CHMP4C通过调控PI3K/AKT信号通路影响NSCLC细胞增殖与凋亡

目的:探究染色质修饰蛋白4C(CHMP4C)对非小细胞肺癌(NSCLC)进展及顺铂敏感性的影响及其机制。方法:通过免疫组化检测CHMP4C在NSCLC癌组织和癌旁组织中的表达情况。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CHMP4C在NSCLC细胞系中的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和细胞克隆实验检测细胞活力及半数抑制浓度IC₅₀;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot分析细胞凋亡相关蛋白(caspase 3、Bad)及PI3K/AKT信号通路中关键蛋白的表达水平。另外,我们采用动物模型进一步验证CHMP4C对体内肿瘤生长的影响。结果:CHMP4C在NSCLC癌组织和细胞系中高表达,与肿瘤T分期显著相关(P<0.05)。敲低CHMP4C抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并将细胞阻滞在S期(P<0.05)。敲低CHMP4C可抑制PI3K/AKT信号通路活化,然而激活PI3K/AKT信号通路逆转了CHMP4C敲低对NSCLC细胞的影响(P<0.05)。利用顺铂处理细胞后发现NSCLC细...     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

穿心莲内酯通过抑制PI3K/AKT通路对人肝癌HEPG2细胞凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨穿心莲内酯通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（AKT）通路对人肝癌细胞凋亡的影响。［方法］ 将人肝癌细胞株HEPG2分为对照组、低浓度穿心莲内酯组、中浓度穿心莲内酯组、高浓度穿心莲内酯组,低、中、高浓度穿心莲内酯组分别加入培养基稀释的终浓度为10、30、50 μmol/L的穿心莲内酯,对照组加入等剂量的培养基。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组HEPG2细胞增殖率,流式细胞术检测各组HEPG2细胞凋亡率,Western blot法检测各组HEPG2细胞PI3K、p-AKT蛋白表达水平。［结果］低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较对照组明显下降（Q=2.942、9.836、6.348,P＜0.05）;中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较低浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=2.942、13.832、10.691,P＜0.05）;高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较中浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=13.411、19.058、16.371,P＜0.05）。低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较对照组明显升高（Q=83.662,P<0.05）;中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较低浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=147.267,P<0.05）;高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较中浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=241.925,P<0.05）。［结论］ 穿心莲内酯可能通过抑制PI3K/AKT通路抑制人肝癌细胞增殖,促进人肝癌细胞凋亡,可为临床治疗肝癌提供新方向。     

PFKFB3通过调控PI3K/AKT信号通路促进骨肉瘤细胞的增殖及转移

目的:探讨6-磷酸果糖2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFB3)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,及可能的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测骨肉瘤组织及其相...     

吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨吉西他滨对肺癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法选取对数生长期的肺癌NCI-H292细胞随机分为吉西他滨组、阿霉素组和对照组,分别采用7μmol/L的吉西他滨、阿霉素与生理盐水处理,采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移与侵袭,Annexin V-PI双标记法检测细胞凋亡,Western blot实验检测PI3K和AKT蛋白表达。结果细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞增殖指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞迁移与侵袭指数均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组的细胞凋亡指数均高于对照组,吉西他滨组高于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。细胞处理后24h和48h,吉西他滨组和阿霉素组PI3K和AKT蛋白表达水平均低于对照组,吉西他滨组低于阿霉素组,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论吉西他滨可促进肺癌...     

内质网激动剂调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡

目的 检测内质网应激能否通过PI3K/AKT/mTOR通路对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡产生作用.方法 采用MTT法检测不同浓度衣霉素对人小细胞肺癌NCI-H446的细胞毒性,Annexin V/PI检测药物作用下人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡情况,Western Blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达.结果 衣霉素可抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞的活性,且呈时间和浓度依赖性.衣霉素能够激活内质网应激,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,使PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化下调,诱导细胞凋亡.结论 内质网激动剂能够调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡.     

EBV-BZLF1通过激活PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞生长

  目的   明确EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）BZLF1基因（EBV-BZLF1）对EB病毒阴性胃癌细胞生物学行为的影响及可能的分子机制。   方法   运用过表达BZLF1的慢病毒感染胃癌细胞系AGS和HGC27,分别采用CCK8、细胞凋亡检测、细胞迁移和侵袭实验及Western blot法检测细胞的增殖能力、细胞凋亡与迁移侵袭能力及细胞信号通路变化情况。将过表达BZLF1的胃癌细胞HGC27注射于非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠背部皮下构建移植瘤模型,观察BZLF1对肿瘤生长的影响。   结果   过表达BZLF1的慢病毒感染组AGS-BZLF1与HGC27-BZLF1相比亲本细胞,细胞中BZLF1蛋白表达明显上调;体外细胞增殖与小鼠体内成瘤能力均显著增强（P < 0.05）;细胞凋亡受到BZLF1蛋白的抑制,其中AGS-BZLF1和HGC27-BZLF1凋亡率为（2.40± 0.14）%和（3.90±0.14）%,显著低于AGS和HGC细胞的（5.75±0.35）%和（9.70±0.42）%（P < 0.05）;但细胞迁移和侵袭能力无明显改变。深入分子机制研究发现,BZLF1表达上调后,PI3K/AKT信号通路明显激活,表现为pAKT和pS6蛋白表达上调。使用BEZ235抑制剂阻断PI3K/AKT信号通路后,HGC27-BZLF1和AGS-BZLF1细胞的生长均受到抑制。   结论   EBV-BZLF1可通过激活PI3K/ AKT信号通路促进胃癌细胞生长,靶向PI3K/AKT通路抑制剂或可成为EBV阳性胃癌的治疗选择。      

UC-MSC经PI3K/AKT信号通路影响人肺腺癌A549 细胞的凋亡和增殖

[摘要] 目的:探讨人脐带来源间充质干细胞（umbilical cord-derived mesenchymal stem cell, UC-MSC）经PI3K/AKT信号通路对人肺腺癌A549 细胞凋亡和增殖的影响及其作用机制。方法:采用酶消化法从人脐带组织中分离UC-MSC并进行体外培养,用流式细胞术鉴定所得到的UC-MSC的免疫表型。收集UC-MSC培养上清,建立UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549 细胞株的体外间接共培养体系。采用CCK-8 法检测A549 细胞增殖率,通过Annexin V/PI 染色流式细胞术检测A549 细胞的凋亡率,通过PI染色法判断肿瘤细胞的细胞周期分布;qPCR实验检测CyclinD1、BAX、Bcl-2 等PI3K/AKT通路下游凋亡与增殖相关基因的转录水平;Wb测定PI3K/AKT通路相关蛋白质表达水平。结果:人脐带组织分离培养3 周后,可见纤维状细胞铺满培养瓶,平行排列或呈旋涡状生长。流式细胞术检测发现所得细胞表达MSC标志分子CD73、CD90、CD105,不表达CD45 和HLA-DR。UC-MSC条件培养基与肺腺癌A549 细胞株在体外间接共培养后,与对照组比较,A549 细胞的增殖率明显降低、凋亡率明显升高,其细胞周期明显停滞在G1期（均P<0.01）。PI3K/AKT信号通路相关分子CyclinD1 和Bcl-2 转录下调、BAX的转录上调（均P<0.01）;UCMSC条件培养基培养的A549 细胞总AKT水平不变,p-AKT蛋白表达呈剂量性依赖下降（P<0.01）。结论:UC-MSC明显影响肺腺癌A549 细胞的增殖和凋亡能力,细胞周期停滞在G1 期,其主要作用机制是UC-MSC抑制A549 细胞PI3K/AKT信号通路,为探索UC-MSC临床应用的安全性和有效性提供实验依据。     

CDO1通过PI3K/AKT信号通路调控胃癌细胞增殖及细胞周期

目的:探讨半胱氨酸双加氧酶1(CDO1)对胃癌细胞增殖、细胞周期的调控机制。方法:用脂质体法将si-NC组（转染si-NC）、si-CDO1组（转染si-CDO1）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-CDO1组（转染pcDNA-CDO1）、pcDNA-CDO1+DMSO组（转染pcDNA-CDO1并用DMSO处理）、pcDNA-CDO1+IGF-1组（转染pcDNA-CDO1并用IGF-1处理）转染至AKG细胞。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、免疫印迹（Western blot）、细胞计数试剂盒（CCK-8）、流式细胞术检测细胞CDO1、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达、细胞增殖、细胞周期。结果:与人胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃腺癌细胞AKG中CDO1的表达明显降低（P<0.05）;与si-NC组相比,si-CDO1组AKG细胞的增殖明显上调,细胞发生明显的S期、G2/M期阻滞,过表达CDO1则具有相反的作用。重要的是,敲减CDO1可上调PI3K/AKT信号通路关键基因PI3K、p-Akt的表达,而过表达CDO1具有相反的作用。激活PI3K/AKT信号通路后,过表达CDO1对胃癌细胞的增殖、细胞周期的调控作用可被部分逆转。结论:CDO1可抑制胃癌细胞的增殖,调控细胞周期,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路的活性有关,将为胃癌的治疗提供参考。     

淫羊藿素通过PI3K/AKT信号通路抑制非小细胞肺癌H460细胞增殖

目的:探讨淫羊藿素（icaritin）通过PI3K/AKT信号通路对非小细胞肺癌H460细胞增殖的影响。方法:采用MTT比色实验检测,不同浓度（0、5、10、20、40、80μmol/L）淫羊藿素处理H460细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞凋亡的影响,Western blot实验检测不同浓度淫羊藿素对H460细胞中PI3K、AKT、p-AKT、Cleaved-Caspase-9蛋白质表达水平的影响。结果:淫羊藿素可抑制非小细胞肺癌H460细胞的增殖,并表现为剂量和时间依赖性（P＜0.05）。0、5、10、20μmol/L淫羊藿素处理H460细胞24h后,H460细胞凋亡率分别为（4.90±1.20）%、（13.5±2.32）%、（16.47±1.90）%和（27.43±3.15）%,P＜0.05。淫羊藿素可下调PI3K、AKT的表达水平,降低AKT的磷酸化(p-AKT)水平,上调Cleaved-Caspase-9表达水平(P＜0.05)。结论:淫羊藿素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制H460细胞增殖。     

硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

白花丹醌通过CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡

目的:观察白花丹醌对结肠癌细胞Caco-2增殖、凋亡的影响,探究其潜在的作用机制。方法:运用CCK8法、流式细胞术检测不同浓度白花丹醌（4、8、12 μmol/L）处理的Caco-2细胞的增殖抑制率、凋亡率。不做任何处理的Caco-2细胞设为Control;脂质体法将si-NC组（转染si-NC）、si-CXCL8组（转染si-CXCL8）转染至Caco-2细胞;8 μmol/L的白花丹醌与0.5%DMSO处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+DMSO组;8 μmol/L的白花丹醌分别与z-VAD-FMK、740Y-P处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+z-VAD-FMK组、8 μmol/L+740Y-P组。RT-qPCR、Western blot实验检测细胞中CXCL8的mRNA、蛋白表达,CXCL8、M2-型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase, PKM2）、L-乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A,LDHA）、人α-烯醇化酶(apha-enolase,ENO1)、葡萄糖磷酸异构酶（glucose phosphate isomerase,GPI）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的蛋白表达。结果:与Control组相比,白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性促进Caco-2细胞增殖抑制率、凋亡率升高,抑制CXCL8的mRNA和蛋白表达。与8 μmol/L+DMSO组相比,8 μmol/L+z-VAD-FMK组细胞的增殖抑制率、凋亡率明显降低,CXCL8的mRNA和蛋白表达明显升高（P＜0.05）。白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性抑制PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达。si-CXCL8组PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达明显低于si-NC组。740Y-P明显减弱白花丹醌对Caco-2细胞增殖抑制率和凋亡率的促进作用。结论:白花丹醌抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡,其潜在的作用机制与CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路有关。     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。