、中、低剂量组视网膜中双调蛋白mRNA和蛋白表达均下降,与buffer组相比,低剂量组视网膜中表皮生长因子受体表达下降（t=2.606,P=0.022）。结论　在近视造模豚鼠的玻璃体内注射双调蛋白抗体后,豚鼠屈光度上升、眼轴长度明显缩短、后极部巩膜厚度增加,其机制可能与双调蛋白表达的减少有关。     

豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜蛋白多糖水平的变化

目的观察豚鼠形觉剥夺性近视眼模型后极部巩膜蛋白多糖水平的变化,探讨其在哺乳类动物近视眼发生机制中的作用。方法出生2~3周的断乳花色豚鼠20只,随机均分成2组。遮盖组右眼予不透明眼罩遮盖2周,去遮盖组右眼遮盖2周后去遮盖1周。左眼开放为自身对照眼。于实验开始及结束时检影、测眼轴,达规定时限后处死动物,取后极部巩膜,行免疫组织化学及RT-PCR反应,检测decorin核心蛋白及其mRNA的表达。试验数据采用配对t检验和方差分析进行统计学处理。结果豚鼠遮盖组诱导的相对近视约-8.15 D,眼轴相对增长约0.63 mm;去遮盖组相对近视约-4.30 D,眼轴相对增长约0.57 mm。去遮盖组屈光程度下降值明显小于遮盖组(F=5.974,P<0.05)。免疫组织化学法及RT-PCR法示遮盖组和去遮盖组的实验眼和自身对照眼后极部巩膜均有decorin核心蛋白及其mRNA表达;其mRNA相对含量在组内比较差异均有显著性(P<0.05)。结论豚鼠形觉剥夺性近视眼后极部巩膜decorin mRNA表达显著降低,去除遮盖后其表达上调,提示decorin可能参与了形觉剥夺性近视眼的发生。