ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制

目的 通过研究冷酚与粗糖的混合比例、粗糖提纯时的质量浓度和乳糖保护剂的用量来制备符合规定的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.方法 发酵细菌,提取A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖粗制品,以不同的纯化工艺纯化A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖.将4种纯化的多糖原液按一定比例混合,加入乳糖作为保护剂,冷冻干燥制成ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.结果 通过比较不同纯化工艺制备的多糖,确定最佳提纯条件为多糖与冷酚的体积比为1∶1,粗糖提纯时的质量浓度为6 g/L.检测按此纯化条件制备的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,3批疫苗的水分含量分别为1.7％、2.0％和2.1％,疫苗的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖含量和回收率分别都≥50 μg/剂和80％,符合相关规定的要求.结论 按确定的工艺成功制备ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.     

正交试验法优选浙江金线兰多糖提取工艺研究

目的 正交试验法优选浙江金线兰多糖最佳提取工艺.方法 以料液比、提取时间、提取温度、提取次数为考察因素,采用苯酚-硫酸法测定吸光度值,以多糖提取含量为评价指标,采用L9(34)正交试验法优选浙江金线兰多糖提取工艺.结果 影响浙江金线兰多糖提取含量主次顺序为C提取温度>D提取次数>A料液比>B提取时间,提取的最佳工艺为料...     

层析法提纯A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖工艺的建立

目的 建立A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖层析纯化工艺。方法 采用陶瓷羟基磷灰石和DEAE Sepharose FF层析柱，在PBS体系中纯化A群多糖。以0.5%脱氧胆酸钠预处理C群多糖，用陶瓷羟基磷灰石层析柱在PBS体系中纯化C群多糖。以含有脱氧胆酸钠的平衡缓冲液溶解Y和W135群多糖，再用Capto Adhere和Capto DEAE层析柱串联纯化。纯化的多糖经Sephadex G-25 Medium层析柱脱盐后冻干，按中国药典2015年版三部的要求进行检定。结果  经过层析纯化，A、C、Y、W135群多糖的蛋白质含量分别降至3.7、4.2、5.4和5.3 mg/g，核酸含量分别降至1.2、3.0、1.1和0.8 mg/g，均符合药典要求。此外，磷、唾液酸和O-乙酰基含量等指标亦均符合药典标准。结论 建立了A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的层析纯化工艺。     

A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量测定的中国药典方法与欧洲药典方法的比较

目的  比较检测A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的中国药典（2015年版）方法（方法1）与欧洲药典（8.0版）方法（方法2）的差异,为今后的方法选择及进一步优化提供参考。方法  分别用方法1和方法2检测标准磷溶液和A群脑膜炎球菌多糖疫苗中的磷含量,比较这2种方法的标准曲线、定量限、准确度、精密度、耐用性（溶液稳定性）的差异。 结果  方法1和方法2标准曲线的决定系数均值分别为0.997 3和0.999 3,定量限分别为3.97和2.16 μg。检测同一批A群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,磷含量检测结果的相对标准偏差,方法1和方法2分别为10.3%和7.6%;磷加样回收率,方法1为87.8%～113.1%,方法2为97.1～103.6%。分别将反应溶液放置0、30、60 min后开始比色,方法1和方法2每30 min吸光度升高均值分别为0.059和0.003。结论  2种方法均可用于A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的检测。与方法1相比,方法2的标准曲线线性更佳、检测定量限更低、准确度和精密度更高、耐用性（溶液稳定性）更好。     

接种脑膜炎球菌菌苗后人体的调理素反应

B群脑膜炎球菌荚膜多糖不象A群及C群多糖那样具有明显的免疫原性.但B群多糖与B群蛋白混合菌苗可使人体产生杀菌抗体.作者应用化学发光多形核白细胞法检测免疫血清对A、B和C群脑膜炎球菌的调理素反应,以期提供抗脑膜炎球菌感染的有价值的资料.     

正交试验优化二至丸多糖的提取工艺及其颗粒剂的制备

目的设计正交试验提取二至丸中的多糖类成分并测定多糖含量,将提取物制成颗粒剂。方法 2022年 9—12月采用传统的水提醇沉法提取二至丸中的多糖类成分,进行 L9)正交实验设计,提取温度、提取时间、提取次数对多糖(34探究料液比、提取率的影响,优选多糖提取物的最佳提取工艺;以葡萄糖为标准,采用苯酚 -硫酸法进行样品多糖含量测定;并将提取的多糖提取物进行湿法制粒。结果探究的四个因素对多糖提取率的影响程度为:提取次数 >提取时间 >提取温度 >料液比;最佳提取工艺为:料液比 1∶10(g/mL),提取温度 95 ℃,提取时间 3h,提取次数 3次;所制多糖颗粒剂质量评价结果均符合 2020版《中国药典》标准。结论该研究优化了二至丸中多糖类成分的提取工艺,为二至丸的进一步开发利用提供科学依据。     

A群脑膜炎球菌和其他多糖菌苗:五年进展

5年前,首次报道在芬兰的一次A群脑膜炎球菌病流行期间,对3月龄～5岁儿童应用A群脑膜炎球菌多糖菌苗的现场试验获得成功。在这项研究中,13万名儿童接种A群脑膜炎球菌多糖菌苗;49,000名儿童接种b型流感嗜血杆菌多糖菌苗;32,000名儿童未接种菌苗作为对照。结果第1组在接种后第1年内未发生A群脑膜炎球菌病,后2组     

稀碱法提取金线莲多糖的研究

目的：研究稀碱法提取金线莲多糖的最佳条件。方法采用DNS法测定多糖含量,以多糖含量为指标,对金线莲多糖的提取沉淀过程中的影响因素进行考察。结果稀碱法提取金线莲多糖的最佳条件是提取温度70℃、提取时间1.5h、料液比1∶35、提取次数2次,静置时间5h、离心转数7000r· min -1、离心时间5min。结论稀碱法提取金线莲多糖是一种效率高且稳定可行的提取方法。     

正交设计法优化复方党参中多糖的提取工艺

目的:考察复方党参中多糖的最佳提取工艺。方法:超声波辅助法提取复方党参中的多糖,苯酚-硫酸法测定多糖的含量。通过正交设计方法,以多糖含量和浸膏得率为考察指标,优化多糖的提取工艺。结果:四因素中提取次数对实验结果影响最大,为多糖提取工艺的主要影响因素,提取温度为次要因素,其次为溶剂量和提取时间。结论:复方党参多糖最佳提取工艺为药材提取温度40℃、液料比6∶1、提取20min、提取3次。     

A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究

研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。     

23价肺炎球菌多糖疫苗的规模化生产及质量控制

目的:扩大肺炎球菌发酵的培养规模,增加肺炎球菌多糖的收量,降低成品疫苗内毒素的含量,以提高肺炎球菌多糖疫苗的产能和质量;制备和标定企业用肺炎多糖参考品,及定性定量检测23价肺炎球菌多糖疫苗用的血清。方法:调整肺炎球菌培养参数及培养过程中糖、碱的补料方式、补料时间,放大肺炎球菌的发酵培养规模;在分段乙醇沉淀过程中添加速度和温度控制、调整乙醇浓度,在酚提过程中调控各种技术参数等,提高精制多糖的收量;控制加入生产过程中主要原辅材料的内毒素含量,并规范操作人员的行为习惯,降低肺炎球菌多糖疫苗成品的内毒素含量。标定自制多糖参考品以及用多糖免疫兔、鼠制备血清参考品。结果:肺炎球菌的发酵体积从500 L提高到1 000 L;精制多糖平均收量提高15%以上;内毒素平均含量控制在20 EU.mL-1以内;制备出23种型别的符合23价肺炎球菌多糖疫苗质量标准的多糖;获得3个型单抗和6个型的多抗。结论:23价肺炎球菌多糖疫苗的产量增加,疫苗质量得到了提升,自主化标准参考品研究进展迅速。     

不同提取方式对金线莲多糖含量及DPPH自由基清除活性的影响

目的考察不同提取方式对金线莲多糖含量、结构及抗氧化活性的影响。方法采用热水回流提取法、超声提取法和酶法分别提取金线莲多糖,苯酚硫酸法测定多糖含量,刚果红实验检测三螺旋结构,采用DPPH自由基清除实验评价其抗氧化活性。结果不同提取方式对多糖的产率和DPPH清除活性均有影响,其中超声提取和酶解提取得到的多糖DPPH自由基清除活性优于热水回流提取所得金线莲多糖;提取所得金线莲多糖不含三螺旋结构。结论综合考虑提取效率、抗氧化活性和工艺成本,超声提取为最优方法。     

检测C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖含量的脱氧胆酸钠沉淀法的建立

 目的  建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group C  meningococcal polysaccharide -tetanus toxoid conjugate vaccine, CPS-TT）中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法。 方法  在不同pH条件下用脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证。 结果  DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3%。DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5%。 结论  DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制。     

茯苓皮总多糖提取纯化工艺研究

目的研究并确立茯苓皮总多糖的最佳提取和纯化工艺。方法用超声波辅助法提取总多糖,用苯酚-硫酸法测其含量并作为指标,经过单因素实验和正交试验确立最佳提取工艺;用大孔树脂纯化总多糖,以多糖保留率,脱色率和蛋白去除率为指标,经过静态和动态实验,确立最佳纯化工艺。结果以料液比1∶25,温度45℃,超声功率100w,超声时间10min为最佳提取工艺;以AB-8型大孔吸附树脂,溶液pH 5,转速180r·min^-1,上样流速24mL·min^-1,径高比1∶15为最佳纯化工艺。在此条件下静态吸附实验蛋白去除率65.29%,脱色率79.08%,多糖保留率59.50%;动态吸附实验蛋白去除率48.98%,脱色率76.84%,多糖保留率74.58%。结论茯苓皮总多糖的提取纯化工艺稳定可靠,可为其进一步开发提供参考。     

基于中英两国药典对比分析我国儿童免疫规划疫苗质量标准综述

通过对比中英两国药典关于儿童免疫规划疫苗质量标准的规定,可看出国内当下儿童免疫规划疫苗质量标准有领先之处亦有不足,中国在重组乙肝和甲肝灭活疫苗游离的甲醛标准、A群流脑多糖与A群C群流脑多糖疫苗抗原、蛋白质及核酸的含量标准、百白破疫苗中的破伤风原液的抗原纯度标准、重组乙肝和吸附百白破联合疫苗的铝含量标准规定上要严于英国....     

酵母发酵鲜党参中多糖的提取及免疫活性研究

目的 优化酵母发酵鲜党参中多糖的提取工艺,并评价其体外免疫活性。方法 以酵母发酵鲜党参为原料,通过木瓜蛋白酶辅助提取,乙醇沉淀得到酵母发酵鲜党参中多糖,以提取温度、时间、酶添加量为影响因素,多糖得率为指标,以水提法为对照,进行单因素实验结合响应面设计开展工艺优化,通过高效凝胶渗透色谱法测定多糖的相对分子量,通过MTT法研究多糖对体外脾淋巴细胞和RAW264.7细胞的增殖活性。结果 酵母发酵鲜党参中多糖的最佳提取工艺为提取温度63 ℃,提取时间6 h,酶添加量4%,多糖的提取率17.46%,比水提法(12.69%)提高。且糖醛酸含量提高。酶提法和水提法得到的多糖相对分子量无明显变化。当多糖浓度为0.5,1.0 mg·mL^-1时,给予酶提多糖的脾淋巴细胞增殖活力和RAW264.7细胞增殖活力均比水提法增加。结论 本研究优选出的酵母发酵鲜党参中多糖的提取工艺切实可行,多糖提取率高且免疫活性显著增强。     

A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量测定方法的建立

目的  建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（meningococcus,Men）多糖疫苗（groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4）多糖含量的火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis,RIE)法。方法  分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果  菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均大于0.98。该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符,均符合质控标准。结论  建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。     

大半边莲多糖的提取与含量测定

目的:研究大半边莲多糖提取工艺.方法:多糖含量测定采用蒽酮-硫酸法;多糖提取采用水提醇沉法,以大半边莲多糖提取得率为指标进行正交试验设计,考察对大半边莲多糖提取得率的影响因素.结果:多糖含量测定的线性回归方程为A=35.602C+0.030 2(r=0.999 4),线性范围为0.002 6～0.015 4 mg·ml-1.多糖提取的最佳工艺为加入8倍量的水,70℃提取2次,每次1h.结论:为大半边莲提供了稳定可行的多糖提取工艺,多糖含量测定方法准确可靠.     

测定脑膜炎球菌疫苗C群多糖的双抗体夹心ELISA法的建立

目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法.  方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定.  结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5～20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6％ ～9.1％和87.5％ ～ 100.0％,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准.  结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定.