miR-138调控年龄相关性白内障晶状体上皮细胞抗氧化应激作用的机制

目的：探讨miR-138对年龄相关性白内障晶状体上皮细胞抗氧化应激能力的影响及其作用机制。

方法：采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测年龄相关性白内障与正常人透明晶状体前囊膜组织中及人晶状体上皮细胞系(SRA01/04)氧化应激模型中miR-138的表达水平。利用2'',7''-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内源性活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。向人晶状体上皮细胞中分别转染miR-138 mimics,mimic controls,miR-138 inhibitors,inhibitor controls 72h后细胞暴露于400μmol/L H₂O₂ 1h,采用RT-qPCR检测p53和Bax的mRNA表达,western blotting检测p53和Bax的蛋白表达水平,MTS法检测细胞增殖活力。

结果：与正常对照组相比,年龄相关性白内障晶状体组织中与人晶状体上皮细胞氧化应激模型中miR-138的表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.001); 人晶状体上皮细胞氧化应激模型中内源性ROS的水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.001)。相对于对照组,miR-138 mimics组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显升高,细胞增殖活力明显下降,差异有统计学意义(均P<0.001); miR-138 inhibitors组p53和Bax的mRNA、蛋白表达水平均明显下降,细胞增殖活力显著升高,差异有统计学意义(均P<0.001)。

结论：miR-138在年龄相关性白内障囊膜组织中表达上调,通过正调控下游靶基因p53和Bax,下调人晶状体上皮细胞抗氧化应激的能力,抑制人晶状体上皮细胞增殖和修复,从而参与年龄相关性白内障的发生过程。     

miR-181调控人晶状体上皮细胞凋亡的机制研究

目的：探讨 miR-181在白内障晶状体组织中的表达情况,及其对人晶状体上皮细胞凋亡的调控机制。
　　方法：利用Real time q-PCR方法,检测年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜和人晶状体上皮细胞凋亡模型中miR-181的表达情况;利用Lipofectamine 2000瞬时转染miR-181 mimic 和 inhibitor 调节人晶状体上皮细胞中miR-181的表达,利用Real time q-PCR方法验证转染效率,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。
　　结果：与对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组和人晶状体上皮细胞凋亡模型组,miR-181的表达显著升高;miR-181 mimic转染组,miR-181的表达显著升高,细胞凋亡率显著升高;miR-181 inhibitor转染组, miR-181的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。
　　结论：miR-181在年龄相关性白内障晶状体组织中呈高表达,miR-181能够促进人晶状体上皮细胞凋亡,从而可能在年龄相关性白内障的发病过程中发挥一定作用,miR-181可能成为白内障非手术治疗的一种新途径,但具体机制有待进一步研究。     

老年性白内障患者circKMT2E表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的　探讨circKMT2E在老年性白内障（ARC）患者中的表达变化及其对晶状体上皮细胞凋亡的影响。方法　取10例在我院接受白内障手术的ARC患者晶状体前囊膜,另选取4例健康捐献者透明晶状体前囊膜作为对照。使用Trizol试剂从人晶状体前囊膜组织中提取总RNA。依次使用cutadapt软件、DCC软件(v0.4.4)、STAR软件 (v2.51 b)、CircBase数据库和circ2Trait数据库对所测得的环状RNA（circRNA）进行注释,筛选circRNA差异表达。将体外培养的SRA01-04细胞随机分组,其中,空白对照组:用正常培养液培养,不作特殊处理;miR-control组:转染miR-control无序序列;miR-34a组:转染miR-34a-5p mimics序列;miR-34a+control组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-control空载体;miR-34a+HMGB1组:共转染miR-34a-5p mimics序列和pcDNA3.1-HMGB1质粒。采用实时荧光定量PCR与双荧光素酶报告基因检测基因表达情况。 通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达。结果　经生物信息学分析显示,circKMT2E在ARC患者晶状体前囊膜组织中表达上调最为显著。双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-34a-5p后circKMT2E-WT报告基因的荧光素酶活性由1.000±0.023降低至0.502±0.057（P<0.05）;而circKMT2E-MUT报告基因的荧光素酶活性由1.005±0.018降低至0.989±0.053（P>0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞凋亡率（23.59%±3.47%）较miR-control组（3.82%±0.41%）增高（P<0.05）,而miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞凋亡率（8.97%±1.20%）较miR-34a-control组（24.59%±4.33 %）降低（P<0.05）。miR-34a组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白、Bax蛋白相对表达量较miR-control组均升高,同时Bcl-2蛋白相对表达量则降低（均为P<0.05）;miR-34a-HMGB1组SRA01-04细胞Cyt-C蛋白和Bax蛋白相对表达量较miR-34a-control组均降低,同时Bcl-2蛋白相对表达量较miR-34a-control组增加（均为P<0.05）。结论　circKMT2E可通过海绵吸附miR-34a-5p减弱其对下游靶点HMGB1的抑制作用,进而有效地阻止SRA01-04细胞凋亡,在一定程度起到延缓ARC发展的作用。     

miR-140-5p靶向Nrf2对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化应激的调节作用

目的　探讨miR-140-5p靶向核因子-类胡萝卜素2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）对高糖诱导的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）细胞氧化应激的调节作用及对应的分子生物学机制。方法　使用5 mmol·L^-1、10 mmol·L^-1、20 mmol·L^-1、30 mmol·L^-1、50 mmol·L^-1的葡萄糖分别处理ARPE-19细胞。利用CCK-8法及RT-qPCR检测各葡萄糖浓度下ARPE-19细胞的活力及miR-140-5p、Nrf2 mRNA表达情况。将miR-140-5p inhibitor、miR-140-5p-NC、miR-140-5p-mimic、si-Con或si-Nrf2转染入ARPE-19细胞,根据转染物和葡萄糖浓度不同分组,使用DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,使用超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性试剂盒检测SOD活性;使用RT-qPCR检测不同处理的ARPE-19细胞Nrf2 mRNA表达情况,并通过荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果　与葡萄糖浓度为5 mmol·L^-1 时相比,30 mmol·L^-1、50 mmol·L^-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞存活率显著降低（P<0.05、P<0.001）,而miR-140-5p相对表达量则明显升高（P<0.05、P<0.001）。与50 mmol·L^-1葡萄糖+miR-140-5p-NC处理组相比,50 mmol·L^-1葡萄糖+miR-140-5p inhibitor处理组细胞存活率显著增加,ROS含量显著降低,SOD活性显著增加（均为P<0.01）。与葡萄糖浓度为5 mmol·L^-1 时相比,30 mmol·L^-1、50 mmol·L^-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞Nrf2 mRNA相对表达量均显著降低（P<0.01、P<0.001）。荧光素酶报告基因实验结果显示,与转染miR-140-5p-NC组相比,转染miR-140-5p-mimic组Nrf2相对荧光素酶活性显著降低,转染miR-140-5p-inhibitor组Nrf2相对荧光素酶活性显著增多,差异均有统计学意义（均为P<0.001）。在50 mmol·L^-1葡萄糖浓度下,与转染miR-140-5p-inhibitor+si-Con的ARPE-19细胞比较,转染miR-140-5p inhibitor+si-Nrf2后ARPE-19细胞存活率降低,细胞内ROS含量增高,SOD活性下降（均为P<0.01）。结论　miR-140-5p可能通过靶向Nrf2调节高糖诱导的RPE细胞氧化应激作用。     

年龄相关性白内障患者miR-138的表达及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的　检测miR-138在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况,并探讨miR-138对人晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响及其可能的靶基因。方法　采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测年龄相关性白内障患者（白内障组）与正常对照组中miR-138和预测靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)的表达水平。向人晶状体上皮细胞系（SRA01/04）细胞中分别转染miR-138 模拟物、模拟物阴性对照物、miR-138抑制物、抑制物阴性对照物,采用RT-qPCR检测SIRT1的mRNA表达,Western blotting检测SIRT1的蛋白表达水平;转染72 h后细胞暴露于200 μmol·L^-1 H₂O₂ 1 h,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。双荧光素酶报告基因检测验证miR-138与SIRT1的靶向关系。结果　与正常对照组相比,白内障组miR-138的表达(3.64±0.19)显著升高（P<0.001）,SIRT1的mRNA表达(0.32±0.06)显著下降（P<0.001）;相对于模拟物阴性对照组,miR-138 模拟物组的SIRT1的mRNA(0.42±0.05)及蛋白(0.46±0.05)表达水平均明显降低,Caspase-3活性(3.24±0.17)明显升高（均为P<0.05）;相对于抑制物阴性对照组,miR-138抑制物组的SIRT1的mRNA(2.95±0.13)及蛋白(1.98±0.12)表达水平均明显升高,Caspase-3活性(0.42±0.05)均明显下降（均为P<0.05）;双荧光素酶报告基因检测确证SIRT1为miR-138的直接作用靶点。结论　miR-138在年龄相关性白内障患者晶状体囊膜中高表达,miR-138通过靶向性负性调控SIRT1表达,促进晶状体上皮细胞凋亡。     

年龄相关性白内障晶状体前囊膜中核因子κB的免疫组化研究

目的:研究核因子κB蛋白在正常人、年龄相关性白内障的晶状体前囊膜上皮细胞中表达的差异,探讨NF-kB在年龄相关性白内障发病机制中的作用.方法:显微镜下随机收集年龄相关性白内障前囊膜组织30例为病例组及透明晶状体前囊膜组织5例为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测NF-κB P65蛋白的表达.结果:正常晶状体前囊膜上皮细胞胞质和胞核中可见NF-κBP65蛋白阳性表达,以胞质为主;年龄相关性白内障晶状体前囊膜上皮细胞胞质和胞核染色呈阳性且以胞核为主.图像分析表明病例组NF-κB P65平均吸光度值高于对照组,差异有统计学意义(t=6.2109,P<0.05).结论:NF-κB表达水平升高与年龄相关性白内障发病密切相关,其表达异常可能参与年龄相关性白内障的发生与发展.     

核因子κB在年龄相关性白内障晶状体前囊膜的表达

目的研究核因子κB（NF-κB）在正常人、年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜上皮细胞中表达的差异,探讨NF-κB在年龄相关性白内障发病机制中的作用。方法收集白内障术中60例60眼年龄相关性白内障的前囊膜组织（白内障组）,选取正常供体5例10眼的透明晶状体前囊膜组织作为正常对照组。取白内障组30眼标本和正常对照组5眼标本用于免疫组织化学法检测NF-κBp65蛋白在晶状体前囊膜上皮细胞中的表达;另外白内障组30例标本及正常对照组的5例标本采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测NF-κBp65mRNA在晶状体前囊膜上皮细胞中的表达。结果正常晶状体前囊膜上皮细胞细胞质和细胞核中可见NF-κBp65蛋白的弱阳性表达,以细胞质为主;年龄相关性白内障晶状体前囊膜上皮细胞的细胞质和细胞核中NF-κBp65蛋白呈强阳性表达。白内障组NF-κBp65吸光度（A）值为0.1658±0.022,正常对照组为0.2889±0.043,差异有统计学意义（t=6.2109,P〈0.05）。白内障组NF-κBp65mRNA表达量为1.454±0.081,正常对照组为0.951±0.075,差异有统计学意义（t=12.9683,P〈0.05）。结论 NF-κB表达水平的升高与年龄相关性白内障的发病密切相关,其表达异常可能参与年龄相关性白内障的发生发展。     

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的　探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法　收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）含量。结果　ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关（r=-0.935,-0.951,均为P<0.05）。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。应用H₂O₂刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H₂O₂ HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低（均为P<0.05）;而circZNF292 siRNA组+H₂O₂细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H₂O₂均进一步升高（均为P<0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低（均为P<0.05）。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转（均为P<0.05）。结论　circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。     

正常幼儿及不同年龄段白内障患者晶状体中常见miRNA的表达

目的：检测并分析miRNA在正常幼儿及不同年龄段白内障患者晶状体中的表达差异,初步探讨其在维持晶状体正常功能和不同年龄段白内障形成中的可能作用。

方法：使用stem-loop RT-PCR法检测正常幼儿和幼儿(先天性白内障)、中青年及老年(年龄相关性白内障)白内障患者晶状体中miRNA的表达情况,比较各组间miRNA表达差异。

结果：正常幼儿晶状体中miR-184表达量最高。与正常幼儿相比,白内障幼儿晶状体中miR-184、miR-182表达升高,miR-124、miR-204表达降低。与幼儿患者相比,中青年患者晶状体中miR-204、miR-124和let-7d表达升高,miR-184、miR-183和let-7a表达降低,而老年患者晶状体中所有被检测miRNA表达均有改变,其中miR-182、miR-204、miR-124表达均升高,miR-184、miR-181b、miR-183、miR-125b、let-7a/b/d表达均降低。

结论：正常幼儿及不同年龄段白内障患者晶状体中miRNA表达差异显著,部分miRNA与晶状体的正常形态、功能及某些病理状态相关,这为进一步研究miRNA在维持幼儿晶状体正常功能及不同年龄段白内障形成过程中的可能作用机制提供了理论依据。     

不同病理类型的葡萄膜黑色素瘤中微小RNA差异表达谱分析

背景 目前研究证实微小RNA(miRNA)参与大多数人类肿瘤疾病的发生和发展,其作用类似于抑癌基因或癌基因.葡萄膜黑色素瘤(UM)是成人常见的眼部恶性肿瘤,其发生和转移机制仍未完全阐明.探讨UM组织中miRNA的差异表达情况有望为UM的靶向治疗提供依据. 目的 筛选不同病理类型的UM组织中特异性miRNA表达谱. 方法 收集于2013年3月至2015年10月在北京同仁医院手术局部切除并经常规组织病理学和免疫组织化学检测证实为梭型细胞型UM的标本4例和上皮细胞型UM标本4例,采用miRNA芯片分别检测2种UM组织中miRNA的表达,收集同期死于非肿瘤疾病的8个供体眼的正常葡萄膜组织作为对照,利用组间差异倍数筛选出差异≥2倍差异表达的miRNA;用在线软件预测差异表达miRNA的靶基因,采用生物信息学方法分析靶基因参与的信号功能通路.采用实时定量PCR法验证芯片检测结果.结果 收集的梭形细胞型和上皮细胞型UM标本经组织病理学检查均得到确诊,免疫组织化学检测梭形细胞型及上皮细胞型UM组织中HMB45、黑色素-A和S-100均呈阳性反应.与正常葡萄膜组织比较,在梭形细胞型UM组织中差异表达的miRNA有109个,其中29个上调,80个下调,上调的miRNA包括miR-146a-5p、miR-25-3p和miR-29b-1-5p,下调的miRNA包括miR-126-5 p、miR-183-5p和miR-96-5p;上皮细胞型UM中差异表达的miRNA有50个,其中23个上调,27个下调,上调的miRNA包括miR-155-5p、miR-210和miR-378 a-5p;下调的miRNA包括miR-199a-5p、miR-143-3p和miR-143-5p.在梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中共同上调的miRNA为miR-132-3p、miR-21-5p、miR-34a-5p和miR-34b-5p,共同下调的miRNA为miR-125b-2-3p、miR-126-3p、miR-199a-3p和miR-214-3p.梭形细胞型和上皮细胞型UM组织中差异表达的miRNA所预测的靶基因分别参与癌症通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、Wnt信号通路、细胞间黏附、胞吞作用、前列腺癌通路、结直肠癌通路和细胞黏附通路.结论 与正常葡萄膜组织相比,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织中存在多种miRNA的差异表达,梭形细胞型UM和上皮细胞型UM组织之间也存在明显的miRNA差异表达,这些差异表达的miRNA可通过不同的信号转导通路参与调控UM的生物学行为.     

miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的 探讨miR-34a-5p对ARPE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 将ARPE-19细胞分为4组：对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、miR-34a-5p过表达组与复合干预组,对照组与TGF-β1组采用Lipofectamine 2000转染试剂转染对照模拟物,miR-34a-5p过表达组与复合干预组转染miR-34a-5p模拟物,培养24 h后采用无血清培养基饥饿培养12 h, TGF-β1组与miR-34a-5p过表达组均添加10 mg·L^-1的TGF-β1,复合干预组添加10 mg·L^-1的TGF-β1与10μmol·L^-1的TGF-β通路激活剂SRI-011381,各组细胞继续培养24 h,测定细胞增殖、迁移与EMT。采用Western blot检测细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达水平,Ki67荧光染色检测细胞增殖情况,免疫荧光染色测定细胞EMT相关蛋白表达情况,划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 ...     

miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化的作用

目的　探究miR-29b通过靶向调节特异性蛋白1（SP-1）调控糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化（EMT）的作用机制。方法　体外培养人晶状体上皮细胞（HLE-B3）,分为正常组、高糖组、阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组。除正常组细胞外,其余各组细胞于35.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖环境中培养。阴性组、miR-29b mimics组和miR-29b mimics+SP-1组分别共转染miRNA模拟物scramble和阴性siRNA序列、转染miR-29b模拟物、共转染miR-29b模拟物和SP-1基因序列。采用实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-29b和SP-1 mRNA表达,采用Transwell法和细胞划痕实验检测各组细胞迁移活性。采用免疫荧光染色和Western blot检测和各组细胞钙黏蛋白（E-Cadherin、N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、SP-1蛋白表达情况。根据生物信息学数据库和双荧光素酶报告基因验证miR-29b和SP-1基因的靶向关系。结果　35.5 mmol·L^-1 D-葡萄糖组处理HLE-B3 24 h,细胞中miR-29b mRNA相对表达量较正常组降低,SP-1 mRNA和蛋白相对表达量均升高（均为P＜0.05）。与正常组相比,高糖组细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加,E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达升高（均为P＜0.05）。而与高糖组和阴性组相比,miR-29b mimics组细胞miR-29b mRNA相对表达量和E-Cadherin蛋白表达增加,SP-1、N-Cadherin 和Vimentin蛋白表达降低,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率均减少（均为P＜0.05）。miR-29b mimics+SP-1组较miR-29b mimics组细胞中E-Cadherin蛋白表达降低,N-Cadherin和Vimentin蛋白表达增加,细胞Transwell小室迁移数量和划痕愈合率增加（均为P＜0.05）。经双荧光素酶报告基因验证,转染miR-29b mimics质粒可降低SP1-3’UTR-WT荧光素酶活性（P＜0.05）,但不降低SP1-3’UTR-MUT荧光素酶活性（P＞0.05）。结论　miR-29b在糖尿病性白内障体外细胞模型中表达下调。上调miR-29b表达可通过靶向SP-1基因参与抑制高糖诱导晶状体上皮细胞EMT的进程。     

miR-210靶向沉默Bcl-2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的　观察ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达,并探讨其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与调控机制。方法　收集年龄相关性白内障患者与新鲜人眼透明晶状体前囊膜（正常对照组）标本;培养人晶状体上皮细胞ＳＲＡ０１／０４,予或不予（正常对照组）紫外线照射,利用实时荧光定量ＰＣＲ检测上述组织或细胞中ｍｉＲ-２１０表达。此外,将遭受紫外线照射的ＳＲＡ０１／０４细胞分为空白对照组、阴性对照组、ｍｉＲ-２１０模拟物组和ｍｉＲ-２１０抑制物组,分别予培养液及ｍｉＲ-２１０阴性对照物、模拟物、抑制物处理４８ｈ,行实时荧光定量ＰＣＲ检测ｍｉＲ-２１０表达,以验证转染效率;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｍｉＲ-２１０的靶基因Ｂｃｌ-２表达,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果　与正常对照组相比,年龄相关性白内障患者晶状体前囊膜组织和紫外线诱导的ＳＲＡ０１／０４细胞凋亡模型中ｍｉＲ-２１０表达均显著上调（均为Ｐ＜０．０１）。相对于空白对照组,ｍｉＲ-２１０模拟物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均增加（均为Ｐ＜０．０１）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０１）;而ｍｉＲ-２１０抑制物组ｍｉＲ-２１０水平和细胞凋亡率均减少（均为Ｐ＜０．０５）,Ｂｃｌ-２蛋白表达水平升高（Ｐ＜０．０１）;阴性对照组上述指标与空白对照组比较,差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论　ｍｉＲ-２１０在年龄相关性白内障患者晶状体组织中呈高表达,ｍｉＲ-２１０可能通过靶向沉默Ｂｃｌ-２促进人晶状体上皮细胞凋亡。     

lncRNA KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖诱导的人视网膜上皮细胞增殖与凋亡

目的：观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。

方法：运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率,qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达,Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。

结果：15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率,后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平,降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率,降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p靶向TSHZ3,lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。

结论：lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3,促进HG诱导的ARPE-19,并抑制其凋亡和氧化应激。