抑制单羧酸转运蛋白1可增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 探讨siRNA沉默单羧酸转运蛋白1(MCT1)增强鼻咽癌细胞HNE1/DDP对顺铂诱导凋亡的敏感性及其可能机制.方法 Western blot检测HNE1和HNE1/DDP细胞中MCT1的表达及siRNA转染沉默MCT1在HNE1/DDP细胞中MCT1的表达;MTT法检测不同浓度顺铂和MCT1 siRNA联合顺铂对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用;PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测Mcl-1、Bak、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 MCT1在HNE1/DDP细胞中高表达,抑制MCT1的表达可增加HNE1/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),部分逆转鼻咽癌细胞对顺铂的耐药.此外,抑制MCT1的表达可增强HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的作用,MCT1 siRNA与8μmol/L顺铂联合作用于HNE1/DDP细胞24 h的凋亡率为(51.23±2.86)%,较单用MCT1 siRNA、顺铂的凋亡率明显升高(P<0.05).同时使细胞线粒体膜电位降低,下调Mcl-1、Bcl-2的表达和上调Bax的表达.结论 抑制MCT1的表达可增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,其机制可能与下调Mcl-1、Bcl-2和上调Bax有关.     

茶多酚联合顺铂对肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响

目的 观察茶多酚（TP）、顺铂（DDP）及两者联合对人肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响,探 讨TP 联合DDP 联合影响A549 细胞生长的机制。方法 人肺癌细胞A549 经TP、DDP 单独或联合处理后, 将A549 细胞分成TP 组、DDP 组、TP 联合DDP 组（TP+DDP 组）及空白对照组,MTT 法检测细胞增殖 情况,Annexin V/PI 双染流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot 检测细胞中p-AKT 和p-ERK1/2 的表达。 结果 TP 组、DDP 组及TP+DDP 组细胞增殖率分别为（91.0±3.6）%、（84.3±5.0）% 和（70.3±4.2）%, TP+DDP 组的细胞增殖率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组;流式细胞 术示TP 组细胞凋亡率无明显影响,TP+DDP 组凋亡率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;DDP 组细胞中p-AKT、p-ERK1/2 蛋白表达降低,TP 联合DDP 组中p-AKT、p-ERK1/2 的蛋白表达与DDP 组 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组。结论 TP 与DDP 联合用药可增强DDP 的抑 制增殖和促进凋亡作用,其机制可能与下调AKT 的表达和ERK1/2 蛋白的磷酸化有关。     

人参皂苷Rg3通过下调PD-L1逆转胃癌细胞的顺铂耐药性

目的 探究人参皂苷Rg3对顺铂（DDP）耐药性胃癌细胞株SGC7901/DDP的逆转作用及机制。方法 CKK-8法鉴定Rg3对SGC7901/DDP细胞的毒性,筛选出合适浓度进行实验;将SGC7901/DDP细胞分为5组,空白对照组、Rg3低剂量组（10μg/ml）、中剂量组（20μg/ml）、高剂量组（40μg/ml）、维拉帕米组（10μg/ml）,CCK-8法检测Rg3对SGC7901/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;实时定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印记（WB）检测PD-L1mRNA和蛋白表达;CCK-8法检测SGC7901/DDP细胞PD-L1过表达后,Rg3对细胞耐药性的作用。结果 5、10、20、40、80、160μg/ml Rg3均能抑制SGC7901、SGC7901/DDP细胞活性,呈剂量和时间依赖效应,选择5、10、20、40μg/ml作为人参皂苷Rg3实验浓度。与DPP组比较,Rg3处理后DDP对SGC7901/DDP细胞增殖的抑制作用明显增强（P<0.05）。与SGC7901细胞比较,SGC7901/DDP细胞中PD-L1蛋白显著高表达（P<0.05）;与DPP组比较,Rg3处理后细胞中PD-L1mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。SGC7901/DDP细胞PD-L1过表达可有效减弱Rg3对SGC7901/DDP细胞耐药性的逆转作用。结论 人参皂苷Rg3可有效抑制SGC7901/DDP细胞增殖,增加SGC7901/DDP对顺铂的敏感度,其机制可能通过下调PD-L1基因表达实现。     

miR-373-3p调控小窝蛋白1逆转膀胱癌细胞顺铂耐药的机制研究

目的 探讨微小RNA-373-3p(miR-373-3p)靶向小窝蛋白1(Cav1)对膀胱癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 建立膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP,RT-qPCR检测T24细胞与T24/DDP细胞中miR-373-3p表达,在T24/DDP细胞中过表达miR-373-3p或抑制Cav1表达,每组实验设置6个复孔,MTT法检测DDP对T24/DDP细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)及细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞中Cav1、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-373-3p与Cav1的靶向关系。结果 与T24细胞比较,T24/DDP细胞中miR-373-3p表达水平降低(0.34±0.06 vs. 1.00±0.18,t=8.521,P<0.001),Cav1蛋白表达水平升高(0.95±0.10 vs. 0.41±0.06,t=11.342,P<0.001);双荧光素酶报告基因实验证明miR-373-3p可靶向负调控Cav1表达;T24/DDP细胞中过表...     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

MicroRNA-101 对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 顺铂敏感性的影响

探讨 MicroRNA-101（miRNA-101）对上皮性卵巢癌耐药细胞 SKOV3/DDP 顺铂敏感性的影响及相关作用机制。方法 本研究通过细胞转染技术上调 SKOV3/DDP 细胞内 miRNA-101 的表达,采用RT-PCR 检测 miRNA-101 及 BDNF mRNA 的表达情况;CCK-8 检测 SKOV3/DDP 细胞顺铂敏感性及增殖力;Annexin V-FITC/ PI 流式细胞实验检测细胞凋亡率。结果 与阴性对照组比较,miRNA-101 转染组细胞 miRNA-101 表达量及细胞凋亡率增加 [ （1.000±0.022）vs（5.380±0.246）, <0.05],[ （11.020±0.685）%vs（26.158±1.278）%, <0.05];BDNF mRNA 表达量降低[ （1.000±0.042）vs （0.389±0.055）, <0.05];顺铂 IC50及细胞增殖力均下降[ （57.276±1.717）vs （33.176±2.465）, <0.05],[ （1.776±0.030）vs （1.642±0.252）, <0.05]。结论 miRNA-101 可有效增加 SKOV3/DDP 细胞对顺铂的药物敏感性,促进细胞凋亡。     

FoxM1对人宫颈癌顺铂耐药株Hela/DDP增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制研究

目的：探讨叉头框转录因子M1(FoxM1)对人宫颈癌顺铂耐药株Hela/DDP增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制。方法：将Hela/DDP细胞分为空白组（常规培养，不予任何处理）、正常对照（NC）组（转染空白干扰质粒）、低表达组和过表达组。低表达组转染siRNA-FoxM1下调Hela/DDP细胞中FoxM1表达，过表达组转染pcDNA3.1-FoxM1上调Hela/DDP细胞中FoxM1表达。采用RT-qPCR法检测FoxM1 m RNA表达水平，CCK-8检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞侵袭能力。结果：FoxM1 mRNA在Hela细胞中的表达水平低于Hela/DDP细胞（P<0.05）。空白组与NC组中FoxM1 mRNA、增殖率、凋亡率、侵袭细胞数及HSP70、S100A9蛋白表达水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。与空白组比较，低表达组细胞活力和侵袭能力及FoxM1 mRNA、HSP70蛋白表达水平降低，凋亡率和S100A9蛋白表达水平升高（P<0.05），与空白组比较，过表达组细胞活力和侵袭能力及FoxM1 m R...     

微RNA-4286靶向核输出蛋白1调控非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探究miR-4286对非小细胞肺癌细胞的顺铂（DDP）敏感性的调节作用及初步机制。方法 采用qRT-PCR法检测A549细胞和A549顺铂耐药细胞（A549/DDP）中miR-4286的表达水平;采用miR-4286模拟物和抑制剂成功构建miR-4286的过表达和低表达细胞模型,分为4组：模拟物阴性对照组、miR-4286模拟物组、抑制剂阴性对照组和miR-4286抑制剂组;采用CCK-8法、平板克隆法和流式细胞术等方法检测改变miR-4286后非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性的改变;采用TargetScan、qRT-PCR法和蛋白印迹法检测miR-4286和核输出蛋白1（XPO1）的靶向关系;采用蛋白印迹法检测在顺铂的作用下改变miR-4286后非小细胞肺癌细胞的凋亡蛋白表达量的改变。结果 miR-4286在A549细胞中的表达高于A549/DDP细胞（P<0.01）。在0~2g/ml顺铂的作用下,过表达miR-4286后A549细胞增殖率降低、凋亡率和对顺铂的敏感性增加（P<0.05或P<0.01）;低表达miR-4286后结果与之相反（P<0.05或P<0.01）。过表达miR-4286后,A549细胞中XPO1的mRNA和蛋白量表达减少,低表达miR-4286后结果与之相反（P<0.05或P<0.01）。在顺铂作用下,下调miR-4286抑制A549细胞凋亡蛋白的表达,同时也下调XPO1能负调控这一作用（P<0.05或P<0.01）。结论 miR-4286能靶向XPO1调控非小细胞肺癌A549细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与细胞的凋亡通路相关。     

长非编码RNA BANCR逆转非小细胞肺癌细胞株顺铂耐药的研究

目的:研究长非编码RNA BANCR对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测耐顺铂细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中BANCR的表达差异,发现BANCR在A549/DDP细胞中显著低表达?在A549/DDP细胞中过表达BANCR,分别应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测过表达后A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性,细胞增殖能力,联合顺铂处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后A549/DDP细胞p53的表达变化?结果:BANCR在A549/DDP细胞中的表达量显著低于A549细胞(P < 0.05),在A549/DDP细胞中过表达BANCR可产生以下效应:相较于对照组,顺铂对A549/DDP/BANCR细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),A549/DDP/BANCR细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/BANCR经过顺铂处理后细胞凋亡增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与空白对照组比较,过表达BANCR的 A549/DDP细胞p53表达水平明显升高?结论:BANCR可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调p53蛋白表达而逆转 A549/DDP细胞对DDP的耐药性?     

氯喹逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药作用

目的探究氯喹对人鼻咽耐药细胞的逆转耐药作用及其机制。方法MTT检测不同浓度的顺铂（2, 4, 8, 16, 32 μmol·L-1）
以及不同浓度的氯喹（5, 10, 20, 40, 80 μmol·L-1）处理HNE1细胞,HNE1/DDP细胞48 h 对细胞增殖的影响;q-PCR方法检测5,
10 μmol·L-1 氯喹处理HNE1/DDP后的多药耐药基因MDR1 mRNA的表达;PI单染方法检测氯喹（10, 20 μmol·L-1）处理HNE1/
DDP后细胞凋亡率;采用Western blot 方法检测氯喹处理HNE1/DDP后的P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）的表达。结果MTT
结果显示,不同浓度的氯喹（5, 10, 20, 40, 80 μmol·L-1）对细胞具有明显的抑制作用,并且呈浓度依赖性;q-PCR结果表明,氯喹
作用细胞后能明显降低MDR1 mRNA水平;PI 结果显示,氯喹作用细胞后,细胞的凋亡率明显增加;通过western blot 实验表
明,氯喹能明显降低MDR1和P-gp 蛋白水平。结论氯喹能逆转人鼻咽癌细胞HNE1/DDP的耐药,其机制可能与下调MDR1
mRNA表达及抑制P-gp的功能与表达有关。
     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

银杏酚C171与顺铂联用逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性

探讨银杏酚C171对顺铂耐药人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药及凋亡的影响。方法: 体外培养A549及A549/DDP细胞,MTT法检测A549/DDP细胞的耐药倍数,确定顺铂作用浓度;此浓度顺铂与不同浓度银杏酚C171(0, 10,20,40 mg/L)联合应用,分别通过Transwell法、免疫印记及流式细胞术检测A549/DDP细胞迁移、侵袭,Nrf2/Keap1信号通路相关蛋白的表达及细胞凋亡情况。结果： MTT结果显示,与A549细胞相比,A549/DDP细胞具有5.8倍耐药性,确定顺铂作用浓度为4 mg/L;与对照组相比,Transwell实验显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能明显抑制A549/DDP细胞的迁移和侵袭(P<0.05);免疫印迹结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能抑制A549/DDP细胞Nrf2、Mrp1及抗凋亡蛋白Bcl2的表达(P<0.05),且促进凋亡蛋白Bax及Keap1蛋白的表达(P<0.01);流式细胞术结果显示,各浓度银杏酚C171与顺铂联用均能致A549/DDP细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。 结论： 银杏酚C171与顺铂联用可逆转体外A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,并促进细胞凋亡。     

下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡

目的 探讨Pannexin2（Panx-2）蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡的影响。方法 免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平；以睾丸癌I-10细胞株为研究对象，实验分为转染试剂对照组（mork组）、阴性对照质粒组（NC组）、干扰Panx-2组（shRNA1质粒组和shRNA2质粒组），采用免疫印迹法验证Panx-2的表达；在转染细胞中添加16 μmol/L的顺铂诱导细胞死亡，通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率，集落克隆法检测细胞的集落形成能力；在顺铂（16 μmol/L）处理8 h后，采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡；在顺铂（16 μmol/L）作用24 h后， 免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 与I-10细胞和Tcam-2细胞相比，I-10/DDP细胞（P< 0.001）和Tcam-2/DDP细胞（P<0.01）中Panx-2的表达显著增加；干扰Panx-2基因后，免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中Panx-2的表达量下降（P<0.05）；MTT法显示shRNA1和shRNA2组细胞的存活率均低于NC组（P<0.001）；在含顺铂培养基的培养下，集落克隆法显示shRNA1和shRNA2组细胞的集落形成能力低于NC组（P<0.001）；AnnexinV/PI双染法显示shRNA1和shRNA2组的早期凋亡率（P<0.01）均低于NC组；免疫印迹结果显示，与NC组相比，shRNA1和shRNA2组中凋亡相关蛋白caspase 3表达升高（P<0.05），Bcl-2表达降低（P<0.01），Bax表达升高（P<0.05）。结论 下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌（I-10）细胞凋亡。     

精氨酸抗利尿激素对急性肺损伤大鼠肺水肿液的清除作用

目的探讨精氨酸抗利尿激素（AVP）对急性肺损伤肺水肿液清除作用。方法48只健康成年的雄性SD大鼠随机分为对照
组、模型组（ALI组）、AVP组,观察各组肺组织病理形态学、肺水含量、肺泡上皮通透性及肺泡液体清除率（AFC）变化,测定肺泡
上皮钠通道（ENaC）和钠/钾ATP 酶（Na+, K+-ATPase）表达情况。结果经AVP治疗后,模型组肺泡上皮通透性（0.27±0.15 vs
0.59±0.19）及肺水含量（5.01±1.59 vs 8.67±1.79）减轻,AFC 增加（23.56±4.51 vs 8.28±3.57）,α-ENaC（1.296±0.322 vs 0.349±
0.141）和α1-Na+,K+-ATPase表达增加（1.421±0.389 vs 0.338±0.186）,均有显著差异（P<0.05）。结论AVP能促进AFC,其作用途
径可能是上调α-ENaC和α1-Na+,K+-ATPase通道蛋白实现的。
     

灵芝多糖逆转卵巢癌细胞株顺铂耐药的作用及其机制

目的:探讨灵芝多糖(GLPS)对卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP耐药性的逆转作用,阐明GLPS通过改善卵巢癌耐药基因而改善其耐药的机制.方法:用不同剂量梯度(4、40和400 mg·L-1)GLPS、顺铂(DDP,1、10和100 mg·L-1)作用卵巢癌耐药细胞SKOV-3/DDP,用MTT法每12 h检测细胞抑制...     

缺氧诱导因子-1α基因沉默逆转卵巢癌细胞SKOV3/DDP耐药性的机制

目的：观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)沉默后人卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP 的HIF-1α、多药耐药基因1 （MDR1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）mRNA及蛋白产物的表达,探讨HIF-1α逆转SKOV3/DDP耐药性的机制。方法：体外培养卵巢癌细胞株SKOV3（敏感组）及其顺铂耐药株SKOV3/DDP（耐药组）,部分耐药株转染HIF-1α干扰质粒 pshRNA-HIF（转染组）及对照质粒pshRNA-Control（对照组）。RT-PCR法检测各组细胞HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量;Western blotting和免疫组织化学法测定HIF-1α、P-gp（MDR1基因编码蛋白）和Bcl-2蛋白的表达量。结果：RT-PCR检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2 mRNA表达量明显低于耐药组（P<0.05)。Western blotting检测,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05) ;免疫组织化学法,敏感组和转染组HIF-1α、MDR1和Bcl-2蛋白表达量明显低于耐药组(P<0.05);MDR1、Bcl-2 mRNA及蛋白在敏感组与转染组的表达量差异无统计学意义（P>0.05）。HIF-1α表达与MDR1、Bcl-2 mRNA表达量均呈正相关关系（r=0.908,P=0;r=0.916,P=0);HIF-1α表达与P-gp、Bcl-2蛋白表达呈正相关关系(r=0.773,P=0.003;r=0.862,P=0）。结论：HIF-1α沉默逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药株SOV3/DDP耐药性可能与MDR1和Bcl-2表达降低有关联。
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