血友病A患者凝血因子Ⅷ基因内含子1倒位的检测

目的 检测中国血友病A(HA)患者中凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子1倒位(inv1)的发生频率,并和国外相关资料相比较,明确部分中国HA患者的发病机制.方法 用一期法检测158例无关家系HA患者的FⅧ活性(FⅧ:C),进行HA表型诊断;分别采用长距离和双管多重PCR技术检测内含子22倒位(inv22)和invl;直接测序法进行FⅧ基因全长序列分析.结果 在158例无关家系的HA患者中发现有2例(家系)invl阳性,检出率为1.26%;对其中1例阳性患者家系进行调查,发现1例罕见女性HA患者为invl携带者.对女性患者另一条染色体FⅧ基因进行全长测序,未发现有新基因突变.结论 invl在中国HA人群中发生率相对较低.女性HA患者为inv1杂合子,其发病考虑为与X染色体非随机失活有关.     

山东省乙型血友病患者的基因检测及分析

目的分析乙型血友病患者FⅨ基因的突变类型,初步探讨乙型血友病发病的分子机制。方法采用PCR扩增目的片段结合直接测序方法,对19个家系24例乙型血友病患者FⅨ基因的8个外显子及其侧翼序列进行检测,并与国际FⅨ基因突变数据库相比对。结果 24例患者FⅨ基因共检测出18种不同突变类型,其中c.200del A、c.306del T、c.688-690del GGA、c.1025C>G、c.1157C>A等5种突变类型为首次发现。结论 FⅨ基因突变是导致乙型血友病的根本原因。FⅨ基因突变分散,呈高度异质性。研究发现5种新突变,丰富了FⅨ基因突变谱,为乙型血友病发病的分子机制提供了一定的分析依据。     

女性A型血友病FⅧ基因突变分析

报道罕见的女性A型血友病1例,并对其凝血因子Ⅶ进行基因突变分析。患者,女,65岁,因为跌倒后右胸痛2d入院,院内查体提示胸壁皮下血肿,双下肢等长,髋屈曲及内旋受限。测定凝血指标提示APTT61．3s,正常血浆纠正后为41．3s,而PT、FIB、TT均正常。有既往出血史。FⅧ活性为2％,FⅨ活性为200％,vWF：Ag为120％,vWF：RCof100％,vWF：CBAl28％,FⅧ结合分析正常;髋关节X片提示;双侧髋臼发育不良,髋关节骨关节炎。临床诊断为血友病A型。提取该患者外周血DNA,根据NM_000132之凝血因子FⅦ基因序列设计合成了其第14外显子特异的引物,行聚合酶链反应扩增,并对扩增产物进行测序分析,测序结果与标准序列进行比较,发现该患者出现4111A→C杂合突变,使1314位氨基酸由苏氨酸变为脯氨酸,产生一错意突变,该突变未见其它文献报道．     

中国人凝血因子Ⅷ基因多态性和血友病A的产前诊断

本文应用克隆化的凝血因子Ⅷ(下称FⅧ)基因cDNA及其旁侧的DNA片段作为探针,分析了123名中国正常人和22例血友病A患者的FⅧ基因及其旁侧的多态性位点Bcl Ⅰ/18e,Xbal/221,MspI/St14和BgI I/DX13。获得了中国人上述4个位点的RFLP资料,并应用RFLP连锁分析对2例血友病A高危妊娠进行了产前诊断。     

基因疗法有望治愈血友病

一项新的研究报道指出 ,利用一种新的基因治疗方法可以提高少数血友病患者的Ⅷ凝血因子水平 ,已有 2名病情严重的患者安全地度过了 1 0个月的时间 ,而没有发生自发性出血。当然 ,目前的试验结果还远不能将这种治疗方法推向市场 ,尤其现在还不能确定其疗效持续时间的长度是否达到实际应用的标准。但是此项研究结果给基因疗法———这项被许多科学家视为无效的治疗方法 ,带来了新的希望。来自马萨诸塞州 ,波士顿ＢｅｔｈＩｓｒａｅｌＤｅａｃｏｎｅｓｓ医学中心的ＤａｖｉｄＲｏｔｈ博士及其同事 ,采用一种新的Ⅷ因子转移方法 ,这种方法避免了…     

血友病A患者环境因素与出血严重程度相关性分析

目的 探讨内含子22（intron 22 inversion,Inv22）和内含子1（intron 1 inversion,Inv1）倒位的重型血友病A（hemophilia A,HA）患者临床表现异质性的环境因素与出血严重程度相关性。方法 回顾性分析2009年至2012年在山西省血友病管理中心登记的63例Inv22和Inv1阳性重型HA患者信息,详细记录其一般情况信息、首次出血年龄、首次关节出血年龄、首次治疗时间、年出血率（annualized bleed rate,ABR）等资料,利用单因素及多因素Logistic回归分析环境因素与临床表现异质性关系。结果 63例患者平均年龄为（17.75±8.51）岁,中位年龄为15岁,平均年出血率为（77.83±56.43）次,年出血率中位数为60次,单因素分析显示,年龄、首次治疗年龄、替代治疗方式在各组间差异有统计学意义（P<0.05）,有序Logistic回归结果显示,首次关节出血年龄≤ 1岁的患者更容易发生出血（OR=13.97,95%CI：2.32~84.52）,首次治疗年龄≤ 1岁的患者更不容易发生出血（OR=0.03,95%CI：0.01~0.49）。结论 在Inv22和Inv1的重型血友病A患者中,首次关节出血年龄≤ 1岁的患者更容易发生出血,首次治疗年龄≤ 1岁的患者更不容易发生出血。首次关节出血年龄可作为HA出血严重程度的预测指标,建议给予更早的预防治疗,以避免后期严重出血的发生。     

女性血友病A FⅧ基因的双重杂合突变-1例基因分析

目的对1例女性血友病A(HA)患者家系进行基因分析，以探讨其分子发病机制。方法FⅧ：C等测定进行HA表型诊断；用LD—PCR进行内含子22倒位检测，对FⅧ基因的所有外显子及其侧翼序列进行扩增，用末端标记双脱氧法检测核酸序列。结果表型检测先证者(父亲)及其女儿的FⅧ：C分别为6．9％、3．4％；3人内含子22倒位为阴性；先证者女儿FⅧ14号外显子存在自发杂合突变(112183-112191)insA，18号外显子131252T→C(Leu1975Pro)；父亲FⅧ18号外显子存在相同突变，母亲FⅧ基因检测没有发现先证者的这2个突变。结论FⅧ14号外显子(112183-112191)insA与18号外显子131252T→C双重杂合突变可能是导致该患者HA的分子机制，其中18号外显子131252T→C为国际首次报道，14号外显子(112183-112191)insA为国内首次报道。     

基因重组人凝血因子Ⅷ在中国人血友病A患者中使用的研究

目的 探讨第二代rFⅧ（Kogenate FS）在中国人血友病A患者中使用的安全性和有效性。方法 采用第二代rFⅧ（Kogenate FS）治疗14例血友病A志愿者患者，用药前进行FⅧ抗体、FⅧ：C活性、血清病毒学（HBV、HCV和HIV）、血常规、尿常规、大便常规以及肝肾功能检查，于第一次用药后10min和60min进行FⅧ：C测定，治疗结束后进行FⅧ抗体和肝肾功能检测。结果 ①采用KogenateFS治疗的14例血友病A志愿者患者中，KogenateFS用量12．99～25．00u／kg（平均18．74u／kg），总用量3000～11000u（平均6570u），自治疗至出血停止或出血症状改善所需的时间为1．5～5．5d（平均3．29d），除1例FⅧ抗体滴度较高者外，其余13例患者第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性均明显升高，用药前后FⅧ：C活性比较差异具有显著性（P〈0．01）。显效13例（占92．86％），好转1例（占7．14％），总有效率为100％。②14例血友病A志愿者患者中，用药前FⅧ抗体阳性2例，其中1例FⅧ抗体〉5Bu，第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性无明显升高，治疗结束后FⅧ抗体仍然〉5Bu，但出血症状改善；另1例FⅧ抗体为4Bu，第一次用药后10min和60minFⅧ：C活性显著升高，治疗结束后FⅧ抗体转为阴性。③14例血友病A志愿者患者在应用KogenateFS治疗期间和治疗结束后均表现出良好的耐受性，无不良事件或药物不良反应发生。结论 第二代rFⅧ（KogenateFS）治疗中国人血友病A患者耐受性好，安全有效。     

获得性血友病A20例临床分析

目的探讨获得性血友病A（AHA）的临床特点与治疗方法,以期早期诊断和提高治疗效果。方法回顾性分析20例AHA的临床特点、实验室检查及治疗与转归。结果 20例AHA中位年龄65岁,以皮肤瘀斑和肌肉血肿为主要表现,多数患者无明确病因或诱因,3例接受单用皮质激素治疗,15例接受激素联合免疫抑制剂治疗,2例在免疫抑制剂基础上联合小剂量利妥昔单抗治疗,所有患者的出血倾向明显好转。结论 AHA以老年人多见,单纯的aPTT延长不能被1∶1的血浆纠正时应该考虑本病。治疗上以联合免疫制剂为主。对于难治性AHA,小剂量利妥昔单抗是一个很好的选择。     

获得性血友病A一例

患者,男,35岁,因四肢皮肤出现瘀斑,左大腿内侧出现包块1月余而就诊.患者平素体健,1月前,四肢出现不明原因的片状瘀斑伴肿痛;无血友病家族史、无输血史、无青霉素过敏史,否认免疫相关性疾病.查体:轻度贫血貌,左大腿内侧明显肿胀,能触及约10 cm×10 cm的包块,质较硬,边界不清,不活动,皮肤表面为片状瘀斑,左右上臂及右膝盖下亦见片状瘀斑;浅表淋巴结无肿大,腹软,肝脾肋下未及.     

Analysis of Intron 22 Inversion Mutation of Factor Ⅷ Gene in the Patients with Hemophilia A in J＆K State of India

Hemophilia A was documented as a familialbleeding disorder in the fifth century[1]and persistsas the commonest hemorrhagic disorder,affecting 1in approxi mately 5 000 males.The disease is causedby the deficiency of factorⅧ,a co-factor ofactivated factorⅨin the factorⅹactivatingcomplex of the intrinsic coagulation pathway[2].FactorⅧgene is located at the tip of the long armof X-chromosome[3],and it spans over 186 kb,comprised of 26 exons and 9 kb mRNA encodes apolypeptide chain of 2 351 a…     

Carrier detection and prenatal diagnosis of hemophilia A

Objective To establish an effective laboratory examination system for carrier detection and prenatal diagnosis of haemophilia A (HA) with a variety of molecular biological methods which are simple, rapid and easy to use Methods Detection of inversion involving intron 22 in the FⅧ gene was completed by long distance polymerase chain reaction (PCR) and linkage analysis was performed by using several genetic polymorphisms including an intragenic BclⅠ RFLP, 2 STRs and an extragenic St14 VNTR Results Intron 22 inversion was observed in 10 out of the 21 (47. 6%) pedigrees examined Prenatal diagnosis was completed in 3 pedigrees A further combination of the four intragenic and extragenic polymophic loci gave an informative rate of 94. 7% Conclusions Female relatives in HA families with inversion can be detected with direct diagnostic procedure The application of long distance PCR makes the detection much more simple and rapid For families without inversions, it is easier and more cost-effective to undertake linkage analysis of genetic polymorphism based on PC     

血友病A发病分子机制的研究现状

血友病A的发病机制是凝血因子Ⅷ（FⅧ）基因的各种突变导致FⅧ活性降低,错义突变是轻/中型血友病A发病的主要机制,内含子22的倒位是重型血友病A发病的主要机制。无义突变、剪接位点突点、片段缺失、插入突变占已知突变的其余部分。突变产生的效应包括产生功能缺陷的FⅧ或减少循环中FⅧ的数量。大部分的基因突变已经确定,仍有少量患者检测不到FⅧ基因的突变。该文就血友病A的发病机制予以综述。     

Identification of seven novel mutations in the factor VIII gene in 18 unrelated Chinese patients with hemophilia A

Background  Hemophilia A (HA) is an X-linked inherited bleeding disorder caused by decreased activity of factor VIII (FVIII) due to heterogenous mutations in the FVIII coding gene (F8). The type of mutation plays an important role in the FVIII inhibitor formation. To date, several studies on the spectra of F8 defects have been performed in Western populations, but similar studies in Asian races are scarce. Here, we reported the distribution of the F8 gene mutations in 18 unrelated Chinese patients with HA.
Methods  Intron 22 and intron 1 inversions in the F8 gene were screened in 158 unrelated patients with HA using a long-distance PCR and multiplex PCR method. Direct sequencing of the coding region of the F8 gene was used to identify the mutations responsible for HA in 18 unrelated Chinese HA patients who were negative for intron 22 and intron 1 inversions; sequences were compared with the HAMSTeRS database. A clotting method was used to assay the FVIII activity level and the Bethesda assay was used to detect the FVIII inhibitor.
Results  A total of 18 different HA F8 mutations were identified, seven of which were described for the first time. These novel mutations included five small deletions, one point mutation and one small insertion. One novel mutation (4382-3 AC deletion) was associated with inhibitor development.
Conclusion  These data extend our insight into the mechanisms by which novel amino acid mutations may lead to HA and how the HA patient genotypes influence the risk of FVIII inhibitor.

     

2例小儿颅内恶性肿瘤合并血友病A的围手术期处理

血友病是由于机体缺乏凝血因子而导致的一种遗传性出血性疾病,主要为凝血因子Ⅷ（factor Ⅷ,FⅧ）缺乏的血友病A及凝血因子Ⅸ（factor Ⅸ,FⅨ）缺乏的血友病B。随着凝血因子替代治疗的应用,国内外关于血友病患儿手术治疗的报道逐渐增多［1-4］。神经外科手术本身术中及术后出血风险较高,若合并严重出血性疾病,围手术期风险明显增加。近年来国外已间断有血友病合并颅内恶性肿瘤手术的报道［5］。北京大学第一医院小儿外科于2013年9月至2014年3月收治2例颅内恶性肿瘤合并血友病A患儿,均行开颅手术治疗,围手术期平稳,术后顺利出院,现结合文献分析如下。     

血友病合并骨折围手术期凝血因子替代治疗

目的 探讨血友病合并骨折围手术期凝血因子替代治疗方法与安全性。方法 5例合并骨折的血友病患者在血液内科的配合下,对患者实施手术治疗骨折,平均随访9个月。根据《血友病诊断与治疗中国专家共识》,围术期行凝血因子Ⅷ和Ⅸ活性水平监测,进行因子Ⅷ（冻干人凝血因子Ⅷ）或因子Ⅸ（凝血酶原复合物）的替代治疗。结果 本组5例血友病患者,围手术期应用凝血因子进行常规替代治疗,均安全度过围手术期,术中、术后无血肿、感染。但有一例股骨干骨折钢板固定后术后4个月再次骨折,经保守治疗骨愈合。结论 凝血因子的替代治疗和凝血因子水平监测是保证血友病合并骨折手术治疗成功的关键。     

联合运用四种技术进行血友病A的基因诊断

目的：最大限度地提高血友病A（HA）患者及家系成员的基因诊断、携带者检出及产前诊断的可诊断率。方法：对于26例HA患者和家系的女性家属首先采用长距离DNA扩增（LD-PCR）技术,直接检测是否为FⅧ基因倒位及其携带者;对于非倒位的HA家系依次采用Bcl I PCR/RFLP分析技术、基因内含子13（CA）n、内含子22（GT）n(AG)n二核苷酸重复序列多态性分析技术以及与FⅧ基因紧密连锁的可变串联重复序列多态性分析技术（St14 VNTR/PCR)进行间接诊断。结果：在26个HA家系的16个重型家系中查出7个基因倒位,占重型HA的43.8%。19个非倒位HA家系,用上述三种间接诊断技术分别有16、13及17个HA家系可以作出诊断,可诊断率分别为84.2%、68.4%和89.5%,联合上述四种技术,对26个HA家系全部作出了诊断。结论：联合采用四种基因诊断技术,几乎可以为所有有家庭史的HA家系作出基因诊断及携带者检出。     

LD-PCR直接基因诊断重型血友病A的研究

目的：检测凝血因子VⅢ基因倒位，提高对重型血友病A患者及其携带者的诊断水平。方法：根据患者的出血症状及遗传史，采用国际通用的一期法检测患者血浆凝因因子VⅢ活性（FVⅢ：C），ELISA法检测血浆vWF:Ag浓度，确诊血友病A及其携带者，对38例重型HA患者及其母亲或姨母，采用长距离DNA扩增（LD－PCR）技术检测是否存在凝血因子VⅢ（FVⅢ）基因倒位，进行直接基因诊断。结果：38例无亲缘关系的重型血友病A患者中，发现15例患者（或家系）有FVⅢ基因倒位，占重型患者的41％；该15例家系中查出基因倒位携带者5名，结论：利用LD－PCR检测FVⅢ基因倒位技术可以准确，简便而快速地直接进行重型血友病A的基因诊断和携带者检测。     

凝血因子ⅩⅢ基因突变与疾病的关系研究进展

凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)是凝血过程中最后一步关键酶。有活性的凝血因子Xa能催化可溶性纤维蛋白交联,形成不溶性纤维蛋白多聚体,从而稳定纤维蛋白凝块,使血凝块不易被纤溶酶降解。FX结构与功能有着密切的关系,FⅩⅢ基因突变可影响其结构,导致功能的改变,与疾病的发生密切相关。就FⅩⅢ结构、基因突变及其功能与疾病的关系进行综述。