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目的 通过研究冷酚与粗糖的混合比例、粗糖提纯时的质量浓度和乳糖保护剂的用量来制备符合规定的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.方法 发酵细菌,提取A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖粗制品,以不同的纯化工艺纯化A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖.将4种纯化的多糖原液按一定比例混合,加入乳糖作为保护剂,冷冻干燥制成ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.结果 通过比较不同纯化工艺制备的多糖,确定最佳提纯条件为多糖与冷酚的体积比为1∶1,粗糖提纯时的质量浓度为6 g/L.检测按此纯化条件制备的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,3批疫苗的水分含量分别为1.7%、2.0%和2.1%,疫苗的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖含量和回收率分别都≥50 μg/剂和80%,符合相关规定的要求.结论 按确定的工艺成功制备ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗. 相似文献
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目的 建立A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖层析纯化工艺。方法 采用陶瓷羟基磷灰石和DEAE Sepharose FF层析柱,在PBS体系中纯化A群多糖。以0.5%脱氧胆酸钠预处理C群多糖,用陶瓷羟基磷灰石层析柱在PBS体系中纯化C群多糖。以含有脱氧胆酸钠的平衡缓冲液溶解Y和W135群多糖,再用Capto Adhere和Capto DEAE层析柱串联纯化。纯化的多糖经Sephadex G-25 Medium层析柱脱盐后冻干,按中国药典2015年版三部的要求进行检定。结果 经过层析纯化,A、C、Y、W135群多糖的蛋白质含量分别降至3.7、4.2、5.4和5.3 mg/g,核酸含量分别降至1.2、3.0、1.1和0.8 mg/g,均符合药典要求。此外,磷、唾液酸和O-乙酰基含量等指标亦均符合药典标准。结论 建立了A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的层析纯化工艺。 相似文献
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目的 比较检测A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的中国药典(2015年版)方法(方法1)与欧洲药典(8.0版)方法(方法2)的差异,为今后的方法选择及进一步优化提供参考。方法 分别用方法1和方法2检测标准磷溶液和A群脑膜炎球菌多糖疫苗中的磷含量,比较这2种方法的标准曲线、定量限、准确度、精密度、耐用性(溶液稳定性)的差异。 结果 方法1和方法2标准曲线的决定系数均值分别为0.997 3和0.999 3,定量限分别为3.97和2.16 μg。检测同一批A群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,磷含量检测结果的相对标准偏差,方法1和方法2分别为10.3%和7.6%;磷加样回收率,方法1为87.8%~113.1%,方法2为97.1~103.6%。分别将反应溶液放置0、30、60 min后开始比色,方法1和方法2每30 min吸光度升高均值分别为0.059和0.003。结论 2种方法均可用于A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的检测。与方法1相比,方法2的标准曲线线性更佳、检测定量限更低、准确度和精密度更高、耐用性(溶液稳定性)更好。 相似文献
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唐巧英 《国际生物制品学杂志》1986,(2)
B群脑膜炎球菌荚膜多糖不象A群及C群多糖那样具有明显的免疫原性.但B群多糖与B群蛋白混合菌苗可使人体产生杀菌抗体.作者应用化学发光多形核白细胞法检测免疫血清对A、B和C群脑膜炎球菌的调理素反应,以期提供抗脑膜炎球菌感染的有价值的资料. 相似文献
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目的设计正交试验提取二至丸中的多糖类成分并测定多糖含量,将提取物制成颗粒剂。方法 2022年 9—12月采用传统的水提醇沉法提取二至丸中的多糖类成分,进行 L9)正交实验设计,提取温度、提取时间、提取次数对多糖(34探究料液比、提取率的影响,优选多糖提取物的最佳提取工艺;以葡萄糖为标准,采用苯酚 -硫酸法进行样品多糖含量测定;并将提取的多糖提取物进行湿法制粒。结果探究的四个因素对多糖提取率的影响程度为:提取次数 >提取时间 >提取温度 >料液比;最佳提取工艺为:料液比 1∶10(g/mL),提取温度 95 ℃,提取时间 3h,提取次数 3次;所制多糖颗粒剂质量评价结果均符合 2020版《中国药典》标准。结论该研究优化了二至丸中多糖类成分的提取工艺,为二至丸的进一步开发利用提供科学依据。 相似文献
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5年前,首次报道在芬兰的一次A群脑膜炎球菌病流行期间,对3月龄~5岁儿童应用A群脑膜炎球菌多糖菌苗的现场试验获得成功。在这项研究中,13万名儿童接种A群脑膜炎球菌多糖菌苗;49,000名儿童接种b型流感嗜血杆菌多糖菌苗;32,000名儿童未接种菌苗作为对照。结果第1组在接种后第1年内未发生A群脑膜炎球菌病,后2组 相似文献
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目的:研究稀碱法提取金线莲多糖的最佳条件。方法采用DNS法测定多糖含量,以多糖含量为指标,对金线莲多糖的提取沉淀过程中的影响因素进行考察。结果稀碱法提取金线莲多糖的最佳条件是提取温度70℃、提取时间1.5h、料液比1∶35、提取次数2次,静置时间5h、离心转数7000r· min -1、离心时间5min。结论稀碱法提取金线莲多糖是一种效率高且稳定可行的提取方法。 相似文献
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目的:考察复方党参中多糖的最佳提取工艺。方法:超声波辅助法提取复方党参中的多糖,苯酚-硫酸法测定多糖的含量。通过正交设计方法,以多糖含量和浸膏得率为考察指标,优化多糖的提取工艺。结果:四因素中提取次数对实验结果影响最大,为多糖提取工艺的主要影响因素,提取温度为次要因素,其次为溶剂量和提取时间。结论:复方党参多糖最佳提取工艺为药材提取温度40℃、液料比6∶1、提取20min、提取3次。 相似文献
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A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究一种不使用苯酚的荚膜多糖提制工艺,用于疫苗制备。采用液体罐培养A群和C群脑膜炎球菌,杀菌后离心取上清液,用十六烷基三甲基溴化铵沉淀多糖,用氯化钙溶液解离后,加乙醇至25%去除核酸等杂质,经乙醇沉淀获得粗多糖。将粗多糖溶解后,加乙醇至一定浓度沉淀蛋白,离心获得上清液,经超滤浓缩和乙醇沉淀,获得纯化多糖。纯化的多糖生化检测结果符合WHO和《中国药典》(2010年版)规定,豚鼠和小鼠异常毒性检查合格,豚鼠过敏试验未见过敏反应,1H NMR检测显示多糖结构具有一致性。该研究建立的A群和C群脑膜炎球菌荚膜多糖提制工艺为应用于疫苗制备奠定了基础。 相似文献
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目的:扩大肺炎球菌发酵的培养规模,增加肺炎球菌多糖的收量,降低成品疫苗内毒素的含量,以提高肺炎球菌多糖疫苗的产能和质量;制备和标定企业用肺炎多糖参考品,及定性定量检测23价肺炎球菌多糖疫苗用的血清。方法:调整肺炎球菌培养参数及培养过程中糖、碱的补料方式、补料时间,放大肺炎球菌的发酵培养规模;在分段乙醇沉淀过程中添加速度和温度控制、调整乙醇浓度,在酚提过程中调控各种技术参数等,提高精制多糖的收量;控制加入生产过程中主要原辅材料的内毒素含量,并规范操作人员的行为习惯,降低肺炎球菌多糖疫苗成品的内毒素含量。标定自制多糖参考品以及用多糖免疫兔、鼠制备血清参考品。结果:肺炎球菌的发酵体积从500 L提高到1 000 L;精制多糖平均收量提高15%以上;内毒素平均含量控制在20 EU.mL-1以内;制备出23种型别的符合23价肺炎球菌多糖疫苗质量标准的多糖;获得3个型单抗和6个型的多抗。结论:23价肺炎球菌多糖疫苗的产量增加,疫苗质量得到了提升,自主化标准参考品研究进展迅速。 相似文献
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目的考察不同提取方式对金线莲多糖含量、结构及抗氧化活性的影响。方法采用热水回流提取法、超声提取法和酶法分别提取金线莲多糖,苯酚硫酸法测定多糖含量,刚果红实验检测三螺旋结构,采用DPPH自由基清除实验评价其抗氧化活性。结果不同提取方式对多糖的产率和DPPH清除活性均有影响,其中超声提取和酶解提取得到的多糖DPPH自由基清除活性优于热水回流提取所得金线莲多糖;提取所得金线莲多糖不含三螺旋结构。结论综合考虑提取效率、抗氧化活性和工艺成本,超声提取为最优方法。 相似文献
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目的 建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗(group C meningococcal polysaccharide -tetanus toxoid conjugate vaccine, CPS-TT)中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法。 方法 在不同pH条件下用脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证。 结果 DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3%。DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5%。 结论 DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制。 相似文献
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目的研究并确立茯苓皮总多糖的最佳提取和纯化工艺。方法用超声波辅助法提取总多糖,用苯酚-硫酸法测其含量并作为指标,经过单因素实验和正交试验确立最佳提取工艺;用大孔树脂纯化总多糖,以多糖保留率,脱色率和蛋白去除率为指标,经过静态和动态实验,确立最佳纯化工艺。结果以料液比1∶25,温度45℃,超声功率100w,超声时间10min为最佳提取工艺;以AB-8型大孔吸附树脂,溶液pH 5,转速180r·min^-1,上样流速24mL·min^-1,径高比1∶15为最佳纯化工艺。在此条件下静态吸附实验蛋白去除率65.29%,脱色率79.08%,多糖保留率59.50%;动态吸附实验蛋白去除率48.98%,脱色率76.84%,多糖保留率74.58%。结论茯苓皮总多糖的提取纯化工艺稳定可靠,可为其进一步开发提供参考。 相似文献
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通过对比中英两国药典关于儿童免疫规划疫苗质量标准的规定,可看出国内当下儿童免疫规划疫苗质量标准有领先之处亦有不足,中国在重组乙肝和甲肝灭活疫苗游离的甲醛标准、A群流脑多糖与A群C群流脑多糖疫苗抗原、蛋白质及核酸的含量标准、百白破疫苗中的破伤风原液的抗原纯度标准、重组乙肝和吸附百白破联合疫苗的铝含量标准规定上要严于英国.... 相似文献
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目的 优化酵母发酵鲜党参中多糖的提取工艺,并评价其体外免疫活性。方法 以酵母发酵鲜党参为原料,通过木瓜蛋白酶辅助提取,乙醇沉淀得到酵母发酵鲜党参中多糖,以提取温度、时间、酶添加量为影响因素,多糖得率为指标,以水提法为对照,进行单因素实验结合响应面设计开展工艺优化,通过高效凝胶渗透色谱法测定多糖的相对分子量,通过MTT法研究多糖对体外脾淋巴细胞和RAW264.7细胞的增殖活性。结果 酵母发酵鲜党参中多糖的最佳提取工艺为提取温度63 ℃,提取时间6 h,酶添加量4%,多糖的提取率17.46%,比水提法(12.69%)提高。且糖醛酸含量提高。酶提法和水提法得到的多糖相对分子量无明显变化。当多糖浓度为0.5,1.0 mg·mL-1时,给予酶提多糖的脾淋巴细胞增殖活力和RAW264.7细胞增殖活力均比水提法增加。结论 本研究优选出的酵母发酵鲜党参中多糖的提取工艺切实可行,多糖提取率高且免疫活性显著增强。 相似文献
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目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌(meningococcus,Men)多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4)多糖含量的火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIE)法。方法 分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果 菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均大于0.98。该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符,均符合质控标准。结论 建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。 相似文献
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目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法. 方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定. 结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5~20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6% ~9.1%和87.5% ~ 100.0%,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准. 结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定. 相似文献