MLAA-22在急性单核细胞白血病中的表达及临床意义

目的:检测MLAA-22基因及其编码蛋白在不同状态急性单核细胞白血病（M5）中的表达,探讨MLAA-22是否可作为M5特异性标记应用于临床。方法:收集临床初诊、完全缓解及复发的M5患者骨髓血,应用荧光实时定量PCR（QRT-PCR）及Western blot检测各组MLAA-22 mRNA及蛋白质的表达,比较、分析基因及蛋白在各组中的表达变化,分析MLAA-22与M5疗效及转归的关系。结果:MLAA-22 mRNA在初诊的M5中特异性高表达,与完全缓解组表达差异具有统计学意义（P<0.01）,与复发组差异无统计学意义（P>0.05）。MLAA-22蛋白在初诊的M5中显著高表达,完全缓解组MLAA-22蛋白表达较初诊患者明显下降。结论:MLAA-22 mRNA及蛋白在急性单核细胞白血病中特异性高表达,有望成为急性单核细胞白血病诊断、临床疗效评估、预后判断及微小残留病监测的特异性指标,值得深入研究。     

全人源抗MLAA-34单链抗体的筛选和鉴定

目的:抗体药物治疗是目前癌症治疗中很有前景的一种方法,利用前期实验得到的MLAA-34纯化蛋白作为抗原,在噬菌体抗体库中进行筛选得到抗MLAA-34的单链抗体,进行测序并鉴定其亲和力.方法:包被纯化的MLAA-34抗原蛋白于96孔板上,封闭过夜,加入1×1012 cfu噬菌体抗体库,4℃结合4 h,洗脱,洗脱后的噬菌体...     

转录因子E2F3对浸润性膀胱癌细胞因子的调控反应

目的 E2F3在浸润性膀胱癌的发生、发展中起着重要作用,但是其具体调控分子机制尚不明确,本研究旨在探讨E2F3对浸润性膀胱癌细胞调控的分子机制.方法 采用RNAi技术使E2F3在浸润性膀胱癌细胞系中低表达,通过蛋白质印迹法、PCR进行检测及后续实验,通过CHIP实验等观察E2F3在HT1376和TCCSUP细胞系中与信号转导及转录激活因子3(STAT3)和Etsl之间及其相关侵袭细胞因子的调节关系.结果 E2F3、STAT3和Etsl基因在高表达E2F3细胞系(HT1376和TCCSUP)中成功被沉默,CHIP测序显示,E2F3与Etsl和STAT3基因启动子结合增多只出现在过表达膀胱癌细胞系中;免疫组化和蛋白质印迹法检测结果显示,E2F3过表达细胞癌中,Etsl和STAT3基因过表达,二者呈正相关,r=0.421,P=0.023;E2F3高表达同时相关细胞因子也增加(IL-1、IL-8、TNF-α和VEGFA等),Etsl和STAT3被沉默后,上述细胞因子也相对降低,CHIP实验显示,与低表达E2F3膀胱癌相比,在高表达E2F3膀胱癌中,Etsl和STAT3启动子活性增强.结论 E2F3过表达在人膀胱癌细胞系中通过Etsl和STAT3调节免疫相关基因的表达,E2F3的过表达促进Etsl和STAT3的表达.     

转录因子E2F1在外阴鳞癌中的表达及意义

目的:探讨转录因子E2F1在外阴鳞癌(VSCC)中的表达情况及其临床意义。方法:采用PCR（qRT-PCR）、Western blot和免疫组化检测30例VSCC及对应癌旁组织中E2F1的水平,分析E2F1表达与临床病理参数的关系。结果:VSCC组织中E2F1的mRNA相对表达量为(1.27±0.04),高于癌旁外阴组织的E2F1水平(0.84±0.06)（P＜0.05）;VSCC组织中E2F1的蛋白相对表达量为(1.16±0.04),高于癌旁外阴组织的E2F1水平(0.93±0.03)（P＜0.05）;免疫组化示VSCC组织中E2F1的阳性表达率(56.67%,17/30)明显高于癌旁外阴组织(33.33%,10/30)(P＜0.05),且其阳性表达率与FIGO分期有关(P＜0.05)。结论:E2F1在VSCC组织中表达上调,且与FIGO分期有关,提示E2F1可能与VSCC的发生、发展有关。     

GADD45g 通过抑制E2F1在急性髓系白血病中发挥抑癌作用

[摘要] 目的：检测转录因子E2F1 与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g（GADD45g）基因在急性髓系白血病（AML）患者中表达的相关性,探讨GADD45g 是否通过抑制E2F1 诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法：选取2013 年1 月至2016 年12 月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32 例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用qPCR检测组织和细胞中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1 过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g 的Molm-13 和THP-1 细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI 染色流式细胞术等确定GADD45g 是否通过抑制E2F1 对AML细胞发挥抑癌作用。结果：AML患者骨髓和细胞系中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达呈显著负相关（r=–0.663,P<0.01）。GADD45g 在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达（均P<0.01）。成功构建同时过表达GADD45g 和E2F1 的Molm-13 和THP-1 细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。与过表达GADD45g 的细胞相比,同时过表达GADD45g 和E2F1 细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低（均P<0.01）;在过表达GADD45g 的细胞中过表达E2F1 逆转了GADD45g 诱导的周期阻滞（均P<0.01）,进而降低了过表达GADD45g 对化疗药物的敏感性（均P<0.01）。结论：GADD45g 通过抑制E2F1 在AML中发挥抗肿瘤作用。     

肝癌细胞系中miR-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系

目的:研究肝癌细胞系中微小RNA（microRNA,miR）-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系。方法:体外培养肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7,处理细胞分miRNA NC组、miR-9 inhibitor组、顺铂（CDDP）组、CDDP+miRNA NC组、CDDP+miR-9 inhibitor 组。实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测miR-9表达水平;免疫印记（Western blot,WB）法检测E2F1蛋白水平;CCK-8法检测miR-9对细胞存活的影响;克隆计数检测miR-9对细胞数量的影响。结果:与正常肝细胞系HL-7702相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9、E2F1蛋白水平升高（P＜0.05）。在HepG2、Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低（P＜0.05）。与miR-9 inhibitor组相比,CDDP组、CDDP+miRNA NC组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量升高（P＜0.05）;CDDP+miR-9 inhibitor组细胞克隆数量、48 h细胞OD450降低（P＜0.05）;与CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低（P＜0.05）。在HepG2细胞系中,与miRNA NC组、CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）。在Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC 组相比,miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（6、12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）;与CDDP组相比,miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（3、6、12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）;与CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组（24、48 h）、CDDP+miR-9 inhibitor组（12、24、48 h）细胞OD450降低（P＜0.05）。结论:肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9和E2F1表达上调;干扰miR-9可抑制E2F1表达,抑制细胞增殖、抑制细胞克隆形成,提高药物敏感性。     

IL-34 对人急性单核细胞白血病细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨过表达IL-34 对急性单核细胞白血病（acute monocytic leukemia,AMoL）细胞恶性生物学行为的影响。方法：构建IL-34 过表达载体,制备慢病毒载体pCDH-GFP,感染AMoL细胞系THP1 和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI 染色检测细胞周期法和Annexin-V/PI 法检测IL-34 对AMoL细胞的增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响,通过流式细胞术分析过表达IL-34 对细胞分化表型的影响,通过裸鼠皮下成瘤模型观察肿瘤大小、质量差异和巨噬细胞募集情况。结果：实验组THP1 和MOLM-13 细胞IL-34 mRNA表达水平分别比对照组提高近4 000 倍和近3 000 倍(均P<0.01）,表明已成功构建稳定过表达IL-34 的AMoL细胞系。体外细胞实验结果显示,过表达IL-34 提高THP1 和MOLM-13 细胞的增殖[72 h：(0.738±0.003) vs(0.646±0.008),(0.290±0.004) vs (0.247±0.004);均P<0.01]和集落形成能力[(127.00±3.37) vs (86.00±4.08)个,(160.70±4.70) vs(116.70 ± 3.93)个; 均P<0.01],对细胞的凋亡没有显著影响(均P>0.05);单核-巨噬细胞分化标志物CD11b 和CD14 表达水平升高,未成熟细胞标志物CD71 表达水平减低,表明IL-34 促进了AMoL细胞向单核-巨噬细胞方向分化（均P<0.05）。裸鼠体内荷瘤实验可见,过表达IL-34 促进瘤组织内巨噬细胞募集(P<0.01)。结论：过表达IL-34 提高AMoL细胞的增殖和集落形成能力,促进细胞向单核-巨噬细胞分化,并促进肿瘤内巨噬细胞的募集。     

MTS1基因β启动子E2F1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达

目的：深入研究MTS1基因β启动子的转录激活与E2F1转录因子的相互作用关系，阐明该转录水平的调控机制。方法：用PCR定点突变方法或酶切连接法，构建β启动子0.38kb SacⅡ-Sac I酶切片段中E2F1 A，B，C任意2个位点或3个位点均突变的pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将构建的重组质粒转染MTS1基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞，检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果：构建的E2F1 A，B，C结合位点突变的重组质粒经Sac I或Nae I酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2F1位点野生型重组质粒比较，突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少，以3个位点均突变的重组质粒为明显。结论：构建的E2F1 A，B，C2个或3个结合位点均突变重组质粒成功，可通过基因转染用于研究MTS1基因的功能试验中；MTS1基因β启动子的转录活性可能与E2F1转录因子的反式激活有关。     

甘肃省人群CYP2E1基因多态性与急性白血病易感性的关系

目的 研究甘肃省人群CYP2E1基因多态性和急性白血病易感性的关系.方法 用1∶1配对病例-对照方法,LDR-PCR方法,对甘肃省人群中100例急性白血病患者和100例对照进行CYP2E1基因突变分析.结果 急性白血病组CYP2E1基因C2等位基因频率(13.5%)和CIC2+C2C2基因型频率(22%)均高于对照组(10.5%和19%),但其差异均无统计学意义.进一步分层分析,急性髓系白血病(AML)组C1C2/C2C2基因型频率(27%)高于对照组(19%),其差异无统计学意义.急性淋巴细胞白血病(ALL)组CYP2E1基因C2等位基因频率和C1C2/C2C2基因型频率均与对照组差异无统计学意义(x2=0.446,P=0.504>0.05).结论 甘肃省研究人群CYP2E1基因多态性与急性白血病(AML和ALL)遗传易感性无关.     

急性单核细胞白血病的临床特点及预后分析

目的:探讨急性单核细胞白血病(AML-M5)的主要临床特点及预后影响因素。方法:回顾性分析2014年01月至2019年01月我院59例初诊AML-M5患者的临床资料,与癌症基因组图谱（TCGA）数据库22例患者的临床特点进行对比分析,并分析可能影响我院患者预后的重要因素。结果:与TCGA数据库相比,我院M5b亚型较多（78.0% vs 36.4%,P=0.000）;中位骨髓原始细胞比例较低（69% vs 83%,P=0.006）;我院NPM1突变较少（25.4% vs 54.5%,P=0.013）,DNMT3A突变较少（8.5% vs 50%,P=0.000）;我院患者与TCGA数据库单纯化疗患者OS差异无统计学意义（P=0.379）;单因素分析显示年龄、白细胞计数、初次诱导缓解程度、FLT3-ITD突变、NPM1突变但不伴FLT3-ITD突变及预后危险分层与预后明显相关（P＜0.05）;多因素分析表明年龄、白细胞计数、初次诱导缓解程度及预后危险分层是影响预后的独立危险因素（P＜0.05）。结论:AML-M5的预后与年龄、白细胞计数、初次诱导缓解程度及预后危险分层相关。     

E2F8在恶性肿瘤中的作用及机制研究进展

E2F8是较晚发现的E2F转录子家族成员。它参与调控细胞周期、细胞增殖、分化、细胞凋亡以及DNA损伤修复。有研究提示,E2F8参与恶性肿瘤的发生发展,在多种恶性肿瘤中表达水平升高,并且其转录水平与肿瘤病人的不良预后密切相关。因此,E2F8有望成为恶性肿瘤的诊断标志物或治疗新靶点。这篇综述总结了近几年有关E2F8在恶性肿瘤中的作用及其机制研究的新进展,以期为恶性肿瘤的临床诊断和治疗提供参考依据。     

E2F1在肿瘤中的研究进展

E2F1是E2F转录因子家族的重要一员，参与人体生命活动中重要的细胞周期和细胞凋亡环节，E2F1促进S期的细胞增多，同时通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡。近来研究显示，E2F1在多种肿瘤如肺癌、前列腺癌、乳腺癌等组织细胞中呈高表达，表现为促癌基因的作用，其表达水平与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。本文结合国内外最新研究报道，对E2F1在肿瘤中的研究进展作一综述。