ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗的研制

目的 通过研究冷酚与粗糖的混合比例、粗糖提纯时的质量浓度和乳糖保护剂的用量来制备符合规定的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.方法 发酵细菌,提取A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖粗制品,以不同的纯化工艺纯化A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖.将4种纯化的多糖原液按一定比例混合,加入乳糖作为保护剂,冷冻干燥制成ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.结果 通过比较不同纯化工艺制备的多糖,确定最佳提纯条件为多糖与冷酚的体积比为1∶1,粗糖提纯时的质量浓度为6 g/L.检测按此纯化条件制备的ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,3批疫苗的水分含量分别为1.7％、2.0％和2.1％,疫苗的A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖含量和回收率分别都≥50 μg/剂和80％,符合相关规定的要求.结论 按确定的工艺成功制备ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗.     

层析法提纯A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖工艺的建立

目的 建立A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖层析纯化工艺。方法 采用陶瓷羟基磷灰石和DEAE Sepharose FF层析柱，在PBS体系中纯化A群多糖。以0.5%脱氧胆酸钠预处理C群多糖，用陶瓷羟基磷灰石层析柱在PBS体系中纯化C群多糖。以含有脱氧胆酸钠的平衡缓冲液溶解Y和W135群多糖，再用Capto Adhere和Capto DEAE层析柱串联纯化。纯化的多糖经Sephadex G-25 Medium层析柱脱盐后冻干，按中国药典2015年版三部的要求进行检定。结果  经过层析纯化，A、C、Y、W135群多糖的蛋白质含量分别降至3.7、4.2、5.4和5.3 mg/g，核酸含量分别降至1.2、3.0、1.1和0.8 mg/g，均符合药典要求。此外，磷、唾液酸和O-乙酰基含量等指标亦均符合药典标准。结论 建立了A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖的层析纯化工艺。     

火箭免疫电泳法定量检测4价脑膜炎球菌多糖疫苗中C群脑膜炎球菌多糖含量的方法学验证

目的 验证用火箭免疫电泳法(rocket immunoelectrophoresis,R1E)检测4价脑膜炎球菌多糖疫苗(tetravalent serogroup A／C／W135／Y meningDcoccal polysaccharide vaccine,MPV4)中C群多糖含量的可靠性。方法 以系列浓度的C群多糖溶液为标准,采用RlE对MPV4中C群多糖含量迸行重复测定。结果 最佳线性范围为30～86 mg／L,相关系数(r)均大于0.985;MPV4与C群多糖参比品的剂量反应曲线之间具有良好的平行性;在精密度试验中,试验内CV为6.08％～8.07％,试验间Cy为7.24％～9.19％;A、W135和Y群多糖及乳糖不引起非特异性免疫反应。结论 本法的线性、精密度和专属性均符合验证要求,可作为定量检测MPV4中C群多糖含量的方法。     

A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量测定方法的建立

目的  建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌（meningococcus,Men）多糖疫苗（groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4）多糖含量的火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis,RIE)法。方法  分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果  菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均大于0.98。该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符,均符合质控标准。结论  建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。     

苯酚提取法对A群脑膜炎球菌多糖中细菌内毒素含量的影响

目的  研究苯酚提取法对A 群脑膜炎球菌多糖料液中细菌内毒素含量的影响。方法  用苯酚对A 群脑膜炎球菌多糖料液进行提取,比较粗制多糖不同溶解倍数、苯酚提取过程中采用不同搅拌转数、提取次数、提取温度等因素对多糖细菌内毒素含量的影响。  结果  粗制多糖采用4.5%醋酸钠溶液1∶100（质量体积比）溶解后进行苯酚提取的多糖细菌内毒素含量最低。同时,综合考虑多糖料液中蛋白含量、多糖回收率的检定结果,确定用苯酚进行提取的最佳条件为搅拌转数为400 转/min,提取次数为3次,温度为13～15 ℃,可有效降低多糖料液中细菌内毒素的含量。  结论  苯酚提取法可明显降低A 群脑膜炎球菌粗制多糖料液中的细菌内毒素含量。     

B群脑膜炎球菌疫苗研究进展

由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述.     

B群脑膜炎球菌疫苗研究进展

由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述.     

B群脑膜炎球菌疫苗研究进展

由B群脑膜炎球菌(Neisseria meningitidis serogroup B,MenB)引起的流行性脑脊髓膜炎是全球重要的公共卫生问题之一.由于MenB荚膜多糖与人体组织具有相似性,以及MenB外膜蛋白抗原具有多样性和复杂性,因此目前尚无有效的MenB疫苗.荚膜多糖修饰疫苗可能是一种解决办法;应用反向疫苗学等方法确认MenB的各种保守抗原是重要的疫苗研究途径;将多种无交叉反应的抗原混合制成疫苗同样是未来的研究方向之一.此文就MenB疫苗的研究进展作一综述.     

脑膜炎球菌疫苗研究进展

1969年,美国Gotschlish等采用十六烷基三甲基溴化铵提取脑膜炎球菌的大分子多糖抗原,成功制备荚膜多糖疫苗,证明免疫效果良好.然而,多糖疫苗对婴幼儿的免疫原性较弱,因而人们研制了单价和多价多糖一蛋白结合疫苗,目前部分结合疫苗已进入临床或上市.鉴于B群脑膜炎球菌多糖的免疫原性极弱,人们开发了外膜蛋白疫苗.研究表明,部分外膜蛋白疫苗对婴儿及儿童有较好的免疫原性及安全性.此外,通过基因工程技术研制DNA疫苗也不失为预防脑膜炎球菌感染的一种免疫策略.     

AC群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的制备

目的  制备以B群脑膜炎球菌外膜蛋白（outer membrane protein,OMP）为载体的AC群脑膜炎球菌多糖（polysaccharide,PS）结合疫苗（AC-OMP）,并初步研究该制备工艺的稳定性。方法  将以溴化氰活化的A、C群PS分别与B群OMP偶联制成AC-OMP。按《中华人民共和国药典》2010年版三部的要求对制备的AC-OMP进行检定。以制备的AC-OMP免疫小鼠,用ELISA法检测小鼠血清抗体阳转率。结果  制备的AC-OMP的各项指标均达到质控标准。AC-OMP具有良好的免疫原性,AC-OMP免疫小鼠的血清抗PS抗体阳转率为100%。结论  该工艺适用于AC-OMP制备。     

A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量测定的中国药典方法与欧洲药典方法的比较

目的  比较检测A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的中国药典（2015年版）方法（方法1）与欧洲药典（8.0版）方法（方法2）的差异,为今后的方法选择及进一步优化提供参考。方法  分别用方法1和方法2检测标准磷溶液和A群脑膜炎球菌多糖疫苗中的磷含量,比较这2种方法的标准曲线、定量限、准确度、精密度、耐用性（溶液稳定性）的差异。 结果  方法1和方法2标准曲线的决定系数均值分别为0.997 3和0.999 3,定量限分别为3.97和2.16 μg。检测同一批A群脑膜炎球菌多糖疫苗显示,磷含量检测结果的相对标准偏差,方法1和方法2分别为10.3%和7.6%;磷加样回收率,方法1为87.8%～113.1%,方法2为97.1～103.6%。分别将反应溶液放置0、30、60 min后开始比色,方法1和方法2每30 min吸光度升高均值分别为0.059和0.003。结论  2种方法均可用于A群脑膜炎球菌多糖疫苗中磷含量的检测。与方法1相比,方法2的标准曲线线性更佳、检测定量限更低、准确度和精密度更高、耐用性（溶液稳定性）更好。     

B群脑膜炎球菌疫苗开发与临床前评价（待续）

脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）感染可导致流行性脑脊髓膜炎和败血症,有较高的病死率.荚膜多糖及多糖结合疫苗能有效控制A、C、W135和Y群Nm感染,而对B群Nm （MenB）感染的预防,只有外膜囊泡疫苗在局部地区取得成功.目前,针对MenB疫苗的研究以外膜蛋白为基础.此文对MenB疫苗的研发进展及临床前研究中的几个关键评价指标进行综述.     

B群脑膜炎球菌疫苗研究进展

 脑膜炎球菌是引起流行性脑脊髓膜炎的主要病原菌,是全球重要的公共卫生问题。目前仍缺少安全有效的疫苗用于控制和预防B群脑膜炎球菌引起的感染。此文对B群脑膜炎球菌疫苗研究进展及存在问题进行综述。     

C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备及其免疫原性

 目的  制备由不同分子大小C群脑膜炎球菌多糖（group C meningococcal polysaccharide,CPS）与破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）共价偶联而成的结合疫苗（CPS-TT）,并检测其在小鼠中的免疫原性。 方法   将CPS降解成不同大小的片段,经碳二亚胺（carbodiimide,EDAC）或溴化氰（cyanogen bromide,CNBr）活化后偶联到TT上制成CPS-TT。NIH小鼠皮下注射制备的不同CPS-TT,用ELISA法测定小鼠血清抗CPS和TT IgG抗体。 结果   EDAC活化的降解CPS的衍化率（3.9%～5.7% ）和多糖回收率（11.4%～21.3%）均高于CNBr活化的降解CPS的衍化率（0.4%～1.2%）和回收率（2.4%～11.5%）。EDAC或CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT在小鼠中均具有较强的免疫原性,但EDAC活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠的抗CPS抗体滴度高于CNBr活化的降解CPS制备的CPS-TT免疫小鼠。结论  EDAC活化的降解CPS可用于制备C群脑膜炎球菌结合疫苗。     

检测C群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖含量的脱氧胆酸钠沉淀法的建立

 目的  建立检测C群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group C  meningococcal polysaccharide -tetanus toxoid conjugate vaccine, CPS-TT）中游离多糖的脱氧胆酸钠沉淀法。 方法  在不同pH条件下用脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）对CPS和TT进行沉淀,确定可有效分离游离多糖和结合多糖的最适沉淀条件,并对该法进行验证。 结果  DOC沉淀法的最适pH为3.5,在此pH条件下用DOC沉淀法检测3批CPS-TT显示,上清TT含量平均为2.3%。DOC沉淀法具有较好的准确度和精密度,3批CPS-TT的批内变异系数均小于5%。 结论  DOC沉淀法可用于C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制。