变形链球菌F-ATPase亚基基因uncEBF基因多态性的研究

目的研究变形链球菌临床分离株耐酸因子F- ATPase亚基c、a、b联合基因uncEBF的遗传多态性,并探讨基因多态与细菌耐酸力的关系。方法选取18株变形链球菌高耐酸株、20株低耐酸株,以特异引物从细菌组DNA扩增uncEBF,行限制性内切酶长度多态性分析（RFLP）和测序比较。结果不同限制性内切酶RFLP产生不同的基因型,测序证实了导致多态出现的基因变异;其中内切酶AluⅠ产生的A、B基因型在不同耐酸力菌株的分布不同（P<0.05）,高耐酸性菌株中A型基因uncEBF的检出高于低耐酸力菌株。结论变形链球菌F- ATPase亚基联合基因uncEBF具有明显基因多态性,酸性环境下生存力强的菌株可能出现基因的适应性变异,可认为不同基因型uncEBF分布与耐酸力不同相关。     

变形链球菌临床株质子移位膜ATP酶γ亚基基因uncG遗传多态性及mRNA表达水平的研究

目的研究变形链球菌临床分离株质子移位膜ATP酶（F- ATPase）的γ亚基基因uncG的遗传多态性和mRNA表达水平。方法选取在不同龋敏感人群中分离的18株高耐酸和20株低耐酸变形链球菌为实验株,扩增uncG基因,行限制性内切酶长度多态性（RFLP）分析和测序比较,应用RT- PCR法和凝胶成像系统定量软件对20株不同基因型和不同耐酸力变形链球菌uncG基因的mRNA表达水平进行评价和比较。结果ALuⅠ- RFLP和BsrⅠ-RFLP产生A、B、C、D 4种基因型,但4种基因型在不同耐酸力菌株的分布差异没有统计学意义（P>0.05）。不同基因型及不同耐酸力菌株uncG的mRNA表达水平不同,但其差异也没有统计学意义（P>0.05）。结论变形链球菌F- ATPase γ亚基基因uncG的RFLP基因型和mRNA表达水平具有明显遗传异质性,但对菌株耐酸力没有明显影响。     

变形链球菌葡糖基转移酶遗传多态性与龋病发生关系的研究

目的:探讨变形链球菌葡糖基转移酶遗传多态性与龋病发生的关系。方法:菌株分别选自本实验室前期工作中分离鉴定的合成水不溶性多糖能力较强和较弱的血清c型变形链球菌临床分离株，提取全菌DNA，经PCR扩增gtfBC(961 - 5574 by)后，分别采用限制性内切酶Hinf工、Mb。工和Taq工进行限制性片段长度多态性分析。结果: 不同龋敏感人群变形链球菌血清。型临床分离株经Hinf工酶切后限制性片段长度多态性分析酶谱出现了差异，有 1.9 kb长片段的菌株在高龋组中的比例高于无龋组(P < 0.05)。结论:萝基因型的不同是导致菌株合成水不溶性多糖能力差异的原因之一。     

变形链球菌表面蛋白A区遗传多态性的研究

目的:探讨变形链球菌表面蛋白A区遗传多态性与其粘附性能的关系。方法:分别选取本实验室前期工作所获得的粘附能力较强和较弱的血清c型变形链球菌临床分离株，提取全菌DNA，经PCR扩增表面蛋白A区编码基因spaP-a后，用限制性内切酶Hae班进行限制性片段长度多态性分析。结果:经Hae ]II酶切后，两组血清c型变形链球菌均出现了4种基因型，且4种基因型在两组菌株的构成情况不同。结论:血清c型变形链球菌临床分离的 spaP-a具有遗传多态性，粘附能力较强的菌株比粘附能力较弱的菌株具有更明显的异质性。     

维吾尔族不同龋敏感儿童变形链球菌临床分离株表面蛋白A区遗传多态性研究

目的:分析维吾尔族高龋和无龋儿童变形链球菌临床分离株表面蛋白A区基因遗传多态性与其黏附能力的关系。方法:通过细菌贴壁法进行维吾尔族儿童高龋组(dmft≥5)和无龋组(dmft=0)变链菌临床株黏附试验。选取黏附能力较强和较弱的菌株,提取细菌DNA,经PCR扩增其表面蛋白A区编码基因spaP-a后,利用限制性内切酶HaeⅢ进行限制性片段长度多态性分析。结果:高龋组黏附能力(33.92±8.79)%强于无龋组(27.53±7.45)%,差异有统计学意义(P<0.05)。经HaeⅢ酶切后,高黏附力组和低黏附力组变链菌均出现了A、B两种基因型,且在两组菌株中的分布情况不同,A基因型在高黏附力组居多,B基因型在低黏附力组居多,差异有统计学意义(P<0.05)。测序证实spaP-a基因的特异性碱基突变引起酶切位点改变而产生基因多态性。结论:维吾尔族不同龋敏感儿童变链菌临床株spaP-a基因具有得遗传多态性可能是其黏附能力出现差异的原因之一。     

老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株耐酸能力的研究

目的:分析老年人高龋患者牙菌斑中,变形链球菌临床分离株(血清型C)在酸性条件下生存的耐酸能力。方法:体外培养从老年人高龋患者、无龋者牙菌斑中分离的101种不同基因型变形链球菌株临床分离株(血清型C),检测菌株在不同的pH条件下的耐酸能力。结果:老年人高龋患者口腔中分离出的变形链球菌临床分离株耐酸能力明显高于无龋组,与国际参考菌株无明显的统计学差异。同时研究发现,在老年人高龋患者同一个体的口腔中,变形链球菌临床分离株耐酸能力存在明显差异。结论:老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株(血清型C)的高致龋性,与其携带有耐酸能力强的菌株关系密切。     

变链菌葡糖基转移酶遗传多态性与乳牙高龋的关系

目的对乳牙高龋与变链菌葡糖基转移酶基因遗传多态性的关系进行初步研究。方法以20名高乳牙龋幼儿合成水不溶性葡聚糖量最高的15个菌株及20名无龋幼儿合成水不溶性葡聚糖量最低的15个菌株作为实验菌株，UA159为参考菌株，应用三种限制性内切酶（HinfI、TaqI、MboI）以PCR-RFLP法分析高龋无龋幼儿变链菌临床分离株葡糖基转移酶gtfBC基因的遗传多态性。结果Hinf I的酶切图谱在两组幼儿间存在差别，高龋组有5株与UA159一致，而无龋组3株与UA159一致，但差别没有统计学意义；TaqI酶切图谱除无龋组有一株与UA159不同外，其余均相同；所有MboI的酶切图谱与UA159相同。结论高龋和无龋幼儿gtfBC基因限制性酶切图谱未发现有统计学意义的差异。     

变形链球菌体外耐酸能力的实验研究

目的 :探讨来自不同龋敏感者变形链球菌 (血清型c)临床分离株耐酸能力的差异。方法 :配制相同浓度的各变形链球菌临床分离株菌悬液 ,分别在不同pH浓度 (pH 4 .0～ 7.0 )的TPY液体培养基中培养相同时间后 ,用紫外分光光度计测定吸光度 ,比较细菌的生长情况。结果 :同一个体所带不同基因型变形链球菌菌株耐酸能力具有差异 ;高龋组个体定植的耐酸能力强的菌株所占比例显著高于无龋组 (P <0 .0 5 )。结论 :高龋组变形链球菌 (血清型c)临床株的高致龋力与其耐酸能力强密切相关。     

变形链球菌临床株F-ATPase亚基基因uncEBF在mRNA水平的表达

目的:研究变形链球菌临床分离株耐酸因子F-ATPase c、a、b亚基联合基因uncEBF在mRNA水平的表达差异,探讨基因表达水平与细菌耐酸力以及uncEBF基因型的关系。方法:应用半定量RT-PCR两步法和凝胶成像系统定量软件分析,分别对18株来自不同基因型和不同耐酸力变链菌的uncEBF基因表达水平进行评价,以SPSS11.0软件分析和比较mRNA表达的差异。结果:不同基因型及不同耐酸力菌株un-cEBF的mRNA表达水平不同(P<0.05),表现为A基因型uncEBF表达高于B基因型,高耐酸力菌株un-cEBF表达高于低耐酸力菌株。结论:变链菌不同基因型uncEBF基因的表达水平不同,表达水平高低与菌株的耐酸力相关。     

高龋者口腔中c血清型变形链球菌的基因组指纹分析

目的：确定高龋者口腔中c血清型变形链球菌的基因型分布。方法：从20例高龋者口腔中分离出c血清型变形链球菌，采用chelex法提取细菌染色体DNA，通过AP—PCR进行临床分离株的基因组指纹分析。结果：共分离获得了87株c血清型变形链球菌，不同个体所携带的变形链球菌临床分离株的基因型不同，同一个体可携带不同基因型的c血清型变形链球菌，26．7％的高龋者携带1种基因型，60．0％携带2种基因型，13．3％携带3种基因型。结论：大多数高龋者口腔中定植有2种或2种以上基因型c血清型变形链球菌。     

老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌临床分离株合成胞外多糖能力的研究

目的；探讨老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌（血清C型）临床分离株合成胞外多糖能力。方法：收集老年人高龋患者、无龋者牙菌斑中变形链球菌（血清C型），检测合成胞外多糖能力，并与国际参考菌株比较。结果：老年人高龋患者牙菌斑中分离出的变形链球菌临床分离株合成胞外多糖能力明显高于无龋组。同时研究发现，在老年人高龋患者同一个体牙菌斑中，不同基因型变形链球菌临床分离株合成胞外多糖的能力仔任差异，在无龋者牙菌斑中发现没有这一现象。结论：老年人高龋患者牙菌斑中变形链球菌（血清C型）临床分离株合成胞外多糖能力强的菌株与龋病的发生密切有关。     

Genotypic and phenotypic analysis of Streptococcus mutans from different oral cavity sites of caries-free and caries-active children

INTRODUCTION: Streptococcus mutans exhibits extensive genotypic diversity, but the role of this variation is poorly understood. This study aimed to determine the number and distribution of genotypes of S. mutans isolated from caries-active and caries-free children and to evaluate some of their phenotypic traits. METHODS: Stimulated saliva, tongue surface and biofilms over sound and carious teeth surfaces were sampled from 10 caries-free and 11 caries-active children aged 5-8 years. A total of 339 isolates of S. mutans were genotyped by arbitrarily primed polymerase chain reaction using OPA2 primer. One isolate from each genotype was tested for its acid susceptibility and its ability to form a biofilm. RESULTS: Fifty-one distinct genotypes were determined, one to three genotypes in each oral sample. A single genotype was detected in seven children, whereas the remaining 14 children exhibited two to seven genotypes. There were no significant differences in the number of genotypes detected in caries-free and caries-active children. No correlation was observed between the number of genotypes and the mutans streptococci salivary levels. Five of the six high biofilm-forming genotypes were obtained from caries-active children, although the differences in biofilm formation between isolates from caries-free and caries-active children were not statistically significant. Genotypes with low susceptibility to acid challenge were statistically more frequent among isolates from caries-active children than among those from caries-free children. CONCLUSION: The present data suggested that there were differences in the distribution of genotypes of S. mutans according to the oral site and that S. mutans populations differ in their acid susceptibility and ability to form biofilms, factors allowing their colonization of sucrose-rich environments.     

高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选

目的 初步筛选高致龋性变异链球菌临床分离株。方法 通过检测41株变异链球菌临床分离株的产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力,初步筛选出高致龋性变异链球菌临床分离株。结果 不同的变异链球菌临床分离株体外致龋能力不同,其中3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较高,提示可能为高致龋性变异链球菌临床分离株,另外3株产酸能力、耐酸能力、黏附能力和合成细胞外多糖能力均较低,提示可能为低致龋性变异链球菌临床分离株。结论 通过筛选可能获得了高致龋性变异链球菌临床分离株。     

Mutacin production in Streptococcus mutans genotypes isolated from caries-affected and caries-free individuals

Relationships between genetic diversity and mutacin production in Streptococcus mutans were evaluated in 319 clinical isolates from eight caries-affected and eight caries-free individuals. The isolates were submitted to mutacin typing and AP-PCR (arbitrarily primed polymerase chain reaction) assay. The mutacin production was detected for 12 Streptococcus sp. indicator strains. Results showed significant variations in the mutacin production profiles and the inhibitory spectra of both groups. A possible association was seen between mutacin activity and the distinct patterns of Streptococcus sp. colonization in the two groups. Genotyping by AP-PCR using the primers OPA-02 and OPA-13 revealed 101 distinct genotypes against 48 phenotypes identified by mutacin typing. No correlation was observed between the inhibitory spectra of mutacin and genotypic similarities based on AP-PCR analyses. According to our results, strains of the same S. mutans genotype showed different mutacin profiles, suggesting a high degree of interstrain diversity. In conclusion, mutacin production seems to be of clinical importance in the colonization of S. mutans and is highly diversified in the S. mutans species.