枝状核酸信号放大定量检测系统

血液中病原体的有效定性与其相关成分的定量检测可为病毒性疾病的感染及预后判断提供可靠的指标。聚合酶链较高，但易受污染，且尚无较可靠、简便的定量方法，枝状核酸信号放大检测系统则无论在定性还是在定量方面都有新的突破。本文就枝状核酸信号放大系统检测的建立与发展，应用以及优劣之处予以简述。     

核酸检测及其临床应用研究进展

随着分子生物学的发展，在核酸检测方面，旧的方法不断完善，新的方法与技术不断涌现，并且在临床应用也越来越广泛，本文就目前这些方法及其临床应用作了综述。     

核酸检测及其临床应用研究进展

随着分子生物学的发展,在核酸检测方面,旧的方法不断完善,新的方法与技术不断涌现,并且在临床应用也越来越广泛,本文就目前这些方法及其临床应用作了综述。     

核酸量化检测技术的研究进展

近些年来，核酸量化检测技术在很多方面得到广泛应用，已报道的方法有多种。本文对这些方法的技术原理及其应用前景作一综述。     

组织核酸测定方法的改进及应用

组织核酸浓度是反映营养因素对机体代谢影响的灵敏而有意义的指标。本法在４℃以下剥离和称重组织，然后冰浴研磨成匀浆，用Ｅｔｈ．Ｂｒ作为荧光探针测定其核酸含量。结果变异系数由原方法的８．９％降至４．８％，提高了灵敏度，同时操作简便，适用于一般实验成批样品的分析。     

核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用

从建立PCR标准化实验室,制定标准操作规程；强化人员培训；正确选择设备设施,做好校准、维护与保养；选择合格的实验耗材；制定严格的防污措施,做好环境质控；做好检测环节质控；确保记录完整等方面,总结了核酸扩增检测技术在血液筛查中的应用实践.     

依赖核酸序列的扩增技术在诺如病毒基因检测中的应用

目的将一种新颖的核酸扩增技术-依赖核酸序列的扩增技术(NASBA)应用于诺如病毒的快速检测与辅助诊断。方法根据NCBI诺如病毒RdRp基因保守序列设计特异性引物,建立NASBA检测方法,同时验证该方法的特异性、灵敏度和重复性,并利用所建立的NASBA检测方法对临床收集的108例病毒性腹泻患者粪便标本进行检测。结果本文建立的NASBA检测方法对诺如病毒具有高度特异性,与轮状病毒等腹泻相关病毒均无交叉反应,反应体系具有很高的稳定性;灵敏度高,即诺如病毒最低检测线为20 pg/μl;检测周期短,NASBA反应在42℃90 min即可进行有效扩增,3 h~4 h即可完成样品中目标基因的筛选。结论本研究应用的诺如病毒NASBA检测方法特异性好、灵敏度高、快速易操作,尤其适用于诺如病毒的日常监测和暴发疫情的应急诊断。     

早孕相关因子的检测及临床应用

早孕相关因子是指卵受精到着床期间,母体启动免疫调控机制而产生的一系列与卵受精相关的因子。目前主要有早孕因子（ＥＰＦ０、胚源性血小板活化因子（ＥＤＰＡＦ０、乳酸脱氢酶Ｍ、Ｈ同功酶（ＬＤＨ－Ｈ,ＬＤＨ－Ｍ）、预植入因子９ＰＩＦ０、胚胎相关免疫抑制因子（ＥＡＳＦ）、细胞因子（ＩＬ－１α、ＩＬ－β）等。它们参与了着床前后的免疫调节。建立灵敏、特异、准确、简单、快速的早孕相关因子检测方法,对开展着床后妊娠诊     

核酸扩增技术在病原体检测中的应用

传统的病原体检测方法在检测敏感性、特异性、应用范围等方面存在许多不足.PCR技术已被用于感染早期的病原体检测,但在应用过程中也面临不少问题.近年来出现的新的核酸扩增技术可弥补普通PCR技术的缺点.此文就其中依赖核酸序列的扩增技术、PCR-胶体金免疫层析技术和多重荧光实时PcR技术进行综述.     

恒温扩增-核酸试纸在副溶血性弧菌快速检测中的应用

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核酸扩增与酶联免疫法联合在血液筛查中的初步应用

目的:在酶联免疫法(enzyme immunoassay,EIA)检测的基础上,探讨HBV核酸扩增检测(nucleicacid amplification testing NAT)技术应用于血液筛查的意义。方法:分别使用两种模式(单检或混检)NAT与EIA两遍检测方式同时进行血液筛查,对NAT阳性标本作进一步做鉴别试验和病毒血清标志物。结果:20925份EIA(-)标本共发现28份核酸三项(HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA)呈反应性,均为HBV-DNA,即EIA两遍检测合格后的HBV-DNA阳性率0.13%,检测其中11份血清,乙肝标志物均呈阳性。结论:EIA阴性献血者中仍有极少数的HBV感染者,核酸扩增检测和酶联免疫检测互补能够检测出EIA漏检的HBV携带者,对提高HBsAg阴性血液标本中HBV感染检出率具有重要价值。     

新型冠状病毒RNA核酸的检测方法研究及应用

[目的 ]　研究和建立引起严重的急性呼吸道综合征 (SARS)的新型冠状病毒RNA核酸的检测方法。　 [方法 ]　使用一步法巢式逆转录聚合酶链扩增法 (RT -PCR)。　 [结果 ]　采自临床留观、疑似和临床诊断病人的 10 46份咽漱液 /咽拭子样品中 ,3份样品SARS冠状病毒RNA核酸为阳性 ;在 482份血清样品中 ,有 5份为阳性。　 [结论 ]　一步法巢式RT -PCR能检测患者急性期咽漱液 /咽拭子和血清样品中的新型冠状病毒RNA核酸 ,但样本采集的时间和咽漱液 /咽拭子采集的质量直接影响检测结果     

血清学检测与核酸检测在献血者血液筛查中的相关性研究

目的评价血清学检测与核酸检测在降低输血相关风险中的相关性。方法对大连市血液中心2012年12月1日-2013年5月31日共计33 708份献血者标本同时进行血清学检测(HBsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体、谷丙转氨酶)和HBV/HCV/HIV三联核酸定性检测。单纯核酸检测反应性的标本需进行鉴别试验,对鉴别阴性的献血者进行跟踪检测。将HBsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体三项酶联免疫检测与核酸检测结果对比分析。结果酶联免疫检测单试剂不合格率为1.38%。酶联免疫检测双试剂反应性而核酸检测无反应性的不合格标本有40份,其中HBsAg反应性12份,HCV抗体反应性28份。单纯核酸检测反应性标本有46份,经鉴别和追踪确认HBV感染献血者15例,HIV窗口期感染1例,无HCV RNA的检出。结论核酸检测对于血清学阴性的HBV感染检出效果明显;但对于感染了HBV但病毒载量极低的献血者,核酸检测存在漏检的可能;血液筛查中核酸检测不能代替血清学检测;慎重对待核酸检测的假阳性结果,制定合理的献血者评估策略以减少献血者流失。     

应用HIV - 1 DNA定量技术对集合核酸筛查法的改良研究

目的 研究HIV - 1 DNA定量检测用于改良集合核酸筛查的可行性。方法 建立荧光定量PCR检测HIV - 1 DNA的检测技术方法,选取来自深圳市各社区咨询检测点新报告HIV - 1抗体阳性者和阴性者血样,从检测样本量、保存条件等方面进行分组研究,寻找确保检出率的基本条件。在此基础上,结合病毒核酸浓缩,确定改良集合检测方案,并对自制的阴性、阳性外部质控品进行检测分析。结果 超敏HIV - 1 DNA检测技术在应用于不同病毒载量样本时,全血单次用量200 μl/反应实现了全部检出,而100 μl以下单次用量在低载量组血样中开始出现少量漏检;血样在室温3 d、4℃ 7 d、 - 20℃ 4周以内,以及 - 20℃保存冻融3次以内,均未对超敏HIV - 1 DNA定性/定量结果产生明显影响;本实验中通过改良集合核酸检测方案,对所有阳性质控品的检出率达100.0%,而对照组的一级集合样本检出率仅为86.3%（69/80）。结论 经过病毒核酸浓缩及超敏HIV - 1 DNA检测改良后的集合核酸检测方案可用于人群筛查。     

Regulatory considerations for nucleic acid vaccines

For regulatory purposes nucleic acid vaccines are considered biological products and will be regulated by the Center for Biologics Evaluation and Research (CBER). Vaccines derived through the use of this technology may ultimately find broad application as preventive vaccines for infectious disease or as therapeutic vaccines for treatment of disease. The regulations that govern the use of biological products as well as other guidance documents available from CBER are applicable to the regulation of nucleic acid vaccines. The regulatory concerns associated with the manufacture, preclinical evaluation and clinical studies for these vaccines are similar to those for other biological products. The following discussion will provide an overview of the organization of CBER and how nucleic acid vaccines will be reviewed within this organization. This discussion will also describe the regulations encoded in the US Code of Federal Regulations which govern the use of biological products and additional guidance provided in Points to Consider Documents and in specific Guidelines. In addition, this discussion will note specific concerns regarding the manufacture, lot release and preclinical evaluation to assess the safety of polynucleotide vaccines. Finally, the process for submission of an Investigational New Drug application and the design of protocols for clinical studies will be described.     

国产全自动血液病毒核酸筛查系统的建立和应用研究

目的建立适合我国供血者全自动核酸检测的方法(国产),探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查的可行性。方法:在酶联免疫吸附试验筛查血液基础上,采用全自动核酸提取仪进行血样汇集(8人份),提取样本核酸,应用聚合酶链反应(实时荧光PCR)在ABI 7300上进行扩增和检测,并用国际标准核酸质控品考评检出限量,对阳性供血者追踪检测。结果经考评及常规应用,该系统全自动汇集及全自动核酸提取、扩增、检测95%的检出限量,乙型肝炎病毒(HBV)DNA、丙型肝炎病毒(HCV)RNA和人免疫缺陷病毒(HIV)-1 RNA分别为35.9IU/mL、147.7 IU/mL、66.1 IU/mL,95%可信区间分别为[21.9～124.8]、[93.3～386.4]和[38.8～235.3]。对60 112份样本共7 514汇集池进行检测分析,HBV DNA阳性12份,阳性比例为1:5 009,其中6份为抗HBc阳性;HCV RNA阳性1份,比例为1:60 112;未检出HIV-1 RNA阳性。对7例HBV DNA阳性者进行追踪,发现4例发生了血清转换现象。结论我国产全自动血液核酸筛查系统可应用于血液HBV DNA、HCV RNA和HIVRNA的筛查工作。     

乙型肝炎病毒核酸检测试剂临床应用的分析

目的 了解HBV/HCV/HIV联合核酸检测的临床应用.方法 使用Abbott Architecti2000化学发光检测盒对534份血浆样品进行血清学检测,Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqManHBV Test试剂定量检测分别与2种联合核酸检测结果 进行比较分析.结果 81份HBsAg、HBeAg、抗-HBc 3项均阳性样品联合核酸检测均为HBV阳性,200份HBsAg阴性的样品中联合核酸检测试剂分别有11、19份检测为HBV阳性.HBV DNA定量检测>500 IU/ml的193份样品联合核酸检测试剂阳性符合率分别为96.9%、94.3%,117份样品<500 IU/ml阳性符合率分别为40.2%、45.3%,151份HBV DNA阴性样品联合试剂阴性符合率为99.3%、96.0%.结论 中国人群中存在一定比例低载量HBV携带者,联合核酸试剂作为献血员筛查的补充方法 在提高血液及其制品使用的安全性方面具有一定的临床使用意义.     

环介导等温扩增技术及在传染性疾病检测中的应用

介绍环介导等温扩增技术的的基本原理、特点及在传染性疾病中检测和诊断的应用。环介导等温扩增技术具有简单、快速、特异性强和扩增效率高等的特点,目前可检测HBV、流感病毒、疱疹病毒、水痘_带状疱疹病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、SARS病毒、呼吸道合胞病毒、西尼罗病毒、结核分枝杆菌、痢疾志贺菌、大肠埃希菌、螺旋体、肺炎链球菌和耶氏菌等。