KSHV编码的趋化因子vMIPII在小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应中的作用

目的　重组vMIPII在大肠杆菌中表达及其纯化。观察纯化的vMIPII蛋白对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应的抑制作用。方法　以 pET3 2a为vMIPII克隆基因的表达载体 ,以大肠杆菌BL2 1(DE3 ) plysS为表达菌 ,诱导表达出硫氧还蛋白 vMIPII的融合蛋白 (2 6× 10 3 D)。经金属离子亲和吸附、肠激酶消化以游离vMIPII、阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白。纯化的vMIPII从尾静脉连续 14d注入异体皮肤移植小鼠 (昆明鼠 /Balb/c)。结果　从 1L发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约 4mg。注射vMIPII的异体皮肤移植小鼠组移植皮存活时间较未注射对照组延长 7d。结论　纯化的重组vMIPII对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应有明显的抑制作用 ,能显著延长移植皮的存活时间     

移植排斥反应中趋化因子及其受体表达的研究进展?

器官移植术后急、慢性排斥反应是导致移植物功能丧失的重要原因之一。趋化因子在器官移植早期表达异常活跃，它们特异性募集T细胞和抗原提呈细胞到移植组织内，激发并加剧炎症发展，致使移植物功能损害。因此，动态监测趋化因子及其受体的表达状况可成为判断急、慢性排斥反应发生的重要依据；筛选出一个或多个特异性趋化因子或受体作为抗排斥治疗的新靶点对提高器官移植术后疗效有很重要的意义。本文就近年来这一领域的研究进展作一综述。     

趋化因子与移植排斥反应

趋化因子是由小分子分泌蛋白组成的一个大的细胞因子超家族,近年来,不断有新的趋化因子和受体被发现。趋化因子是能够诱导白细胞做定向运动的细胞因子,在病原体的清除、炎症反应、移植排斥、造血、血管生成、肿瘤发生、HIV感染等过程中也发挥着重要作用。本文概述了与移植排斥相关的趋化因子和受体的研究进展。     

反义肽核酸抑制树突细胞趋化因子受体CCR7表达的实验研究

目的探讨靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸(PNA)对树突细胞(DCs)CCR7的表达及趋化活性的影响。方法体外培养大鼠骨髓来源DCs,设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA,以随机PNA、空白组为对照处理体外培养7d的DCs,分别于24h,48h,72h后收集细胞,利用Western-blot和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测反义PNA对CCR7分子表达的影响,通过趋化实验检测DCs的趋化活性。结果DCs经PNA处理后24h,各组DCs其CCR7表达无明显差别,在48h,Western-blot检测显示反义PNA组CCR7蛋白表达明显低于对照组,而RT-PCR检测在mRNA水平却无明显差别。在72h,反义PNA组CCR7的表达在不同水平均明显低于对照组。经趋化实验证实,在48h以后反义PNA组DCs趋化活性受到明显抑制(P<0.05)。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠树突细胞趋化因子受体CCR7的表达及其趋化活性,为进一步研究体内应用反义PNA抑制DCs的定向迁移和抗原递呈,调节免疫反应和诱导免疫耐受提供了新的策略。     

趋化因子受体拮抗剂对大鼠小肠移植的影响

目的:观察趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对同种异体大鼠异位小肠移植术后移植物的存活时间和组织病理学改变的影响,以及与小剂量他克莫司(FK506)的协同效应. 方法:选用成年雄性SD和Wistar大鼠进行异位小肠移植(SD→Wistar).将动物分为3组,每组30只:第1组,未治疗对照组;第2组,Met-RANTES治疗组(200 μg/d,ip);第3组, Met-RANTES(200 μg/d,ip) 小剂量FK506治疗组[0.5 mg/(kg*d), im].观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于术后第1,3,5,7日取各组动物移植肠标本进行组织病理学检查和组间比较. 结果:第1组大鼠存活时间中位数为7.2 d (1.5),全部死于急性排斥反应及感染;组织病理学检查显示移植后第3,5,7日分别符合轻、中、重度排斥反应.第2组大鼠存活时间中位数为19.2 d (16.4),与第1组相比存活时间明显延长(P＜0.01). 第3组大鼠存活时间中位数为30.9 d (9.0),与第1,2组显著延长(P＜0.01).第2,3组组织病理学检查无明显排斥反应征象,可长期存活. 结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量FK506的免疫抑制作用.     

PTD-mFoxp3抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究

目的:研究带有蛋白穿膜结构域的小鼠Foxp3融合蛋白(mouse Foxp3 fusin protein combining with transduction domain, PTD-mFoxp3)对小鼠脾淋巴细胞活化增殖能力和皮肤移植排斥反应的影响.方法:取健康C57BL/6小鼠脾淋巴细胞,在体外经刀豆蛋白A(concanavaline A, ConA)活化,并分别给予环孢素A(cyclosporine,CsA)、不同浓度的PTD-mFoxp3,mFoxp3,PTD-GFP和培养基处理,检测脾淋巴细胞增殖指数.在此基础上进行从Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植试验,将40只C57BL/6受体小鼠随机分为4组,每组10只,分别以PTD-mFoxp3,CsA,0.9%氯化钠注射液(NS),PTD-GFP于手术当天开始连续腹腔注射8天为干预手段.术后第9天各组随机取2只移植小鼠,采集皮片标本,进行组织学检查.其余的8只用于观察移植皮瓣的存活时间.结果:PTD-mFoxp3和CsA相似,与其他处理方法相比明显抑制ConA活化的小鼠脾淋巴细胞增殖指数(P<0.05).PTD-mFoxp3组,CsA组移植物的存活时间较各对照组显著延长(P<0.05);病理检查显示PTD-mFoxp3组和CsA组移植物淋巴细胞浸润明显轻于各对照组.结论:PTD-mFoxp3能抑制ConA活化的T淋巴细胞的增殖,且具有抑制小鼠皮肤移植排斥反应的作用.     

小型猪胰腺移植急性排斥反应模型的实验研究

目的　建立小型猪胰腺移植动物模型 ,探索早期诊断急性排斥反应的方法。方法　 4 0只猪随机配对行胰腺移植 2 0次 ,将供胰所带的血管与受体髂血管吻合 ,所带小段十二指肠与空肠吻合 ,术中监测平均动脉压、中心静脉压及血气。术后测定受体的血淀粉酶、血糖 ,监测外周血免疫指标 ,彩色多普勒检测供胰血流及超声引导下活检、组织病理检查。结果　移植手术成功率为 90 % ,受体平均动脉压在吻合血管开放后有明显下降 ,与血流开放前差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,输血有助于手术成功 ,受体术后平均存活 (12 6± 2 3)d。外周血免疫学监测指标早于供胰的组织病理改变 ,两者的改变均早于急性排斥反应的临床表现。结论　小型猪适用于胰腺移植模型的建立 ,加强术中循环功能的管理、及时输血有利于受体成活 ;超声引导下穿刺活检供胰的组织病理学检查与监测外周血免疫指标均适于早期诊断急性排斥反应     

青蒿琥酯对大鼠皮肤移植排斥反应的影响

目的：进一步研究青蒿琥酯的免疫作用，采用动物实验方法同琥酯对皮肤移植斥反应的影响。方法将动物随机分为对照组和青琥酯组，供皮鼠受皮鼠均用药，分别为７ｄ和１２ｄ。Ｗｉｓｔｅｒ株大鼠作为供皮鼠，将其圩ＳＤ株大鼠，结果：对照组和青蒿琥酯组移植皮肤平均存活时间分别为１２．１±２．０８８ｄ和１６．８±３．６３３ｄ（Ｐ〈０．０１）。结论：青蒿琥酯组可显延长大鼠皮肤移植排斥反应，进一步证实青贡琥酯的免疫作用     

雷公藤联合小剂量环孢素A抑制猪小肠移植排斥反应

目的：雷公藤联合小剂量环孢素抑制小肠移植排斥反应优于大剂量环孢素治疗。方法：以猪为动物模型，采用节段小肠二步移植法作同种异体移植，给予传统中药雷公藤和小剂量环孢素。结果：无免疫抑制组（Ⅰ组）和单独小剂环抱素组（Ⅳ组）发生排斥反应，移植物平均存活分别为１２．８±２．７６和１２．４±２．６ｄ。大剂量环孢素组（Ⅱ组）和雷公藤加小剂量环孢素组（Ⅲ组）均未出现排斥反应，但Ⅱ组中有２只猪因严重感染分别于第９２、９７ｄ死亡。Ⅱ、Ⅲ组存活１００ｄ以上的猪为Ⅴ组，仅给予雷公藤，均获得满意的长期存活，未发生感染。结论：首先将雷公藤应用于小肠移植，并且发现雷公藤是有效的抗排斥药物。雷公藤可部分取代环孢素防治小肠移植后早期的急性排斥，在移植后期，单独应用雷公藤可抑制慢性排斥。     

人活体小肠移植受体血清IL-8与排斥反应相关

目的 观察我国首例活体部分小肠移植受体围手术期趋化因子IL-8的变化及其与移植物缺血再灌注损伤和急性排斥反应的相关性。方法 双抗夹心ELISA法测定受体术前及术后1-140d血清IL-8动态水平。结果 受体血清IL-8水平夺术后1d显著升高（2.44ug.L^-1vs0.26ug.L^-1),且于次日迅速下降（1.70ug.L^-1),术后4d达术前水平,血清IL-8的第2个高峰出现于术后67d发生移植物急性排斥反应时（1.47ug.L^-1)。但高度较第1次低,恢复较第1次慢,在术后96d达术前水平。结论 在人活体部分小肠移植中,血清IL-8水平与移植物缺血再灌注损伤和急性排斥反应密切相应。可作为重要的小肠移植物急性排斥反应的信号之一。     

异种移植超急性排斥反应

1　异种移植排斥反应概述器官移植现在被认为是终末期器官衰竭患者最有效的治疗手段 ,然而人类器官供体缺乏严重限制了它的广泛应用 ,这就激起人们对异种移植的兴趣。异种移植是指不同种属动物之间组织或器官的转移。由于不同种属动物遗传背景不同 ,器官移植后产生的反应有差异 ,1970年R .Calne首次将异种器官移植分为 :①协同性异种移植 :指供、受体双方进化关系较近 ,类似于第一次同种移植排斥反应的异种移植 ,移植物存活以日为计 ,如狒狒、猩猩的器官移植给人。②非协同性异种移植 :指供、受体双方进化关系较远 ,类似于第二次接触抗原的…     

谷氨酰胺强化TPN对小肠移植急性排斥反应影响的实验研究

目的观察谷氨酰胺强化TPN对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响.方法48只异基因异位小肠移植受体大鼠(SD→Wlstar),根据常用TPN或谷氨酰胺强化的TPN支持以及环孢素A应用与否随机分为4组,观察至术后14d各时相点移植小肠病理改变、固有层淋巴细胞IL-2受体表达、血浆IL-2水平以及受体大鼠脾淋巴细胞转化试验和IL2分泌能力.结果谷氨酰胺强化的TPN能够增强小肠移植受体大鼠的细胞免疫功能,加重急性排斥反应.应用环孢素A(10mg@kg-1@d-1)能阻断这种免疫增强作用,使谷氨酰胺不能诱发或加重急性排斥反应.结论谷氨酰胺能够加重小肠移植的排斥反应,但在应用环孢素A后不会诱发或加重急性排斥反应.     

雷帕霉素对小鼠移植排斥反应及免疫功能的影响

目的：研究雷帕霉素（rapamycin, RAPA）对小鼠移植排斥反应及免疫功能的影响。方法：小鼠同种异型耳后心脏移植和皮肤移植,二硝基氟苯(dinitro-fluorobenzene, DNFB)诱导的迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity, DTH）的测定,溶血素的测定, 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验。结果：RAPA可显著延长小鼠同种异型心脏及皮肤移植的存活期;显著抑制小鼠DTH反应;并使绵羊红细胞(sheep red blood cell, SRBC)致敏小鼠溶血素生成显著下降;对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红作用无明显影响。结论：雷帕霉素可抑制小鼠同种异型移植排斥反应,抑制小鼠细胞及体液免疫功能,但不影响非特异免疫功能。     

益气活血安胎中药对异种皮肤移植急性排斥反应的影响

目的研究益气活血安胎中药对异种皮肤移植急性排斥反应的抑制作用。方法以SD大鼠为供体,昆明小鼠为受体,建立异种异体皮肤移植模型。术后将小鼠分为中药组、阳性对照组和阴性对照组,分别以中药醇提取物、醋酸地塞米松溶液和生理盐水灌胃,记录移植皮片的存活时间和存活情况,于移植后第5天和第10天取移植皮肤行病理切片。结果与阴性对照组相比,中药组和阳性对照组急性排斥反应明显较轻,移植皮片平均存活率和存活时间明显延长（P〈0．05）。结论益气活血安胎中药对异种异体皮肤移植的急性排斥反应可产生有效的抑制作用,减少炎性细胞浸润,延长皮片存活时间。     

诱导免疫耐受抑制小鼠异体坐骨神经移植排斥反应的实验研究

目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对异体鼠坐骨神经移植存活的作用。方法 自供体C57BL／6小鼠脾细胞中提取MHC抗原，注入受体Balb/c小鼠胸腺内，2周后移植供体C57BL／6小鼠坐骨神经。同时另设4组对照组，即自体神经移植组，异体神经移植组，冷冻后异体神经移植组，应用免疫抑制剂异体神经移植组；3周后进行神经电生理检查、组织学的检测。结果 实验组优于异体神经移植组及冷冻后异体神经移植组；接近于自体神经移植组及应用免疫抑制剂异体神经移植组。结论 胸腺内注射供体MHC抗原可诱导特异性坐骨神经移植耐受。     

胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3与移植肝急性排斥反应的相关性

目的:观察胆汁中趋化因子IP-10及其可溶性受体CXCR3(sCXCR3)的动态变化,探讨其与移植肝急性排斥反应(AR)的关系。方法:以2007年10月～2008年3月在本院行肝移植术的28例患者为研究对象,按急性排斥反应发生与否分为AR组(n=8)和NAR组(n=20);另选本院消化科因胆石症行鼻胆管引流(ENBD)的患者10例作为对照。采用双抗体夹心ELISA方法检测患者移植术后第1、3、5、7天和激素冲击治疗第1、3、7天胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达变化,分析其与肝穿刺活检Banff排斥活动指数(RAI)的相关性,评价其对AR的诊断价值。结果:肝移植患者术后胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平逐渐升高,术后第5天达到高峰,且从第5天开始,AR组患者的表达水平显著高于NAR组和ENBD组(P<0.05);经激素冲击治疗后,IP-10及sCXCR3的表达水平明显下降(P<0.05)。AR确诊当日,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的表达水平与RAI具有良好相关性(P<0.05)。术后第5天,截断值为964.45 pg/ml时,IP-10诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为100%;术后第7天,截断值为819.35 pg/ml时,sCXCR3诊断AR的敏感性为87.5%,特异度为80%。结论:肝移植术后早期,胆汁中趋化因子IP-10及sCXCR3的动态变化与移植肝急性排斥反应密切相关,有望成为AR早期诊断及抗排斥治疗效果的无创监测指标。     

大鼠小肠移植急性排斥反应中IL-2表达的研究

目的　探讨移植肠白细胞介素 2的表达在小肠移植排斥反应中的意义及诊断价值以及普乐可复 (FK 5 0 6 )对其影响。方法　选用近交系大鼠SD和Wister建立同种异基因小肠移植模型 ,随机分为对照组 ,同基因移植组 ,异基因移植组和异基因加FK5 0 6治疗组 ,术后第 3、5、7天取各组动物移植肠标本进行组织学检查 ,应用免疫组织化学技术检测大鼠术后IL 2在移植小肠黏膜中的表达。结果　组织学检查显示异基因移植组大鼠在术后第 3、5、7天分别符合轻、中、重度排斥 ,同基因移植组、异基因加FK5 0 6治疗组无明显排斥征象。异基因移植组IL 2表达在术后均显著高于其他 3组 ,FK5 0 6治疗组IL 2表达与对照组比较亦有升高 ,但差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论　IL 2在小肠移植排斥反应过程中发挥重要作用 ,移植肠黏膜内IL 2表达水平可作为早期诊断急性排斥反应的一个有参考意义的指标     

重组趋化因子vMIPⅡ对小鼠异体移植皮肤存活时间的影响

目的　观察纯化的重组vMIPⅡ蛋白对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应是否有抑制作用及能否延长移植皮肤的存活时间。方法　pET3 2a为vMIPⅡ克隆基因的表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达出硫氧还蛋白 vMIPⅡ的融合蛋白 (2 6× 10 3 )。经金属离子亲和吸附、肠激酶消化以游离vMIPⅡ、阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白。用体外配体结合实验证实重组vMIPⅡ与趋化因子受体CCR5的结合能力。纯化的vMIPⅡ经尾静脉给药异体皮肤移植小鼠 (昆明鼠 /Balb/c)连续 14d。结果　经纯化可获得高纯度目的蛋白。vMIPⅡ与趋化因子受体CCR5结合的解离常数 (Kd)为 11 5 6± 1 98nmol/L。给药vMIPⅡ的异体皮肤移植小鼠组移植皮存活时间较未注射对照组延长至术后 7天以上。结论　纯化的重组vMIPⅡ对小鼠异体皮肤移植免疫排斥反应有明显的抑制作用 ,能显著延长移植皮的存活时间