基于CRISPR/Cas9技术敲除PD-L1对非小细胞肺癌PC-9/T790M细胞吉非替尼耐药敏感性的影响

目的:探讨在具有T790M突变的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中应用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除程序性细胞死亡配体1(PD-L1)后对吉非替尼耐药敏感性的影响,阐明PD-L1对PC-9/T790M细胞耐药敏感性的作用机制.方法:常规体外培养PC-9细胞和PC-9/T790M细胞,经CRISPR/Cas9基因编...     

吉非替尼对晚期复治非小细胞肺癌疗效的临床研究

目的 分析吉非替尼对晚期复治非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的疗效,及影响疗效和疾病进展因素. 方法 70例经病理或细胞学证实的Ⅲb-Ⅳ期复治NSCLC,口服吉非替尼250 mg/d,并对其进行随访,评价其疗效、无进展生存期(PFS)长短及PFS影响因素、不良反应. 结果疾病有效率25%,疾病控制率64.71%;女性、腺癌和细支气管肺泡癌、不吸烟、小病灶、出现皮疹患者较男性、鳞癌、吸烟、大病灶及无皮疹出现患者疾病控制率高,无进展生存期长(均P<0.05);COX多因素回归分析显示,吸烟、病灶大小、疾病是否得到控制是影响疾病进展的独立因素,RR分别为4.989,2.241,2.900,95%CI分别为2.150-11.576,1.290-3.892,1.227-6.855.皮疹和腹泻是最常见的不良反应,多为Ⅰ-Ⅱ级,不需特殊处理. 结论 吉非替尼对女性、腺癌和细支气管肺泡癌、不吸烟、小病灶、出现皮疹的Ⅲb-Ⅳ期复治NSCL患者有较好疗效.     

非小细胞肺癌HCC827奥希替尼耐药细胞株的建立及耐药机制探讨

目的 体外构建人非小细胞肺癌(NSCLC)奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,并探讨耐药机制.方法 使用NSCLC细胞株HCC827,通过浓度递增法构建奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,并比较两种细胞株形态学、增殖能力、细胞凋亡以及细胞蛋白质表达的差异.结果 半抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)结果显示,HCC8...     

有氧运动对非小细胞肺癌吉非替尼耐药的延缓作用

目的:分析有氧运动对非小细胞肺癌(NSCLC)吉非替尼耐药的影响。方法:采用CCK-8、Western blot及流式细胞术检测亲本细胞PC-9与吉非替尼耐药细胞PC-9-GR的吉非替尼半数抑制浓度(IC₅₀),缺氧诱导因子1(HIF-1)、乙醛脱氢酶1(ALDH1)与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及肿瘤干细胞(CSCs)百分比。裸鼠皮下种植PC-9-GR,通过有氧运动和吉非替尼进行干预,分为4组：对照组、吉非替尼治疗组、有氧运动组及联合组,对比各组裸鼠荷瘤能力及对吉非替尼的应答效力,并检测各组裸鼠瘤体内HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表达及CSCs百分比。结果:与PC-9细胞相比,PC-9-GR细胞的吉非替尼IC₅₀,HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表达及CSCs百分比均增高(P<0.05)。裸鼠皮下荷瘤实验中,吉非替尼治疗及有氧运动均可降低裸鼠荷瘤能力,且二者存在协同作用(P<0.05);吉非替尼对裸鼠瘤体内HIF-1、ALDH1、VEGF蛋白表达及CSCs百分比无影响,而有氧运动可使上述指标降低(P<0.05...     

吉非替尼治疗进展期非小细胞肺癌疗效分析及对血清MMP-9的影响

目的 探讨吉非替尼治疗进展期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效、安全性以及对血清基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响.方法 依据纳入与排除标准,选取68例进展期NSCLC患者为研究对象.随机分为观察组与对照组,每组各34例.观察组予以口服吉非替尼;对照组予以GP方案.观察2组患者的临床疗效,包括客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR) 、无进展生存期(progression free survival,PFS)与总生存期(overall survival,OS)等,治疗前后测定血清MMP-9的浓度,记录可能发生的不良反应.结果 观察组ORR达47.06%,DCR达76.47%,均高于对照组;观察组中位PFS为6.8个月,中位OS为12.3个月,均长于对照组;两组患者治疗后血清MMP-9水平均明显降低,且观察组治疗后血清MMP-9水平降低更显著;观察组与对照组不良反应发生率分别为14.71%、38.24%,观察组不良反应发生率显著低于对照组.上述差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 吉非替尼为进展期NSCLC的二、三线治疗提供了新的治疗方法,抑制了MMP-9的活性,具有较好的肿瘤抑制作用,且临床安全性高,比较适合于进展期NSCLC的临床治疗.     

吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌3例

吉非替尼（Iressa，ZD1839）是一种选择性表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶抑制剂，该酶通常表达于上皮来源的实体瘤。对于EGFR酪氨酸激酶活性的抑制可妨碍肿瘤的生长、转移和血管生成，并增加肿瘤细胞的凋亡。目前我国尚未上市，多为慈善供药，我院地处闽南侨乡，与港、澳、台交流频繁，患者自购该药较其他地区方便。我院自2003年9月至2004年6月用吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌3例。现报告如下。     

厄洛替尼挽救治疗吉非替尼治疗失败的晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的 评价厄洛替尼作为挽救方案治疗吉非替尼治疗失败的晚期非小细胞肺癌的疗效及不良反应.方法 回顾性分析2005年12月至2009年11月吉非替尼治疗进展后接受厄洛替尼治疗的晚期非小细胞肺癌患者.观察的主要指标为:客观有效率(RR)、疾病控制率(DCR)、疾病无进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS)及不良反应.结果 随访至2010年6月,共有22例患者符合入组条件.22例患者均可接受疗效及生存评价,其中部分缓解(PR)2例,稳定(SD)12例,进展(PD)8例,RR为9.1%,DCR为63.6%,中位为PFS 3.0个月,OS为5.5个月.4例患者检测了表皮生长因子受体(EGFR)突变,2例有突变,2例无突变,全部患者均得到疾病控制.1例男性吸烟腺癌合并颅内转移患者原发无效给予厄洛替尼治疗后颅内病灶达到CR.亚组分析显示:吉非替尼治疗疗效SD者DCR显著提高(90% vs 58.3%,P=0.031),其RR、PFS及OS分别为20%、3.0个月及5.5个月.Ⅲ/Ⅳ度不良反应主要是皮疹1/22(4.5%)、肝功能损害1/22(4.5%)及肺间质纤维化1/22(4.5%).结论 吉非替尼治疗失败后的晚期非小细胞肺癌给予厄洛替尼挽救治疗具有较好的临床获益率,其中吉非替尼治疗疗效SD患者显著提高疾病控制率.     

吉非替尼在非小细胞肺癌治疗中的耐药处理策略探讨

目的：探讨吉非替尼在非小细胞肺癌治疗中的耐药处理策略。方法：选取2020年12月—2021年12月山东省鄄城县人民医院收治的69例吉非替尼耐药的非小细胞肺癌患者作为研究对象,根据随机数字表法分为三联合组与二联合组。二联合组采用吉非替尼联合顺铂治疗,三联合组在二联合组基础上增加培美曲塞二钠治疗。比较两组肿瘤直径及体积、治疗效果、肿瘤标志物水平、T淋巴细胞亚群指标水平、不良反应发生情况。结果：治疗后,三联合组肿瘤直径短于二联合组,肿瘤体积小于二联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。三联合组治疗有效率和疾病控制率均高于二联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,三联合组肿瘤标志物、T淋巴细胞亚群指标水平优于二联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：吉非替尼耐药者联合培美曲塞二钠和顺铂治疗,可有效提升肿瘤控制效果,临床应用安全可靠。     

安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及安全性评价

目的探讨安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效及安全性。方法回顾性分析应用安罗替尼治疗的50例晚期NSCLC病人资料,其中有45例病人接受安罗替尼三线治疗,5例病人接受四线治疗。分析评估安罗替尼的疗效及安全性。结果最终47例病人纳入研究,无完全缓解的病人,部分缓解2例（4.26%）,病情稳定24例（51.06%）,病情进展21例（44.68%）。客观缓解率及疾病控制率分别是4.26%和55.32%,中位总生存时间（mOS）及中位无进展生存时间（mPFS）分别是8.6个月（95%CI 5.853~11.347）和4.8个月（95%CI 2.904~6.696）;≥60岁病人mOS及mPFS分别为8.6个月（95%CI 5.853~11.347）、5.8个月（95%CI 4.283~7.317）。使用安罗替尼发生的不良反应基本可耐受,发生率较高的不良反应为厌食、咯血、肝功能异常、手足综合征、高血压。结论安罗替尼作为晚期NSCLC病人三线及以上治疗是可行的方案。     

CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤耐药研究中的应用进展

成簇规律间隔短回文重复序列/CRISPR相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)基因编辑系统是存在于细菌和古生细菌中的一种抵御外源DNA入侵的适应性免疫反应系统.与传统的锌指核酸酶(ZFN)和转录激活样因子效应物核酸酶(TALEN)基因编辑技术相比,CRISPR/Cas9操作更加简便、高效.目前,该技术已在肿瘤耐药研究中得到广泛应用,包括乳腺癌和白血病耐药等诸多方面.CRISPR/Cas9技术的应用虽仍存在脱靶效应等问题,但其应用前景非常广阔.本文就其在肿瘤耐药研究方面的应用进行综述.     

EGFR突变的非小细胞肺癌耐药机制及其克服新策略

表皮生长因子受体(EGVR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)被列为一个与临床相关的、独特的肺癌亚群.虽然EGFR突变的肿瘤患者增加了对酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的敏感性,但其耐药仍然是一个主要的临床问题.针对原发和获得性耐药不同的分子机制,包括应用第2代或第3代TKI,以及与EGFR下游信号通路抑制剂的组合用药等多项临...     

CRISPR/Cas9系统构建ROCK2基因敲除肺癌细胞系

目的 利用CRISPR/Cas9编辑系统对人肺癌细胞系A549、H460细胞中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2(ROCK2)基因进行稳定敲除,并对其敲除效果进行验证。初步探讨ROCK2基因敲除肺癌细胞株的细胞水平上的功能改变。方法 利用Rock-2 CRISPR 质粒和Rock-2 HDR 质粒转染构建A549、H460 ROCK2基因敲除稳定细胞株。蛋白质印迹法验证敲除效果、用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ROCK2基因的mRNA表达水平。平板克隆形成实验、MTT法检测各细胞株的增殖能力。结果 A549、H460肺癌细胞中ROCK2基因稳定敲除株构建成功。与原始细胞株相比,ROCK2敲除株细胞中的蛋白表达水平完全缺失,细胞内的mRNA表达水平显著下降,而且能降低A549、H460肺癌细胞的增殖能力。结论 利用CRISPR/Cas9基因编辑系统获得ROCK2基因敲除的肺癌细胞系,为进一步研究ROCK2对肺癌生长的影响奠定基础。     

Gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化

[目的]了解gefitinib获得性耐药产生时非小细胞肺癌上皮性标志EGFR及E-cadherin表达的变化。[方法]采用逐步递增药物浓度、间歇作用体外诱导法诱导人肺腺癌NCI-H1975细胞株gefitinib获得性耐药;倒置显微镜下观察亲本细胞株和耐药细胞株在gefitinib作用前后的细胞形态学变化差异;细胞计数法描绘耐药细胞株和亲本细胞株的生长曲线并计算群体倍增时间;免疫细胞化学法检测耐药细胞株及亲本细胞株的EGFR及E-cadherin蛋白表达状态,并比较二株细胞间两种蛋白表达的差异。[结果]历时6个月诱导建成人肺腺癌gefitinib耐药细胞株NCI-H1975/GR。Gefitinib作用后耐药细胞株NCI-H1975/GR的细胞形态变化与亲本株NCI-H1975有所不同;在gefitinib的作用下,NCI-H1975/GR细胞体积变小,部分细胞变为纺锤形;NCI-H1975/GR细胞株群体倍增时间延长7.14 h(P<0.05);免疫细胞化学结果显示:与亲本株比较,虽然耐药细胞株NCI-H1975/GR细胞细胞膜EGFR蛋白的表达无明显变化,但在细胞浆的表达明显增高;E-cadherin在细胞膜的表达明显降低。[结论]非小细胞肺癌产生gefitinib获得性耐药后EGFR蛋白在细胞浆积聚;而以E-cadherin为代表的上皮分化标记表达减弱。     

Recurrence patterns of advanced non-small cell lung cancer treated with gefitinib

Background Gefitinib is widely used in the treatment of advanced non-small cell lung cancer (NSCLC).However,only a small number of reports have described initial failure sites in patients treated with ...     

吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

[目的]观察吉非替尼(Gefitinib)治疗含铂类化疗失败的晚期非小细胞肺癌的疗效及毒副作用.[方法]对76例含铂类化疗失败的晚期非小细胞肺癌患者给予吉非替尼250 mg/d口服治疗,持续服用直到疾病进展或出现不可耐受的毒副作用.[结果]76例患者中完全缓解(CR)3例(3.9%),部分缓解(PR)19例(25.0%),稳定(SD)30例(39.4%).总有效率(RR)为28.9%.临床获益率为68.3%(52/76).有效患者的中位缓解时间为8.3个月,中位肿瘤进展时间(TTP)为5.8个月,中位总生存期(OS)为12个月,1年生存率为47.6%.女性患者的有效率显著高于男性患者(P＜0.001).与药物相关的毒副作用依次为:皮疹29例(38.0%),腹泻16例(21.0%),皮肤干燥11例(14.43%),搔痒12例(15.7%).其他亦可出现恶心、ALT轻度升高等.[结论]吉非替尼可有效治疗含铂类化疗失败的晚期非小细胞肺癌.吉非替尼的毒副作用可耐受.     

Efficacy and safety of gefitinib as monotherapy for Chinese patients with advanced non-small cell lung cancer

PLATINUM-BASED CHEMOTHERAPY CAN IMPROVE THE SURVIVAL AND QUALITY OF LIFE OF PATIENTS WITH LOCALLY ADVANCED AND METASTATIC LUNG CANCER. SECOND-LINE DOCETAXEL MONOTHERAPY CAN IMPROVE OVERALL SURVIVAL FOLLOWING THE FAILURE OF FIRST LINE CHEMOTHERAPY. HOWEVER, MANY LIMITING FACTORS SUCH AS POOR PERFORMANCE STATUS, ADVANCED AGE, ADVERSE EFFECTS OF CHEMOTHERAPY AND RELUCTANCE …     

应用CRISPR/Cas9技术制备MrgD基因敲除小鼠模型

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立MrgD基因敲除的小鼠模型,为研究MrgD基因在糖、脂代谢中的作用提供实验工具。方法 根据MrgD基因第一外显子碱基序列,设计针对MrgD基因的sgRNA（single guide RNA）,构建sgRNA表达质粒,利用T7RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9后,将Cas9 mRNA和sgRNA对C57BL/6J小鼠的受精卵进行显微注射。使用基因测序检测MrgD基因碱基的突变情况。结果 获得了MrgD基因突变的F2代纯合子小鼠,即MrgD基因缺失173bp的小鼠。并且,初步研究显示MrgD基因纯合突变小鼠在普通饲料喂养下糖、脂代谢正常。结论 成功构建了MrgD基因敲除小鼠动物模型,为探讨MrgD基因在糖尿病发生发展中的作用提供研究平台。