长链非编码RNA MEG3对肝癌细胞增殖及自噬能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA MEG3对肝癌细胞增殖及自噬能力的影响。方法:实时定量PCR检测60例肝癌组织标本以及相应癌旁组织中MEG3的表达水平，并检测MEG3在肝癌细胞系中的表达情况。通过质粒转染方法构建MEG3过表达的肝癌细胞Huh7和HepG2，采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况；Western blot检测自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、p62）表达变化；利用免疫荧光检测LC3变化情况。结果:MEG3在肝癌组织中表达低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌细胞中过表达MEG3后，其细胞增殖能力显著降低（P<0.05）；并且过表达MEG3后能减少LC3-I向LC3-Ⅱ的转化，而p62表达升高（P<0.05）；免疫荧光可见明显LC3荧光斑点减少。结论:在肝癌组织中MEG3表达低于癌旁组织；在体外细胞实验中发现，MEG3能够抑制肝癌细胞增殖和自噬水平，有望成为肝癌治疗的潜在靶点。     

过表达长链非编码RNA H19对肝癌细胞增殖和自噬的影响及可能机制

目的:研究长链非编码RNA H19(long noncoding RNA H19,H19)对肝癌细胞自噬的影响及可能机制。方法:Real-time PCR检测H19在肝癌组织及相应癌旁组织中的表达；CCK-8分析过表达H19对肝癌细胞增殖的影响；免疫荧光实验和Western blot分析过表达H19对肝癌细胞自噬的影响；Western blot分析过表达H19肝癌细胞的Atg7表达变化以及与Atg7干扰质粒共转染后对肝癌细胞自噬的影响。结果:H19在肝癌组织中表达水平高于癌旁组织；过表达H19后肝癌细胞增殖活力及自噬增强；过表达H19通过上调自噬相关基因Atg7促进肝癌细胞自噬。结论:上调H19促进肝癌细胞增殖与自噬,H19对肝癌细胞自噬的调控可能与Atg7有关。     

ZNRD1在肝癌中的表达及对HepG2细胞增殖的影响

[目的]检测ZNRD1基因在肝癌中的表达并探讨其对HepG2细胞增殖的影响.[方法]Western blot技术检测ZNRD1在7例肝癌组织和相应癌旁组织中的表达;脂质体介导法将ZNRD1的真核表达载体转染肝癌细胞系HepG2,G418筛选后应用Western blot进行鉴定;MTT法检测细胞转染前后生长速度的变化.[结果]ZNRD1基因在肝癌组织中的表达显著低于癌旁组织;成功建立了ZNRD1高表达的肝癌细胞模型;转染后的肝癌细胞生长速度明显下降.[结论]ZNRD1基因可能参与肝癌的发生,对肝癌细胞的生长可能起重要调控作用,具备一定的基因治疗应用前景.     

LINC00659在胃癌组织中的表达及其对人胃癌细胞侵袭、迁移和自噬的影响

目的:在胃癌组织中检测LINC00659的表达水平,并探讨LINC00659对人胃癌AGS、HGC-27细胞侵袭、迁移和自噬的影响。方法:收集宁夏回族自治区人民医院自2020年01月至11月的17例胃癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本,qRT-PCR法检测人胃癌组织与癌旁组织中LINC00659的表达,Western blot法和免疫组化检测人胃癌与癌旁组织中自噬相关蛋白LC3、p62的表达;在AGS和HGC-27细胞株中分别构建敲减和过表达LINC00659胃癌稳转株细胞,分为Vector组、sh-LINC00659组、pEX-3组和LINC00659组。慢病毒转染48 h后通过倒置荧光显微镜和qRT-PCR检测转染效率;Transwell、细胞划痕实验法检测各组细胞的侵袭和迁移能力;Western blot、免疫荧光检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3、p62的相对表达水平。结果:LINC00659及自噬相关蛋白LC3在胃癌组织中的表达均显著高于癌旁组织,而自噬相关蛋白p62在胃癌组织中的表达要低于癌旁组织（均P＜0.05）。AGS、HGC-27细胞经慢病毒转染后,与空载组相比,敲减组中LINC00659相对表达水平明显降低,过表达组LINC00659相对表达水平明显升高（均P<0.01）;Transwell、细胞划痕实验结果显示,与对照组相比,AGS敲减组细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制,而HGC-27过表达组细胞的侵袭和迁移能力显著增强（均P＜0.05）;Western blot、免疫荧光结果显示,AGS敲减组细胞中自噬相关蛋白LC3的表达有所下调,而p62的表达则明显升高,且在HGC-27过表达组中自噬相关蛋白LC3、p62的表达水平与敲减组完全相反（均P<0.05）。结论:LINC00659在胃癌组织中高表达,且能够促进人胃癌细胞的侵袭、迁移和自噬。     

原发性肝癌组织中KruPPel样因子6(KLF6)的表达及其对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的了解Kruppel样因子6（KLF6）基因在原发性肝癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Wstern blot检测原发性肝癌及其癌旁组织KLF6 mRNA及蛋白质的表达水平。构建KLF6真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪及MTT试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以Western blot技术检测外源KLF6基因对p21WAF1表达的影响。结果与对应的癌周组织比较,23例原发性肝癌组织中8例（34.8%）KLF6 mRNA,9例（39.1%）KLF6蛋白质水平明显下降。与对照组比较,转染KLF6基因的SMMC-7721细胞G0~G1期所占细胞的比例明显增高,转染KLF6基因SMMC-7721的增殖率明显下降。外源KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达。结论KLF6基因表达水平的下降可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径.     

微小RNA-101对人骨肉瘤细胞自噬和侵袭性的影响

目的 探讨微小RNA-101（microRNA-101,miR-101）的表达对人骨肉瘤细胞自噬和侵袭性的影响。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测骨肉瘤组织和人骨肉瘤细胞系MG-63细胞以及成骨细胞miR-101的相对表达,蛋白免疫印迹(Western blot)检测两种细胞自噬相关蛋白Beclin1和LC3B的表达;经脂质体转染将miR-101模拟物和miR-101阴性对照转染MG-63细胞,并设立空白对照,通过qRT-PCR、Western blot和侵袭实验（Transwell）检测以上三组细胞miR-101的表达、Beclin1和LC3B的表达以及三组细胞侵袭能力的变化。结果 与癌旁骨组织和正常骨组织或成骨细胞相比,miR-101在骨肉瘤组织和MG-63细胞中表达明显下降（P<0.01）;模拟物转染组miR-101的表达较空白对照组上调了255%,但该组自噬相关蛋白的表达较空白组却显著降低（P<0.01）;Transwell侵袭实验显示,模拟物转染组细胞迁移数目较阴性对照组和空白对照组分别减少了60%和67.67%（P<0.01）。结论 miR-101在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞中呈现低表达,可能与骨肉瘤的发生发展相关。miR-101抑制骨肉瘤细胞侵袭,其机制可能是通过抑制细胞自噬而发挥作用。     

长链非编码RNA TUG1在膀胱尿路上皮癌中的表达及对细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（taurine up-regulated gene 1,TUG1)在膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）中的表达,及其对BUC细胞增殖和凋亡的调控作用。方法:实时定量PCR法检测TUG1基因在62例BUC组织和T24、J82细胞系中的表达。统计分析TUG1基因在BUC组织的表达与BUC临床病理因素的相关性。TUG1抑制剂smart silencer-TUG1（ss-TUG1）沉默T24和J82细胞中TUG1的表达。CCK8法检测T24和J82细胞的增殖活力。流式细胞术检测T24和J82细胞的凋亡率。结果:与癌旁组织及人膀胱上皮永生化细胞系SV-HUC-1相比,TUG1基因在BUC组织及T24、J82细胞系中的表达显著上调。随着BUC病理分级和分期的增加,BUC组织中TUG1基因表达明显增加。转染ss-TUG1能够显著抑制T24和J82细胞中TUG1的表达,TUG1沉默能够显著抑制T24和J82细胞的增殖活力,并促进其细胞凋亡。结论:长链非编码RNA TUG1在BUC组织及细胞系中高表达,其表达沉默能够抑制BUC细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡。     

miR-581调控FOXO1对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响

目的 探讨miR-581对卵巢癌SKOV3细胞自噬的影响及作用机制。方法 将miR-581 mimics和miR-581 NC转染到卵巢癌SKOV3细胞中,实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测转染效率;转染成功后,Western blot检测转染后卵巢癌SKOV3细胞中自噬相关蛋白的表达水平;TargetScanHuman数据库预测miR-581靶基因,Western blot验证miR-581与靶基因的作用。结果 过表达miR-581后可显著抑制自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达（P<0.01）;miR-581可负向调控FOXO1的表达（P<0.01）;FOXO1促进卵巢癌SKOV3细胞自噬（P<0.05）。结论 miR-581通过调控FOXO1的表达影响卵巢癌SKOV3细胞自噬。     

硫氧还蛋白相互作用蛋白通过抑制自噬途径促进结肠腺癌细胞的凋亡

目的:探究过表达硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin interacting protein,TXNIP）对结肠腺癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:收集我院30例结肠腺癌患者的结肠腺癌组织及癌旁组织,实时荧光定量PCR检测组织中TXNIP mRNA表达,免疫组织化学染色检测组织中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与凋亡标志蛋白Cleaved Caspase-3表达;将人结肠腺癌 LoVo细胞随机分为对照组、阴性空载体组（LV-GFP）和 TXNIP 过表达组（LV-GFP-TXNIP）,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率,收集转染72 h后的LoVo细胞,通过流式细胞术检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞自噬情况,免疫荧光染色检测细胞中LC3表达,Western blot 检测细胞中自噬相关蛋白与凋亡相关蛋白表达变化。结果:与癌旁组织比较,结肠腺癌组织中TXNIP mRNA相对表达量显著降低（P＜0.01）,LC3-Ⅱ阳性表达率显著升高（P＜0.05）,Cleaved Caspase-3阳性表达率显著降低（P＜0.05）;慢病毒转染72 h后转染效率较高（P＜0.05）;与对照组比较,LV-GFP-TXNIP组LoVo细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）,细胞质较为致密,自噬体数目明显减少,LC3荧光染色减弱,Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达显著下降（P＜0.05）,而LC3-I、p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,同时,Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达显著下降（P＜0.05）。结论:在结肠腺癌细胞中过表达TXNIP可通过抑制自噬来促进细胞凋亡。     

ATG7对神经母细胞瘤增殖和耐药的影响及机制研究

摘 要：［目的］ 研究自噬相关基因ATG7对神经母细胞瘤增殖和化疗耐药性的影响,初步探索其分子机制,为神经母细胞瘤临床治疗提供新的线索和理论依据。［方法］ 在神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和SK-N-BE2中,慢病毒转染敲减ATG7基因,采用MTT染色检测ATG7对细胞增殖能力的影响,同时通过Western blotting方法检测细胞内自噬标志性蛋白LC3表达量来反映细胞内自噬水平;通过检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等凋亡相关蛋白研究ATG7对细胞凋亡的影响。SH-SY5Y细胞经阿霉素处理后,采用实时无标记细胞分析仪连续监测细胞增殖情况,探讨ATG7在神经母细胞瘤耐药中作用。［结果］ 敲减ATG7基因能显著抑制细胞内自噬水平,而且ATG7敲减后细胞在第4、5d的增殖倍数分别为3.05±0.05和3.92±0.08,低于对照组的3.40±0.05和4.35±0.13（P=0.0012,P=0.0085）;与对照组相比,ATG7敲减组其凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显降低,促凋亡蛋白Bax和Caspase-3表达显著升高（P<0.05）。经阿霉素处理后,ATG7敲减组细胞增殖率明显低于对照组（P<0.05）。［结论］ 由于ATG7基因介导细胞自噬过程,ATG7基因在神经母细胞瘤中可能通过自噬作用促进肿瘤细胞异常增殖,抑制细胞凋亡,进而增强细胞耐药性。     

lncRNA TUG1在结直肠癌组织和细胞中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:探讨lncRNA牛磺酸上调基因1（taurine upregulated gene 1,TUG1)与结直肠癌临床病理因素的相关性及临床意义,以及其促进结直癌细胞增殖和侵袭的生物学功能。方法:实时定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测结直肠癌组织TUG1的表达水平,并采用卡方检验分析TUG1表达水平与临床资料的相关性。Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验分析TUG1表达水平与结直肠癌预后的相关性。CCK8实验和Transwell实验检测过表达和敲低TUG1后的结直肠癌细胞增殖或侵袭能力的变化。结果:TUG1在结直肠癌组织中表达水平明显升高（P<0.05）;TUG1表达水平与肿瘤大小、CEA水平、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期密切相关（P<0.05）。Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验提示,TUG1表达水平越高,结直肠癌患者预后越差（P<0.05）。CCK8和Transwell实验结果表明,与对照组相比,pcDNA3.1-TUG1组结直肠癌细胞中TUG1表达水平明显增高(P＜0.05),细胞增殖活性和侵袭数目增多(P＜0.05);而siRNA-TUG1组结直肠癌细胞中TUG1表达水平明显降低(P＜0.05),细胞增殖活性和侵袭数目减少(P＜0.05)。结论:TUG1在结直肠癌组织中呈高表达,且TUG1表达水平越高,患者预后越差。并且,lncRNA TUG1促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过荧光定量PCR检测miR-34a在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a的靶基因,子宫内膜癌Ishikawa细胞转染miR-34a mimics及对照miR-NC,并转染Notch表达载体,通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a和Notch1对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a对Notch1蛋白表达的影响。结果:miR-34a在人子宫内膜癌组织中表达显著下调（P<0.05）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-34a能与Notch1 3' UTR结合,miR-34a mimics能够显著抑制细胞活力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）,并且miR-34a mimics显著抑制Notch1蛋白表达（P<0.05）。结论:miR-34a能够通过调控靶基因Notch1的表达,抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

肝癌组织中EGFL9基因的表达及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究表皮生长因子样结构域9（epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9）基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,RT-qPCR）方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。     

LncRNA TUG1靶向miR-138-5p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1（TUG1）和微小RNA 138-5p（miR-138-5p）在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-qPCR法检测胰腺癌组织及其细胞系中TUG1和miR-138-5p表达水平。通过小干扰RNA下调PANC-1细胞中TUG1水平或转染miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TUG1和miR-138-5p的靶向关系。共转染TUG1-siRNA和miR-138-5p mimics至PANC-1细胞，MTT、Transwell法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在胰腺癌组织及其细胞系中，TUG1表达上调（P<0.05）而miR-138-5p表达下调（P<0.05）。在PANC-1细胞中敲减TUG1或过表达miR-138-5p，细胞活力、迁移和侵袭能力下降（P<0.05）。starBase v2.0在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明，TUG1可靶向调控miR-138-5p表达。MTT、Transwell实验结果显示，降低miR-138-5p的表达可逆转TUG1-siRNA对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:敲减TUG1能够通过上调miR-138-5p水平抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

SPOCK2基因表达上调对前列腺癌细胞增殖的影响

目的:探讨SPOCK2基因表达上调对前列腺癌细胞增殖的影响。方法:通过Real-time PCR及Western Blot检测前列腺癌组织及细胞中SPOCK2基因的表达。进一步通过基因重组技术上调前列腺癌细胞系DU145及LNCaP中SPOCK2基因表达,通过CCK8检测细胞增殖情况变化,通过流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果:前列腺癌组织中SPOCK2表达显著低于正常对照组（P<0.05）,应用基因重组片段有效上调SPOCK2基因表达后,转染组细胞增殖率均显著低于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。转染组G0/G1期细胞百分比显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。转染组S期显著低于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。DU145细胞转染组凋亡率显著高于阴性对照组及空白对照组,差异有显著统计学意义（P<0.05）。结论:SPOCK2上调可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G0/G1期,表明该基因可能通过影响细胞增殖,作为抑癌基因在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞自噬反应的影响

目的:探讨苹果多酚通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1（AMP-activated protein kinase/Sirtuin1,AMPK/SIRT1)信号通路对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮细胞（A549）自噬反应的影响。方法:使用不同浓度的苹果多酚提取物（apple polyphenol extract,APE）预处理A549细胞2 h后,LPS诱导A549细胞培养24 h,MTT法检测增殖活性,筛选APE最佳预处理浓度;将A549细胞分为对照组、LPS组（3 mg/L LPS）、LPS+APE组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE）、APE+Compound C组（3 mg/L LPS+20 μg/mL APE+50 μmol/L Compound C）,免疫荧光染色观察A549细胞自噬;流式细胞术检测A549细胞凋亡;Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白及AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达水平。结果:与对照组比较,经LPS诱导的A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与LPS组比较,LPS+APE组细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著升高,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）;与LPS+APE组比较,APE+Compound C组A549细胞增殖活性、自噬水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、SIRT1、p-ULK1/ULK1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平显著降低,p62蛋白表达及细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。结论:苹果多酚通过激活AMPK/SIRT1 信号通路提高LPS诱导的肺上皮细胞自噬,降低细胞凋亡。     

EBSS饥饿人鼻咽癌CNE-2细胞株诱导自噬的机制研究

目的:观察饥饿状态下永生化正常鼻咽上皮NP69细胞、鼻咽癌CNE-2细胞的自噬变化及自噬与凋亡的相互作用,为Baf-A1在鼻咽癌中的应用前景提供证据。方法:EBSS溶液替代DMEM溶液在NP69和CNE-2细胞中制造体外饥饿环境,Baf-A1抑制细胞自噬。应用Western blot及透射电镜检测细胞自噬,MTT检测细胞存活率,qRT-PCR检测mRNA表达。结果:与NP69细胞相比,EBSS制造的饥饿环境显著促进CNE-2细胞发生自噬,处理24时后出现大量细胞凋亡,100 nmol/L Baf-A1抑制细胞自噬可延缓饥饿诱导的细胞凋亡。qRT-PCR检测结果:EBSS作用下,LKB1、AMPK、ULK1、Beclin1、ATG5 mRNA水平均显著上升(P<0.05)。结论:EBSS通过LKB1/AMPK/mTOR通路显著诱导CNE-2细胞自噬的发生。     

褪黑素介导小鼠肝H22肿瘤细胞自噬作用的研究

目的:探讨褪黑素（melatonin,MLT）对小鼠肿瘤细胞自噬信号通路的影响,从而阐述褪黑素发挥抗肿瘤效果的机制。方法:构建H22肝癌模型小鼠30只,每组10只,分别为生理盐水组、10 mg/kg褪黑素组、20 mg/kg褪黑素组。将小鼠肿瘤组织制备成切片后于光学显微镜和电镜下观察切片。利用荧光免疫组化法检测每个视野中的阳性细胞数平均百分比,以该切片阳性细胞百分比为基础进行计分。通过蛋白印迹试验对蛋白进行定性及定量测定,最后利用荧光显微镜下观察细胞内的绿色荧光,记录图像,分析计数LC3阳性细胞与总细胞数的比例,反映细胞发生自噬的程度。结果:MLT处理的动物其自噬形态较生理盐水组明显增多。随机成像后MLT处理组自噬液泡总数明显高于生理盐水组（P<0.05）。经MLT处理的H22荷瘤小鼠的肿瘤组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平明显高于生理盐水组（P<0.05）。MLT处理的H22荷瘤小鼠肿瘤组织中,LC3亮点有所增强。MLT处理的H22荷瘤小鼠肿瘤组织中Akt和mTOR磷酸化水平较生理盐水组明显降低（P<0.05）。结论:褪黑素在H22荷瘤小鼠中诱导自噬,褪黑素能够诱导自噬过程标志蛋白Beclin-1和LC3的表达,并且能够抑制H22荷瘤小鼠中的Akt/mTOR信号通路。