人α干扰素抗体亲和层析的研究

本文报道了人α干扰素(IFN)抗体亲和层析技术建立与应用的研究。通过用初提和部分纯化的人Namalva IFN免疫绵羊,获得了抗IFN血清。在将抗血清中的抗体分离出之后,用“假IFN制剂”柱进行反复吸附,去除其中的抗杂质抗体。并用蛋白酶抑制剂柱去除其中的蛋白水解活性。然后,与Sepharose 4B结合,制备成抗IFN抗体柱。该柱能将粗制人Namalva IFN一步纯化至比活性达10~7U/mg以上,回收率>100％。纯化IFN的活性峰集中于1～3个洗脱组分(3～8ml)中。用该柱纯化人白细胞IFN也获得了类似的效果。本研究还表明,以此法制成的多克隆抗自然IFN抗体柱可将重组人IFN-αD型纯化至电泳均一性。     

溴乙锭荧光法测定环境污染物的DNA交联作用

目的：评价溴乙锭荧光法检测食用油烟，香烟烟气，蚊香因气颗粒提取物，氧化型染发型，硝基苯类化合物的ＤＮＡ交联作用。方法：ＤＮＡ交联溴乙锭荧光分析法（ＥＦＡ）基于双链间并联所致的ＤＮＡ在变性条件下不解链，与溴乙锭结合可产生较强荧光，而正常ＤＮＡ变性后形成的单链ＤＮＡ无此现象的原理对ＤＮＡ交联进行测定。结果：食用油烟和香烟烟气颗粒提取物，氧化型当发剂具有致小牛胸腺ＤＮＡ交联形成的作用，具有遗传毒性的蚊香     

溴乙锭荧光法测定环境污染物的DNA交联作用

目的：评价溴乙锭荧光法检测食用油烟、香烟烟气、蚊香烟气颗粒提取物、氧化型染发剂、硝基苯类化合物的ＤＮＡ交联作用。方法：ＤＮＡ交联溴乙锭荧光分析法（ＥＦＡ）基于双链间交联所致的ＤＮＡ在变性条件下不解链，与溴乙锭结合可产生较强荧光，而正常ＤＮＡ变性后形成的单链ＤＮＡ无此现象的原理对ＤＮＡ交联进行测定。结果：食用油烟和香烟烟气颗粒提取物、氧化型染发剂具有致小牛胸腺ＤＮＡ交联形成的作用，具有遗传毒性的蚊香烟气颗粒提取物和２，４－二硝基甲苯和间二硝基苯等硝基苯化合物未观察到致ＤＮＡ交联作用。结论：ＤＮＡ交联溴乙锭荧光方法灵敏、快速、简便，适用于对环境污染物ＤＮＡ损伤机制的研究。     

干扰素中和抗体对干扰素治疗慢性乙型肝炎效果的影响

目的 对采用干扰素对患有慢性乙型肝炎的患者进行治疗时干扰素中和抗体对疗效的影响进行研究分析.方法 抽取在过去一段时间内在我院就诊的干扰素中和抗体检测结果为阳性的患有慢性乙型肝炎的临床确诊患者病例和同期在我院就诊的干扰素中和抗体检测结果为阴性的该病患者病例各38例,分别将其定义为A、B组.结果 B组患者的完全应答和总应答率明显高于A组患者;该组患者完全应答所需要的疗程明显长于A组患者.结论 干扰素中和抗体可以对采用干扰素治疗的乙型肝炎患者的应答造成影响.     

干扰素治疗慢性丙型肝炎中出现反跳与干扰素抗体关系的研究

目的：探讨干扰素抗体与干扰素治疗慢性丙型肝炎临床疗效的关系。方法：用酶免疫法（EIA）检测41例应用干扰素治疗的慢性丙型肝炎患者治疗前及治疗不同时期血清中的干扰素总抗体,同时应用抗病毒中和生物鉴定法（ANB）检测干扰素中和抗体及其滴度。结果：应答伴反跳组干扰素中和抗体及总抗体的阳性率明显高于完全应答组（P＜0．05）,而安全应答组和无应答组间无显著性差异（P＜0．05）。干扰素中和抗体滴度与患者血清ALT水平间存在相关关系,且NA滴度＜1：800患者的完全应答率明显高于NA滴度≥1：800的患者（P＜0．05）。结论：干扰素抗体的产生可能是影响干扰素临床疗效的因素之一,以中和抗体对疗效的影响为主,中和抗体滴度,干扰素的疗效差。干扰素中和抗体的产生可能是临床应用干扰素治疗慢性丙型肝炎患者出现反跳的原因之一。     

干扰素病毒唑联合治疗慢性丙型肝炎疗效及干扰素抗体的影响

目的 :研究干扰素与病毒唑联合治疗慢性丙型肝炎疗效及干扰素抗体的影响。方法 :观察组 2 0例采用干扰素 α2b 3MvTiwIH +病毒唑 10 0 0mgQdpo连用 2 4周 ;对照组 3 2例采用干扰素 α2b 3MvTiwiH连用 2 4周。停药后观察 2 4周比较疗效并检测干扰抗体。结果 :观察组完全应答率为 5 0 % ,明显高于对照组 18.7% ;复发率为 2 5 .0 %低于对照组 5 6.3 % (P <0 .0 1)。无反应率均为 2 5 .0 %。且复发与干扰素抗体尤其是中和抗体有关。结论 :观察组疗效优于对照组 ,复发与干扰素抗体尤其是中和抗体有关。     

干扰素治疗慢性肝炎中检测干扰素总抗体的临床意义

应用干扰素治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎患者,观察血清干扰素总抗体的产生情况,以探讨干扰素抗体与干扰素治疗慢性乙型、丙型肝炎临床疗效的关系。     

天然DNA和细胞因子对系统性红斑狼疮患者淋巴细胞体外分泌抗双链DNA抗体的影响

检测６例活动期、６例缓解期系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者和１０例正常人血清和外周血单个核细胞（ＦＢＭＣ）自发及经天然ＤＮＡ（ｎＤＮＡ）、重组白介素２（ｒＩＬ－２）和重组γ干扰素（ｒＩＦＮ－γ）锈导后分泌ＩｇＧ类抗双链ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）特异性抗体水平，观察到活动期患者血清中含量和自发分泌量显著高于缓解期，后者又显著高于正常人，且体外细胞分泌水平与血清中含量密切相关（ｒ＝０．９８８２）。ｎＤＮＡ能特异地激发ＳＬＢ患者的ＰＢＭＸＣ分泌抗ｄｓＤＮＡ抗体，但对正常人无作用。ｒＩＬ－２和ｒＩＦＮ－γ皆能增强ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ产生抗ｄｅＤＮＡ抗体。ｎＤＮＡ和ｒＩＬ－２联合应用时对活动期患者ＰＢＭＣ分泌抗ｄｓＤＮＡ抗体有协同作用。作者未发现重组白介素６（ｒＩＬ－６）对抗ｄｓＤＮＡ抗体分泌的影响。     

延安市病毒性肝炎干扰素抗体的检测分析

目的 观察肝炎患者治疗后体内干扰素抗体产生情况.方法 对正常献血者30例,急性乙型肝炎38例,慢性乙型肝炎53例,肝炎肝肝硬化43例,进行血清干扰素抗体的检测及统计学分析.结果 急性乙肝患者组、慢性乙肝患者组、肝炎肝硬化患者的阳性率分别15.79%、24.53%和20.93%,慢性乙肝患者组、肝炎肝硬化患者和正常对照组比较有显著性差异.结论 干扰素在治疗过程中部分患者会产生抗体,检测血中干扰素抗体的产生可指导临床用药.     

番茄凝集素的甲壳素亲和层析纯化

番茄果实经中性盐溶液提取,硫酸铵沉淀,甲壳素柱亲和层析和CM-纤维素离子交换层析,得纯番茄凝集素;对其化学组成及细胞凝集作用进行了实验研究。     

多粘菌素B琼脂糖层析柱清除体液中内毒素

用多粘菌素B琼脂糖亲和层析法清除内毒素,结果表明:5ml多粘菌素B层析柱的总吸附内毒素能力为450 μg,用此法可完全清除体液或各种液体中的内毒素,对血清及腹水中的内毒素也有明显的吸附作用,而其他各种主要成分(除内毒素外)经过处理后无明显改变。去氧胆酸是一种强有力的去污剂,可使已饱和的柱子复活,复活率达85％左右。该方法有简便,可靠,吸附能力大,柱子的复活率高等优点。本方法的建立为内毒素血症的治疗展示了新的前景。     

赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性

用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还测定了其氨基酸组成,糖含量及酶的底物特异性。     

亲和层析纯化LCA结合型甲胎蛋白异质体

本文采用溴化氰活化Sepharose 4B,制备抗甲胎蛋白抗血清亲和层析柱和小扁豆(兵豆)凝集素亲和层析柱,结合硫酸铵盐析从肿细胞癌患者血清中分离LCA结合型甲胎蛋白异质体。聚丙稀酰胺凝胶电泳及SOS电泳均呈单一区带,分子量为70000,含糖量为4％。亲和交叉免疫电泳自显影法显示明显的甲胎蛋白异质体峰。     

大鼠损伤神经组织中Tropic 1808基因相关蛋白的亲和层析法纯化

目的：纯化大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic 1808基因特异表达的蛋白。方法：将Tropic1808基因重组蛋白的单克隆抗体与CNBr-activated Sepharose 4B交联，用亲和层析的方法，提取在大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic1808基因特异表达的蛋白，并将纯化的蛋白进行SDS-PAGE分析。结果：(1)经层析系统紫外检测，新生层析后洗脱，在280nm波长处获得两个不同的紫外吸收峰。（2）亲和层析的洗脱液，经冷冻浓缩，SDS-PAGE分析，出现43.0kDa.320kDa,31.0kDa和14.4kDa蛋白条带，其中在32.0kDa的蛋白条带与预期的Tropic1808基因在组织中的编码蛋白基本相符，而43.0kDa.31.0kDa,14.4kDa蛋白，预测为Tropic1808基因在大鼠损伤坐骨神经组织中表达的相关蛋白。结论：用亲和层析的方法，获得了大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic1808基因特异表达的相关蛋白，为进一步研究其结构和功能提供了实验依据。     

甲状腺微粒体过氧化物酶及其单克隆抗体的制备

本工作共分３部分：①取健康人甲状腺组织，经匀浆、超声波处理及不同速度离心去除其中细胞碎片，胞核和线粒体，再经超速离心沉淀和即获得粗提的甲状腺微粒体过氧化物酶（ＴＰＯ）。②以此粗提ＴＰＯ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞杂交，获得分泌抗ＴＰＯ单抗的杂交瘤细胞系多株，经组化染色证明这些单抗能与人甲状腺微粒体结合。②用这些单抗与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ偶联，将粗提ＴＰＯ作亲和层析，获     

利用序列特异性DNA亲和层析分离纯化一种前列腺细胞核蛋白

目的分离纯化RFA结合蛋白并加以鉴定,为进一步深入研究RFA及其结合蛋白相互作用和参与AR介导的PSA基因表达奠定基础.方法培养人前列腺癌细胞PC-3,提取核蛋白,以RFA序列为探针进行亲和层析分离纯化目的蛋白,层析前后均用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测目的蛋白的功能.经SDS-PAGE测定纯化蛋白的分子量,然后切下目的蛋白条带,进行蛋白质鉴定.结果纯化蛋白在SDS-PAGE图谱上36kD附近呈现单一条带,氨基酸组成分析和质谱分析显示纯化蛋白条带含有2种蛋白,与核内不均一核糖核蛋白A1,A2(hnRHPA1,A2)高度同源.结论①以Dynal M-280链亲和素磁珠为固相介质的DNA亲和层析,具有简便、快速、无毒的优点,可在对目的蛋白了解甚少的条件下,以较高的纯度将其纯化②RFA结合蛋白与hnRNP超家族成员hnRNPA1,A2高度同源,其与RFA相互作用的具体机制和意义有待进一步研究.     

两种亲和层析法纯化白桂木凝集素的比较

分别采帮人血清γ球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析及半乳糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６Ｂ亲和层析来分离纯化白桂木凝集素。结果：两种方法提取的ＡＨＬ在纯度，凝集活力及回收率上均无明显差别。     

免疫耐受法制备抗感觉神经元抗体

根据免疫耐受大批量，用兔运动神经细胞蛋白组分作为耐受原，接种于新生ＳＤ大鼠并诱导产生免疫耐受现象。然后以兔感觉神经细胞蛋白组分作为制备特异性抗体的抗的，接种于已对运动神经细胞蛋白产生耐受的ＳＤ大鼠。经此方法制备特异性抗感觉神经细胞的抗血清，用免疫组织化学方法检测抗血清的特异性。结果表明，抗血清只对感觉神经细胞产一阳性反应，对运动神经细胞则表现为阴性反应。本研究说明，如果两种细胞蛋白组分中含有共同抗