氨氯地平对2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax和bcl-2表达的影响

目的探讨钙通道阻滞药氨氯地平(amlodipine)对实验性2型糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及调控基因bax,bcl-2的影响,以及其防治糖尿病肾病的可能机制.方法通过高糖高脂膳食喂养SD雄性大鼠,诱发胰岛素抵抗,再注射小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发高血糖,复制实验性2型糖尿病大鼠模型.实验分为 3组,对照组、糖尿病组和氨氯地平治疗组.分别于注射STZ第8和12周后各取6只大鼠,光镜观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测大鼠肾组织bcl-2以及bax表达,流式细胞术检测大鼠肾组织细胞凋亡率及bcl-2、 bax表达.结果糖尿病组肾小球系膜基质增生,基底膜增厚及细胞外基质堆积;少部分肾小管轻度萎缩或管腔扩张,上皮细胞肿胀,胞浆内可见小脂肪空泡.流式细胞术结果显示:糖尿病组肾小球及肾小管凋亡率高于其他各组,治疗组肾小球及肾小管凋亡率与糖尿病组比较降低,且有统计学意义(P<0.05).免疫组织化学结果显示:bcl-2与bax在各组均有不同程度表达,糖尿病组bcl-2与bax表达增强,治疗组与糖尿病组比较bcl-2表达增强,bax表达减弱.结论细胞凋亡及相关基因 bcl-2/bax参与了糖尿病肾病的发病;氨氯地平可以通过bax表达下降、bcl-2 表达增加使肾脏细胞凋亡率减少从而达到保护肾脏的作用.     

糖尿病结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2及caspase-3的表达

目的:探讨糖尿病(DM)结肠动力障碍大鼠远端结肠平滑肌细胞凋亡基因的表达。方法:雄性SD大鼠18只应用链脲佐菌素40mg/kg尾静脉注射后成功建立DM结肠动力障碍大鼠模型,分为模型6周和10周组;另18只分为正常对照6周和10周组,各组9只大鼠。应用实时荧光定量PCR检测各组大鼠远端结肠平滑肌细胞的bax、bcl-2和caspase-3mRNA表达,采用免疫组化SP法检测其蛋白的表达。结果:不同组别和作用时间各组大鼠远端结肠平滑肌细胞bax、bcl-2、caspase-3mRNA和蛋白的表达差异均有统计学意义(P均<0.001),模型组与同一时间点正常对照组以及模型10周组与6周组大鼠比较,远端结肠平滑肌细胞bax和caspase-3mRNA和蛋白的表达增强,bcl-2mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:远端结肠平滑肌细胞凋亡基因bax、bcl-2及caspase-3表达的改变可能是DM大鼠结肠动力障碍发病机制之一。     

灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜VEGF表达的影响

目的 检测灯盏花素对实验性糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长冈子(VEGF)表达的影响,探讨灯盏花抑制糖尿病视网膜病变的可能机制.方法 采用链尿佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,将动物随机分为糖尿病组(10只×2)和注射用灯盏花素治疗组(10只×2),另取等量正常大鼠做对照组.治疗组在出现糖尿病表现后按每日20 mg/kg腹腔注射灯盏花素溶液,糖尿病组和对照组同期注射等量生理盐水.注射后2、8周取左眼视网膜行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),右眼行免疫组化分别观察VEGF mRNA和蛋白的变化.结果 2周糖尿病组VEGF mRNA较对照组明显增加(P<0.05),蛋白表达无明显变化;灯盏花素治疗组VEGF较糖尿病组无明显变化.8周糖尿病组VEGF mRNA和蛋白表达均较2周时明显增加(P<0.05),而治疗组两者较糖尿病组明显减少(P<0.05).结论 灯盏花素明显抑制糖尿病大鼠视网膜VEGF表达,提爪灯盏花素nf能通过降低糖尿病大鼠视网膜VEGF而缓解其糖尿病视网膜病变.     

灯盏花素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾功能的影响

目的：观察灯盏花素对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠肾功能的影响。方法：雄性SD大鼠27只,随机分为正常对照组（C组）、糖尿病模型组（D组）、糖尿病灯盏花素治疗组（DD组）各9只。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,DD组每天给予灯盏花素20mg（/kg.d）灌胃,8周后测定三组大鼠血糖、血尿素氮、血肌酐。摘取左肾称重,右肾浸泡于4%中性福尔马林溶液中,常规HE染色,光镜下观察形态学改变。结果：成模8周时,D组大鼠的体重、血糖与C组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）,DD组与D组大鼠的血糖及体质量比较,差异无统计学意义（P〉0.05）;D组肾脏肥大指数、血尿素氮、肌酐升高,与C组大鼠比较差异有统计学意义（P〈0.01）;DD组经灯盏花素治疗8周后,血肌酐下降,但与D组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,尿素氮下降,差异有统计学意义（P〈0.01）。肾组织HE染色显示,DD组大鼠肾小球体积较D组有所减小,血管襻开放。结论：灯盏花素不能降低糖尿病大鼠血糖,但能降低大鼠血尿素氮水平,对糖尿病大鼠肾功能有一定保护作用。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾皮质糖基化终产物受体mRNA表达的影响

目的探讨灯盏花素对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾皮质RAGE表达水平的影响。方法雄性SD大鼠27只,随机分为3组。STZ腹腔注射建立糖尿病模型后,糖尿病灯盏花素治疗组(DD组)每日给予灯盏花素[20mg/(kg.d)]灌胃,8周后取肾脏组织行半定量RT-PCR检测RAGE mRNA的表达水平,与正常对照组(C组),糖尿病安慰剂组(D组)比较。结果成模8周时,糖尿病大鼠的体重、血糖与正常组相比有显著性差异(P<0.01),DD组与D组的血糖及体重无显著性差异(P>0.05);DD组、D组和C组的RAGE OD值/β-actin OD值分别为0.452±0.208,0.769±0.104,0.218±0.032,各组间RAGE表达有显著性差异(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肾皮质RAGE mRNA表达明显高于正常对照组。灯盏花素能下调肾皮质RAGE的表达水平,对糖尿病肾病具有一定治疗作用。     

前列地尔调节Bc1-2,Bax抑制大鼠糖尿病肾病肾小管细胞凋亡

目的 探讨前列地尔对大鼠糖尿病肾病（DN）肾小管细胞凋亡及蛋白Bc1-2/Bax表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠30只随机抽取10只作为正常对照组,余20只制备成糖尿病大鼠模型,并将成模大鼠随机分为糖尿病组和前列地尔组.16周后取大鼠肾脏皮质,免疫组化法检测肾脏组织Bc1-2/bax蛋白表达,TUNEL检测肾脏细胞的凋亡.结果 与正常对照组相比,前列地尔组和糖尿病组Bc1-2和bax表达水平均升高,Bc1-2/bax比值降低,肾小管细胞凋亡指数增加（P＜0.05）.与糖尿病组比较,前列地尔组Bc1-2表达量及Bc1-2/bax比值升高,bax蛋白含量和肾小管细胞凋亡指数降低（P＜0.05）.结论 前列地尔可通过调节DN肾脏组织中Bc12,bax的表达,发挥对肾脏的保护作用.     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌组织凋亡的影响

目的探讨白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化兔心肌组织线粒体途径凋亡的影响。方法健康雄性新西兰白兔70只,随机分为5组：正常组、病理对照组、病理＋低剂量Res组（4 mg·kg^-1·d^-1）,病理＋中剂量Res组（8 mg·kg^-1·d^-1）、病理＋高剂量Res组（16 mg·kg^-1·d^-1）。分笼饲养12周后,取左心室尖部心肌组织。H-E染色观察心肌组织形态学改变,原位末端标记法检测心尖部细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测bax、bcl-2的mRNA变化。结果H-E染色下各组细胞形态学改变不明显;病理对照组细胞凋亡指数高于正常组（P〈0.01）和Res干预组（P〈0.01）,Res作用下凋亡指数下降呈剂量依赖性（P〈0.05）;病理对照组bax、bcl-2mRNA表达量较正常组升高（P〈0.01）,而加入Res干预后,bax的表达量明显下降,bcl-2表达升高（P〈0.01）。结论Res可以减少促凋亡基因bax的表达,增加抗凋亡基因bcl-2的表达,降低Bax/bcl-2比值,抑制心肌细胞的凋亡。     

凋膜止崩方对无排卵型功能失调性子宫出血大鼠模型子宫内膜细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的观察凋膜止崩方对无排卵型功能失调性子宫出血（ADUB）大鼠模型子宫内膜细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax表达的影响,探讨凋膜止崩方治疗ADUB子宫内膜增生症的机制。方法采用去势大鼠雌激素负荷法建立ADUB模型,随机分成空白组、模型组、实验小剂量组和实验大剂量组共4组。造模成功后第3天,宫腔注药处死,采用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测bcl-2、bax基因的表达。结果（1）模型对照组与空白组相比,凋亡指数增高（P〈0．05）;大、小剂量组与模型组相比,凋亡指数均明显升高（均P〈0．05）;大、小剂量组问差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）模型组与空白组相比,bcl-2表达明显升高,而bax表达降低,bcl-2／bax比值显著升高（均P〈0．05）。（3）实验大、小剂量组与模型组相比,bcl-2表达明显降低,bax表达明显升高,bcl-2／bax比值显著下降（均P〈0．05）。结论凋膜止崩方能够降低bcl-2mRNA的表达,而增强baxmRNA的表达,通过下调bcl-2／bax比值,诱导过度增生的子宫内膜细胞凋亡可能是其发挥祛除子宫内膜作用的分子机制。     

褪黑素对糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用

目的 探讨褪黑素对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法 将实验动物随机分为正常对照组（C组）、糖尿病组（D组）及糖尿病褪黑素治疗组（M组）。给予褪黑素治疗4周。检测血糖、血肌酐、肾脏肥大指数（肾重／体重），放免法测定24h尿白蛋白排泄量，对肾脏标本进行光镜观察，用图像分析仪测量各组大鼠平均肾小球面积、平均肾小球体积。同时用实时荧光定量RT-PCR法对糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA表达进行半定量分析。结果 褪黑素治疗组较糖尿病组24h尿白蛋白排泄量、肾脏肥大指数均明显下降（P〈0.05）。实时荧光定量RT-PCR检测糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1 mRNA表达明显高于正常对照组，为C组的9．2倍，给予褪黑素治疗后，糖尿病大鼠TGF-β1 mRNA表达水平下降3．95倍，但仍明显高于正常对照组（P〈0.01）。肾小球平均面积、平均肾小球体积M组显著低于D组（P〈0.01）。结论 褪黑素可抑制糖尿病大鼠肾脏皮质TGF-β1mRNA表达，减少糖尿病大鼠的尿白蛋白，减轻及延缓肾小球硬化，发挥保护肾脏的作用。     

异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 观察异丙酚对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞的凋亡和相关基因bcl-2、bax蛋白表达变化的影响。方法 取新生2～3d Wistar大鼠T12～L5脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（C组）、乳剂对照组（L组）、谷氨酸对照组（G组）、异丙酚对照组（P组）、谷氨酸和异丙酚合用组（GP1、GP2、GP3组）。加药后培养24h免疫细胞化学法观察bcl-2和bax蛋白平均吸光度（A）值及细胞形态学变化，流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率。结果 与C组比较，G组、GP。组细胞发生大量凋亡（均P〈0.01），bax蛋白阳性表达，bax蛋白A值升高（均P〈0.01），bcl-2蛋白阴性表达，bcl-2蛋白A值降低（均P〈0.01）。与G组比较，GP2组、GP3组凋亡降低（P〈0.05，P〈0.01），bcl-2蛋白阳性表达，bcl-2蛋白A值升高（P〈0.05，P〈0.01），bax蛋白阴性表达，bax蛋白A值降低（P〈0．05，P〈0.01）。结论 异丙酚通过增强bcl-2蛋白表达，显著抑制谷氨酸诱导的星形胶质细胞凋亡，其抑制程度与剂量有关。     

灯盏花对大鼠急性呼吸窘迫综合征细胞凋亡的影响

目的探讨灯盏花对大鼠急性呼吸窘迫综合征（ARDS）中细胞凋亡的作用及可能机制。方法建立大鼠在体ARDS模型,将32只大鼠按随机数字表法分为对照组（I组）、ARDS组（II组）、小剂量灯盏花组（III组,25mg／kg）和大剂量灯盏花组（IV组,50mg／kg）,检测各组肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,应用免疫组化法检测bcl．2蛋白含量,DNA缺口末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡,光镜下HE染色观察病理形态学改变。结果与II组比较,III、IV组SOD活性及bcl-2含量明显增高,MDA含量、凋亡指数均明显降低,肺水肿程度显著减轻;III、IV组之间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论灯盏花对ARDS具有防治作用,其机制可能与抗氧化、抑制氧自由基释放、上调bcl-2基因表达,从而减轻肺细胞凋亡有关。大剂量比小剂量保护作用更显著。     

川芎嗪对糖尿病大鼠组织非酶糖化和视网膜细胞凋亡的影响

目的：观察非酶糖化与糖尿病视网膜细胞凋亡的关系以及非酶糖化抑制剂氨基胍和具有非酶糖化抑制作用的川芎嗪对糖尿病视网膜病变的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为4组,正常对照组、糖尿病组、糖尿病氨基胍（100mg· kg-1· d-1）治疗组、糖尿病川芎嗪（150mg· kg-1· d-1）治疗组,除正常对照组,其余实验组分别腹腔注射链脲佐菌素（60mg/kg）诱发糖尿病。16周后,处死大鼠,分离主动脉,测定组织非酶糖化,观察bcl-2,bax的表达,电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果①治疗16周结束,糖尿病各实验组大鼠体重低于正常对照组（P＜0．01）,糖尿病各实验组间体重比较差异无统计学意义（P＞0．05）。②糖尿病各实验组血糖水平高于正常对照组（P＜0．01）,氨基胍治疗组与川芎嗪治疗组血糖与治疗前比较,差异无统计学意义（P＞0．05）。③与正常对照组相比,糖尿病组非酶糖化明显升高（P＜0．01）,氨基胍治疗组、川芎嗪治疗组较糖尿病组非酶糖化降低（P＜0．01）。④透射电镜下见糖尿病组大鼠视网膜神经节细胞呈典型的凋亡形态学改变,氨基胍治疗组、川芎嗪治疗组大鼠细胞凋亡改变减轻。结论非酶糖化抑制剂氨基胍、川芎嗪抑制非酶糖化、抑制细胞凋亡,延缓糖尿病视网膜病变发展。     

中西医联合用药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的影响

[目的]观察不同治疗方法对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、糖尿病对照组、盐酸二甲双胍治疗组、中药治疗组和中西医联合用药组,小剂量两次腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠模型。中药治疗组和中西医联合用药组在造模前15天就进行预防性给药(以中药补肾通窍方煎剂灌胃)。西药组和中西医联合用药组在成模后给以盐酸二甲双胍给药。成模6W后将实验大鼠脱臼处死,取出眼球加入液氮磨碎,提取RNA,进行PCR电泳,再进行荧光PCR扩增,检测视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因表达的情况。[结果]中西医联合用药组大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax表达跟其它组比较具有显著性差异(P0.05),有统计学意义。[结论]中西医联合用药可以有效影响糖尿病大鼠视网膜神经节细胞bcl-2和bax基因的表达,从而抑制糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的凋亡。     

α-硫辛酸对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响研究

目的通过α-硫辛酸对糖尿病肾病模型大鼠肾组织转化生长因子（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响,研究其延缓肾脏纤维化的作用及机制,为临床防治糖尿病肾病提供实验依据。方法将健康SD大鼠50只,体重250～300 g,随机分为6组：①正常对照组;②糖尿病对照组;③α-硫辛酸15、30、60mg/（kg.d）。50只采用STZ 45 mg/kg造成糖尿病模型,10只用等量柠檬酸缓冲液腹腔注射,造成模型组,用α-硫辛酸给糖尿病模型组给予剂量。检测各组的大鼠血糖,血清肌酐,肾重指数,制备肾脏石蜡切片,测定肾小球体积（MGA）和计算肾小球平均体积（MGV）。比较MGA和MGV;用SureStep Plus型血糖仪于实验结束前检测空腹血糖;用Western-Blot法检测肾组织TGF-β1、CTGF的表达。结果 DM组大鼠血糖明显升高,血清肌酐无明显变化;与DM组相比,治疗组大鼠血糖,血清肌酐均无统计学意义;DM组大鼠肾重指数明显增加,光镜先显示：DM组的大鼠肾小球体积明显增大,肾小球HE染色区扩大,系膜区增宽,毛细血管管腔受压,肾小球基底膜增厚,α-硫辛酸治疗后上述异常均有不同程度的改善,但未恢复到正常状态图像显示;DM组肾小球平均面积（MGA）和肾小球平均体积（MGV）明显扩大,与其相比,治疗组有不同程度的缩小。结论α-硫辛酸通过抑制肾组织TGF-β1、CTGF的表达而发挥其抗纤维化的作用,从而延缓STZ糖尿病大鼠肾脏纤维化的发展。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2和C-IV表达的影响

目的探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶抑制因子．2（TIMP-2）和IV型胶原（C—IV）表达水平的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为3组：正常对照组（c组）,糖尿病未治疗组（DM组）,糖尿病苯那普利（10mg／kg）治疗组（DB组）。8周后,用免疫组化方法（SP法）和RT—PCR方法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2及C—IV的表达。结果DM组大鼠肾小球MMP-2蛋白、mRNA的表达较C组明显降低,TIMp-2及C—IV蛋白、mRNA明显升高,差异有高度统计学意义（P〈0．01）,出现糖尿病。肾病（DN）典型的病理改变。DB组MMP-2蛋白、mRNA较DM组表达明显升高（P〈0．01）、TIMP-2和C—IV表达较DM组明显降低（P〈0．01）,病理改变好转。结论苯那普利可能通过逆转糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、TIMP-2的表达,降低C—IV的堆积,对糖尿病肾病（DN）起保护作用。     

活性维生素D3抗炎机制对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

[摘要] 目的 探讨活性维生素D3对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法 实验选用3月龄雄性SD大鼠(清洁级)24只。按随机数字表法分为3组,分别为正常对照组(NC),糖尿病模型组(DM),活性维生素D3治疗组(DC),每组8只。喂养12周后,观测肾组织形态学和肾功能变化,尿白蛋白排泄率等指标的变化,用免疫组化法检测肾脏转化生长因子- 1（TGF- 1）、核转录因子- B （NF- B）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、CD68表达水平的变化,RT-PCR方法检测各组大鼠肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平的变化。结果 与正常对照组比较,第12周末糖尿病肾病模型组大鼠的肾脏肥大指数（KW/BW）、平均肾小球体积（MGV）、系膜面积比(FMA)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血肌酐(Scr)、均有明显升高(P<0．05),肾皮质TGF- 1 、NF- B、MCP-1 、CD68的蛋白表达水平也有显著增高(P<0．05),同时肾组织TGF- 1 、NF- B、MCP-1 mRNA表达水平均明显升高(P<0．05)。活性维生素D3治疗组的上述指标与糖尿病模型组比较,则有明显的降低(P<0．05)。结论 活性维生素D3对于糖尿病肾脏病变至少具有部分保护作用,其机制可能为通过抑制糖尿病大鼠肾脏的TGF- 1 、NF- B、MCP-1等细胞因子的表达,抑制巨噬细胞的聚集,从而经由抗炎机制发挥对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。     

钒酸盐对实验性糖尿病大鼠肾脏的影响

目的 观察钒酸盐（Ｖａ）对链脲霉素诱导的糖尿病（ＤＭ）大鼠肾脏功能和结构的影响。方法 正常大鼠和糖尿病大鼠自由饮用钒酸钠水１２周后,包括内生肌酐清除率、脲蛋白排泄量（ＵＰＥ）,并取肾脏作光镜和电镜检查,测定肾小球平均面积（ＭＧＰＡ）和肾小球平均体积（ＭＧＶ）。结果ＤＭ大鼠１２周时存在肾功能改变,Ｃｃｒ和ＵＰＥ增加,ＭＧＰＡ和ＭＧＶ增大,并有肾脏超微结构受损,而钒酸盐治疗能明显改善ＤＭ大鼠的上述改变     

慢性应激对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2表达的影响

目的：探讨慢性应激对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响。方法：大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（A组）,假手术组（B组）,心肌梗死模型组（C组）,心肌梗死后慢性应激组（C组）;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax和bcl-2蛋白表达。结果：（1）与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;A和B组心肌细胞凋亡指数比较无统计学差别;（2）与A、B组比较,C、D组心肌细胞bax和bcl-2蛋白表达均明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞bax蛋白表达明显增加,P〈0.01,而bcl-2蛋白表达明显减少,P〈0.01。结论：慢性应激可促进心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax蛋白表达和下调bcl-2的蛋白表达有关。