AZD2281诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的实验研究

目的 观察AZD2281对乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法MTT法和流式细胞仪法观察不同浓度AZD2281（2.5、5、10 nmol/L）作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h后对细胞增殖、周期分布及细胞凋亡的影响;Western blotting检测经AZD2281处理该细胞24 h后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达水平的变化。结果AZD2281可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;AZD2281作用于MDA-MB-231细胞24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。AZD2281作用MDA-MB-231细胞24 h后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达呈剂量依赖性下降,而凋亡促进蛋白caspase-3的表达呈剂量依赖性上升。结论AZD2281能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调caspase-3和下调Bcl-2蛋白表达实现的。     

丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及机制

目的 研究丙戊酸钠对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖的影响及其机制.方法 细胞计数法检测不同浓度丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线.流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.Westernblot检测细胞周期蛋白cyclin D1和p21、凋亡抑制基因survivin的变化.结果 丙戊酸钠能明显抑制Raji细胞的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(P＜0.01).流式细胞仪检测发现以3 mmol/L的丙戊酸钠处理Raji细胞后细胞阻滞于G0/G1期,其凋亡率呈时间依赖性上升(P＜0.01).Western blot检测发现3 mmol/L丙戊酸钠处理后Raji细胞cyclin D1表达明显下调而p21表达明显上调(均P＜0.05).survivin表达显著下降(P＜0.01).结论 丙戊酸钠对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与细胞周期和诱导凋亡有关.     

Bcl-2 shRNA对甲氨蝶呤诱导的Raji细胞凋亡及细胞增殖作用的影响

目的:探讨Bcl-2短发夹样RNA (short hairpin,shRNA)对甲氨蝶呤(methotrexate , MTX)诱导的人Burkit淋巴瘤Raji细胞凋亡的增强作用.方法:采用脂质体介导的转染方法将构建有Bcl-2 shRNA的质粒转染Raji细胞,然后加入MTX,采用RT-PCR法检测作用48 h时细胞 Bcl-2 mRNA表达水平,免疫荧光法检测细胞中Bcl-2蛋白表达水平,MTT法检测经处理24、48和72 h后细胞的增殖活性,Giemsa染色及FCM法检测细胞凋亡.结果:将Bcl-2 shRNA质粒转入Raji细胞后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),转染Bcl-2 shRNA联用MTX可明显诱导细胞凋亡,细胞增殖活性显著降低,分别与MTX组、阴性shRNA联用MTX组、Bcl-2 shRNA组及空质粒+MTX组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对Raji细胞增殖的抑制作用,增加对细胞凋亡的诱导作用.     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1,以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平,筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组,siRNA处理细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h;siRNA处理细胞后,与空白对照组相比,siRNA组细胞增殖率明显降低,凋亡率明显升高,Bax、caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;AKT蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

人参皂苷Rg3抑制肺癌NCI-H1650细胞增殖作用研究

[目的]研究人参皂苷Rg3对肺腺癌NCI-H 1650细胞增殖的抑制作用及对凋亡的影响.[方法]MTT法检测人参皂苷Rg3对NCI-H 1650细胞增殖的抑制作用,Annexin-V-FITC/PI法检测细胞凋亡.Western blot法检测caspase-3、Bcl-2、Bax、survivin蛋白表达的情况.[结果]不同浓度人参皂苷Rg3能有效抑制NCI-H1650细胞增殖,且呈时间剂量依赖性(P＜0.01).20μmol/L人参皂苷作用NCI-H1650细胞24、48h,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).20μmol/L人参皂苷作用NCI-H1650细胞48h,Bcl-2、survivin蛋白表达降低、caspase-3、Bax蛋白表达增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01).[结论]人参皂苷Rg3对肺腺癌NCI-H1650细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间剂量依赖关系,其机制可能与降低细胞Bcl-2、survivin蛋白表达,增加caspase-3、Bax蛋白表达,促进细胞凋亡有关.     

番荔枝内酯单体squamocin诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的 观察番荔枝内酯单体squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨squamocin诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测不同浓度的squamocin对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响;流式细胞仪检测squamocin干预在不同时间点对人肺腺癌A549细胞凋亡率的影响;Western blotting检测squamocin干预前后细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2的表达情况。结果 MTT法显示,squamocin对人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用随着squamocin浓度的增加和作用时间的延长而增强,24、48、72h半数抑制浓度（IC50）分别为16.54、9.28、6.17μg／ml;流式细胞仪检测显示,在24、48、72h实验组人肺腺癌A549细胞凋亡率之间及其与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,其中实验组72h的细胞凋亡率最高,为（51.87±1.79）％Western blotting显示,squamocin干预后细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax表达上调,Bcl-2表达明显下调。结论 squamocin可诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,这可能与squamocin上调细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达以及降低抑制细胞凋亡基因Bcl-2表达有关。     

HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用及其机制的探讨

目的:探讨HIF-1α对电离辐射诱导人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)预处理人NHL细胞后给予5 GyX线照射,采用Annexin V染色方法检测肿瘤细胞凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达水平.将HIF-1α siRNA反义转染至NHL细胞中,检测转染后细胞凋亡分数及Caspase-3蛋白表达水平.结果:流式细胞仪检测结果显示,Namalwa细胞空白对照组、单纯照射组(RI)、RI+EC 2 nmol/L组的凋亡率分别为5.27±1.13、13.81±3.12和39.96±6.81,Ramos细胞分别为6.02±1.26、12.98±3.07和40.76±11.58,Raji细胞则为7.16±0.46、17.62±4.94和47.85±10.22,P＜0.01.电离辐射后,转染vector和HIF-1α siRNA的Namalwa细胞凋亡率分别为15.32±3.64和20.20±1.87,Ramos细胞分别为15.05±2.46和21.02±3.12,t值分别为3.99和3.19,P＜0.05 ;而Raji细胞则为10.90±1.65和17.26±0.69,t=5.98,P＜0.01.蛋白质印迹法结果显示,通过EC预处理抑制HIF-1α的表达能够明显上调射线诱导的各NHL细胞系中Caspase-3蛋白表达水平,同时凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值明显降低,与单纯照射组相比差异均有统计学意义,P＜0.05.结论:抑制HIF-1α能够增加射线诱导的NHL细胞凋亡,其机制可能与增加Bax蛋白表达而下调Bcl-2蛋白表达有关.     

培美曲塞联合舒尼替尼对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨培美曲塞联合舒尼替尼对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:以培美曲塞和舒尼替尼单药或联合处理肝癌SK-Hep1细胞后,MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM检测细胞的周期变化和凋亡率,Western blot检测蛋白激酶B（AKT）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和切割型半胱天冬酶3（Cleaved caspase-3）蛋白的表达。结果:培美曲塞和舒尼替尼均能够呈时间-浓度依赖性抑制SK-Hep1细胞增殖,72 h IC50分别为（2.89±0.20）μmol/L和（2.12±0.12）μmol/L（P＜0.05）;培美曲塞和舒尼替尼均能够诱导SK-Hep1细胞凋亡（P＜0.05）;培美曲塞使SK-Hep1细胞周期阻滞于S期,舒尼替尼使细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.05）;培美曲塞和舒尼替尼均可使p-AKT、PCNA、Bcl-2的表达下降,Cleaved caspase-3表达升高。两药联用使SK-Hep1细胞阻滞在G2/M期,细胞增殖抑制率和细胞凋亡率较单药更加明显,且p-AKT、PCNA、Bcl-2表达下降及Cleaved caspase-3表达升高更为显著（P＜0.05）。结论:培美曲塞联合舒尼替尼可抑制SK-Hep1细胞增殖,并诱导SK-Hep1细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调p-AKT、PCNA、Bcl-2表达和上调Cleaved caspase-3表达有关。     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1（RHPN1-AS1）靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞（U-2OS、SAOS-2、HOS）中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平。利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA（si-RHPN1-AS1）、小干扰RNA阴性对照（si-NC）、miR-485-5p模拟物（miR-485-5p mimics）、miRNA阴性对照（miR-NC）分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶14（MMP-14）蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系。结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）。与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）;与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）。RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达。干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

阿帕替尼调控WWOX对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨阿帕替尼（Apatinib）是否通过包含氧化还原酶的WW结构域（WWOX）影响子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭。方法:噻唑蓝（MTT）比色法检测4 μmol/L、8 μmol/L、16 μmol/L、32 μmol/L Apatinib作用于子宫内膜癌细胞HEC-1 24 h、48 h、72 h后的细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、WWOX蛋白水平,Transwell小室法检测迁移细胞数、侵袭细胞数。在HEC-1中转染pcDNA3.1-WWOX,或转染si-WWOX并用16 μmol/L Apatinib进行处理,采用上述方法评估细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。结果:Apatinib明显降低HEC-1细胞活性（P＜0.05）,呈剂量、时间依赖性;Apatinib显著增加HEC-1细胞凋亡率及p21、Bax蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;Apatinib明显降低Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量（P＜0.05）,呈剂量依赖性;16 μmol/L Apatinib显著减少HEC-1细胞的迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白表达量（P＜0.05）,明显提高E-cadherin、WWOX蛋白表达量（P＜0.05）。过表达WWOX明显降低HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数（P＜0.05）,提高p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量及细胞凋亡率（P＜0.05）。抑制WWOX表达逆转了Apatinib对HEC-1细胞中Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达量、细胞活性、迁移、侵袭的抑制作用,以及逆转了其对p21、Bax、E-cadherin、WWOX蛋白表达量、细胞凋亡的促进作用。结论:阿帕替尼通过调控WWOX表达,抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。     

硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

EBV-miR-BART5-3p靶向p53对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究爱泼斯坦-巴尔病毒（EBV）-miR-BART5-3p对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人EBV阳性鼻咽癌细胞（C666-1）和人鼻咽癌细胞（CNE-2Z）,将CNE-2Z组细胞设置为正常组,C666-1细胞随机分为对照组、EBV-miR-BART5-3p NC组、EBV-miR-BART5-3p mimics组和EBV-miR-BART5-3p inhibitor组。用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞及EBV阴性鼻咽癌患者和EBV阳性鼻咽癌患者癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达情况,噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞存活率,平板克隆实验评估各组放疗敏感性变化情况,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V-FITC/PI）法检测各组细胞凋亡敏感性变化,蛋白免疫印迹分析法检测转染后各组细胞p53、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸酶-3（caspase-3）和Bcl-2蛋白表达情况,双荧光素酶报告实验验证EBV-miR-BART5-3p与p53的靶向关系。结果:与EBV阴性组相比,EBV阳性组鼻咽癌组织中EBV-miR-BART5-3p表达水平显著升高（P＜0.05）。与正常组相比,对照组EBV-miR-BART5-3p表达、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p mimics组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与对照组和EBV-miR-BART5-3p NC组相比,EBV-miR-BART5-3p inhibitor组EBV-miR-BART5-3p表达水平、存活率、克隆数量和Bcl-2蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,凋亡率、p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,与TP53-3' UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p NC组比较,TP53-3' UTR-WT+EBV-miR-BART5-3p inhibitor组荧光素酶活性降低（P＜0.05）。结论:下调EBV-miR-BART5-3p可能通过靶向促进p53蛋白表达,提高人EBV阳性鼻咽癌细胞的放射敏感性。     

联合转染PTEN与PINCH siRNA对结直肠癌细胞增殖、侵袭及凋亡影响的机制研究

目的:研究联合转染PTEN与PINCH siRNA对结直肠癌SW620细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法:在结直肠癌SW620细胞中转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH,qRT-PCR检测PINCH和PTEN mRNA的表达,Western blot检测PINCH、PTEN、CDK1、MMP-2、Bcl-2和 Bax蛋白表达, MTT法、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率。结果:在结直肠癌SW620细胞中联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH后,PTEN的mRNA和蛋白表达量显著升高（P＜0.05）,PINCH的mRNA和蛋白表达量显著降低（P＜0.05）;转染pcDNA-PTEN或/和si-PINCH均可抑制SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,抑制SW620细胞内增殖蛋白CDK1、侵袭蛋白MMP-2和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进凋亡蛋白Bax的表达;联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH比单独转染pcDNA-PTEN或si-PINCH效果更显著。结论:联合转染pcDNA-PTEN和si-PINCH可抑制结直肠癌SW620细胞增殖和侵袭并促进细胞凋亡,且比单独转染效果更显著。     

长链非编码RNA FGD5-AS1在肺癌组织中的表达及其对细胞增殖的影响

目的:研究长链非编码RNA（LncRNA）FGD5-AS1在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法:RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及微小RNA(miRNA)的表达改变,根据表达量的改变确定候选LncRNA FGD5-AS1;RT-qPCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中FGD5-AS1的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖和抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中FGD5-AS1与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析FGD5-AS1与miR-129-5p结合可能性。将A549细胞分成空白对照组（Control）、si-FGD5-AS1组、miR-mimics组（miR-129-5p mimics）、si-FGD5-AS1与miR-mimics联合组,利用脂质体法将si-FGD5-AS1、miR-129-5p mimics分别或联合转染入A549细胞,24 h后,利用CCK-8检测细胞活力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白（Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3）的表达。结果:FGD5-AS1在肺癌组织及肺癌细胞中的表达均显著升高（P＜0.01）,其表达量与Ki-67的表达呈正相关（r=0.641 8,P=0.000）。miR-129-5p在肺癌组织及细胞中的表达均显著降低（P＜0.01）,生物在线软件及荧光素酶检测验证,FGD5-AS1与miR-129-5p存在结合位点;在肺癌组织中,miR-129-5p的表达与Ki-67的表达呈负相关（r=-0.752 8,P=0.000）。与Control组比较,si-FGD5-AS1可显著抑制A549细胞的增殖（P＜0.01）、促进其凋亡（P＜0.01）,Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著升高（均P＜0.01）,Bcl-2的表达显著降低（P＜0.05）;与si-FGD5-AS1组比较,si-FGD5-AS1与miR-mimics联合组可进一步抑制细胞增殖（P＜0.01）,促进细胞凋亡（P＜0.01）,Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著提高（均P＜0.01）,Bcl-2的表达显著降低（P＜0.01）。结论:肺癌组织中FGD5-AS1的表达显著上调,可能通过抑制hsa-miR-129-5p的表达而促进肺癌细胞增殖,参与肺癌的发生及进展。     

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞）,采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。     

EphB1通过PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡

目的:研究促红细胞生成素产肝细胞受体B1(erythropoietin-producing human hepatocellular receptor B1,EphB1)对食管鳞状细胞癌EC-9706细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并探索其可能的作用机制。方法:qRT-PCR法分析40对食管鳞状细胞癌手术患者的癌组织及邻近正常组织中EphB1表达情况,并分析其临床特征。在EC-9706细胞中分别转染si-EphB1 RNA和oe-EphB1 RNA及其阴性对照。通过qRT-PCR和蛋白免疫印迹实验检测转染效率;CCK-8实验分析EphB1对细胞活力的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞学实验检测细胞凋亡;划痕愈合实验及Transwell侵袭实验明确细胞迁移及侵袭能力;蛋白免疫印迹实验检测EphB1蛋白、增殖相关蛋白［增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）］、凋亡相关蛋白［Bad、Bcl-2、Caspase 3 及剪切型-Caspase 3（cleaved-Caspase 3）］、侵袭转移相关蛋白［基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2）、Snail、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、E-cadherin］以及PI3K/AKT信号通路相关蛋白（PI3K、AKT、p-AKT）的表达水平。结果:EphB1在食管鳞状细胞癌组织及细胞系中高表达(P均＜0.05),EphB1的表达水平与食管鳞状细胞癌患者的TNM分期、有无淋巴结转移和远处转移具有显著相关性(P均＜0.05)。与对照组相比,通过细胞转染技术沉默EphB1和过表达EphB1使EC-9706细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显降低或增强,并诱导或抑制细胞凋亡(P均＜0.05)。在蛋白水平上,si-EphB1和oe-EphB1处理EC-9706细胞48 h后,增殖相关蛋白PCNA蛋白表达水平分别显著降低或增加（P均＜0.05）,并分别增加或降低促凋亡相关蛋白Bad、cleaved-Caspase 3的表达水平（P均＜0.05）,下调或上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase 3的蛋白表达（P均＜0.05）,抑制或促进侵袭转移相关蛋白MMP-9、MMP-2、Snail、Vimentin、N-cadherin的蛋白活性,但却上调或下调 E-cadherin的表达水平（P均＜0.05）。同时,Western blotting实验结果还证实EphB1可诱导食管鳞状细胞癌EC-9706细胞中通路蛋白PI3K、p-AKT的活性增强（P均＜0.05）。结论:EphB1可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进食管鳞状细胞癌EC-9706细胞的增殖、迁移及侵袭,并抑制其凋亡。     

水通道蛋白-5对结直肠癌细胞迁移、凋亡的影响及机制研究

目的:探讨短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5,AQP5）对人结直肠癌HT-29细胞和HCT116细胞迁移、凋亡的影响及相关机制。方法:构建pRNA-H1.1-AQP5的干扰质粒和pRNA-H1.1-NC的对照质粒转染HT-29和HCT116细胞,利用Real-time PCR（RT-PCR）、Western blot方法验证AQP5基因敲降效率,划痕试验检测AQP5-shRNA对结直肠癌细胞迁移率的影响,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2基因在蛋白水平的表达。选用NF-κB抑制剂BAY 11-7082（BAY）处理转染AQP5-shRNA的HT-29和HCT116细胞,划痕试验检测各组细胞的迁移率,Western blot检测凋亡基因Bax和Bcl-2的表达情况。结果:AQP-shRNA转染HT-29和HCT116细胞中,AQP5表达量明显低于NC-shRNA转染的HT-29和HCT116细胞（P＜0.05）。划痕试验结果表明,对比NC组,AQP5-shRNA明显抑制HT-29和HCT116细胞的迁移（P＜0.05）。流式细胞术结果表明AQP5-shRNA显著提高HT-29和HCT116细胞的凋亡率（P＜0.05）。对比NC-shRNA组,AQP5-shRNA组细胞中Bax蛋白表达明显提高,而Bcl-2蛋白表达显著下降。BAY处理后,AQP5-shRNA所抑制的结直肠癌细胞迁移率显著下降,AQP5-shRNA所促进的细胞凋亡率显著升高,且对比AQP5-shRNA组,AQP5-shRNA与BAY共同处理的细胞中Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低。结论:AQP5-shRNA抑制结直肠癌细胞迁移,促进结直肠癌细胞凋亡受NF-κB信号调控。