基因重组hEGF融合蛋白的发酵条件优化

对hEGF融合蛋白基因工程菌的发酵条件进行优化。结果表明，当起始pH为6．6～7．0，以100ml／500ml的装液量，6％接种量，37℃培养2h，加入0．1mmol／L的IPTG诱导4h后，收获菌体可得到较高的生物量和hEGF融合蛋白表达量。其中IPTG诱导开始时间和菌体收获时间对蛋白表达有显著影响。     

工程菌LacU V5par8egf产hEGF发酵方法的比较

目的：明确培养条件对工程菌LacUV5par8egf表达水平和质粒稳定性的影响,方法：采用优化MBL培养基,利用摇瓶发酵研究工程菌LacUV5par8egf的最优培养条件,并与2L发酵罐上的发酵进行比较,结果：摇瓶发酵的最优培养条件为：温度32度,接种量10％,种子液OD5501．0－3．0,装液量10％,摇床转速220rpm;摇瓶发酵的最优诱导条件是在对数生长中后期诱导,IPTG最适浓度为0．2mM,2L发酵罐发酵与摇瓶发酵相比,发酵周期缩短了约三分之一,hEGF表达水平接近摇瓶中发酵水平,达到27．7mg/L,结论：利用摇瓶最优培养条件,较好实现了重组hEGF从摇瓶到发酵罐的放大。     

表达GST-NK4工程菌的发酵工艺研究

目的建立重组GST NK4融合基因工程菌的发酵工艺。方法采用摇瓶、发酵罐发酵,对影响工程菌生长和表达的条件如pH值、诱导时间及诱导剂浓度等进行优化。结果根据优化的条件,15L发酵罐发酵11h ,菌体收获量可达到湿重(2 4 .6±0 .98)g/L ,目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的5 0 %左右。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺     

重组人Shiga-EGF工程菌发酵工艺研究

目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ,以乳糖诱导表达 5h ,5L罐发酵工程菌菌密度 (A60 0nm)达到 15 ,菌体湿重 2 7g/L ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 15 %～ 2 0 %。结论确立以乳糖为诱导剂的发酵条件能降低目的蛋白制备成本     

环孢菌素A产生菌发酵条件的优化研究

利用“单因素多浓度”和“均匀设计法”对环抱菌素生产菌株茄病镰刀菌的发酵条件和发酵培养基组分进行优化．并在5000L发酵罐上对菌株的发酵动力学规律作了初步的探索。实验结果表明。5．5％玉米粉,0．5％葡萄糖,0．5％干酪素．0．05％KCl,0．05％MgSO4,0．015％KH2PO4和0．3％CaCO3为最佳摇瓶发酵培养基组成;5000L发酵罐的发酵动力学规律表明,菌体浓度发酵培养至80h左右达到最大．产素水平在116h左右达到最大。     

重组人肝增强因子工程菌JM109的发酵工艺研究

目的：研究表达重组人肝增强团子（hALR）工程菌JM109的发酵工艺。方法：采用发酵罐发酵,优化工程菌发酵的培养基配方、pH值、诱导表达时间、补料方式等。结果：在pH6．9条件下,培养6h后诱导表达5h,同时补科,5L罐发酵工程菌,菌体收得量可达湿重33．0g／L。目标蛋白表达量约占菌体总蛋白的31．3％。结论：此发酵工艺可以较好地提高ALR工程菌菌体得率和目标蛋白表达量。     

水蛭素基因工程菌的培养

采用正交实验法优化了水蛭素基因工程菌的发酵培养基，得到较佳培养基配方及培养条件，并优化了发酵工艺，摇瓶培养22h，发酵液抗凝血酶活力可达850ATU/ml，25L发酵罐培养18h，发酵液中抗凝活力亦可达800ATU/ml，水蛭 素表达量在原有基础上有了大幅度提高，为大规模培养及工业生产建立了可行路线。     

RGD-TRAIL工程菌发酵工艺的摸索研究

经过培养基筛选、培养温度和诱导条件的优化,确定了表达RGD-TRAIL(RGD-TNF related apoptosis inducing ligand)融合蛋白的基因工程菌RT发酵的最佳条件为:TB培养基分别作为RGD-TRAIL的发酵培养基,发酵生长温度控制在37℃,诱导温度控制在25℃,IPTG的最佳诱导浓度为0.8 mmol/L。诱导16 h后目的蛋白表达量到30%,可溶性目的蛋白表达量达15%。并在10 L发酵罐进行验证,确定了发酵工艺。     

重组胸苷磷酸化酶在大肠杆菌中的表达和1-（2-脱氧-β-D-呋喃核糖基）-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的生成

研究了大肠杆菌BL21（DE3）中重组胸苷磷酸化酶的最佳诱导表达条件及1-（2-脱氧-β-D-呋喃核糖基）-1,2，4-三唑-3-甲酰胺（1）的最佳生成条件。菌体培养3．5h时加入8mmol／L乳糖诱导6h后，胸苷磷酸化酶的酶活力为2．14×10^4u／mg湿菌体。5％湿菌体在pH7．0的0．1mol／L Tris—HCl缓冲液中与底物胸苷、1，2，4-三唑-3-甲酰胺于50℃反应5h后，所得1的转化率大于90％。     

乳糖诱导胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中的表达

目的研究用乳糖替代异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂诱导胸腺融合肽Tα1-TP5表达,并优化诱导表达条件。方法在摇瓶发酵条件下,以乳糖作为诱导剂,SDS-PAGE电泳和AlphaEase凝胶电泳图像分析系统研究培养基组成、诱导剂浓度、诱导时机、诱导时间、诱导温度和诱导方式等条件对目的肽Tα1-TP5表达量的影响,并与IPTG诱导结果相比较。结果选用TB培养基,在菌体对数生长的中后期加入终浓度为1 g/L的乳糖,37℃诱导6 h,GST-Tα1-TP5融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,且主要以可溶形式表达,与IPTG的诱导结果相同。分批流加乳糖4次和一次性加入乳糖诱导,融合蛋白表达量无明显差异。结论乳糖可以替代IPTG诱导胸腺融合肽Tα1-TP5的表达。     

重组复合干扰素摇瓶发酵条件的研究

目的对表达重组复合干扰素(con-IFN)的工程菌E.coli DH5α的摇瓶发酵条件进行研究。方法利用单因素比较实验及正交试验等方法考查工程菌摇瓶发酵条件,探讨发酵条件对工程菌的生长和con-IFN表达的影响。结果优化后条件为培养基含玉米粉6%、牛肉膏5.5%、谷氨酸钠0.5%,发酵液初始pH 7.2,30℃培养7 h后升温至42℃诱导表达6 h,转速220r/min,装样量10%,接种量2%。结论优化后平均蛋白质表达量达到36.39%,和LB培养基相比,目的蛋白质表达量提高了4.8%,为工程菌的大规模发酵提供参考。     

重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ工程菌高密度发酵工艺优化

目的优化表达重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)工程菌的高密度发酵条件。方法考察培养基以及诱导时机、诱导剂量和诱导时间对蛋白表达的影响;用自控发酵罐进行分批补料培养实验,确定优化工艺条件。结果以2×YT+0.5%葡萄糖为发酵培养基,经0.8 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导5 h,通过pH-stat反馈补料方式实现工程菌高密度发酵与目的蛋白高效表达,每1 L发酵液收获干菌体50.1 g,IGF-Ⅰ含量达5.25 g/L。结论建立了IGF-Ⅰ工程菌优化的高密度发酵工艺,为IGF-Ⅰ的下游纯化和工业化生产奠定了基础。     

重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究表达重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺。方法首先采用摇瓶培养,对培养基配方、pH值、诱导表达时机和诱导剂量进行优化,确定基本发酵参数,然后在30L发酵罐上进行中试规模发酵培养。结果在摇瓶培养时,发现含有甘油和微量元素等成分的改良培养基效果明显优于LB培养基和2×YT培养基,另外,工程茵的最佳pH值为7.0,最佳诱导时机为对数中期,最佳诱导剂浓度为0.4mmoL/L异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖,最佳诱导时间为4h,将摇瓶培养确定的关键参数应用到30L发酵罐中,控制溶氧大于30%,进行3批发酵试验,发现发酵产物的湿菌产量可达58-61.9g/L,目的蛋白质表达量可达28.9%-31.2%以上。结论建立了工程菌M15[pQE-scFv]的中试发酵工艺,为进一步开发打下良好基础。     

诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响

目的优化人线粒体色氨酰-tRNA合成酶(hmtTrpRS)的表达条件。方法构建表达载体pET-24a(+)-hmtTrpRS,转化到大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中。分析异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时间和诱导温度对hmtTrpRS表达的影响。结果确定IPTG浓度为0.1 mmol/L,30℃诱导4 h,为诱导蛋白表达较合适条件。同时利用特异性的Ni亲和柱色谱纯化了目的蛋白。结论获得较合适的表达条件,并纯化得到较高纯度的hmtTr-pRS,为以后该酶结构、功能的研究奠定了基础。     

抗阿尔茨海默病神经保护肽[Gly14]-Humanin融合基因工程菌发酵工艺研究

目的优化大肠杆菌表达重组[Gly14]-Humanin(HNG)融合基因工程菌的发酵工艺。方法在15L发酵罐内,研究培养基、培养条件和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响,并考察工程菌中重组质粒的遗传稳定性。结果工程菌在pH7.4的2×YT培养基中诱导5h,菌体湿重可达80g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的36%,所构建的重组质粒在BL21宿主菌中传代稳定。结论优化了HNG融合基因工程菌的发酵和表达条件,为药物中试研究和规模化生产奠定了基础。     

重组人白细胞介素-18工程菌的培养及高密度发酵

目的优化重组人白细胞介素-18的发酵工艺,以获得工程菌的高密度发酵和目的蛋白的高表达.方法在10L发酵罐中,研究重组人白细胞介素-18工程菌在不同的pH值、溶氧和诱导时间对工程菌生长和目的蛋白表达的影响.结果根据优化条件,连续三批重复发酵10L工程菌,最终菌体密度均达A600nm=28,菌体获得量均可达湿重50g?L-1以上.目的蛋白表达量均为40%以上.结论优化了重组人白细胞介素-18基因工程菌的发酵和表达条件,为规模化生产奠定了基础.     

欧文氏菌发酵生产紫杉醇工艺的优化

考察了植物内生细菌欧文氏菌(Erwinia taxi)生产紫杉醇的摇瓶发酵和30 L罐发酵工艺条件。结果显示,培养基中添加不同的前体对紫杉醇产量影响显著。较高浓度的乙酸钠(>0.01 mmol/L)和较低浓度的苯丙氨酸(<0.05 mmol/L)有利于紫杉醇积累。在此基础上进行了30 L罐发酵试验,得优化培养基配方(g/L):大豆蛋白胨20,工业酵母抽提物5,氯化钠0.5,氯化钾0.1,葡萄糖4,氯化镁1,乙酸钠0.1,苯丙氨酸5×10-4;pH 6.5。发酵培养条件:接种量5%,发酵温度22℃,通气速率0.17 vvm,转速50 r/min,发酵时间60 h。在此条件下,30 L发酵罐中紫杉醇的产量为102 g/L。     

乳糖诱导表达重组人甲状旁腺激素rhPTH(1-34)

目的研究以乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组人甲状旁腺激素的可行性。方法对乳糖浓度、诱导时间及发酵培养方式进行研究,确定了乳糖诱导的最佳条件。结果 0.6%的乳糖诱导4 h,目的蛋白的表达量约占菌体总蛋白的56.8%,采取分批补料培养方式,5 L发酵罐中蛋白表达量达到42.6%。结论乳糖能作为诱导剂诱导rhPTH(1-34)在大肠杆菌中的表达。     

纤溶酶产生菌株BS-26的发酵工艺优化

目的对纤溶酶产生菌株BS-26发酵工艺进行优化。方法通过单因素试验和正交试验,确定了摇瓶发酵的最佳条件。结果该菌株产纤溶酶最佳的发酵条件为:3%糊精、1%酵母粉、0.02%CaCl2、0.07%MgSO4,初始pH7.0,接种量为6%,装液量为70/250(mL/mL),摇床温度37℃,转速180 r/min,发酵时间60 h,在该条件下产酶酶活可达593.03 U/mL,是原发酵培养条件下产酶活力的4.5倍。结论此发酵条件可以很好地提高纤溶酶的活力,为发酵规模的扩大奠定了基础。