BmKNJX10对大鼠背根神经节神经元外向钾电流的影响

目的:作者运用柱层析和高效液相色谱的方法,从东亚钳蝎毒素中分离纯化获得一个长链组分BmKNJX10, 质谱报告结果显示其相对分子质量为7214。本文研究其对神经元钾电流的影响。　方法:采用全细胞膜片钳技 术,观察了BmKNJX10对大鼠背根神经节(DRG)神经元外向钾电流(IK)的作用。　结果:BmKNJX10以浓度依赖 的方式对IK有明显的促进作用。在刺激电压为+20mV时,10mg/L、30mg/L、50mg/L和70mg/LBmKNJX10对 IK的增大率分别为(17.1±3.9)%(n=4)、(25.1±6.2)%(n=4)、(45.3±2.8)%(n=5)和(70.2±11.1)%(n= 3)。　结论:BmKNJX10具有开放钾通道的功能,可能属于一个新的钾通道毒素多肽。     

马桑内酯对大鼠瞬时外向钾电流的影响

目的:用全细胞膜片钳记录技术,研究马桑内酯(Coriaria Lactone,CL)对培养大鼠皮层神经元瞬时外向钾电流(Transient outward potassium current,IA)的影响,从而探讨CL癫痫的电生理机制及与IA的关系,为临床更有效地防治癫痫提供新的依据.方法:采用全细胞膜片钳技术记录IA,进行以下实验:①培养大鼠皮层神经元IA的特性及鉴定;②三种不同浓度CL对神经元IA的影响;③CL对神经元IA的I-V曲线的影响;结果:测试电压为 65mV时,5μg·ml-1、50μg·ml-1、100μg·ml-1CL后均可抑制IA的电流振幅,其抑制均有统计学差异;50μg·ml-1与100μg·ml-1CL的效应无显著性差异.结论:CL具有抑制瞬时外向钾电流的作用,且在一定范围内呈剂量依赖性,这可能与CL的致痫机制有关.     

电压门控钠通道Nav1.6在骨癌痛模型大鼠背根神经节中的表达

目的建立大鼠胫骨癌痛模型,并观察电压门控钠通道亚型Nav1.6在其背根神经节(DRG)中的表达。方法雌性Wistar大鼠随机分为3组:癌痛组(n=15)大鼠左胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞,假手术组(n=10)注射生理盐水,以正常大鼠作为空白对照组(n=10)。于造模后第4、8、12、16、20日,观察大鼠体质量变化,评估机械性痛觉过敏以及热痛觉过敏。造模后20 d,取接种侧胫骨做病理切片,观察肿瘤生长情况,real-time PCR检测大鼠L5~L6DRG中Nav1.6 mRNA的表达。结果癌痛组大鼠出现进行性加重的疼痛行为学改变,癌痛组大鼠DRG中Nav1.6 mRNA的表达量明显高于假手术组和空白对照组(P<0.05)。结论 Walker256乳腺癌细胞制备的大鼠胫骨癌痛模型是骨转移瘤相关疼痛较可靠的模型。Nav1.6mRNA在骨癌痛模型大鼠DRG中的表达上调,提示该通道可能参与骨癌痛的发生过程。     

水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流及其尾电流的影响

目的 采用全细胞膜片钳技术记录耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion neurons,SGNs)外向整流钾电流及其尾电流,分析水杨酸钠对耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流的影响,初步探讨其耳毒性机制.方法 采用全细胞膜片钳技术记录急性分离并进行细胞短时间(2～3 h)血清培养后,耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流及其尾电流曲线,同时记录不同浓度水杨酸钠(0.01、0.1、0.5、1、10 mmol/L)对2种电流的影响.结果耳蜗SGNs上可记录到外向电流,该电流对4-氨基吡啶(4-AP)敏感,证明其为钾电流,该钾电流具有延迟整流特性;1 mmol/L水杨酸钠能明显抑制耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流;+50 mV的去极化电压刺激可使最大稳态电流幅值减少(46.3±2.0)%,水杨酸钠对此电流的抑制具有浓度依赖性,外液洗脱后耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流可基本恢复正常.另外,可记录出耳蜗SGNs延迟整流钾电流的尾电流曲线;水杨酸钠可降低此尾电流峰值,并缩短尾电流的时间常数,加速尾电流的失活.结论 钾电流在耳蜗SGNs正常电生理活动中有重要作用.水杨酸钠抑制耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流,并加速尾电流的失活,这种作用可导致耳蜗SGNs的电生理活动异常,从而引发水杨酸钠对听觉功能的损害.     

心室肌M细胞瞬时外向钾电流特性研究

目的 研究表明犬心室壁中层心肌细胞（Ｍ细胞）具有独特的电生物特征，如动作电位时程有较强的频率依赖性。本文观察Ｍ细胞瞬时外向钾电流特征，并讨论其与动作电位特征的关系。方法 酶解犬左心室心肌Ｍ细胞及心内、外膜层肌细胞，应用膜片钳全细胞记录技术观察并比较其单个心肌细胞的瞬时外向钾流特征。结果（１）Ｍ细胞和心外膜层肌细胞的瞬时外向钾流较心内膜层仙细胞明显地大。（２）Ｍ细胞瞬时外向钾流具有显著频率依赖性，即     

骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节P2X3受体的表达变化

目的:观察骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达变化,初步探讨其可能的意义。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为3组（每组n=20）：空白对照（C）组;骨癌痛模型（CP）组,左胫骨内接种含2×105个Walker-256大鼠乳腺癌细胞的悬液10 μl;假手术（S）组,左侧胫骨骨髓腔内注入等体积的生理盐水。在接种后第4、7、10、14、17、21天进行疼痛行为学测试,在第14、21天各组分别选10只大鼠,取背根神经节,5只行免疫组化染色,另5只抽提RNA行实时PCR,检测背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达。结果:CP组大鼠在胫骨内接种肿瘤后第10天开始出现痛觉过敏,第14~21天最为明显。CP组接种肿瘤后第14、21天患侧背根神经节神经元中P2X3受体免疫阳性细胞率明显增高（P<0.05）,mRNA表达水平显著增高（P<0.05）。结论:骨癌痛模型大鼠存在痛觉敏化,可能与P2X3受体表达增高有关。     

阿米洛利对甲状腺素诱发大鼠肥厚心肌的瞬时外向钾电流的作用

目的研究阿米洛利对甲状腺素诱发大鼠肥厚心肌瞬时外向钾电流(Ito)的作用,观察正常组、肥厚组及阿米洛利处理组心肌细胞Ito特性的不同,以阐明肥厚大鼠心肌细胞动作电位的变化及阿米洛利抗心肌肥厚的电生理机制。方法大鼠ipL-甲状腺素造成心肌肥厚模型后,用标准微电极技术记录大鼠右心室乳头状肌动作电位;用膜片钳技术记录大鼠单个心室肌细胞的Ito。结果肥厚大鼠心肌细胞动作电位时程(尤其是APD20)明显延长,阿米洛利可使过度延长的APD20恢复或接近于正常值。肥厚组心肌细胞Ito幅度和密度均增加,激活动力学特性无改变。Amiloride[0.5mg/(kg·d),p.o]能抑制Ito电流幅度及电流密度的增加。结论在甲状腺素诱发大鼠心肌肥厚模型中,Ito特性发生了变化,这是造成肥厚心肌电生理异常的离子基础。Amiloride能对抗甲状腺素致肥厚的心肌细胞Ito的变化,这可能与其抗心肌肥厚的作用有关。     

心室肌M细胞瞬时外向钾电流特性研究

目的研究表明犬心室壁中层心肌细胞(M细胞)具有独特的电生理特征,如动作电位时程有较强的频率依赖性。本文观察M细胞瞬时外向钾电流传性,并讨论其与动作电位特征的关系。方法酶解犬左心室心肌M细胞及心内、外膜层肌细胞,应用膜片钳全细胞记录技术观察并比较其单个心肌细胞的瞬时外向钾流传性。结果(1)M细胞和心外膜层肌细胞的瞬时外向钾流较心内膜层肌细胞明显地大。(2)M细胞瞬时外向钾流具有显著频率依赖性,即基础刺激周长长时其强度明显增加。结论 M细胞具有较大的瞬时外向钾电流是其显著“峰和园顶”形态和动作电位时程较强的频率依赖性的离子基础之一。     

高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

目的研究高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录Ito和Ik1,观察50μmol/L姜黄素对Ito和Ik1的影响。结果 50μm/L姜黄素对Ito和Ik1通道电流的抑制率分别是(84±11)%(P<0.05)和(59±8)%(P<0.01)。它使Ito和Ik1通道电流密度-电压曲线电流幅度减小,但不改变其整流特性。结论 50μmol/L姜黄素能明显抑制大鼠心室肌细胞Ito和Ik1电流,提示其可能存在心脏毒性作用。     

神经病理性痛大鼠背根神经节神经元钠电流的变化

目的 钠通道在神经病理性疼痛中的作用尚不十分明确,仍有许多疑题待研究.文中研究神经病理性痛模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元钠电流的变化. 方法 SD雄性大鼠,周龄4～6周,采用结扎L5脊神经的方法建立神经病理性痛模型.于术后14d时采用酶消化法急性分离模型组损伤侧组(SNL组)以及假手术组(Sham组)L5 DRG神经元,采用全细胞膜片钳技术记录神经元钠电流. 结果 SNL-L5组 DRG神经元河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)密度峰值较Sham组增高(P＜0.05),河豚毒素非敏感型钠电流(TTX-R INa)密度峰值较Sham组降低(P＜0.05).与Sham组比较,SNL组TTX-S INa的激活曲线向超极化移动了8.5mY(P＜0.05),稳态失活曲线变化没有统计学意义(P＞0.05);TTX-R INa激活向超极化移动7.4mV(P ＜0.05),稳态失活曲线向去极化方向移动9.6mV(P ＜0.05). 结论 神经病理性疼痛模型大鼠损伤DRG神经元2种钠电流发生了不同的变化,提示损伤神经元不同类型的钠通道在神经病理性痛过程中发挥着不同的作用.     

CPUHY002对大鼠心肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的观察一种新合成的磷酸二酯酶Ⅲ(PDEⅢ)抑制剂CPUHY002对大鼠心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术考察CPUHY002对急性分离大鼠心肌细胞和H9c2细胞系Ito的作用。结果在+50 mV下,CPUHY002对急性分离细胞和H9c2细胞系的Ito呈浓度依赖性抑制,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.98μmol/L和0.91μmol/L;1μmol/L CPUHY002可使I-V曲线明显下移,Ito峰值分别下降(39.10±2.30)%和(47.32±2.06)%,激活曲线右移,失活曲线左移(未见于H9c2),恢复曲线无显著变化。结论 CPUHY002可浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞Ito。     

Effect of CPUHY002 on transient outward potassium current in rat ventricular myocytes

目的 观察一种新合成的磷酸二酯酶Ⅲ(PDEⅢ)抑制剂CPUHY002对大鼠心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的影响.方法 采用全细胞膜片钳技术考察CPUHY002对急性分离大鼠心肌细胞和H9c2细胞系Ito的作用.结果 在+50 mV下,CPUHY002对急性分离细胞和H9c2细胞系的Ito呈浓度依赖性抑制,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.98 μmol/L和0.91 μmol/L;1 μmol/L CPUHY002可使I-V曲线明显下移,Ito 峰值分别下降(39.10±2.30)% 和(47.32±2.06)%,激活曲线右移,失活曲线左移(未见于H9c2),恢复曲线无显著变化.结论 CPUHY002可浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞Ito.     

经典瞬时感受器电位通道在炎性痛及神经病理性痛大鼠背根神经节表达水平的差异

目的 探讨背根神经节细胞经典瞬时感受器电位通道家族（TRPC）各亚型在炎性痛及神经病理性痛中表达是否存在差异性.方法 选用Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分为两大组：炎性痛组和神经病理性痛组.炎性痛组又随机分为：空白对照组,生理盐水对照组,蜜蜂毒炎性痛模型组;神经病理性痛组又随机分为：空白对照组,假手术组,坐骨神经分支选择性结扎模型组.测定各组大鼠机械刺激缩足反射阈值和热刺激缩足潜伏期;然后分别于蜜蜂毒处理后2h及神经结扎后1周,检测各组大鼠背根神经节细胞内TRPC家族各亚型mRNA表达水平和各组背根神经节细胞内TRPC家族相应亚型蛋白表达水平.结果 实时定量基因扩增荧光检测技术显示,背根神经节细胞TRPC3、4、5亚型的mRNA表达水平在蜜蜂毒炎性痛组显著增加（P＜0.001）;而在神经病理性痛组背根神经节细胞TRPC2 mRNA表达水平显著提高（P ＜0.001）,同时TRPC3 mRNA表达水平却显著降低（P＜0.05）.免疫组化结果显示蜜蜂毒炎性痛组大鼠背根神经节内TRPC3、4、5免疫阳性细胞数显著增加;而神经病理性痛组大鼠背根神经节内TRPC2免疫阳性细胞数显著增加.结论 蜜蜂毒炎性痛模型及坐骨神经分支选择性结扎模型大鼠背根神经节细胞TRPC通道各亚型基因及蛋白表达水平存在差异,提示TRPC通道各亚型在炎性痛及神经病理性痛的发病中可能发挥着不同的作用.     

ATP对大鼠三叉神经节神经元瞬时外向钾电流(IA)的快速作用

目的 通过大鼠三叉神经节(TG)神经元体外培养及全细胞膜片钳技术, 观察ATP对大鼠TG神经元上电压敏感性钾离子电流IA的调节及可能的机制。方法 雄性SD大鼠TG神经元急性分离,体外培养4 h后进行全细胞膜片钳记录。结果 在TG神经元上ATP可以诱导三种型式的电流, 即T型、S型和B型。ATP可以抑制T型神经元IA(P<0.05),这种作用可以被P2X3受体拮抗剂TNP-ATP拮抗, 在S型神经元上ATP对IA无作用。在ATP未能诱导出内向电流的TG神经元, ATP仍然对IA有抑制作用, 而且这一作用可以被P2Y受体的拮抗剂suramin拮抗。结论 ATP对分离培养的TG神经元上IA可以起到抑制作用, 这一作用可能通过P2X3受体或P2Y受体来完成, 但ATP对IA电流的作用机制目前尚不十分清楚。这一研究将为进一步阐明神经病理性痛的发生机制提供实验依据, 为临床治疗提供理论基础。     

缺氧对小鼠背根神经节细胞IK电流的影响

目的:探讨氧感受过程参与对钾通道调制的假设。方法:应用新鲜分离的小鼠背根神经节小细胞,采用全细胞膜片钳记录IK电流。结果:当小细胞缺氧时,钾通道在3 min之内即可发生变化,表现为绝大多数(86%,6/7)细胞的IK减弱,1个细胞(14%,1/7)的IK电流增强;缺氧1 min时IK减弱,3 min时产生最大抑制。当测试电位从 10 mV至 70 mV时,急性缺氧显著性降低IK,IK电流密度降低最大幅度从(304.4±122.9)降为(253.9±106.4)pA.pF-1,但IK稳态激活曲线无明显变化。结论:急性缺氧抑制小鼠背根神经节小细胞IK电流,而IK电流的抑制作用可能是外周神经细胞对缺氧的一种适应和保护机制。     

加巴喷丁对大鼠背根神经节神经元高电压激活钙电流的影响

目的 探讨加巴喷丁对正常大鼠与神经病理性痛大鼠不同损伤部位的背根神经节神经元高电压激活(HVA)钙电流的影响及其原因.方法 雄性SD大鼠,周龄4～6周,采用左侧L5脊神经结扎(SNL)术制备大鼠神经病理性痛模型.于结扎后第14天时采用酶消化法急性分离结扎侧L4背根神经节神经元(SNL-L4组)、L5背根神经节神经元(SNL-L5组),另取正常大鼠L4,5背根神经节神经元作为对照组.采用全细胞膜片钳技术记录加巴喷丁对3组神经元HVA钙电流的作用.结果 在10、100、300 μmol/L浓度下,加巴喷丁对SNL-L5组峰值钙电流的抑制率[(18.5±1.7)%、(32.0±2.6)%、(32.7±2.8)%]高于SNL-L4组[(16.0±1.9)%、(26.9±2.0)%、(27.4±2.3)%]和对照组(均P<0.05).加巴喷丁作用后,SNL-L5组钙通道稳态失活曲线向超级化方向移动幅度较其他两组明显.与其他两组比较,SNL-L5组加巴喷丁敏感性钙电流中N型钙电流比例升高(均P<0.05).结论 加巴喷丁对神经病理性痛大鼠L5背根神经节神经元HVA钙电流的抑制作用增强,其可能与神经损伤后钙通道激活特性的改变以及N型钙电流比例的升高有关.

Abstract：

Objective To compare the effects of gabapentin on high-voltage-activated calcium (HVA) current in dorsal root ganglion (DRG) neurons in normal and nerve-injured rats and understand the reasons of their differences. Methods Pathogen-free male SD rats(weight 180-220 mg)aged 4-6 weeks were used. The animals were anesthetized with intraperitoneal pentobarbital sodium 50 mg/kg. L5 spinal nerve was ligated between DRG and sciatic nerve and cut distal to the ligature. The animals were decapitated at Day 14 post-operation. L5 (SNL-L5 group) and L4 DRGs (SNL-L4 group) were respectively isolated and the ganglionic neurons enzymatically dissociated. The control group of rats was not operated. The lumbar DRG neurons of normal rats were treated similarly. The HVA-Ca2+ current was recorded by the technique of whole cell patch clamp. Results Compared with the SNL-L4 group [(16.0±1.9)%, (26.9±2.0)%, (27.4±2.3)%] and the control group, gabapentin inhibited the peak calcium current highlier at 10, 100 and 300 μmol/L in the SNL-L5 group [(18.5±1.7)%, (32.0±2.6)%, (32.7±2.8)%] (P<0.05). The steady-state inactivation curves shifted to more hyperpolarized potentials in the SNL-L5 group. The N-type relative contribution to the gabapentin-sensitive HVA-Ca2+ current was markedly elevated in the SNL-L5 group compared with that in other two groups (P<0.05). Conclusion Gabapentin enhances the inhibition of HVA-Ca2+ current in injured DRG neurons following spinal nerve ligation in rats. The alteration in the activation of electrophysiological properties and the increase of N-type relative contribution to the total HVA-Ca2+ current may be involved in the mechanism.     

低频脉冲电针对慢性根性痛大鼠背根神经节P物质的影响

目的：探讨局部及肢体远端不同穴位低频脉冲电针对慢性根性痛大鼠背根神经节P物质（sP）的影响。方法：复制慢性根性痛大鼠模型。将25只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、局鄙电针组（取双侧L4“夹脊”穴）、远端电针组（取双侧“阳陵泉”穴）及远近结合电针组（取双侧L4“夹脊”穴＋双侧“阳陵泉”穴）。通过免疫组化法，观察比较惠侧背根神经节sP表达的变化。结果：与模型组相比，正常组、电针组惠侧背根神经节sP的表达均减少（P〈0．05）。各电针组之间，远近结合电针组惠侧背根神经节sP的表达较局部电针组、远端电针组减弱（P〈0．05）。结论：低频脉冲电针的镇痛作用可能部分是通过抑制sP的合成实现的。与局部电针组和远端电针组相比，远近结合电针组抑制sP的合成作用较强。     

糖尿病神经痛中大鼠背根神经节细胞电生理特性的改变

目的通过观察背根神经节细胞的动作电位特征在糖尿病大鼠周围神经病变中的变化,以探讨糖尿病大鼠周围神经病变引起痛觉过敏的发生机制。方法运用全细胞电流钳技术对糖尿病周围神经痛觉过敏大鼠背根神经节细胞进行电生理记录,与正常大鼠比较静息电位水平、动作电位峰值、动作电时程变化、基强度、动作电位爆发阈值。结果与正常组比较,糖尿病神经痛大鼠背根神经节细胞静息电位水平和动作电位峰值无显著差异;大、中、小直径神经元动作电位与正常大鼠比较爆发阈值下降,动作电时程变宽,基强度显著降低。结论糖尿病大鼠周围神经病变引起初级感觉神经元背根神经节细胞的兴奋性增强,这可能是引起糖尿病大鼠周围神经痛觉过敏原因之一。     

CXCR4对大鼠背根神经节中交感芽生形成的干预作用

 目的 研究CXCR4在大鼠脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)后对背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)交感芽生形成的干预作用。方法 将大鼠随机分为AMD3100(CXCR4特异抑制剂)实验组(n=16)、AMD3100对照组(n=8)、对照组(n=16)和空白对照组(n=16),对AMD3100实验组和对照组的大鼠行SNL术,术后7天内对AMD3100实验组大鼠每天给予AMD3100,术后3、5、7、10、14天(d3、d5、d7、d14)检测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold, MWT),分别用实时PCR和Western blot检测神经生长因子(nerve growth factor, NGF)的RNA和蛋白质水平,d7和d14行免疫荧光检测DRG中交感芽生。结果 与对照组相比,AMD3100实验组大鼠在d5、d7和d14的MWT均显著缓解,抑制CXCR4后,AMD3100实验组大鼠DRG中交感芽生在d7较对照组显著减少,但在d14减少不明显,且NGF的RNA和蛋白质水平均较对照组显著降低。结论 抑制CXCR4能改善大鼠SNL术后d5～d14的疼痛行为,并能减少d7的蓝状结构数量。