配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的各病毒原液最适滴度研究

目的 研究配制麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles-mumps-rubella-varicellacombined attenuated live vaccine,MMRV)的各病毒原液最适滴度.方法 将麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液分别冻干,检测各冻干单价疫苗的滴度和热稳定性,观察病毒滴度的下降幅度.将4种病毒原液按不同配比配制MMRV,检测配制前后的各病毒滴度,摸索配制MMRV的最佳配比.按确认的最佳配比配制MMRV并冻干,检测冻干MMRV的各病毒滴度和热稳定性,确定配制MMRV的各病毒原液最适滴度.结果 各病毒原液冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.4 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml;各冻干单价疫苗37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒的滴度分别下降约0.6、0.5、0.5 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml.在配制MMRV过程中,仅腮腺炎病毒可能在一定程度上受到其他病毒的干扰.按确认的最佳配比配制的MMRV冻干后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.5、0.6、0.5 lgCCID50/ml和0.6 lgPFU/ml;冻干MMRV于37℃放置1周后,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒滴度分别下降约0.6、0.6、0.5 lgCCID50/ml和0.5 lgPFU/ml.结论 在按确认的最佳配比配制MMRV时,麻疹、腮腺炎、风疹和水痘病毒原液的滴度需分别≥6.0、≥6.5、≥6.0 lgCCID50/ml和≥5.3 lgPFU/ml.     

麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗的研制

目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞或人胚肺二倍体细胞2BS株中制备高滴度疫苗病毒原液.观察4种原液按不同比例稀释配制后病毒的滴度变化和相互干扰现象,确定MMRV疫苗中4种原液的配制比例,并筛选适宜保护剂,建立最佳冻干工艺.同时,建立MMRV联合减毒活疫苗的检定方法.采用t检验对结果进行比较.结果 选择最佳配制比例、保护剂和冻干工艺制备出连续多批MMRV疫苗,按国家药典要求检定全部合格.其中连续3批疫苗经国家检定机构检定合格:麻疹病毒基础滴度和37℃放置7d后的滴度分别≥3.9和≥3.5 lg半数细胞培养感染量(50％ cell culture infective dose,CCID50)/ml,腮腺炎病毒≥5.0和≥4.7 lgCCID50/ml,风疹病毒≥5.0和≥4.8 lgCCID50/ml,水痘病毒≥4.5和≥4.4 lg噬斑形成单位/ml.用建立的方法检测MMRV疫苗,结果4种病毒滴度实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t值为0.149～1.838,P值均＞0.05).结论 建立了稳定、可行的MMRV疫苗生产工艺和检定方法.     

麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度测定方法研究

目的 建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法.方法 首先通过比较温度,确定中和条件;再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力,确定每种抗血清的使用浓度.观察抗血清对2BS细胞生长的影响和对水痘病毒的干扰作用.采用t检验对结果进行比较.结果 与37℃1h相比,4℃1h的中和条件能准确反映MMRV疫苗中水痘病毒的滴度水平(t=6.7082,P＜0.01).3种抗血清(麻疹1∶80、腮腺炎1∶40、风疹1∶40)混合后对2BS细胞生长无影响,对不同滴度水痘病毒无干扰(高滴度t=0.4472,P＞0.05;中滴度t=0.9045,P＞0.05;低滴度t=0.3536,P＞0.05).使用建立的方法测定MMRV疫苗中水痘病毒滴度,实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t=1.7533,P ＞0.05).结论 建立了MMRV联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法.     

腮腺炎病毒在转瓶和细胞工厂中制备的比较

目的 比较15 L转瓶及40层细胞工厂工艺制备腮腺炎减毒活疫苗的病变情况、病毒滴度和原液各项质量指标。方法 分别采用15 L转瓶及40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞1～3 d后感染S79株腮腺炎病毒,继续培养至5～7 d收获病毒液。两种培养方式收获的腮腺炎病毒单次收获液分别合并后获得疫苗原液,并进行相关检定。结果 转瓶收获的单次病毒液0和21 d检定的平均滴度分别为6.6、6.1 lg半数细胞培养感染量（50% cell culture infective dose,CCID₅₀）/ml。细胞工厂收获的单次病毒液0和21 d检定的平均滴度分别为6.8、6.2 lgCCID₅₀/ml。两种方式制备的腮腺炎减毒活疫苗原液各项质量指标均合格。结论 应用40层细胞工厂工艺制备腮腺炎减毒活疫苗的细胞病变情况及单次病毒收获液滴度均优于15 L转瓶培养工艺,此实验为40层细胞工厂制备腮腺炎减毒活疫苗的大规模生产及工艺改进奠定了基础。     

麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗研制

目的 研制中量规模麻疹腮腺炎风疹(measles,mumps and rubella,MMR)联合减毒活疫苗.方法 应用本所自主开发的麻疹病毒纯化沪-191株以及腮腺炎病毒S79株和风疹病毒BRD Ⅱ株制备3种疫苗原液,检测3种疫苗原液按不同比例稀释后病毒的滴度变化和相互之间的干扰现象,确定MMR疫苗中3种疫苗原液的配制比例和半成品配方.产品送国家检定部门进行全面质量检定.观察管制抗生素玻璃瓶包装疫苗的稳定性.结果 3种疫苗原液的病毒滴度在稀释体积增加1倍时下降幅度约为0.35～0.50 lg CCID50/ml,3种病毒之间无明显干扰现象.麻疹、腮腺炎、风疹、稳定剂的配制比例为1∶2∶1∶1.16批中试产品自检、7批产品经国家检定部门检定全部合格,保存21个月稳定性良好.结论 产品全面达到临床前研究的标准.     

两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗加速稳定性可比性研究

目的  通过强制降解试验,对细胞工厂与转瓶培养两种工艺制备的麻疹减毒活疫苗进行加速稳定性可比性研究。方法  取细胞工厂与转瓶培养工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液和原液各3批于25 ℃保存10 d,疫苗成品3批于37 ℃保存10 d。按照中国药典2015版三部和企业标准进行病毒滴度检定。利用Minitab 19比较两种工艺产品的病毒滴度降解曲线。结果  所有样品的降解曲线均符合麻疹病毒的热敏感性。2种工艺制备的麻疹减毒活疫苗单次收获液病毒滴度第1组分别下降1.51和1.56 lg细胞培养半数感染量（CCID₅₀）/ml,第2组均下降1.33 lg CCID₅₀/ml,第3组均下降1.54 lg,原液分别下降1.20和1.43 lg CCID₅₀/ml,成品分别下降1.33和1.30 lg CCID₅₀/ml。2种工艺产品的降解曲线相似。结论   细胞工厂与转瓶培养工艺生产的麻疹减毒活疫苗具有相似的加速稳定性。     

麻疹风疹联合减毒活疫苗的稳定性观察

目的  观察麻疹风疹联合减毒活疫苗（麻风二联）的稳定性。方法  将17批北京生物制品研究所有限责任公司（北京公司）2012—2017年生产的麻风二联存放于（5±3）℃,分别在0、9、12、18和24个月按照企业注册标准和中国药典2010或2015年版三部要求进行相关检测。同时对新、旧车间生产的各3批疫苗进行主要质量指标比对。结果  随着存放时间延长,疫苗的病毒滴度呈逐渐下降趋势,麻疹病毒滴度波动于3.9~4.8 lg半数细胞培养感染量（CCID₅₀)/ml,风疹病毒滴度波动于4.0~4.8 lgCCID₅₀/ml,热稳定病毒滴度下降均不超过1.0 lg,疫苗水分不高于3.0%,疫苗的其余各项指标均符合企业注册标准和中国药典要求。新、旧车间生产的疫苗质量没有差别。结论  北京公司生产的麻风二联的质量稳定。     

麻疹减毒活疫苗生产工艺优化

目的 调整优化现行麻疹疫苗原液生产工艺,为提高麻疹疫苗及其联合疫苗质量提供参考。方法 应用10层细胞工厂(CF10)、三种不同感染复数(MOI)和两种换液次数制备麻疹单价疫苗及其联合疫苗,并取2020年北京生物制品研究所有限责任公司疫苗一室生产的麻腮风联合减毒活疫苗原液商业批的连续三批为对照组,通过比较活细胞数、细胞存活率来确认各组间基线一致性,通过比较麻疹病毒滴度与细胞病变程度、麻腮风成品中麻疹病毒滴度及其热稳后滴度来评估优化后的工艺效果。结果 各组细胞悬液所含活细胞数与存活率均符合国家规定,具有较好的基线一致性。其中E组滴度均数和标准差波动幅度较理想,一收滴度为(5.77±0.07)lgCCID₅₀/ml,二收滴度为(6.00±0.08)lgCCID₅₀/ml,原液滴度为(5.97±0.05)lgCCID₅₀/ml,E组病变程度更高、面积更大、分布更均匀,与滴度结果相匹配。热稳试验后各组滴度均有不同程度下降,E组方案制备的MMR中麻疹单基滴度和热稳下降幅度较理想,单基滴度为(4.23±0.07) lgCCID     

不同稳定剂配方的麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗的稳定性研究

目的 对比不同冻干稳定剂配方对麻疹-腮腺炎-风疹-水痘联合减毒活疫苗(measles,mumps,rubella and vericella combined live attenuated vaccine,MMRV)稳定性的影响,初步筛选出最佳配方。方法 对比2种含明胶（配方1、2）和1种无明胶冻干稳定剂配方（配方3）对MMRV在37、25及2～8 ℃保存后关键质量指标的影响。结果 37 ℃加速稳定性试验中,仅配方3产品4种病毒滴度均在合格范围内。25 ℃加速稳定性试验中,配方1产品1个月时腮腺炎和水痘病毒滴度即全部低于质量标准下限,配方2、3产品放置6个月,所有4种病毒滴度均在质量标准范围内,但配方2腮腺炎及水痘病毒滴度均处于标准下限。2~8 ℃长期稳定性试验中,配方1产品放置6个月,腮腺炎及水痘病毒滴度均低于质量标准下限,配方2、3产品的病毒滴度稳定性可分别保持18和24个月。结论 针对MMRV开发的无明胶冻干稳定剂配方3在冻干和保存过程中对4种病毒的活性保护效果最佳,其产品有效期至少为2年,并有进一步延长的潜力。研究结果也为日后研发降低明胶使用含量的麻疹系列疫苗冻干稳定剂配方提供了支持。     

麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗生产场地变更的质量可比性研究

目的  比较生产场地变更前后生产的麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗（麻腮风疫苗）的关键质量指标及其变化趋势。 方法   新老车间同步各生产3批麻腮风疫苗,比较新老车间生产的疫苗的关键指标及其变化趋势,同时对新老车间生产的疫苗进行稳定性和安全性比较研究。 结果   新老车间生产的疫苗成品的关键质量指标均符合相关规定的要求,其中新车间生产的疫苗的水分为1.6%~1.8%,其麻疹、腮腺炎和风疹病毒滴度分别为4.1~4.3、4.8~5.0 和3.9~4.1 lgCCID₅₀/ml,与老车间生产的疫苗（水分为1.6%~2.1%,麻疹、腮腺炎和风疹病毒滴度分别4.0~4.3、4.8~5.0和4.1~4.2 lgCCID₅₀/ml）相似。新老车间生产的疫苗成品的稳定性和安全性实验结果均符合相关规定的要求,且新老车间生产的疫苗的稳定性实验结果相似,新老车间生产的疫苗的抗生素残留量（t＝3.46,P>0.05）和牛血清白蛋白残留量（t＝2.00,P>0.05）间的差异无统计学意义。 结论   麻腮风疫苗生产场地变更未对其制品质量产生影响。     

Live attenuated measles, mumps, rubella, and varicella zoster virus vaccine (Priorix-Tetra)

The live attenuated tetravalent vaccine against measles, mumps, rubella, and varicella zoster viruses (MMRV) is a combination of the measles, mumps, and rubella (MMR) vaccine and the varicella zoster virus vaccine. The immunogenicity after each dose of a two-dose vaccination course of MMRV vaccine was generally similar to that of two doses of separately administered MMR plus varicella zoster vaccines, or a single dose of separately administered MMR plus varicella zoster vaccines followed by a dose of MMR vaccine, in infants aged 9-24 months. In infants aged 9-24 months administered a two-dose course of MMRV vaccine, geometric mean titers for antibodies against all vaccine antigens increased after the second dose relative to the first dose, with the increase being most pronounced for varicella zoster virus antibodies (10- to 21-fold). MMRV as the second vaccination was immunogenic in children aged 5-6 years who had previously received either MMRV or MMR as the first vaccination at 12-24 months of age. The immunogenicity for measles, mumps, rubella, and varicella zoster viruses, in terms of seropositivity and antibody titers, was not altered when MMRV was coadministered with a booster dose of diphtheria, tetanus, acellular pertussis, hepatitis B, inactivated poliovirus, and Haemophilus influenzae type b conjugate vaccine in infants aged 12-23 months. Nor was the immunogenicity of the latter vaccine altered by coadministration. The tolerability profile of MMRV vaccine was comparable to that of separately administered MMR plus varicella zoster vaccines or of MMR vaccine alone. Injection-site redness and fever (rectal temperature > or =38degreesC or axillary temperature > or =37.5degreesC) were the most frequent adverse events in both groups.     

水痘减毒活疫苗无明胶稳定剂的筛选和应用

 目的   研制不含明胶的新型稳定剂,以提高水痘减毒活疫苗的安全性。方法   以现行水痘减毒活疫苗稳定剂配方为基础,去除明胶,配制4种不同的新型稳定剂（B、C、D、E配方）。用无明胶稳定剂制备水痘减毒活疫苗,并将制备的无明胶稳定剂疫苗（B、C、D、E疫苗）与现行的含明胶稳定剂疫苗（作为对照的A疫苗）进行比较,确定最佳稳定剂配方。结果   疫苗成品于37 ℃放置7 d后,A、B、C、D、E疫苗的相关质量指标均符合《水痘减毒活疫苗注册标准》的要求,病毒滴度分别为3.6、3.5、3.3、3.3、3.3 lg PFU/0.5 ml,但C、D、E疫苗的病毒滴度已降至临界值。疫苗成品于2~8 ℃放置24个月后,A、B、C、D、E疫苗的病毒滴度分别为3.4、3.4、3.2、3.0、2.8 lg PFU/0.5 ml,其中C、D、E疫苗的病毒滴度已低于规定的标准（3.3 lg PFU/0.5 ml）,仅B疫苗的相关质量标准符合规定的要求,且与A疫苗（对照）没有差异。 结论   去除明胶的B配方稳定剂对水痘病毒有较好的保护作用。