他莫昔芬对人肝癌HepG2细胞增殖和Smad7表达的影响

目的研究他莫昔芬（TAM）对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法将他莫昔芬配制为0、7.5、l5、30?μmol／L,与人肝癌HepG2细胞培养24、48、72?h,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定人肝癌HepG2细胞的抑制率;免疫组化染色观察人肝癌HepG2细胞Smad7蛋白的阳性表达。结果人肝癌HepG2细胞增殖随他莫昔芬浓度增加和处理时间的延长,细胞抑制率明显增加,细胞浆内Smad7蛋白阳性表达率明显降低,与时间和浓度呈负相关。结论他莫昔芬可抑制肝癌细胞增殖,可能与下调Smad7蛋白的表达有关。     

苦参素促进肝癌HepG2细胞凋亡及其分子机制

目的研究苦参素抑制人肝癌细胞的增殖与促进细胞凋亡的作用及其可能的分子机制。方法体外培养人肝癌细胞HepG2,MTT法检测浓度分别为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的苦参素作用HepG2细胞24h、48h、72h后的细胞增殖抑制率;选择合适浓度(0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml)苦参素作用HepG2细胞48h后,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡率,real-time qRT-PCR法检测促凋亡蛋白Bim mRNA表达变化。结果MTT结果显示,0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml苦参素作用HepG2细胞不同时间后,各组细胞增殖均受到抑制,且呈浓度依赖性,各组间差异有统计学意义(P<0.001)。经0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml苦参素作用后,各实验组HepG2细胞凋亡率增加,促凋亡蛋白Bim mRNA表达增加,与阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论苦参素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡,其分子机制可能与提高促凋亡蛋白Bim的表达有关。     

AMD3100对人肝癌HepG2细胞增殖与AFP表达的抑制作用

目的：检测AMD3100对人肝癌HepG2细胞增殖及其与甲胎蛋白（alphafetoprotein,AFP）表达的影响并探讨其意义。方法：显微镜观察不同浓度AMD3100对人肝癌HepG2细胞生长的影响;MTT法检测不同时间AMD3100对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,用Westernblotting分析不同浓度AMD3100干预前后AFP、CxCR4的表达变化。结果：AMD3100对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用,且随着浓度的增加抑制作用越明显;给AMD3100处理后HepG2细胞的CXCR4和AFP表达明显减弱。结论：AMD3100对HepG2细胞的增殖有抑制作用,这种作用很可能与抑制AFP的表达有关。     

辣椒素对肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨辣椒素对肝癌HepG2细胞生长抑制及凋亡诱导作用的机制。方法:以100、200、400μmol/L浓度辣椒素处理肝癌HepG2细胞后分别培养12、24、48 h,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:随着作用浓度及时间增加,经辣椒素处理的肝癌HepG2细胞增殖活性明显降低(P<0.01);抑制率均显著增加,呈浓度和时间依赖性(P<0.01);HepG2细胞凋亡率也随辣椒素浓度增加而上升;凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,Bax、Bad表达上升(P<0.05)。结论:辣椒素对肝癌HepG2细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500 μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoisomerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500 μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100 μg/ml和500 μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

低氧条件下三氧化二砷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡作用

目的：探讨低氧条件下三氧化二砷（As2O3）诱导人肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法：分别在常氧和低氧（CoCl2 200μmol/L）条件下以2、4、8μmol／LAs2O3作用人肝癌Hep岛细胞,24、48、72小时后以MTr法检测细胞增殖抑制率,以AnnexinV／PI双染色法流式细胞仪检测细胞凋亡,分析两种条件下As2O3对细胞增殖抑制率和凋亡率的影响。结果：常氧及低氧条件下细胞增殖抑制率,细胞早期凋亡率均随As2O3浓度增加及作用时间延长而升高（P〈0．05）。相同浓度As2O3相同作用时间,低氧条件下细胞增殖抑制率及凋亡率升高更为明显。结论：在低氧条件下As2O3促进细胞凋亡,抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用显著增强。     

聚桂醇对人肝癌HepG2细胞增殖及迁移影响的体外研究

目的体外探讨聚桂醇对人肝癌HepG2细胞的生长、迁移影响及血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控。方法应用MTS比色法观察不同浓度的聚桂醇对人肝癌细胞系细胞的生长抑制作用,并观察细胞在各时间点的抑制率;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力的变化;用细胞划痕实验观察对肝癌细胞迁移的影响;Western blot检测VEGF蛋白的表达变化。结果聚桂醇以剂量依赖的方式抑制HepG2细胞生长,0、20、40、60及80μg/ml聚桂醇对肝癌细胞的生长抑制率分别为0、26.78%、35.37%、51.52%和67.15%(P<0.05);聚桂醇能抑制肝癌细胞的克隆形成、迁移及VEGF蛋白表达,且抑制VEGF蛋白表达跟作用时间呈正相关。结论聚桂醇能抑制肝癌细胞增殖及迁移,影响VEGF蛋白表达。     

DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响.方法：采用MTT、细胞计数检测DADS对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响;应用流式细胞仪检测DADS对HepG2细胞周期和细胞凋亡率的影响.结果：DADS使细胞增殖明显受抑制且抑制率呈药物浓度时间依赖性（P＜0.05）,DADS组细胞的倍增时间延长（P＜0.05）.与对照组比较DADS处理组G2/M期细胞比例显著增加,而G0/G1期细胞比例则明显下降,细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）.结论;DADS对人肝癌细胞株具有抗增殖作用,且与药物浓度及作用时间相关.DADS能阻滞细胞周期在G2/M期,并诱导细胞凋亡.     

FKBP51表达降低促进雌激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药机制初探

目的:初步探讨FK506结合蛋白51（FKBP51）在雌激素受体阳性（ER+）乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及分子机制。方法:采用ER+人乳腺癌MCF-7细胞建立对他莫昔芬耐药的MCF-7/TAMR细胞,MTT法检测他莫昔芬对MCF-7和MCF-7/TAMR细胞增殖的影响。Western blot检测FKBP51和蛋白激酶B（AKT）信号通路中相关蛋白在MCF-7和MCF-7/TAMR细胞中的表达情况。通过敲低或者过表达FKBP51,观察FKBP51对ER+乳腺癌细胞耐药性及AKT信号通路的影响。在ER+人乳腺癌组织标本中验证FKBP51表达情况。结果:成功建立MCF-7/TAMR细胞株。他莫昔芬对MCF-7和MCF-7/TAMR细胞增殖的抑制率均呈剂量依赖性,且对MCF-7细胞增殖的抑制率高于MCF-7/TAMR细胞（P<0.05）。Western blot结果显示,FKBP51在MCF-7/TAMR细胞中的表达低于MCF-7细胞,并且其表达水平的降低激活AKT信号通路的活性,促进乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药。同时,FKBP51在ER+他莫昔芬耐药人乳腺癌组织中表达水平低于他莫昔芬敏感人乳腺癌组织。结论:FKBP51表达水平降低促进ER+乳腺癌患者对他莫昔芬耐药,可能与激活细胞内AKT信号通路有关。     

氯喹通过miR-26b调控Mcl-1诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨氯喹对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用及其可能机制。方法选择浓度10、20、40、80、160 μmol/L的氯喹处理细 胞,MTT法检测氯喹对HepG2细胞的增殖抑制作用。试剂盒检测胞内ATP水平,PI单染检测细胞凋亡情况,此外,使用PCR检 测miR-26b水平,Western blot检测Mcl-1蛋白的表达。结果氯喹在10~160 μmol/L浓度范围内对HepG2细胞具有显著的增殖 抑制作用,在80 μmol/L氯喹的作用下24、48、72 h的存活率分别为（71.59±0.2）%、（45.40±0.5）%、（26.34±1.4）%,随浓度增加抑 制率也逐渐增加。同时,随着氯喹浓度的增加,ATP水平相应降低。氯喹在10~160 μmol/L浓度范围内,PI单染检测结果显示早 期凋亡率逐渐增加,转染miR-26b抑制剂可降低氯喹诱导的凋亡率。PCR检测结果表明,给予80 μmol/L氯喹作用后,miR-26b 的表达明显升高,Western blot检测Mcl-1蛋白的表达水平降低,转染miR-26b的抑制剂后表达升高。结论氯喹能诱导肝癌细 胞HepG2凋亡,且呈浓度依赖性,其机制可能是通过miR-26b靶向调控Mcl-1的表达实现的。     

双氯芬酸抑制肝癌细胞增殖和促进环氧合酶-2 mRNA作用的表达

目的 观察环氧合酶抑制剂双氯芬酸钠对体外培养的肝癌细胞HepG2、Hep3B和正常肝细胞系QSG-7701增殖的作用以及药物对环氧合酶-2（COX-2）mRNA表达的影响,探讨COX-2与肝癌细胞增殖的关系。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞计数法测定药物作用24、48、72h后细胞增殖活性,半定量逆转录聚合酶链反应检测各种细胞系COX-2 mRNA的表达水平以及药物作用对基因表达的影响。结果双氯芬酸在10～200μmol/L浓度依赖性地抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖,50μmol／L作用48h后抑制率分别为40．47％和54．49％,半数抑制浓度分别为70．54和48．39μmol／L。双氯芬酸对正常肝细胞株QSG-7701的抑制作用较弱,作用48h的半数抑制浓度为189．91μmol／L。HepG2、Hep3B细胞均表达COX-2 mRNA,QSG-7701细胞几乎不表达COX-2 mRNA。双氯芬酸和化疗药5-氟尿嘧啶均可增强HepG2和Hep3B细胞COX-2 mRNA的表达。结论 双氯芬酸特异性地抑制表达COX-2的肝癌细胞HepG2和Hep3B的增殖,并且诱导COX-2 mRNA表达上调,提示COX-2在肝癌细胞增殖中具有重要意义。     

钙敏感受体在3,3′-二吲哚甲烷抑制肝癌细胞增殖与迁移侵袭中的作用

目的:探讨钙敏感受体（calcium-sensing receptor,CaSR）在3,3′-二吲哚甲烷(3,3′-diindolylmethane, DIM)对肝癌细胞增殖、迁移与侵袭影响中的作用。方法:采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）DIM分别处理人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞24 h,采用MTT法检测肝癌细胞增殖能力,蛋白免疫印迹法检测CaSR蛋白表达,筛选合适的DIM浓度,Transwell法检测DIM对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。另将HepG2和SMMC-7721细胞分为4组:对照组、60 μmol/L DIM组、300 μmol/L氯化钆（CaSR激动剂）组及氯化钆+ DIM组（用300 μmol/L氯化钆预处理细胞0.5 h,再与60 μmol/L DIM共处理24 h）,评价细胞增殖、CaSR蛋白表达以及细胞迁移和侵袭能力。结果:与对照组相比,60 μmol/L和40 μmol/L DIM处理后可分别显著抑制HepG2和SMMC-7721细胞增殖能力（P均<0.05）,降低两株细胞CaSR蛋白表达量（P均<0.05）；DIM抑制两株细胞迁移和侵袭能力呈效应剂量关系；与60 μmol/L DIM组相比,300 μmol/L氯化钆+60 μmol/L DIM组细胞CaSR蛋白表达、增殖、迁移和侵袭能力均明显升高（P<0.05）。结论:激活CaSR可以缓解DIM引起的抗肝癌效应,提示CaSR可能是DIM抗肝癌作用的潜在靶点。     

Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法:给予不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L)的Exendin-4刺激HepG2,使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:Exendin-4在0.1、1.0nmol/L水平对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,在10.0、100.0nmol/L水平有明显促进增殖作用,差异具有统计学意义(P<0.05),呈现出浓度、时间依赖性地促进HepG2的增殖,并且随着Exendin-4水平的增加,HepG2G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05)。结论:Exendin-4在低浓度时对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,但浓度增加到一定水平时具有促进增殖作用,且呈现时间依赖性促进H epG2的增殖效应。     

IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用

目的探讨IGF-ⅠR信号通路在西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖中的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5～500)mg/mL、胰岛素样生长因子(IGF)(2.5～250)μmol/L及其抑制剂aIR3(2.5～250)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察IGF与aIR3对西妥昔单抗抗HepG2增殖的影响。结果细胞培养72 h后,单药西妥昔单抗对HepG2细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,西妥昔单抗联合aIR3组增殖抑制率在相应浓度下均显著高于同浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01),IGF(10～250)μmol/L与西妥昔单抗(20～500)mg/mL联合组增殖抑制率均显著低于相应浓度的西妥昔单抗组(均为P<0.01)。结论 IGF-ⅠR通路可影响西妥昔单抗抗HepG2细胞增殖的作用,可能是肝癌细胞株对西妥昔单抗耐药的机制之一。     

姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910增殖和凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对体外培养人卵巢癌HO-8910细胞增殖和凋亡的影响。方法:选用人卵巢癌细胞株HO-8910进行体外培养至对数生长期,以0~80μmol/L姜黄素(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)分别处理HO-8910细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞凋亡率的影响;免疫组化法检测PCNA在细胞中的表达,评价细胞的增殖状态。结果:姜黄素对HO-8910细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。姜黄素作用24h随浓度的升高PCNA阳性表达逐渐降低。流式细胞仪分析证实随着浓度的升高细胞凋亡率和膜受损率均提高。结论:姜黄素对人卵巢癌细胞株HO-8910的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡。     

低剂量阿司匹林诱导产生的自噬减弱其对人肝癌HepG2细胞系的抑制作用

目的 研究一定浓度的阿司匹林对人肝癌HepG2细胞系的增殖抑制作用及产生抑制作用可能的原因.方法 采用MTT法和平板克隆实验研究阿司匹林对人肝癌HepG2细胞增殖活力的影响.吖啶橙荧光染色法观察阿司匹林对人肝癌HepG2细胞内自噬小体的影响.Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在人肝癌HepG2细胞中的表达.结果 10 mmol/L浓度的阿司匹林能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖活力,但增加HepG2细胞中自噬小体的数量,增加AMPK表达,降低 mTOR的表达,且和40 μm自噬抑制剂氯喹(CQ)联合使用时,CQ能够增强10 mmol/L浓度阿司匹林对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用.结论 联合自噬抑制剂CQ减弱浓度为10 mmol/L的阿司匹林诱导产生的自噬从而明显增强其抗HepG2作用.     

重楼水提物对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨重楼水提物对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡的影响.方法 以体外培养的肝癌HepG2细胞为研究对象,MTT法检测重楼对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪Annexin V/PI 双染法检测重楼对其凋亡的影响,ELISA法检测Bcl-2、Bax 蛋白表达的情况.结果 不同浓度重楼水提物能有效抑制HepG2细胞的增殖,且呈时间及浓度依赖性,作用效果在12 μg/ml时抑制效果最好（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2细胞24 h、48 h后,结果表明HepG2随着重楼水提物作用时间的延长,细胞凋亡率增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）.12 μg/ml重楼水提物作用HepG2 细胞24 h后,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 重楼水提物能抑制HepG2细胞的体外增殖,抑制作用表现出时效关系,其机制可能与促进细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达、增加Bax蛋白表达有关.     

ZD6474对肝癌细胞和乙肝相关肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨ZD6474对肝癌细胞株HepG2和乙肝相关肝癌细胞株HepG2.2.15细胞增殖的影响.方法:用WST方法检测ZD6474对细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测ZD6474对细胞周期及凋亡的影响.结果:ZD6474可以显著抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖,6.4 μmol/L的ZD6474可以抑制(46.86±10.32)％的HepG2和(41.24±7.35)％的HepG2.2.15细胞增殖,其抑制增殖作用随剂量增加而增强(P＜0.05).ZD6474诱导细胞产生G0/G1期阻滞,6μmol/L的ZD6474可诱导71.90％的HepG2和69.90％的HepG2.2.15细胞阻滞于G0/G1期.结论:ZD6474可以抑制HepG2和HepG2.2.15细胞增殖,其机制可能与诱导细胞周期阻滞有关.