LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨LY294002联合顺铂对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的影响及机制研究.方法 将A2780和SKOV3细胞分为正常对照组、LY294002组、顺铂组和LY294002+顺铂组,采用CCK-8法检测不同浓度的LY294002(10、20、40、60)μmol/L和顺铂(5、15、25、40)μmol/L处理...     

稳定过表达XAF1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

目的 构建稳定过表达XAF1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察XAF1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法 分别将质粒pcDNA3.1（+）和pcDNA3.1（+）-XAF1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记（遗传霉素G418）筛选得到阴性对照细胞株（A2780/Negative control, A2780/NC）和稳定表达XAF1的细胞株（A2780/XAF1）;通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果 成功构建了稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1,细胞形态无明显变化;与A2780/NC相比,A2780/XAF1克隆形成能力能力更低（P= 0.0016）,细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低（P=0.009,0.0035）,两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义（P< 0.0001）,两两比较结果显示A2780/XAF1组G2-M期细胞百分比显著增加（P<0.001）。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下,A2780/XAF1的凋亡率均比A2780/NC更高（P<0.001）;在不同紫杉醇浓度作用下,A2780/XAF1的增殖活性均显著低于A2780/NC（P<0.001）,且A2780/XAF1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论 成功构建稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1;XAF1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期,并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。     

siRNA抑制eIF4E基因的表达对卵巢癌A2780细胞生物学行为的影响

目的:探讨真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因在卵巢癌细胞生长增殖、迁移侵袭以及对顺铂敏感性中的作用。方法:采用eIF4E基因的特异shRNA表达质粒转染卵巢癌A2780细胞,通过siRNA抑制eIF4E的表达,采用real time-PCR和Western印迹法检测siRNA对eIF4EmRNA和蛋白表达水平的抑制作用,优化转染作用条件。进而分析eIF4E敲降后,A2780细胞生物学行为的变化。结果:特定的siRNA对eIF4E基因的表达有显著的抑制作用;eIF4E敲降后,与对照组比较,A2780细胞的增殖明显受到抑制(P<0.05),对顺铂的敏感性明显增强;细胞划痕实验和Transwell侵袭实验发现A2780细胞的运动侵袭能力显著下降(P<0.05);细胞周期分析发现A2780细胞S期细胞比例略有下降,G1期细胞比例略有上升,但无统计学意义(P>0.05)。结论:抑制eIF4E基因的表达,可以显著抑制卵巢癌细胞增殖、抑制细胞的迁移侵袭能力,增强细胞对顺铂敏感性。上述结果为卵巢癌的分子机制及顺铂敏感性的研究提供了新依据;也为卵巢癌的临床治疗提供了新靶点基因。     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的:探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组:对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果:MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为(37.20±2.01)%、(51.60±2.10)%和(57.47±2.85)%,明显高于其他各处理组(P<0.05);Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组(P<0.05)。结论:超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的：探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法：将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组：对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果：MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为（37.20±2.01）%、（51.60±2.10）%和 （57.47±2.85）%,明显高于其他各处理组（P＜0.05）;Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组（P＜0.05）。结论：超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

震颤同系物-5过表达对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨RNA结合蛋白震颤同系物-5(QKI-5)在卵巢癌细胞中的表达以及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:通过免疫印迹实验(Western blot)检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中QKI-5的表达差异,并选取QKI-5相对表达水平最低的卵巢癌细胞进行过表达慢病毒感染,构建稳定转染细胞系后通过细胞增殖和毒性分析...     

唾液酸酶NEU1 siRNA对人卵巢癌OVCAR3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨唾液酸酶1(neuraminidase,NEU1)小干扰RNA (siRNA)对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。 方法 将人类卵巢癌细胞OVCAR3接种于无抗生素的培养基后进行NEU1 RNA沉默处理。对照组转染加入250 μl Opti-mem无血清培养基,模型组(MOCK)转染加入245 μl Opti-mem无血清培养基和5 μl MOCK siRNA (100 pmol),实验组转染加入245 μl Opti-mem无血清培养基和5 μl NEU1 siRNA (100 pmol)。处理48 h后,收集被转染的细胞,并进行免疫印迹,细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞侵袭试验。 结果 细胞增殖试验和凋亡试验(流式细胞术)结果表明,与模型组相比,NEU1 siRNA能有效抑制癌细胞增殖,阻滞细胞周期G₀/G₁期,并且诱导细胞凋亡。Transwell实验的结果表明,经NEU1 siRNA处理过的OVCAR3细胞侵袭力被显著抑制。此外,Western blot结果表明NEU1 siRNA可抑制Cln3和Cln5的表达以及降低ATP5B和ATP5J的表达水平。 结论 NEU1 siRNA能有效抑制人类卵巢癌OVCAR3细胞的增殖、凋亡和侵袭,为卵巢癌的靶向治疗提供了一个新方向。      

氯喹对卵巢癌细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的：探讨氯喹对卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法：采用CCK8法检测不同浓度氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞后的增殖能力;克隆形成实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞克隆形成的影响;划痕实验和Transwell实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞的迁移能力的影响;红绿双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬双标质粒转染A2780细胞和SKOV3细胞,荧光显微镜观察氯喹处理48 h后自噬小体的形成和自噬流的变化;Western Blot检测氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞48 h后自噬标志蛋白LC3的表达及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结果：氯喹显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖能力和迁移能力,另外,氯喹处理能显著抑制卵巢癌细胞的自噬水平。A2780细胞和SKOV3细胞经氯喹处理后LC3Ⅱ、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达水平显著增高,而AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低。结论：氯喹能显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖和迁移能力,并可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞自噬。     

Bcl-2抑制剂S1诱导的卵巢癌细胞凋亡对自噬影响的实验研究

【目的】 凋亡与自噬密切相关,但二者之间的关系尚需进一步探究。本研究利用Bcl-2抑制剂S1建立卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡模型,初步探究S1诱导的SKOV3细胞中凋亡对自噬的影响。 【方法】 培养SKOV3细胞。用MTT法检测S1对细胞生存率的影响。用流式细胞术检测细胞凋亡率。用蛋白质印迹方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3和自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。用免疫荧光技术检测Beclin1及LC3蛋白的表达情况。在S1作用的基础上,应用广谱caspase抑制剂Z-VAD抑制caspase后,检测SKOV3细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。 【结果】 S1能够降低SKOV3细胞的生存率;增加SKOV3细胞的凋亡率。与对照组(0 h)相比,S1组(2、4、8、12、24、48 h)中的Bcl-2蛋白表达持续降低,Bax及caspase3蛋白表达持续增高,呈现出明显的时间依赖性;S1组(2、4、8、12、24、48 h)中自噬的发生也呈时间依赖性,但自噬并不是持续增强的,在12 h时,自噬相关蛋白Beclin1和LC3蛋白表达水平最高,12 h后则呈下降趋势,Beclin1和LC3的荧光结果也表现出一致的现象。与S1单独作用(8、24 h)相比较,给予广谱caspase抑制剂Z-VAD,8 h结果显示 Beclin1及LC3蛋白的表达水平基本无变化,而24 h结果显示Beclin1及LC3蛋白的表达水平显著增高,同时荧光实验也显示出同样的结果。 【结论】 在SKOV3细胞中,S1通过抑制Bcl-2、促进Bax释放,诱导细胞发生凋亡,并呈时间依赖性增强。同时S1通过抑制Bcl-2,释放自噬起始基因Beclin1,诱导自噬发生。但是自噬并未始终呈时间依赖性增强,自噬水平在S1长时间作用下反而出现下降的趋势。据此推测,随着S1诱导凋亡的不断增强,大量活化的caspase可能通过裂解自噬起始基因Beclin1,从而抑制Beclin1诱导的自噬。     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响

目的探讨小蘖碱对体外培养人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响。方法选用人卵巢癌细胞株SKOV-3进行体外培养,以5-100μmol/L小蘖碱分别处理SKOV-3细胞24-72h,MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;SABC法检测survivin、caspase-3在细胞中的表达。结果小蘖碱能显著抑制SKOV-3细胞体外生长,呈时间剂量依赖性。小蘖碱作用24h随浓度的升高survivin阳性表达逐渐降低,caspase-3阳性表达逐渐升高。流式细胞仪分析证实小蘖碱能使SKOV-3细胞积聚在S期和G2/M期。结论小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3的生长有显著的抑制作用,survivin的表达下降、caspase-3的表达上调可能参与了诱导细胞凋亡。     

成纤维细胞激活蛋白对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的通过体外实验研究成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人类卵巢癌细胞系0VCAR3,用不同浓度的FAP(0、0.0625、0.125、0.25、0.5及1μg/mL)处理24 h或48 h后,通过MTT法检测FAP对卵巢癌细胞增殖的影响。0VCAR3用不同浓度的FAP(0、0.0625、0.25及1μg/mL)处理48 h后,通过流式细胞术检测FAP对OVCAR3细胞凋亡的影响。结果 MTT法示FAP可促进卵巢癌细胞OVCAR3增殖,其作用呈时间、剂量依赖性(P0.05);流式细胞术示FAP对卵巢癌细胞系OVCAR3的细胞凋亡率并无明显影响(P0.05)。结论 FAP可促进卵巢癌细胞系OVCAR3的增殖,对其凋亡水平无明显影响。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响

目的:观察全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响,为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供实验依据.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,以不同浓度的ATRA处理HO8910细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况,倒置显微镜进行形态学观察,Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果:(1)ATRA浓度为10~(-7)～10~(-5)mol/L时,均明显抑制HO8910细胞的增殖(P<0.05),并具有时间-剂量依赖性.24、48、72 h ATRA抑制HO8910细胞增殖的IC_(50)值分别为2.331×10~(-5)、0.998×10~(-6)、0.891×10~(-7)mol/L.(2)倒置显微镜可观察到经10~(-6)mol/LATRA处理的HO8910细胞部分发生形态学的良性分化.(3)体外侵袭实验显示经10~(-6)mol/L ATRA处理的HO8910细胞,穿膜细胞数目明显减少(P<0.05).结论:ATRA能明显抑制人卵巢癌细胞株HO8910的增殖、侵袭能力,有望为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供新的有效的途径.     

姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抗增殖作用

目的:探讨姜黄素对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖作用及其机制.方法:采用MTT法测定姜黄素在不同浓度、不同时间对SKOV3的抑制增殖效应,流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率,透射电镜观察细胞的超微结构变化,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因蛋白的表达.结果:姜黄素可抑制SKOV3细胞的生长,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系,72h的中效浓度(IC50)为79.96μmol/L,流式细胞仪分析证实姜黄素能使SKOV3细胞聚积在G2/M,电镜观察发现姜黄素可诱导细胞凋亡,姜黄素作用72h后,免疫细胞化学表明突变型P53蛋白(MTP53)及Bcl-2表达减弱,Bax及Fas表达增强.结论:姜黄素对SKOV3细胞有抑制增殖作用,通过下调MTP53、Bcl-2的表达及上调Bax、Fas的表达而诱导细胞凋亡.     

乌苯美司在晚期卵巢癌化疗中的应用

目的：观察乌苯美司在晚期卵巢癌化疗中对患者免疫功能的影响和对患者生活质量的作用。方法：将100例晚期卵巢癌患者随机分为对照组（40例）和治疗组（60例）,两组患者均行P1、方案化疗。治疗组患者加服乌苯美司30mgqd共6个月,4个周期后评价化疗疗效和毒副反应,以化疗前和化疗6周期后患者KPS评份、体重变化评价患者的生活质量和一般体力状况。结果：4周期化疗后两组有效率分别为55％（对照组）和56．7％,无显著差异;对照组的重度骨髓抑制发生率（55％）高于治疗组（23．3％）,有统计学意义;治疗组KPS评分稳定率和体重稳定率为82．8％和79．3％,而对照组为55．6％和50％,两者比较均有统计学意义。结论：乌苯美司联合化疗对晚期卵巢癌患者免疫功能有一定改善作用,减轻了毒副反应,改善了生活质量。     

“cell-in-cell”对胃癌细胞生物学行为的影响

目的 探究胃癌肿瘤细胞与免疫细胞cell-in-cell的形成对胃癌细胞生物学行为的影响。 方法 胃癌细胞与单核淋巴细胞（PBMC）的共培养体系分为对照组、1∶1组和5∶1组。PBMC和BGC823细胞分别以1∶1和5∶1的接种到24 孔板中（共5×10 4个）。通过吉姆萨染色检测“cell-in-cell”构建情况。分别检测各组细胞增殖、凋亡和侵袭能力。 结果 1∶1组的“cell-in-cell”构建率为（8.65±1.06）%。5∶1组的“cell-in-cell”构建率为（12.92±1.32）%,显著高于1∶1组（P＜0.05）。3组细胞的生物学行为水平比较差异显著（P＜0.05）。1∶1组的增殖和侵袭能力显著高于对照组,而凋亡率显著低于对照组（P＜0.05）。5∶1组的增殖和侵袭能力显著高于1∶1组和对照组,而凋亡率显著低于1∶1组和对照组（P＜0.05）。 结论 胃癌细胞与免疫细胞形成的“cell-in-cell”结构会促进胃癌细胞的增殖和侵袭并抑制凋亡。     

舒芬太尼调控LINC00668对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究舒芬太尼调控LINC00668对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响.方法 分别给予终浓度为25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的舒芬太尼处理A2780细胞,记为实验1、2、3组,正常培养的细胞作为对照组;将si-NC、si-LINC00668分别转染至A2780细胞中,记为si-NC组、si-LIN...     

Survivin与卵巢癌的研究进展

Survivin基因是近年来新发现的一种抗凋亡蛋白，具有高度的组织分布特异性和强大的抗凋亡功能，逐渐成为肿瘤发病及治疗研究中的一个热点。本文重点介绍Survivin的结构和功能及其在卵巢癌的诊断和治疗中的作用。     

卵泡刺激素对卵巢癌细胞株增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的 观察卵泡刺激素（FSH）对卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法将FSH以不同浓度（10、20、40、80、160mU／m1）分别作用于1×10^5或2．5×10^6个SKOV-3细胞和6×10^4或1．5×10^6个ES-2细胞,FSH0mU／ml为对照组,其中FSH作用于SKOV-3细胞的适宜时间为48h,ES-2细胞为24h,分别测定细胞的增殖活性;细胞凋亡和细胞周期情况;细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的活性;SKOV-3和ES-2细胞内MMP-2蛋白及mRNA表达的变化;细胞的迁移侵袭能力。结果 （1）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的增殖活性升高,与对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（2）随着FSH浓度的增加,SKOV-3细胞的凋亡率下降,分别为0．94％±0．06％、0．71％±0．03％、0．22％±0．02％、0．32％±0．02％、0．55％±0．05％,与对照组（1．30％±0．10％）比,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。（3）FSH浓度自40mU／ml起,SKOV-3细胞G0／G1（均P〈0．05）。（4）FSH可提高SKOV-3细胞MMP-2mRNA和胞质中MMP-2蛋白含量及细胞培养上清液中MMP-2的活性。（5）侵袭实验：SKOV-3细胞加FSH组和对照组穿透基底膜细胞数分别为（157±20）、（27±9）个／高倍镜（×200）,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;划痕实验也显示FSH提高了SKOV-3细胞的迁移能力。FSH作用于ES-2细胞的表现与SKOV．3细胞基本一致。结论 FSH可促进卵巢癌细胞株SKOV-3和ES-2细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。