柯萨奇-腺病毒受体在扩张型心肌病心肌中的表达及意义

目的探讨柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在扩张型心肌病(DCM)心肌组织中的表达及其在DCM发病中的意义.方法利用多聚酶链反应(PCR)技术检测20例原位异体心脏移植的DCM受体心肌组织以及5例正常对照心肌组织中柯萨奇B组病毒(CVB)、腺病毒(ADV)基因,采用免疫组化及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测心肌柯萨奇-腺病毒受体mRNA及蛋白表达水平.结果20例DCM心肌标本中,柯萨奇B组病毒阳性7例(柯萨奇病毒组),腺病毒阳性5例(腺病毒组);其余8例柯萨奇B组病毒、腺病毒均阴性(其它组),5例正常对照柯萨奇B组病毒、腺病毒也均为阴性.正常对照和其它组心肌中均无柯萨奇-腺病毒受体mRNA及蛋白表达,而在柯萨奇病毒组和腺病毒组其表达水平明显增加,但两组之间比较,差异无显著性.结论柯萨奇-腺病毒受体表达上调可能是导致柯萨奇病毒或腺病毒易感性增加,促使病毒性心肌炎向扩张型心肌病转化的重要原因.     

柯萨奇-腺病毒受体与病毒性心肌炎

柯萨奇 腺病毒受体是一种普通的存在于心肌细胞表面的病毒受体 ,作为柯萨奇病毒和腺病毒的共同受体 ,在它们感染心肌细胞的过程中起着关键性的作用。     

柯萨奇病毒-腺病毒受体与心血管疾病

柯萨奇病毒 (Coxsackievirus ,Cox V ,CV)和腺病毒 (adenovirus ,Adv)均为人类共同的致病因子。柯萨奇病毒是无衣壳的核糖核酸 (RNA)病毒 ,属于微小RNA病毒家族 ,可引起脑膜脑炎、胰腺炎 ,是儿童糖尿病的触发因子 ,也是在急性感染的心脏中分离出的最常见的病毒[1] ,有A、B、C、D、E、F六种血清型。腺病毒为无衣壳DNA病毒 ,可引起呼吸道、肠道感染 ,同样也引起心脏的感染。引起人类病毒性心肌炎 (viralmyocarditis,VMC)最常见的病毒包括B族柯萨奇病毒(CVB)和腺病毒。为何这两种结构完全不一样的病毒为VMC的共同致病因子 ,是长期…     

黄芪对病毒性心肌炎小鼠心脏柯萨奇病毒和腺病毒受体表达的影响

目的:研究黄芪对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心脏柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)表达的影响。方法:建立小鼠VMC模型,将120只小鼠随机分为3组:病毒组、治疗组和正常组。在感染病毒后第0、3、7、14天,无菌取出小鼠心脏分别用RT-PCR法半定量检测CAR的表达。结果:病毒组的CAR表达高于正常组,CAR表达高峰在柯萨奇病毒3型(CVB3)感染后第7天;黄芪治疗后的CAR表达明显降低(P<0.01)。结论:感染CVB3后,心脏组织CAR升高,黄芪可降低CAR的表达,从而减轻CVB3对心肌的损害。     

柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白在肺癌中的表达及其与临床病理因素及预后的关系

目的 探讨柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白在肺癌中的表达及其与临床病理因素及预后的关系.方法 选取支气管肺泡肺癌患者手术后病理切片100例作为观察组,非支气管肺泡肺癌患者病理切片40例为对照组1,肺部良性病变的病理切片40例为对照组2.通过免疫组织化学法检测柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白在良性病变肺组织、肺癌组织中以及不同组织学中的表达情况.对比柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白的表达情况与临床病理特征之间的关系,分析柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白表达与患者生存期的相关性.结果 柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白在良性病变肺组织呈灶性分布,在肺癌组织中呈弥漫性分布.对照组2中柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白阳性表达率(5％)低于观察组(68％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 柯萨奇病毒-腺病毒受体蛋白的表达与肺癌的发展进程有关,且与所处类型(支气管肺泡癌)有一定的联系.     

心肌组织柯萨奇毒-腺病毒受体表达与病毒持续感染的关系

目的探讨心肌组织中柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)表达与病毒性心肌病发病的关系。方法应用免疫组化技术检测慢性心肌炎和扩张型心肌病(DCM)心肌组织中CAR的表达;应用巢式聚合酶链反应检测相应心肌组织中柯萨奇B组病毒(CVB)RNA和腺病毒(AV)DNA,并以冠心病和先心病等非感染性心脏疾病心肌组织及意外事故死亡者正常心肌标本为对照组。结果26例心肌炎和39例DCM心肌组织中均检测到较高水平CAR表达(0.011 6±0.003 6),而对照组仅有较低表达(0.004 0±0.0025),两组比较差异有非常显著意义(P< 0.001)。心肌炎和DCM患者心肌中CVB RNA 阳性率分别为42%和35.9%(平均38.5%),AV DNA阳性率分别为15.4%和10.3%(平均12.3%),对照组14例均为阴性。心肌组织病毒核酸阳性者CAR免疫组化面积积分(0.013 1±0.003 4)较阴性者(0.010 1±0.003 0)明显增高(P< 0.001)。结论CAR在慢性心肌炎和DCM心肌组织中表达明显增高,心肌组织中CVB和AV感染与CAR表达上调相关,在慢性心肌炎和DCM的发病过程中可能起重要作用。     

原位逆转录PCR法检测心肌组织中的柯萨奇B3病毒RNA

目的　探讨柯萨奇B3病毒感染与心肌炎及扩张型心肌病的病原学关系。方法　应用生物素标记的核苷酸直接掺入法 ,建立了原位逆转录PCR反应技术 ,检测心肌炎、扩张型心肌病患者的心肌活检标本及正常心肌的尸检标本中的柯萨奇B3病毒。结果　 16例病理学及临床诊断为心肌炎患者的心肌组织中 ,7例检测到柯萨奇B3病毒RNA ;14例病理学及临床诊断为扩张型心肌病的患者心肌组织中 ,5例检测到柯萨奇B3病毒RNA ;16例正常心肌标本中检测结果均为阴性。结论　部分心肌炎及扩张型心肌病患者心肌组织中存在柯萨奇B3病毒RNA ,提示柯萨奇B3病毒感染与部分心肌炎及扩张型心肌病的发病有关。     

低硒小鼠柯萨奇B组病毒重叠感染与心肌损伤关系的研究

目的 探讨Se缺乏、CVB4、CVB3m重叠感染与心肌损伤的关系。方法 采用低Se及相对低蛋白合成饲料、饮用含Se元素水与不含硒的水的方法,饲养小鼠及其所产的幼鼠,于出生7d,幼鼠先后感染CVB4,CVB3m,2型病毒感染间隔为7d,感染CVB3m病毒后7、14、21d分别处死小鼠,取心脏做光镜、电镜检测。结果 Se缺乏组小鼠,心肌可见轻度损伤,心肌细胞色素氧化酶活力下降。病毒感染7d后,低Se 病毒组小鼠与补Se 病毒组小鼠比较,低硒病毒组血清CVB3m抗体效价1:256,补硒病毒组中和抗体效价为1:512,低硒组感染病毒的毒力增加,心肌中病毒分离滴度低硒组明显高于补硒组,心肌细胞色素氧化进一步下降,心肌损伤检出率达63.6%,心肌变性坏死的数量多,损伤面积大。结论 Se缺乏是克山病心肌损害因素之一,而柯萨奇B组2型病毒重叠感染在克山病心肌损伤过程中的作用也不能忽视。硒具有某种程度的抗病毒作用或抑病毒作用。     

腺病毒载体在小鼠肝脏的分布及其表达规律研究

目的研究腺病毒载体介导的β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因在小鼠肝脏的分布及表达情况,评价腺病毒载体作为基因治疗转导系统的有效性及安全性,为进一步的目的基因导入及表达奠定基础。方法将Balb/cJ小鼠随机分为正常组及暴发性肝炎组,给小鼠经尾静脉注射2×108PFU腺病毒,收集24h、48h、72h、96h、120h和第7天小鼠血清,检测谷丙转氨酶和总胆红素,同时取肝脏、肺脏、心脏、肾脏标本进行X-gal染色,以观察腺病毒载体在各脏器的表达情况。取MHV-3诱导的暴发性肝炎组小鼠24h、48h、72h、96h肝脏,检测腺病毒载体在肝脏的表达情况。结果腺病毒载体主要在小鼠肝脏表达,并于72小时表达最高,在正常小鼠及暴发性肝炎小鼠肝脏中表达效率分别约55.7%和25.7%,之后逐渐消减;正常组小鼠注射腺病毒载体后,肝功能无明显变化。结论腺病毒载体介导的报告基因可在肝脏高效表达且未见明显的肝损害,可作为基因治疗中安全有效的基因传递系统用于治疗肝脏疾病。     

柯萨奇B3m病毒致小鼠急性心肌损伤的双向凝胶电泳分析

目的建立双向凝胶电泳体系分析柯萨奇B3m病毒(CVB3m)致小鼠急性心肌损伤过程中的蛋白质组差异,探讨CVB3m致心肌损伤的机制。方法分别提取感染CVB3m第0,4,8及21天的BALB/C鼠心肌组织总蛋白,采取固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白,用Image Master软件进行图像分析。结果心肌组织总蛋白平均抽提浓度为13.9 g/L;获得正常小鼠和急性CVB3m感染鼠不同感染时期(第4,8和21天)心肌组织双向电泳凝胶图谱,图像分析4块胶平均蛋白点数为(792±32)个,匹配率为61.25%±6.25%。随机选定不同感染时期的8个差异表达的蛋白质点,得到了表观相对分子质量和表观等电点等一系列数据。结论获得了CVB3m致小鼠急性心肌损伤的双向凝胶电泳图谱,建立了该模型的蛋白质双向凝胶电泳数据库,有利于该病毒引起小鼠心肌损伤机制的进一步研究。     

柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌硫氧还蛋白的表达

目的研究硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)在柯萨奇B3病毒感染小鼠心肌炎模型中表达的变化,探讨Trx在病毒性心肌损伤中的作用。方法建立柯萨奇B3病毒感染鼠心肌炎模型,采用光镜检测心肌形态改变,应用RT鄄PCR技术比较接种病毒后不同时间点(7,14,21d)TrxmRNA表达变化。结果7d时心肌病损严重;14d时部分心肌病损开始修复;21d时心肌修复较完全。接种病毒后21d时,硫氧还蛋白mRNA表达与对照组比较明显上调(P<0.01),7d和14d时同对照组相比表达无显著性差异(P>0.05)。结论在急性柯萨奇B3病毒性心肌炎中,Trx可能被急性炎症刺激素特异地诱导,在疾病的后期TrxmRNA表达上调,促进心肌修复,提示适当剂量的Trx可能对急性柯萨奇B3病毒性心肌炎有潜在治疗作用。     

CVB3m对免疫功能低下小鼠心肌损伤的病理观察

目的 观察免疫功能低下小鼠感染ＣＶＢ３ｍ后心肌损伤的特点。方法 雄性昆明小鼠随机分成４组,１对照组;Ⅱ照射组;Ⅲ病毒组;Ⅳ照射＿病毒组。照射组４ＧｙＸ－射线全身照射;病毒组常规腹腔接种ＣＶＢ３ｍ;照射＋病毒组先照射,丁照射后次日接咎ＣＶＢ３ｍ。观察各组小鼠接种病毒后第３、７、１４、２１天心肌光镜改变,及第１４天心肌电镜改变。结果 病毒组小鼠注射病毒后第７在,病变最重,病毒性心肌炎（ＶＭＣ）检出率为     

原位PCR法对围生期心肌病柯萨奇B组病毒的检测

目的 :探讨围生期心肌病的病因。方法 :应用原位 PCR法对 2例 1 4、1 5年前临床诊断为围生期心肌病患者的心肌活检的石蜡切片进行柯萨奇 B组病毒 ( CVB)的检测。结果 :2例患者的心肌活检组织中 CVB- RNA均显示阳性信号。结论 :CVB感染可能是围生期心肌病的病因之一。     

替米沙坦对ApoE基因缺陷小鼠单核细胞Toll样受体4表达的影响

目的 通过观察替米沙坦对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,探讨替米沙坦在AS治疗中的炎性机制. 方法 AS模型采用高脂餐喂养的ApoE基因缺陷小鼠.替米沙坦干预组在高脂餐喂养基础上给予替米沙坦.8周后,测定单纯高脂饮食组和替米沙坦干预组血清低密度脂蛋白、三酰甘油、总胆固醇水平,并应用流式细胞仪检测两组小鼠外周血单核细胞表面TLR4的表达. 结果 两组小鼠血脂水平无统计学差异.与单纯高脂饮食组相比,替米沙坦干预组小鼠TLR4表达明显降低(P＜0.05). 结论 替米沙坦可降低TLR4表达而干预其在AS进程中介导的炎性反应.     

柯萨奇B2病毒致低硒乳鼠心肌细胞凋亡及其调控的实验研究

目的 观察低硒条件下野毒株柯萨奇B2病毒(CVB2)感染对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及调控。方法 应用低硒合成饲料(含硒0．016mg／kg)喂养昆明鼠5周后交配，取其子代7日龄乳鼠经腹腔注入10^7 TCID50 CVB2 0．1ml，9d后处死，取其心脏。TUNEL法检测心肌细胞凋亡的发生情况，免疫组化方法对凋亡相关基因蛋白的表达情况进行检测。结果 补硒病毒组和低硒对照组乳鼠心肌均可检测到凋亡细胞，而补硒对照组和低硒病毒组未见细胞凋亡发生。各组乳鼠C-myc、Bcl-2、p53以及TGFβ-1蛋白表达异常。结论 低硒和病毒分别作用均可引起乳鼠心肌细胞发生凋亡。低硒条件下感染CVB2(野毒株)不能引起心肌细胞发生凋亡。     

应用嗜鼠心肌CoxsackieB3病毒反复感染致BALB／c小鼠心肌损伤

应用嗜鼠心肌ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠重复腹腔注射，连续３次，间隔３０天，末次注射后１０天处死小鼠。光学显微镜检查发现，小鼠心肌可见不同时期的病灶（坏死灶、瘢痕），心肌损伤检出率达１００％。应用ＴＵＮＥＬ法检测发现，８２．５０％感染组鼠心肌中可见散在心肌细胞凋亡，与对照组（２３．０８％）比较，Ｐ＜０．０１，有极显著性差异。提示ＣＶＢ３ｍ重复感染可致ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠慢性心肌损伤，心肌细胞凋亡参与心肌损伤的发生与发展。     

病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化

目的观察实验性病毒性心肌病小鼠心肌线粒体基因表达变化情况,探讨线粒体基因表达变化在病毒性心肌病中的发病作用。方法用柯萨奇病毒B3m反复增量感染Balb/c小鼠,建立心肌病动物模型,用包容35 852条基因的cDNA微矩阵芯片分析心脏组织特异的mRNA表达,筛选出明显差异表达的线粒体相关基因。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察心肌细胞凋亡情况。结果共有31个心肌病小鼠心肌线粒体能量代谢相关基因、心肌细胞线粒体凋亡及相关调节基因明显差异表达。心肌病小鼠心肌细胞凋亡的数目明显高于对照组(t=8.85,P<0.01)。结论心肌线粒体功能受损伴有心肌细胞凋亡发生是病毒性心肌病的重要发病机制。