缝隙连接在脑损伤中作用的研究进展

人体组织细胞间普遍存在缝隙连接(GJ),将神经细胞连接成为功能性合胞体,维持细胞内外环境稳定及功能。GJ对神经细胞的生长、分化及其生理功能的调节亦具有重要作用。脑组织缺氧、缺血,以及其他损伤等异常情况下,细胞间GJ、Cx43及耦联被打破,导致神经元功能失常及死亡。     

神经干细胞联合神经营养因子-3基因修饰的嗅鞘细胞移植对创伤性脑损伤大鼠神经功能的影响及机制

目的 探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)联合移植对大鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后神经功能的影响及机制。方法 将100只Sprague Dawley雄性大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、NSCs组、OECs组、联合治疗组,每组20只。模型组、NSCs组、OECs组、联合治疗组大鼠采用改良Feeney法构建TBI模型。造模1 d后,将不同的试剂注入各组大鼠损伤灶进行细胞移植,模型组大鼠注入10μL生理盐水,OECs组大鼠注入10μL NT-3基因修饰的OECs悬液,NSCs组大鼠注入10μL NSCs悬液,联合治疗组大鼠注入5μL NT-3基因修饰的OECs细胞悬液和5μL NSCs悬液,注射完成后继续常规饲养。分别于移植后1、7、14、28 d,各组随机取10只大鼠,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估各组大鼠的神经功能缺损程度。移植后7 d,采用酶联免疫吸附试验法检测大鼠脑组织中白细胞介素(IL)-6、IL-1β及神经生长因子(NGF)水平。移植后28 d,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织病理学改变,采用免疫组织化学染...     

脂肪来源干细胞(ADSC)在脂肪移植中的应用

自体脂肪移植是整形外科一个常见的手术,临床应用广泛。然而,移植脂肪的存活率具有很大的不确定性。脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cell, ADSC)是近年来从脂肪组织中发现的一类具有多功能分化能力的干细胞。ADSC能够在自体脂肪移植中起到辅助作用,增加脂肪存活率,这一技术又叫做细胞辅助脂肪移植术(cell-assisted lipotransfer, CAL)。本文对CAL的现状进行综述,为ADSC在脂肪移植中的临床应用和基础研究提供参考。     

移植的神经干细胞在脑损伤区壳聚糖载体中的存活与分化

目的:探讨移植的NSCs在大鼠脑损伤区壳聚糖载体中的存活、分化情况及其对TBI大鼠认知功能的影响。方法:低温冷冻干燥法制备壳聚糖多孔支架。将从鼠胚前脑中分离的NSCs扩增、标记BrdU。Feeney法制备SD大鼠TBI模型,随机分为3组:损伤对照组清创后不做移植;NSCs 支架移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植;NSCs 支架 NGF移植组行壳聚糖作载体的NSCs移植,并在其中加入NGF。术后1、2、3个月行避暗回避和跳台试验。脑切片行Nissl染色、BrdU与NF-200免疫荧光双标染色。结果:两移植组的认知功能在术后1、2、3个月较损伤对照组明显改善,含NGF的移植组改善更加显著。两移植组术后1、2、3个月在移植区均可见BrdU与NF-200免疫荧光双标细胞,含NGF移植组中的双标细胞数量多、胞体大、突起多且长。结论:大鼠TBI后移植的外源性NSCs可以在脑损伤区壳聚糖载体中长期存活并向神经元分化,可以改善大鼠的认知功能;NGF对其具有促进作用。     

PKH26荧光示踪剂在神经干细胞移植大鼠创伤性脑损伤中的应用

目的探讨神经干细胞移植创伤性脑损伤（TBI）过程中有效的示踪剂,并进一步观察移植后NSCs的自然存活与分化情况。方法Feeney法制备大鼠TBI模型;将体外培养的NSCs进行PKH26荧光示踪剂标记,并于损伤后第3天移植入脑损伤灶区,对照组注射等量生理盐水。分别于移植后1天、4天、7天及2周、3周、4周、8周取材,行全脑冷冻切片,观察PKH26标记的NSC的自然存活及分布情况;Nestin、βⅢ-微管蛋白和GFAP免疫细胞化学染色观察移植后NSCs的分化。同时,于取材前采用Corner试验进行神经行为学检测。结果PKH26标记NSCs的阳性率＞95%。移植后第1天、4天,NSCs主要分别于注射部位周围,细胞胞体较小,分布均匀,大部分仍为Nestin阳性表达细胞。移植后第7天,移植NSCs可迁移至嗅球、额叶及枕叶皮质等区域。针道及周围组织NSCs分化为神经元和神经胶质细胞的比例分别为12.3％±2.1％和372％±7.6％。移植后第2周,海马、脑桥、小脑普肯耶细胞层等广泛区域均可见移植细胞。移植后第4～8周,移植细胞存活数量呈减少趋势。移植细胞的PKH26染色未见明显减弱。同一时间段内,与对照组相比,NSCs移植组动物的感觉运动功能均有明显改善。结论PKH26荧光示踪剂可用于体外培养的NSCs脑内移植示踪观察。移植NSC于损伤灶区,可自然分化为神经元和神经胶质细胞,并可迁移至脑内多处远距离部位,能明显改善TBI动物的感觉运动功能。     

神经干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠脑组织中连接蛋白43表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法将6～7周龄雄性SD大鼠36只随机分为对照组和NSCs移植组,每组18只。从15只E14大鼠胚胎分离NSCs,进行原代培养及传代培养;用含体积分数10%胎牛血清的培养基对NSCs进行诱导分化;采用免疫细胞化学技术对培养的NSCs及其分化为神经元的表型进行鉴定;采用改良的Feeney法制备TBI模型;利用脑立体定位仪和微量注射泵进行NSCs脑内移植;采用免疫组织化学技术、免疫印迹技术和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测在移植后不同时间脑组织损伤区Cx43的表达。结果在培养基中,NSCs呈球团状悬浮生长,神经上皮干细胞巢蛋白表达阳性。NSCs体外诱导分化第2天,多数细胞伸出突起,以后突起逐渐延长,分支增加;分化后第5天,部分细胞βⅢ-微管蛋白阳性。免疫组织化学结果显示,无论有无NSCs移植,在移植后第1、2和4周受损脑组织中,均可见Cx43在细胞膜上、膜旁的细胞质及突起中呈棕黄色表达。NSCs移植大鼠的Cx43染色在各个时间点均显著强于对照组(P<0.05)。在移植后的4周内,NSCs移植组移植点及其周围脑组织中Cx43 mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P<0.01)。结论移植NSCs至TBI大鼠损伤脑组织,在移植点周围脑组织中Cx43的表达显著增加。     

脂肪基质干细胞移植对大鼠脑出血模型运动功能的影响

目的：研究脂肪极基质干细胞移植对大鼠脑出血模型运动功能的影响．方法：体外培养扩增的ADSCs于造模成功后24h立体定移植入大鼠右侧脑室．移植后3,7,14,21,28d通过longa评分观察大鼠运动功能情况．各组大鼠按时处死取脑制作切片,利用免疫荧光观察ADSCs分布情况,利用凋亡染色观察各组出血灶周围凋亡细胞情况．结果：移植的细胞自侧脑室及针道逐渐向损伤灶迁移．凋亡细胞主要位于出血灶周围．移植组在7,14,21,28d有更好地神经功能评分（P〈0．05）,在各时间点移植组凋亡细胞明显少于对照组（P〈0．05）．结论：脂肪基质干细胞移植可能通过抑制病灶周围细胞凋亡进而改善运动功能．     

缝隙连接在重度失血性休克兔脑损伤延生复苏中对细胞能量代谢的作用

目的探讨缝隙连接在重度失血休克兔脑损伤延生复苏中对Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力的作用机制,为延生复苏提供新的临床策略和方法。方法 24只家兔随机分4组:A组(常规复苏组)、B组(低温复苏组)、C组(辛醇复苏组)和D组(低温+辛醇复苏组),每组6只。动物麻醉后,机械通气,动静脉插管,心电监测。采用改良的Wiggers法制作重度失血性休克动物模型,模拟临床将该模型分为三期:即失血休克期,院外救助期,院内复苏期。动物处死后取右半脑组织作脑组织干湿重比检测,取部分脑组织作Cx43免疫组化、Na~+-K~+-ATP酶、Ca~(2+)-ATP酶活力测定。结果B、C、D组的脑组织干湿重比明显低于A组(P0.05);Cx43的免疫组化示B、C、D组与A组相比表达明显增多(P0.05);B、C、D组的Na~+-K~+-ATP酶活力、Ca~(2+)-ATP酶活力明显高于A组(P0.05),但B、C、D组之间没有明显差异。结论抑制缝隙连接可提高重度失血性休克兔缺血性脑损伤后延生复苏中Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力;抑制缝隙连接和低温在重度失血性休克缺血性脑损伤延生复苏中对Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力作用相似;低温在重度失血性休克缺血性脑损伤延生复苏中有可能是通过阻断GJ/Cx43上调Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活力而起作用的。     

脂肪干细胞胶在自体脂肪移植隆胸术中的应用效果

目的 评价脂肪干细胞胶（SVF-GEL）在自体脂肪移植隆胸术中的应用效果。方法 选取2017 年1 月—2019 年1 月阜阳市人民医院收治的隆胸患者60 例,其中20 例接受SVF-GEL 自体脂肪移植作为观察组,40 例接受假体隆胸术作为对照组。比较两组胸围、胸部隆起值及其稳定保留率、并发症和满意率。结果 观察组术后2 周,以及1、3 及6 个月的胸围、胸部隆起值及稳定保留率高于对照组（P <0.05）。两组并发症发生率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。观察组满意率高于对照组（P <0.05）。结论 自体SVFGEL移植隆胸术操作简便、安全性高,隆胸效果好,乳房维持稳定,患者满意率较高。     

间充质干细胞经鼻内途径移植对创伤性脑损伤的精准修复作用

目的：探讨间充质干细胞（MSCs）经鼻内途径移植对创伤性脑损伤（TBI）的定向精准修复作用。方法：75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术对照组、模型对照组、患处MSCs移植组、鼻内MSCs移植组、尾静脉MSCs移植组,每组15只。采用改良式自由落体法制备中度TBI模型,分别以患处、鼻内、尾静脉途径移植MSCs(5×105个/只)。移植后第1、第7天通过改良神经功能缺损评分（m NSS）了解大鼠神经功能恢复情况;解剖观察脑组织恢复情况;比较各组脑脏器系数;普鲁士蓝染色观察超顺磁性纳米铁颗粒（SPIO）标记的MSCs经鼻内途径入颅情况;HE染色观察各组大鼠脑组织病理学改变情况。结果：m NSS结果显示,模型对照组术后第1、第7天mNSS评分明显高于假手术对照组（P<0.01）。与模型对照组比较,MSCs移植各组术后第1、第7天m NSS均显著降低（P<0.01）。解剖观察显示,与模型对照组比较,移植后第7天MSCs移植各组大鼠脑创面均有明显改善。与假手术对照组比较,移植后第1天模型对照组脑脏器系数显著升高（P<0.05）;与模型对照组比较,患处及鼻内MSCs移植组脑脏...     

Induction of functional recovery by co-transplantation of neural stem cells and Schwann cells in a rat spinal cord contusion injury model

Objective To study the transplantation efficacy of neural stem cells （NSCs） and Schwann cells （SC） in a rat model of spinal cord contusion injury. Methods Multipotent neural stem cells （NSCs） and Schwann cells were harvested from the spinal cords of embryonic rats at 16 days post coitus and sciatic nerves of newborn rats, respectively. The differential characteristics of NSCs in vitro induced by either serum-based culture or co-culture with SC were analyzed by immunofluorescence. NSCs and SCs were co-transplanted into adult rats having undergone spinal cord contusion at T9 level. The animals were weekly monitored using the Basso-Beattie-Bresnahan locomotor rating system to evaluate functional recovery from contusion-induced spinal cord injury. Migration and differentiation of transplanted NSCs were studied in tissue sections using immunohistochemical staining. Results Embryonic spinal cord-derived NSCs differentiated into a large number of oligodendrocytes in serum-based culture upon the withdrawal of mitogens. In cocultures with SCs, NSCs differentiated into neuron more readily. Rats with spinal cord contusion injury which had undergone transplantation of NSCs and SCs into the intraspinal cavity demonstrated a moderate improvement in motor functions. Conclusions SC may contribute to neuronal differentiation of NSCs in vitro and in vivo. Transplantation of NSCs and SCs into the affected area may be a feasible approach to promoting motor recovery in patients after spinal cord injury.     

Schwann cells transplantation promoted and the repair of brain stem injury in rats

Objective To explore the possibility of Schwann cells transplantation to promote the repair of injured brain stem reticular structure in rats. Methods Schwann cells originated from sciatic nerves of 1 to 2-day-old rats were expanded and labelled by BrdU in vitro, transplanted into rat brain stem reticular structure that was pre-injured by electric needle stimulus, lmmunohistochemistry and myelin-staining were used to investigate the expression of BrdU, GAP-43 and new myelination respectively. Results BrdU positive cells could be identified for up to 8 months and their number increased by about 23%, which mainly migrated toward injured ipsilateral cortex. The GAP-43 expression reached its peak in 1 month after transplantation and was significantly higher than that in the control group. New myelination could be seen in destructed brain stem areas. Conelusion The transplantation of Schwann cells can promote the restoration of injured brain stem reticular structure.     

Differentiation of rat embryonic neural stem cells promoted by co-cultured Schwann cells

Objective To explore the factors which induce differentiation of embryonic neural stem cells. Methods Rat embryonic neural stem cells were co-cultured with newborn rat Schwann cells in serum-free medium. The phenotype and specific-markers including tubulin-β, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and galactorcerebroside (GalC), were domonstrated by phase contrast microscopy and double immunofluorescence staining. Results Overall, 80%±5% of neural stem cells protruded several elongated processes and expressed tubulin-β antigen at high levels, while 20±3% of them protruded several short processes and were GalC or GFAP positive. Conclusion The factors secreted by Schwann cells could induce rat embryonic neural stem cell to differentiate.     

神经干细胞移植对大鼠脑自由落体撞击伤的治疗作用

目的通过神经干细胞(NSCs)移植治疗大鼠脑自由落体撞击伤,探讨NSCs对脑外伤功能恢复的影响。方法体外培养NSCs并用5-2溴脱氧尿嘧啶(B rdU)标记。自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区以制作脑外伤模型,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、4周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测B rdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达。结果大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显。神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、4周时,实验组的评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。第2、4周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,以后逐渐下降。B rdU阳性细胞在损伤灶中心区最高多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现。结论NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复。移植的NSCs可以在损伤部位存活并增殖分化与迁移。     

脂肪干细胞(ASCs)在急性肾损伤(AKI)动物模型治疗中的作用研究进展

 近年来干细胞移植已成为损伤组织更新、再生和修复研究的重点。来源于脂肪组织的干细胞群较其他干细胞系有独特的优势。首先,脂肪组织分布广泛,容易获取,对患者创伤小,患者易于接受;其次,干细胞群易于分离,增殖速度快,能够快速应用于治疗。急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)作为内科常见急症,发病率高,治疗手段相对较局限,治疗效果不理想,亟需新的治疗方法,其中细胞疗法被认为是非常有前景的治疗手段。本文就脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ASCs)在AKI动物模型治疗中的应用进行综述和展望,以期为今后的研究奠定基础。     

Immunomodulatory effects of mesenchymal stem cells from adipose tissue in a rat orthotopic liver transplantation model

Objective To investigate immunomodulatory effects of adipose-derived mesenchymal stem ceils in a rat orthotopic liver transplantation model. Methods Mesenchymal stem ceils were isolated from adipose tissue of SD rats. In in vitro mixed lymphocyte culture system by using Wistar T cells as responders and SD spleen cells as stimulators,[第一段]     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑组织辐射损伤

目的 研究间充质干细胞(MSCs)对脑组织辐射损伤的修复作用,为治疗放射性脑损伤奠定理论基础.方法 选取24只雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组、模型组和治疗组.模型组和治疗组大鼠均接受直线加速器产生的X线行一次性全脑照射20 Gy;正常对照组不接受照射.其中治疗组大鼠接受辐射24 h、7 d、14 d、21 d后尾静脉注射MSCs 3×106/只;模型组和正常对照组大鼠尾静脉注射同体积生理盐水1 mL.28 d后处死所有大鼠,检测血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用苏木精-伊红染色法 (HE染色法)制作大鼠的脑组织病理切片观察辐射对脑组织形态学的影响.结果 模型组大鼠精神较差,反应迟钝,少动,毛发粗糙、变黄,眼睑分泌物增多,睁眼困难;治疗组大鼠精神好,毛发微黄,眼睑有少量分泌物.治疗组大鼠血清SOD明显高于模型组,而MDA水平低于模型组.病理结果显示模型组大脑皮质变薄,神经元细胞聚集排列,数目显著减少,可见核固缩、深染;尼氏小体融解消失,呈凋亡状态;治疗组大脑皮质较模型组明显增厚,海马神经元细胞增多,仍可见凋亡状态的尼氏小体,细胞染色较淡,损伤的细胞数目明显减少,损伤程度减轻.结论 MSCs能够使神经细胞再生,修复脑组织的辐射损伤.     

白细胞介素8对高糖诱导的人脂肪间充质干细胞损伤的保护作用

目的  探讨白细胞介素8（IL-8）对高糖诱导人脂肪间充质干细胞（hAdMSC）损伤的保护作用。方法含250 mmol/L葡萄糖的培养基建立细胞高糖模型;P65质粒转染人IL-8基因到hAdMSC为IL-8转染组,仅转染P65质粒者为P65对照组,在IL-8转染组中添加PD98059为Erk抑制剂组。利用MTT细胞增殖实验、ELISA或流式细胞技术检测各组hAdMSC增殖的光密度值（OD值）、Caspase-3、Erk或VEGF等蛋白的表达。结果  与P65对照组比较,IL-8转染组hAdMSC增殖OD值明显升高,Caspase-3蛋白表达下降（P <0.01）;IL-8转染组Erk蛋白活性和VEGF蛋白含量明显高于P65对照组（P <0.01）;但与IL-8转染组比较,Erk抑制剂组hAdMSC增殖的OD值降低,Caspase-3蛋白表达升高（P <0.01）。结论  IL-8在高糖环境下,通过Erk通路,发挥对hAdMSC的保护作用。

     

左旋多巴诱发异动症大鼠模型的制作及其行为学研究

目的 探讨左旋多巴(L-dopa)诱发帕金森病(PD)大鼠异动症模型的建立,以及多巴胺受体激动剂与拮抗剂对异动症大鼠不自主运动的影响.方法 6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型并给予L-dopa+苄丝肼治疗21 d,对其异常不自主运动(AIM)进行录像并评分,观察肢体运动功能及旋转行为改变情况.对出现异动症的大鼠给予多巴胺受体激动剂和拮抗剂并观察其行为学改变.结果 PD大鼠在接受L-dopa慢性治疗后出现不自主运动,第3天评分:(31.13±0.32)分,肢体运动功能在接受治疗过程中同时改善.D2受体激动剂可诱发大鼠不自主运动(48.24±1.27)分,D2受体拮抗剂可减轻L-dopa诱发的大鼠不自主运动(41.93±2.27)分,但同时拮抗L-dopa运动功能改善效应.结论 慢性脉冲式L-do-pa治疗PD大鼠可以诱发大鼠AIM,与人类L-dopa诱导的异动症(LID)具有相似的特点,可作为研究异动症的动物模型.     

大鼠脂肪干细胞源性神经球分化为雪旺细胞样细胞

目的:体外诱导大鼠脂肪干细胞为雪旺细胞样细胞?方法:分离?培养和鉴定大鼠脂肪干细胞;表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导大鼠脂肪干细胞为神经球,并对神经球进行鉴定;视黄酸?forskolin?血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor, PDGF)及heregulin等诱导神经球为雪旺细胞样细胞,并对雪旺细胞样细胞的形态和表面标志物进行鉴定?结果:大鼠脂肪干细胞为成纤维细胞样单层贴壁细胞,表达间质细胞标志物fibronectin,不表达神经干细胞标志物nestin,并能进行成脂和成骨分化?大鼠脂肪干细胞能被诱导为悬浮生长的神经球;神经球表达nestin,不表达fibronectin,并能进一步分化为雪旺细胞样细胞?雪旺细胞样细胞呈双极或三极,并表达雪旺细胞经典标志物胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)?S100和p75?结论:大鼠脂肪干细胞能在体外分化为雪旺细胞样细胞?这种雪旺细胞样细胞对于治疗神经系统疾病具有重要意义?