小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的抑制作用(英文)

目的探讨小檗碱对大鼠骨髓间质干细胞成脂分化的影响及其机制。方法经分离纯化的大鼠骨髓间质干细胞,分为正常对照组,成脂分化诱导液(AIM)模型组及AIM+小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1组。倒置显微镜下观察细胞的形态特征,油红O染色检测脂肪细胞,以对硝基苯磷酸为底物检测碱性磷酸酶(ALP)活性,MTT法检测细胞存活率,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),脂肪酸结合蛋白(aP2)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA表达。结果与正常对照组比较,AIM模型组细胞形成的脂肪细胞明显增加(P<0.01),ALP活性明显降低(P<0.01),PPAR,γaP2和C/EBPαmRNA表达明显增高(P<0.01)。与AIM组比较,AIM+小檗碱显著抑制骨髓间质干细胞成脂分化,小檗碱0.1,0.3,1和3μmol·L-1显著升高ALP活性,分别增加26%,54%,81%和122%;小檗碱3μmol·L-1显著下调PPARγmRNA(0.91±0.10vs1.34±0.06),(P<0.01),aP2 mRNA(1.05±0.10vs1.53±0.09)(P<0.01)和C/EBPαmRNA表达(1.24±0.06vs1.54±0.09)(P<0.01)。小檗碱对骨髓间质干细胞增殖无显著影响。结论小檗碱能够抑制骨髓间质干细胞成脂分化,该作用可能与其下调PPARγmRNA,aP2 mRNA和C/EBPαmRNA表达有关。     

番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。     

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。     

板蓝根水提物对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的探讨板蓝根水提物(water extract of Radix Isatidis,WERI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法和流式细胞技术检测WERI对细胞增殖的影响;鸡尾酒诱导剂诱导3T3-L1前脂肪细胞,油红O染色和比色分析法观察WERI对前脂肪细胞分化及脂肪积累的影响;采用RT-PCR检测脂肪细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA的表达;Western blot法检测PPARγ及C/EBPα蛋白表达。结果WERI在一定浓度范围内能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,同时细胞周期呈现G_0/G_1向S期阻滞;与空白组相比,用不同浓度的WERI处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制,且细胞内脂滴生成量明显减少;PCR及Western blot结果显示,WERI还可以抑制脂肪细胞PPARγ和C/EBPα基因及蛋白的表达。结论 WERI具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,并可通过下调PPARγ和C/EBPαmRNA及蛋白表达来抑制细胞成脂分化。     

白藜芦醇对小鼠3T3-L1细胞增殖与分化的影响及其机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对小鼠3T3-L1细胞增殖、分化的影响及其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,添加不同剂量的白藜芦醇,用WST-1法检测细胞的增殖;用油红O染色后以染色比色法分析脂肪细胞的分化程度;采用RealtimePCR技术检测各组脂联素和瘦素的mRNA表达;采用Westernblot技术检测相关位点,包括沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)、过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated re-ceptor γ,PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCTT Aenhan-cerbinding proteinα,C/EBPα)的蛋白质表达。结果Res明显抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,且呈一定的时间-剂量依赖关系;与对照组比较,Res组脂联素和瘦素的mRNA表达水平下降(P<0.01),Res抑制3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化;添加Res导致脂肪细胞中Sirt1蛋白表达水平上升,PPARγ和C/EBPα蛋白表达水平下降。结论白藜芦醇能抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化,其机制可能是通过增加Sirt1表达,抑制脂肪细胞分化相关蛋白PPARγ、C/EBPα的表达。     

高表达miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的抑制作用

目的 探究miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞（MSC）成脂分化的影响。方法 (1)取1周龄C57BL/6J小鼠胫骨和股骨分离培养MSC。体外培养扩增至P3代,吉姆萨染色,倒置显微镜镜下观察其形态;用流式细胞术检测其细胞表型;经成脂和成骨诱导液分别诱导分化7和14 d,分别用油红O染色和碱性磷酸酶染色检测其体外成脂和成骨分化能力,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其成脂分化关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及成骨标志性蛋白骨钙素（OCN）和成骨分化关键转录因子Runx相关转录因子2(Runx2)mRNA表达。(2)合成与MSC成脂分化相关的微RNA(miRNA)即miR-25-3p模拟物,将miR-25-3p模拟物及其对照miRNA分别瞬时转染P3代MSC,用荧光显微镜观察转染细胞Cy3红色荧光强度鉴定细胞转染效率,RT-qPCR检测转染细胞miR-25-3p表达水平。(3)将未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的P3代MSC成脂诱导分化7 d,用油红O染色检测细胞脂滴形成数目,RT...     

褪黑素对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的探讨褪黑素(MT)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,以及MT的作用机制。方法取大鼠骨髓分离培养BMSCs,经传代脂向分化,分组进行干预。对照组为单纯脂向分化(模型)组;实验A组用MT进行干预;实验B组用MT和其受体拮抗剂2-苯基-N-乙酰色胺(LZD)共同干预。检测脂肪细胞的比例来比较各组的脂化程度,并应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组细胞中成脂转录因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)mRNA的表达。结果实验A组脂化程度明显低于对照组和实验B组(P<0.05)。结论MT能抑制BMSCs向成脂方向分化,并通过其受体机制起作用。这可能与骨质疏松的病因学有关。     

姜黄素通过减少CREB转录活性抑制前脂肪细胞分化

目的探讨姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及其作用机制。方法选取3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,姜黄素(10、20、40μmol·L~(-1))处理3T3-L1前脂肪细胞并同步诱导细胞分化,采用MTT法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖情况,油红O染色方法检测胞质脂质堆积情况,实时荧光定量PCR法及蛋白印迹法检测3T3-L1脂肪细胞环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物体增殖剂活化受体γ(PPARγ)的mRNA及蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖具有明显抑制作用,且呈现一定剂量、时间依赖性;油红O染色显示,姜黄素可抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且呈现一定剂量依赖性;0、20、40μmol·L-1姜黄素处理3T3-L1前脂肪细胞,p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα、PPARγmRNA水平及蛋白水平随姜黄素剂量升高均呈现明显下降趋势(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖分化,其机制可能为姜黄素抑制CREB转录活性,从而抑制C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ表达。     

黄芪甲苷促进脐带血干细胞向心肌细胞分化作用的研究

目的探讨黄芪甲苷对脐带血间充质干细胞向心肌细胞分化的作用。方法采用贴壁法分离人脐带血间充质干细胞,用流式细胞术对细胞表型进行鉴定。通过免疫组化方法观察黄芪甲苷对间充质干细胞向心肌细胞分化的促进作用。结果流式细胞仪检测结果表明,分离的脐带血间充质干细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34和HLA-DR。黄芪甲苷（浓度200 mg/L）作用下,间充质干细胞表达特异性心肌细胞蛋白,包括结蛋白（desmin）、α横纹肌肌动蛋白（-αsarcomeric actin）和肌钙蛋白T（C-TnT）。结论黄芪甲苷对脐带血间充质干细胞分化的促进作用,分化的心肌细胞在心肌损伤性疾病的潜在的治疗价值值得进一步研究。     

1β-Hydroxy-2-oxopomolic acid isolated from Agrimonia pilosa extract inhibits adipogenesis in 3T3-L1 cells

In order to determine anti-adipogenic effect, this study investigated 1β-hydroxy-2-oxopomolic acid (HOA) isolated from Agrimonia pilosa inhibits adipocyte differentiation and expression of adipogenic marker genes, such as peroxisome proliferator activated receptor γ (PPARγ), CCAAT-enhancer-binding protein α (C/EBPα), glucose transporter 4 (GLUT4), adiponectin, adipocyte fatty acid-binding protein 2 (aP2), adipocyte determination and differentiation factor 1/sterol regulatory element binding protein 1c (ADD1/SREBP1c), resistin, and fatty acid synthase (Fas) in 3T3-L1 preadipocyte. We demonstrated that HOA induced a significant decrease in lipid accumulation and expression of adipogenic marker genes in a dose-dependent manner. In addition, HOA reduced the transcripitional activity of PPARγ induced by troglitazone, a potent diabetes agent; it also suppressed expression of PPARγ and C/EBPα protein levels. Our data suggest that HOA isolated from Agrimonia pilosa inhibits adipocyte differentiation through downregulation of various adipocytokines by blocking PPARγ and C/EBPα expression.     

曲格列酮在人前列腺癌细胞中对核受体结合蛋白1表达调控的影响

目的探讨在人前列腺癌株DU145细胞中过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)的特异性激动剂曲格列酮对核受体结合蛋白1(NRBP1)的表达调控作用。方法 MTT法检测不同浓度曲格列酮(浓度分别为0.5、5.0、10.0μmol/L)作用24 h后对DU145细胞增殖的影响。在DU145细胞中用PPARγ的特异性激动剂曲格列酮处理24 h后,在转录水平和翻译水平检测NRBP1的表达。结果曲格列酮各浓度实验组对细胞的活性和增殖无影响(P>0.05)。曲格列酮作用于DU145细胞后在转录水平和翻译水平对NRBP1有明显抑制作用。结论 PPARγ在DU145细胞中可抑制NRBP1的表达。     

Cucurbitacin B and cucurbitacin I suppress adipocyte differentiation through inhibition of STAT3 signaling

Cucurbitacin B, a member of the cucurbitaceae family, can act as a STAT3 signaling inhibitor to regulate the growth of hepatocellular carcinoma. STAT3 signaling has been shown to inhibit adipocyte differentiation through C/EBPα and PPARγ. Based on these studies, we hypothesized that cucurbitacin B would prevent PPARγ mediated adipocyte differentiation through STAT3 signaling. To test this hypothesis, mesenchymal C3H10T1/2 and 3T3-L1 preadipocyte cells were treated with a sub-cytotoxic concentration of cucurbitacin B. Cucurbitacin B treatment inhibits lipid accumulation and expression of adipocyte markers including PPARγ and its target genes in a dose-dependent manner. Cucurbitacin B treatment impairs STAT3 signaling as manifested by reduced phosphorylation of STAT3 and suppression of STAT3 target gene expression in preadipocytes. The anti-adipogenic effects of cucurbitacin B are significantly blunted in cells with STAT3 silenced by introducing small interfering RNA. Finally, our data show that cucurbitacin I, another cucurbitacin family member, also inhibits adipocyte differentiation by suppressing STAT3 signaling. Together, our data suggest the possibility of utilizing cucurbitacins as a new strategy to treat metabolic diseases and implicate STAT3 as a new target for the development of functional foods and drugs.     

滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞成脂分化的影响

目的:研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞(MSC)模型成脂分化的影响。方法:小鼠灌胃滋肾降糖丸(1.5g·kg-1),每天1次,连续7d,最后一天在灌胃2h后收集含药血清。随后用油红O染色法检测上述含药血清对MSC成脂诱导分化的影响。最后用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-RT-PCR)方法进一步测定含药血清对MSC成脂诱导过程中相关关键基因过氧化物酶体增殖物激活γ2受体(PPARγ2)与人脂肪酸结合蛋白4(FABP4)表达的影响。结果:含药血清可显著抑制MSC的成脂分化,显著抑制MSC成脂诱导分化第3、6天后关键基因PPARγ与FABP4的表达。结论:滋肾降糖丸具有抑制MSC成脂分化的作用,其作用机制可能与抑制MSC上PPARγ2与FABP4的表达有关。