胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎中枢神经系统内细胞因子IFN-γ、IL-10的影响

目的:观察胍丁胺对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)中枢神经系统(CNS)内细胞因子IFN-γ和IL-10的影响。方法:用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠建立EAE动物模型,应用双抗体夹心ELISA法观察不同剂量胍丁胺(分别为25、50、100 mg/kg)对EAE大鼠脑和脊髓组织内细胞因子IFN-γ和IL-10水平的影响。结果:胍丁胺可降低Wistar大鼠EAE的发病率,减轻其临床症状。与空白对照组比较,模型组大鼠脑和脊髓组织中的IFN-γ水平增加和IL-10水平降低(P<0.05或P<0.01),而胍丁胺干预的3组大鼠CNS内脑和脊髓组织中的IFN-γ水平降低和IL-10水平增加。结论:胍丁胺能调节EAE中的Th1/Th2比例平衡,降低IFN-γ水平,升高IL-10水平。     

胍丁胺抑制福尔马林诱导的脊髓PKCγ,pCREB,c-Fos和c-Jun表达上调

目的研究福尔马林致炎性疼痛脊髓蛋白激酶Cγ(PKCγ),磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB),即刻早期基因c-fos和c-jun表达的变化及胍丁胺对其的影响。方法♂SD大鼠,180～220g,随机分为:①生理盐水组;②福尔马林组;③胍丁胺(160mg·kg-1,ip)组。足底注射5%福尔马林50μl后10、20、120min取L4,5脊髓,通过免疫组化和免疫印迹研究,检测胍丁胺对炎性疼痛脊髓PKCγ、pCREB、c-Fos和c-Jun蛋白表达变化的影响。结果大鼠单侧足底注射5%福尔马林10min后,引起双侧脊髓膜结合PKCγ表达量升高;足底注射20min后,双侧脊髓pCREB表达量升高;足底注射2h后,注射侧脊髓背角c-Fos和c-Jun蛋白表达量升高,注射对侧脊髓c-Fos和c-Jun蛋白表达量没有改变。胍丁胺明显抑制福尔马林所引起的膜结合PKCγ、pCREB、c-Fos和c-Jun蛋白表达量的升高(P<0.01)。结论炎性疼痛引起脊髓膜结合PKCγ、pCREB、c-Fos和c-Jun蛋白表达上调可能参与疼痛及痛觉过敏的产生。胍丁胺的镇痛机制可能与抑制PKCγ、pCREB、c-Fos和c-Jun等痛觉相关的信号转导分子的表达有关。     

胍丁胺对慢性应激大鼠海马神经元和星形胶质细胞的影响

目的在海马神经元和星形胶质细胞水平探讨胍丁胺抗抑郁作用机制。方法采用多种应激方式建立大鼠慢性应激抑郁模型,通过开场实验和蔗糖饮水实验观察模型组、阳性对照药氟西汀组(10 mg.kg-1,ig)和胍丁胺组(20 mg.kg-1,ig)大鼠的行为学变化;应用神经元标志物——微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)和星形胶质细胞标志物——胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)免疫组织化学染色,观察各组大鼠海马神经元和星形胶质细胞形态改变。结果慢性应激模型组大鼠开场实验水平运动得分和垂直运动得分明显降低,蔗糖偏嗜度明显降低,氟西汀和胍丁胺可逆转此变化;免疫组化结果显示,慢性应激模型组MAP2和GFAP表达明显减弱,表现为海马神经元突起长度和数目以及星形胶质细胞的数量和突起数量明显降低,氟西汀和胍丁胺可改善此病理变化。结论海马神经元和星形胶质细胞共同参与抑郁症发生,胍丁胺可逆转慢性应激引起的细胞形态结构改变,发挥抗抑郁作用。     

黄连素对EAE大鼠小胶质细胞及细胞因子的影响

目的探讨黄连素(berberine,Ber)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(encephalomyelitis,EAE)大鼠脊髓中小胶质细胞及IFN-γ、TNF-α和IL-10水平的影响。方法 Lewis大鼠24只随机分为3组:对照组、模型组和Ber组。采用免疫组化法检测腰髓中小胶质细胞的变化;采用ELISA法检测大鼠外周血和颈髓中促炎因子IFN-γ、TNF-α和抑炎因子IL-10的变化。结果模型组8只大鼠全部出现典型的EAE行为学改变,Ber组有3只大鼠出现EAE行为学改变。与模型组相比,Ber组大鼠外周血中IFN-γ和TNF-α表达降低(P<0.05),而IL-10的表达无明显变化;脊髓中活化的小胶质细胞数量减少,IFN-γ和TNF-α表达降低(P<0.05),IL-10表达增加(P<0.05)。结论 Ber能抑制大鼠EAE的病情,其机制可能与抑制小胶质细胞的活化,下调IFN-γ、TNF-α的表达,并且上调IL-10的表达有关。     

Wistar大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的制备

目的　探讨Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎 (EAE)动物模型 ,检测EAE中起关键趋化作用的巨噬细胞趋化因子 - 1(MCP- 1)的表达。方法　采用免疫诱导方法制备EAE模型并苏木素 伊红 (HE)染色 ,同时用原位杂交法检测EAE大鼠MCP -1的表达。结果　免疫后 12～ 17d ,发病鼠出现EAE临床症状 ,HE染色 ,光镜下可见血管周围炎性浸润 ,MCP- 1的表达明显增加。结论　Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓炎模型是可信、可用的。     

咪唑啉类药物对星形胶质细胞白细胞介素-4分泌的作用

目的 观察咪唑啉类药物(咪唑克生,胍丁胺)调节大鼠星形胶质细胞IL-4分泌的影响.方法 10μg·mL-1脂多糖诱导培养后的星形胶质细胞,分为4组:对照组、咪唑克生组、胍丁胺组及地塞米松组.咪唑克生1 mmol·L-1;胍丁胺5 μmol·L-1;地塞米松1 μmol·L-1.于24 h收集上层培养液,用EILSA法测定4组的星形胶质细胞分泌IL-4水平.结果 用咪唑克生、胍丁胺、地塞米松处理后,IL-4分泌均增加.结论 咪唑克生、胍丁胺及地塞米松均促进星形胶质细胞Th2细胞因子分泌,使星形胶质细胞分泌的Th1/Th2细胞因子类型转换,起到免疫调节作用.     

EAE大鼠模型的构建及外周血淋巴细胞中多种炎症因子表达的意义

目的 构建实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型,探讨炎症因子在EAE发病过程中的作用及意义.方法 采用髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下来构建EAE模型,苏木素-伊红(HE)染色观察不同发病阶段EAE大鼠模型脊髓组织形态学改变,同时利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测不同发病阶段大鼠外周血淋巴细胞中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA和蛋白表达.结果 成功建立了EAE大鼠模型,随着EAE大鼠病情的加重,实验组IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA量和蛋白表达量较对照组逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4和IL-10的mRNA量和蛋白表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),当大鼠症状缓解后两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 通过髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下的方法能很好地构建EAE模型,同时外周血淋巴细胞中多种炎症因子的表达与EAE大鼠模型的发病密切相关.     

胍丁胺通过抑制大鼠脊髓JNK通路对抗慢性吗啡耐受

目的探讨脊髓c-Jun蛋白氨基末端激酶(c-Jun N-ter-minal kinase,JNK)在胍丁胺抗慢性吗啡镇痛耐受中的作用。方法 SD大鼠皮下注射吗啡(10 mg.kg-1,每日2次,连续9 d)建立慢性吗啡镇痛耐受模型。应用热水甩尾法测定甩尾潜伏期观察吗啡的镇痛效果。应用免疫印迹法(Westernblot)检测脊髓总JNK和磷酸化(p)-JNK蛋白表达;免疫组织化学染色法检测脊髓p-JNK的免疫反应性(immnunoreac-tivity,IR)。结果吗啡耐受大鼠脊髓背角p-JNK-IR明显增多,p-JNK蛋白表达也增多,而总JNK没有改变。胍丁胺(10 mg.kg-1)不仅拮抗吗啡镇痛耐受,而且明显地抑制脊髓背角p-JNK-IR增多及p-JNK蛋白表达上调。结论抑制慢性吗啡注射所引起的脊髓JNK的激活可能是胍丁胺抗吗啡镇痛耐受的作用机制之一。     

益肾达络饮缓解EAE模型小鼠神经系统炎症的机制研究

目的 研究益肾达络饮抑制β-制动蛋白1(β-arrestin1)表达对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型小鼠炎症因子、环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路的影响,探讨益肾达络饮治疗EAE的机制。方法采用随机数字表法将60只小鼠分为正常组、模型组、中药组（益肾达络饮20 g/kg）、阳性对照组（醋酸泼尼松3.9 mg/kg）、β-arrestin1siRNA腺相关病毒（AAV-β）组、AAV-β+中药组,每组10只。除正常组外,其余各组小鼠均制备EAE模型。AAV-β组、AAV-β+中药组小鼠通过尾静脉注射AAV-β干扰β-arrestin1蛋白的表达。造模第8天开始每天灌胃相应药液/生理盐水1次,连续14 d。检测小鼠神经功能评分,观察小鼠脑和脊髓组织的病理形态学变化,检测小鼠血清中炎症因子[白细胞介素2(IL-2)、IL-23、γ干扰素（IFN-γ）]水平,检测小鼠脑和脊髓组织中β-arrestin1、cAMP、PKA、CREB蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠神经功能评分、血清中炎症因子水平以及脑、脊髓组织中β-a...     

条件培养基对大鼠慢性脊髓损伤后胶质GFAP表达的影响实验研究

目的研究总结骨髓间充质干细胞条件培养基对大鼠慢性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法随机选取脊髓神经损伤研究实验室84只雄性Wistar大鼠,两组大鼠均为慢性脊髓损伤,依据大鼠的受伤情况并运用随机数字表法将其分为对照组(n=42)与观察组(n=42),对照组予以等渗盐水治疗,观察组予以BMSC-CM治疗。观察两组大鼠受伤后1、4、11、21、35、60、90d后的免疫组织化学检测结果,同时观察大鼠生物行为学变化与组织病理学变化。结果观察组大鼠的伤后恢复时间为(21.01±0.28)d,明显短于对照组(30.05±1.25)d,并且在11、21d的BBB评分与对照组相比差异较大;同时观察组大鼠在受伤第4,11,21天时的GFAP灰度值与对照组相比差异较大,具有统计学意义(P<0.05),在第21天至痊愈期间观察组大鼠的GFAP平均灰度值下降水平快于对照组。结论 BMSC-CM能够有效的修复大鼠慢性脊髓损伤,并且能够降低胶质纤维酸性蛋白表达,对于损伤大鼠脊髓功能的恢复具有重要意义。     

哮喘大鼠血管内皮生长因子表达与γ-干扰素、白介素-4变化的相关性及地塞米松的干预

目的:观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)在大鼠哮喘急性模型中的表达情况,探讨Th细胞亚群的失衡与其表达的相关性.方法:36只清洁级雄性sD大鼠随机分为生理盐水对照组(C组)、哮喘组(A组)和地塞米松干预组(D组),以卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏激发法制备大鼠哮喘急性模型.末次激发24 h后腹腔注射麻醉,心脏取血,右肺行支气管肺泡灌洗留取灌洗液(BALD.应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清和BALF中IL-4、IFN-γ和VEGF的浓度.结果:A组血清和BALF中IL-4、VEGF的水平均分别显著高于C组,D组血清和BALF中IL-4、VEGF的水平均分别显著低于A组(P<0.01),C组和D组相比差异均无统计学意义(P>0.05).A组血清和BALF中IFN.,的水平均显著低于C组(P<0.01),D组血清、BALF中的IFN-γ水平均显著高于A组(P<0.01)而低于C组(P<0.01).大鼠BALF中IL-4浓度与VEGF浓度呈显著正相关(r=0.797,P<0.01),IFN-γ浓度与VEGF浓度呈显著负相关(r=-0.568,P相似文献   

辛伐他汀对变态反应性脑脊髓炎小鼠INF-γ和IL-10表达的影响

目的研究辛伐他汀(Simvastatin)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic en-cephalomyelitis,EAE)小鼠肿瘤坏死因子-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响,探讨该药物对EAE保护作用的免疫调节机制。方法通过皮下注射MOG33-55肽段诱导小鼠急性EAE模型,实验分为EAE给药组、EAE对照组和正常对照组。观察各组小鼠体重等变化,测定EAE发病高峰期血清、培养的单核细胞及脾细胞培养上清液的INF-γ和IL-10水平。结果辛伐他汀能降低EAE小鼠的发病率,减轻了症状的严重程度,并能显著降低EAE小鼠血清、单个核细胞及脾细胞培养上清中INF-γ水平,升高IL-10水平。结论辛伐他汀可能通过其抑制INF-γ和上调IL-10的表达,调节免疫状态,从而对小鼠EAE起到保护作用。     

左旋咪唑对变态反应性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统的基质金属蛋白酶-2及细胞间黏附分子的影响

目的 研究左旋咪唑(LMS,抗蠕虫病药)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠中枢神经系统内基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响.方法 用豚鼠脊髓匀浆免疫Wistar大鼠,建立EAE模型;分别在免疫前(LMS1)、免疫同时(LMS2)及免疫后(LMS3),给予LMS 10 mg·kg-1,用行为学变化观察发病情况;常规HE和Kluver与Barrera髓鞘染色法,观察中枢神经系统病理变化;原位杂交法观察MMP-2、ICAM-1mRNA的表达.结果 LMS1及LMS2组均能加重行为学及病理变化(P＜0.01,P＜0.05);而LMS3组出现复发.和模型组相比,LMS1及LMS2组的MMP-2、ICAM-1表达量均明显升高(P＜0.01,P＜0.05).结论 LMS能明显促进EAE大鼠中枢神经系统内MMP-2、ICAM-1的表达.     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠L-选择素的表达及意义

目的 探讨实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠脑和脊髓L-选择素的表达和意义.方法 大鼠随机分为正常组、福氏完全佐剂对照组（CFA组）、左旋咪唑对照组（LMS组）和模型组 模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福氏完全佐剂诱发大鼠急性EAE,观察临床表现并评分 HE染色和Loyez氏髓鞘染色观察病理和髓鞘改变 免疫组化法检测脑和脊髓L-选择素表达阳性的血管数.结果 正常组和对照组大鼠均未出现症状,模型组临床症状发生率为100%,模型组L-selectin表达阳性的血管数的数值为（31.86±1.39）,较正常组（1.38±0.18）、CFA组（1.50±0.27）和LMS组（7.25±0.59）表达均明显增高（均P〈0.05）.HE染色见大脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润 Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变.结论 脑和脊髓L-选择索的表达水平增高在大鼠急性EAE中发挥重要作用.     

丝素蛋白支架对大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响

目的研究丝素蛋白(SF)支架移植对大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成的影响。方法64只SD大鼠随机均分为脊髓全横断术后SF支架移植组(A组)和空白对照组(B组);术后取出脊髓组织,显微镜下观察组织病理学变化,免疫组化染色和Western blot分别检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、生长相关蛋白43(GAP-43)的阳性细胞染色和蛋白表达。结果与B组相比,A组可见支架内少量神经纤维,胶质细胞增生不明显,GFAP阳性细胞染色和蛋白表达减少(P<0.05),而GAP-43阳性细胞染色和蛋白表达增加(P<0.05)。结论 SF支架移植可减少大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成,并可能会间接促进神经再生。     

实验性变态反应性脑脊髓炎中血红素氧合酶-1mRNA的动态变化及作用机制

目的 探讨脑组织血红素氧合酶-1(HO-1)在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法 CFA-GPSCH诱导大鼠EAE 1d、7d、14d、21d后，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定了其脑组织仅少量HO-1mRNA表达的动态变化，并观察与症状之间的关系。结果 对照组大鼠脑组织仅有少量HO-1mRNA表达；诱导EAE后，随着大鼠EAE症状的出现和加重，脑组织H）-1mRNA水平逐渐升高；在发病极期(免疫后14d)达高峰；21d脑组织HO-1mRNA水平逐渐下降，大鼠EAE症状也逐渐恢复。应用HO-1特异性抑制剂Snpp-9以抑制脑内HO-1蛋白表达后，大鼠EAE症状和脑组织损伤明显减轻，说明脑组织HO-1mRNA的动态变化与EAE病情密切相关。结论 脑组织HO-1mRNA表达增加在EAE发病中起着重要的作用，应用HO-1抑制剂可能是防治该病的有效方法之一。     

西维来司钠对实验性自身免疫性脑脊髓炎模型大鼠的保护作用

目的:研究西维来司钠对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型大鼠的保护作用。方法:取Wistar大鼠60只,随机分为正常对照(生理盐水)组、模型(生理盐水)组、阳性药物[醋酸泼尼松片5 mg/(kg·d)]组和西维来司钠低、中、高剂量[5、8、10mg/(kg·d)]组,每组10只。除正常对照组不作处理外,其余各组大鼠均以全脊髓匀浆作为免疫抗原建立EAE模型,建模当天开始ip给予相应药物,连续16 d。对各组大鼠神经功能进行评分,观察其脑和脊髓组织病理学变化,检测其外周血中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、巨噬细胞炎性蛋白1α(CCL3)和调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(CCL5)的含量。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠的神经功能评分和IFN-γ、CCL3、CCL5含量增加,IL-4含量降低(P<0.01),组织呈现髓鞘脱失和炎性细胞浸润。与模型组比较,阳性药物组和西维来司钠低、中、高剂量组大鼠的神经功能评分和CCL3、CCL5含量降低(P<0.01),脱髓鞘改变和炎性细胞浸润均减轻,阳性药物组和西维来司钠高剂量组大鼠的IFN-γ含量降低、IL-4含量增加,西维来司钠中剂量组大鼠IL-4含量增加(P<0.01),其余各组差异无统计学意义(P>0.05)。上述效果均呈剂量依赖性。结论:西维来司钠能有效减轻EAE模型大鼠髓鞘脱失和炎症细胞浸润,其机制可能与减少外周血中IFN-γ含量、增加IL-4含量、抑制CCL3和CCL5表达有关。     

Detection of Th1, Th2 and Th17 immune responses in rats with experimental autoimmune encephalomyelitis

目的 探讨不同类型免疫反应在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用.方法 24只SD大鼠随机均分为EAE组和对照组,通过行为观测和大脑微观形态学确认免疫诱导的EAE模型,用ELISA法检测淋巴结和脾细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ和血清中IgG水平,流式细胞术检测淋巴结和脾细胞中IL-17及Foxp3细胞频数.结果 与对照组相比,EAE组IgG、IFN-γ、IL-17及IL-4水平均明显增高(P＜0.05或P＜0.01).结论 Th1、Th2和Th17免疫细胞在EAE的发病均起着重要的作用.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠Th1、Th2和Th17免疫反应检测

目的探讨不同类型免疫反应在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法 24只SD大鼠随机均分为EAE组和对照组,通过行为观测和大脑微观形态学确认免疫诱导的EAE模型,用ELISA法检测淋巴结和脾细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ和血清中IgG水平,流式细胞术检测淋巴结和脾细胞中IL-17及Foxp3细胞频数。结果与对照组相比,EAE组IgG、IFN-γ、IL-17及IL-4水平均明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论 Th1、Th2和Th17免疫细胞在EAE的发病均起着重要的作用。     

右美托咪定预处理对局灶性脑缺血/再灌注星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 探讨预注右美托咪定对局灶性脑缺血/再灌注后星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法 大脑中动脉插线法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型。观察脑缺血2 h再灌注24 h后神经功能损害改变并评分,并采用免疫组化和蛋白免疫印迹方法观察大鼠脑缺血后星形胶质细胞GFAP蛋白表达情况。结果 缺血/再灌注后可诱导大鼠脑组织星形胶质细胞GFAP表达明显增强,右美托咪定可明显改善大鼠神经功能损害,减少缺血区GFAP阳性星型胶质细胞,降低GFAP表达水平。结论 早期应用右美托咪定可抑制脑缺血后星形胶质细胞GFAP的过度表达,可发挥抗脑缺血损伤,保护神经元作用。