氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨氯高铁血红素预先给药对感染性休克大鼠心肌损伤的影响.方法 健康清洁级SD大鼠20只,雌雄不拘,2～2.5月龄,体重160～185 g,随机分为2组(n=10),感染性休克组(S组)单次腹腔注射0.9%NaCl溶液1 ml,氯高铁血红素预先给药组(H组)单次腹腔注射氯高铁血红素100 mg/kg(1 ml).2组均于给药后24 h采用静脉注射脂多糖(LPS)10 mg/kg(0.5 ml)制备感染性休克模型.于静脉注射LPS前、注射LPS后30、60和90 min时,记录左心室收缩压(LVSP)和左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax).于静脉注射LPS后6 h经颈总动脉采集血标本,放血处死大鼠,取左心室心肌组织,测定血浆乳酸脱氢酶(DH)和肌酸激酶(CK)活性、全血一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度及心肌血红素氧合酶(HO)-1 mRNA、HO-2 mRNA及其蛋白的表达.结果 与S组比较,H组静脉注射LPS前LVSP和±dp/dtmax差异无统计学意义(P＞0.05);注射LPS后各时点LVSP和±dp/dtmax升高,血浆LDH和CK活性降低,全血COHb浓度升高,心肌HO-1 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05),HO-2mRNA及其蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯高铁血红素100 mg/kg预先给药可通过诱导HO-1生成减轻感染性休克大鼠心肌损伤.     

预先注射氯高铁血红素对感染性休克大鼠肺脏的保护作用

目的 研究氯高铁血红素对感染性休克大鼠肺脏的保护作用。方法 20只健康清洁级SD大鼠随机分为2组:对照组(S组)和预先注射氯高铁血红素组(H组),每组10只。S组腹腔内注射生理盐水(NS)1 ml,H组腹腔内注射氯高铁血红素100 mg／kg(用NS稀释至1 ml)。24 h后两组均静脉注射伊文思蓝30mg／kg,5min后再静脉注射脂多糖(LPS)10 mg／kg,6h后取大鼠肺组织检测含水率、SOD活性、伊文思蓝、丙二醛(MDA)含量及血红素氧合酶-1(HO-1)、血红素氧合酶-2(HO-2)的基因和蛋白表达。结果 与S组相比,H组肺组织含水率、伊文思蓝和MDA含量明显降低,SOD活性、HO-1的基因和蛋白表达增加(P<0.05或0.01),HO-2的基因和蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论 预先注射氯高铁血红素对感染性休克大鼠肺脏有保护效应,其机制与HO-1的表达增加有关。     

活化蛋白-1在大鼠内毒素性肺损伤时血红素加氧酶-1上调中的作用

目的 评价活化蛋白-1(AP-1)在大鼠内毒素性肺损伤时血红素加氧酶-1(HO-1)上调中的作用.方法 健康清洁级雄性SD大鼠48只,体重200 ～ 220 g,2.5 ～ 3.0月龄,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):正常对照组(C组)腹腔注射0.1％二甲基亚砜(姜黄素溶媒)0.5 ml,30 min时股静脉注射生理盐水(LPS溶媒)0.5 ml;内毒素性肺损伤组(ALI组)腹腔注射0.1％二甲基亚砜0.5ml,30 min时股静脉注射10 mg/kg LPS0.5 ml;姜黄素+内毒素性肺损伤组(Cur+ ALI组)腹腔注射20mg/kg姜黄素0.5 ml,30 min时股静脉注射10 mg/kg LPS 0.5 ml;姜黄素组(Cur组)腹腔注射姜黄素20mg/kg,30 min时股静脉注射生理盐水0.5 ml.静脉注射LPS 6 h时处死大鼠取肺组织,行病理学评分,测定MDA含量和SOD活性;采用Western blot法测定HO-1和AP-1表达;采用荧光定量PCR法测定HO-1 mRNA表达.结果 与C组比较,ALl组和Cur +ALI组肺组织病理学评分和MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1 mRNA、HO-1和AP-1表达上调(P＜0.05),Cur组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与ALl组比较,Cur+ ALl组肺组织病理学评分和MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1mRNA、HO-1和AP-1表达下调(P＜0.05).结论 内毒素性肺损伤时HO-1上调的机制与转录因子AP-1活化有一定关系.     

阿片受体在瑞芬太尼减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨阿片受体在瑞芬太尼减轻肾脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠75 只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=15):假手术组(S组)、肾脏缺血再灌注损伤组(I/R组)、瑞芬太尼组(R组)、纳洛酮组(N组)、纳洛酮+瑞芬太尼组(NR组).采用夹闭双侧肾动脉45 min再恢复灌注的方法制备大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型.R组和NR组于缺血前15 min至再灌注30 min尾静脉输注瑞芬太尼1.0 μg·kg-1 ·min-1,S组、I/R组和N组输注等容量生理盐水;N组和NR组于缺血前20 min及间隔55 min分别尾静脉注射纳洛酮0.3 mg/kg,S组,I/R组和R组注射等容量生理盐水.再灌注24 h时采集股静脉血样和抽取膀胱尿样,用于测定血清Cr和BUN浓度及尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)水平.随后取肾组织,采用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸法分别测定SOD活性及MDA含量,并于光镜下观察肾脏病理学结果.结果 与S组比较,其他4组血清Cr和BUN浓度、尿NAG和γ-GT水平及肾组织MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01),其肾组织有不同程度病理学损伤.与I/R组比较,R组血清Cr和BUN浓度,尿NAG和γ-GT水平及肾组织MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.01),其肾组织病理学改变明显减轻;而N组和NR组以上各指标的差异无统计学意义(P＞0.05),肾组织病理学改变相似;与R组比较,N组和NR组血清Cr和BUN浓度、尿NAG和γ-GT水平及肾组织MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01).结论 阿片受体介导了瑞芬太尼减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用.     

电针刺激足三里和肺俞穴对兔内毒素休克诱发急性肺损伤的影响

目的 评价电针刺激足三里和肺俞穴对兔内毒素休克诱发急性肺损伤的影响.方法 健康雄性新西兰大白兔60只,体重1.5 ～ 2.0 kg,2月龄,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=10):假手术组(S组)、血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉-Ⅸ组(Z组)、内毒素组(L组)、电针刺激穴位+内毒素组(EL组)、电针刺激非穴位+内毒素组(SEL组)、电针刺激穴位+锌原卟啉-Ⅸ+内毒素组(ELZ组).EL组和ELZ组电针刺激双侧足三里和肺俞穴,疏密波,频率15 Hz,刺激强度以兔出现轻微肌颤为宜,1次/d,15 min/次,连续5d;SEL组刺激足三里和肺俞穴旁开0.5 cm处.停止电针刺激后24 h,L组、EL组、SEL组和ELZ组静脉注射脂多糖5 mg,/kg,S组和Z组给予等容量生理盐水0.5ml.Z组和ELZ组给予脂多糖后2h腹腔注射锌原卟啉-Ⅸ10 μmol/kg,其他4组给予等容量NaHCO3 1 ml.注射脂多糖后6h时处死兔,取肺组织,进行肺损伤评分,测定肺泡上皮细胞凋亡指数、HO-1和HO-1 mRNA表达.结果 与S组比较,Z组肺损伤评分、肺泡上皮细胞凋亡指数、HO-1和HO-1 mRNA 表达差异无统计学意义(P＞0.05),其他4组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数升高,HO-1和HO-1 mRNA表达上调(P＜0.01);与L组比较,EL组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数降低,HO-1 和HO-1 mRNA表达上调(P＜0.01),其他2组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EL组比较,ELZ组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数升高,HO-1和HO-1 mRNA表达下调(P＜0.01).结论 电针刺激足三里和肺俞穴可减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤,其机制与上调肺组织HO-1表达,抑制肺泡上皮细胞凋亡有关.     

蛋白激酶C激活在兔内毒素休克诱发急性肾损伤中的作用

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)在兔内毒素休克诱发急性肾损伤中的作用及其可能作用机制。方法:健康清洁级雄性新西兰大白兔40只,采取随机数字表法分为对照组(CON组)、内毒素休克致急性肾损伤组(AKI组)、PKC-α阻断剂-白屈菜赤碱加AKI组(CHA)、PKC-α激活剂-佛波酯加AKI组(PMA)。PMA组经兔耳缘静脉注射佛波酯5μg/kg,CHA组静脉注射白屈菜赤碱5 mg/kg,CON组与AKI组注射各自溶媒1%DMSO 0.5 m L。30 min后,AKI组、PMA组及CHA组静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg(溶于2 m L生理盐水),CON组给予等容量生理盐水。静脉注射LPS或生理盐水6 h时,采集动脉血,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)浓度,处死动物后取肾组织,进行病理学观察及肾损伤评分,测定肾组织PKC-α蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白的表达水平。结果:与CON组比较,AKI组、CHA组及PMA组血清BUN、Cr浓度升高,肾组织病理学评分升高,PKC-α蛋白(1.37±0.26)、HO-1蛋白(0.89±0.11)、Nrf2核蛋白(0.97±0.26)及总蛋白的表达均上调(P0.05);与AKI组比较,PMA组血清BUN、Cr浓度降低,肾组织病理学评分降低,PKC-α蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白的表达均上调(P0.05),CHA组血清BUN、Cr浓度升高,肾组织病理学评分(9.8±3.9)升高,PKC-α蛋白、HO-1蛋白、Nrf2核蛋白及总蛋白的表达均下调(P0.05)。结论:PKC-α激活是内毒素休克诱发急性肾损伤时机体的适应性调节反应机制之一,其机制可能与激活Nrf2/ARE通路、上调HO-1的表达有关。     

白细胞介素-10对内毒素血症大鼠肝损伤的影响

目的 评价白细胞介素-10(IL-10)对内毒素血症大鼠肝损伤的影响.方法 清洁级雄性Wistar大鼠100只,10 ～ 14周龄,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=20)∶对照组(C组)、内毒素血症组(LPS组)、1L-10组(IL-10组)、HO-1诱导剂钴原卟啉Ⅸ组(Co组)和HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(Zn组).LPS组、IL-10组、Co组和Zn组腹腔注射脂多糖(LPS) 20 mg/kg,IL-10组、Co组和Zn组于给予LPS前3h腹腔注射重组人IL-10 1 μg,Co组和Zn组分别于给予重组人IL-10后2h腹腔注射钴原卟啉Ⅸ和锌原卟啉Ⅸ25 mg/kg.每组于注射LPS后24 h时取10只大鼠,采集心脏全血,测定血清谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;然后取肝组织,测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达.每组取10只大鼠,记录给予LPS后72 h内大鼠生存情况.结果 与C组比较,LPS组、IL-10组、Co组和Zn组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量升高,肝组织GSH-Px、SOD活性和生存率降低(P＜0.05);与LPS组比较,IL-10组和Co组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量降低,肝组织GSH-Px、SOD活性、HO-1 mRNA表达和生存率升高(P＜0.05);与IL-10组比较,Zn组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β水平和肝组织MDA含量升高,肝组织GSH-Px、SOD活性和生存率降低(P＜0.05),Co组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 IL-10可减轻内毒素血症大鼠肝损伤,其机制与诱导HO-1表达有关.     

环孢素A联合钴原卟啉预防小鼠HSCT后移植物抗宿主病

目的 探讨应用环孢素A(CsA)联合钴原卟啉(CoPP)预防小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物抗宿主病(GVHD)的作用.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,分为4组:清髓性全身照射(TBI)组,受鼠TBI后经尾静脉注射磷酸盐缓冲液;常规异基因移植组(BS组),受鼠TBI后经尾静脉注射供鼠骨髓细胞与脾细胞的混合悬液(含骨髓细胞5×106个和脾细胞5×105个);CsA组,受鼠HSCT后腹腔注射CsA;CsA联合CoPP干预组(联合组),受鼠HSCT后腹腔注射CsA和CoPP.观察受鼠存活情况,记录体重.获取受鼠肝脏、小肠和皮肤组织样本,观察GVHD的病理变化;行Masson染色,观察肾组织纤维化;检测受鼠肾组织血红素氧合酶1(HO-1)mRNA的表达.结果 与BS组和CsA组相比较,联合组GVHD程度较轻,体重下降较少且恢复较快.移植后30d时BS组累积存活率为36.8％,联合组为69.6％,CsA组为53.5％,差异有统计学意义(P＜0.05).联合组小鼠肝脏、小肠和皮肤组织可见细胞水肿、变性均较轻,坏死少见,炎症细胞浸润较少,其病理改变较BS组和CsA组轻.联合组几乎无肾间质小管纤维化,而CsA组则较明显.联合组HO-1 mRNA表达高于BS组,CsA组HO-1 mRNA表达低于前两组(P＜0.05).结论 CsA和CoPP联合应用可增强CsA抗GVHD效应,并可减轻CsA的不良反应,其机制可能与HO-1表达上调有关.     

七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤海马血红素氧合酶-1蛋白表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用及血红素氧合酶-1(HO-1)在其中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠40只,体重230～270 g,随机均分为五组:假手术组(C组),缺血-再灌注组(IR组),七氟醚组(S组),七氟醚+锌原卟啉Ⅸ(Znpp)组(SZ组)和溶剂对照组(SD组).采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再回输的方法制备脑缺血-再灌注损伤模型,S组再灌注前5 min气管插管,吸入1MAC七氟醚15 min; SZ组模型制备前腹腔注射Znpp45μmol/kg,溶于二甲基亚砜(DMSO)0.5 ml; SD组模型制备前腹腔注射DMSO 0.5 ml.所有大鼠再灌注24 h后处死,取海马.光镜下观察各组海马病理学变化,检测海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和HO-1蛋白表达.结果 与C组比较,其余四组SOD活性明显降低(P＜0.05),MDA含量明显升高(P＜0.05),SZ组HO-1蛋白表达差异无统计学意义,IR、S和SD组HO-1蛋白表达明显升高(P＜0.05).与IR组比较,S组和SD组SOD活性和HO-1蛋白表达明显升高(P＜0.05),MDA含量明显降低(P＜0.05),SZ组HO-1蛋白表达明显降低(P＜0.05).光镜下S组和SD组海马病理学损伤较IR组和SZ组减轻.结论 七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与七氟醚上调脑组织中HO-1蛋白表达有关.     

血红素加氧酶-1对心肺复苏诱发大鼠脑水肿发生的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对心肺复苏诱发大鼠脑水肿发生的影响.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、心肺复苏组(CAR组)、氯化高铁血红素组(H组)和锡原卟啉组(SnPP组).CAR组、H组和SnPP组进行窒息性心跳骤停后行心肺复苏,H组预先12 h经腹腔注射氯化高铁血红素15 mg/kg,SnPP组预先1 h经腹腔注射锡原卟啉Ⅸ30 μmol/kg.各组于恢复自主循环(ROSC)后1 h和6 h时断头取脑组织,测定脑皮质、海马和脑干含水量,测定HO-1和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达.结果 与S组比较,CAR组和SnPP组皮质和海马含水量增加,海马AQP4 mRNA表达上调,H组HO-1 mRNA表达上调,SnPP组HO-4 mRNA表达下调(P<0.05);与CAR组比较,H组皮质和海马含水量降低,皮质及海马AQP4 mRNA表达下调,HO-1 mRNA表达上调(P<0.05),SnPP组T_2时皮质及海马AQP4 mRNA表达上调,HO-1 mRNA表达下调(P<0.05),各组脑干含水量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HO-1活性增高可减轻大鼠心肺复苏早期脑水肿,其机制可能与下调AQP4的表达有关.     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌HIF-1α和HO-1的影响

目的 探讨缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血红素加氧酶1(HO-1)的影响.方法 健康雄性SD大鼠48只,体重220～280 g,随机分为4组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理+缺血再灌注组(IP组)和缺血预处理+缺血再灌注+HO-1抑制剂组(HI组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注模型.S组仅在冠状动脉下穿线;IP组于缺血前采用结扎/放松左冠状动脉前降支各5 min,重复3次的方法行缺血预处理;HI组于缺血预处理前1 d腹腔注射锌原卟啉Ⅸ 10 ms/ks,其余同IP组.于再灌注结束时测定心肌HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白表达、HO-1活性、SOD活性及MDA含量,计算心肌梗死面积,取动脉血样测定血清TNF-α和IL-6的浓度.结果 与S组比较,IR组、IP组和HI组心肌SOD活性降低,MDA含量升高,血清TNF-α和IL-6的浓度升高(P＜0.01);与IR组比较,IP组心肌SOD活性升高,MDA含量降低,血清TNF-α和IL-6浓度降低,心肌HIF-1α和HO-1的mRNA和蛋白表达上调,HO-1活性升高,心肌梗死面积减小(P＜0.01);与IP组比较,HI组心肌SOD活性降低,MDA含量升高,血清TNF-α和IL6浓度升高,心肌HO-1的mRNA和蛋白表达下调,HO-1活性降低,心肌梗死面积增加(P＜0.05或0.01),心肌HIF-1α的mBNA和蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与HIF-1α诱导HO-1活性增强有关.     

芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾实质小动脉内膜/中膜厚度比与炎性因子的影响

目的：观察芪蛭降糖胶囊对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾实质小动脉内膜/中膜厚度比与炎性因子的影响。方法：48只清洁级雄性Wistar大鼠按体重随机抽取40只,采用切除右肾加腹腔注射链脲菌素（streptozotocin,STZ）的方法制备DN模型,另外8只大鼠行右肾假切术。造模成功后按血糖高低,两头随机抽取分为模型组、缬沙坦对照组、芪蛭降糖胶囊低剂量组、芪蛭降糖胶囊高剂量组。成模2 d起各组给予相应浓度和剂量的药物,分别于4、8、12周观察DN尿蛋白定量（TP）、尿视黄醇结合蛋白（RBP）、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG酶）和血尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、β2微球蛋白（β2-MG）的变化。12周后,处死所有动物,肾组织行HE染色,光镜下观察肾组织病变,测量肾实质小动脉内膜/中膜厚度比;电镜观察肾小球毛细血管超微结构;免疫组化检测肾组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和肾小动脉CD31的表达;原位杂交法检测MCP-1 mRNA在肾组织中的表达;免疫荧光检测肾小动脉α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。结果：在各个时间点,芪蛭降糖胶囊能明显减少DN大鼠TP、RBP、NAG酶（P〈0.01）,改善肾功能。HE染色显示,芪蛭降糖胶囊能减轻肾组织及其血管病理损害,比较各组大鼠肾小动脉内膜/中膜厚度比表明,模型组显著高于假手术组（P〈0.01）,对照组和低剂量组明显低于模型组（P〈0.05）,高剂量组显著低于对照组（P〈0.01）。电镜观察显示,芪蛭降糖胶囊能减轻肾小球基底膜增厚和系膜增生,保护内皮细胞之间窗孔形态,减轻足细胞足突融合。免疫组化检查显示芪蛭降糖胶囊能减少肾组织中MCP-1表达和下调肾小动脉CD31的表达（P〈0.01）;原位杂交法检测显示芪蛭降糖胶囊能下调MCP-1mRNA在肾组织中的表达;免疫荧光检测显示芪蛭降糖胶囊能下调肾小动脉α-SMA的表达。结论：芪蛭降糖胶囊可以改善肾组织和血管结构病理损害,而此作用可能部分是由下调MCP-1、MCP-1 mRNA在肾组织的表达阻断炎性反应而实现的。     

乌司他丁对体外循环心内直视手术婴儿围术期肾功能的影响

目的 评价乌司他丁对体外循环心内直视手术婴儿围术期肾功能的影响.方法 择期拟行心内直视手术的室间隔缺损伴肺动脉高压婴儿40例,月龄3～5月,体重5.3～6.8kg,ASA分级Ⅱ级,性别不限.随机分为2组(n=20):对照组(C组)和乌司他丁组(U组).U组将乌司他丁20 000 U/kg溶于20 ml生理盐水中,颈内静脉注射1/3量,体外循环开始时和主动脉开放即刻预充液中各充入1/3量;C组用生理盐水替代.分别于切皮前30 min(T1)、主动脉阻断前5 min(T2)、主动脉开放后5 min(T3)、术毕(T4)、术后24 h(T5)和48 h(T6)时,留取新鲜尿液,并采集颈内静脉血样,测定尿β2-微球蛋白(β2-MG)浓度和N-乙酞-β-D-葡萄糖苷酶(NAG)活性、血清Cr和BUN的浓度.结果 两组血清BUN和Cr浓度组内和组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).与T1时比较,两组T2-6时尿NAG活性和β2-MG浓度升高(P＜0.05);与C组比较,U组T3-5时尿NAG活性和β2-MG浓度降低(P＜0.05).结论 乌司他丁可保护体外循环心内直视手术婴儿围术期的肾功能.     

热休克蛋白70和血红素加氧酶-1表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价热休克蛋白70(HSP70)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用.方法健康雄性SD大鼠140只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=35):假手术组(S组)仅开腹,游离双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹团;肾缺血再灌注组(I/R组)夹闭双侧肾蒂缺血45 min,恢复灌注;缺血后处理组(IPo组)夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次,恢复灌注;HSP抑制剂槲皮黄酮+缺血后处理组(Q+IPo组)缺血前1 h 腹腔注射槲皮黄酮100 mg/kg,余操作同IPo组.于再灌注即刻(T0)、1、3、6、12、24、48 h(T1～6)时各组随机取5只大鼠抽心脏血后取肾,检测肾组织HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达,T3时抽心脏血,测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度、caspase-3 mRNA的表达,TUNNEL法检测肾组织凋亡细胞,计算凋亡指数(AI),光镜下观察肾组织病理学结果.结果 与S组比较,其余组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3 mRNA表达上调,各时点HSF70、BO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AI降低,caspase-3 mRNA表达下调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与IPo组比较,Q+IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3mRNA表达上调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).IPo组肾组织病理学损伤较I/R组减轻,Q+IPo组肾组织病理学损伤程度与I/R组相似.结论 HSP70和H0-1表达参与了肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤的过程.

Abstract：

Objective To evaluate the role of the expression of heat shock protein 70 (HSP70) and heme oxygenase-1 (HO-1) in the reduction of renal ischemia-reperfusion (I/R) injury by ischemic postconditioning in tats.Methods One hundred and forty healthy male SD rats weighing 250-280 g were randomized into 4 groups ( n = 35 each) : sham operation group (S group) ; I/R group; ischemic postconditioning group (IPo group); quercetin (an inhibitor of HSP) + ischemic postconditioning group (Q + IPo group). Renal I/R was produced by clamping bilateral renal pedicels for 45 min followed by reperfusion. In group S, bilateral kidneys were only exposed through a midline incision but their- pedicels were not clamped. In IPo and Q + IPo groups, 45 min ischemia was followed by three 10 s episodes of ischemia at 10 s intervals for reperfusion and in addition intraperitoneal quercetin 100 mg/kg was injected at 1 h before ischemia in group Q + IPo. Blood samples from hearts were obtained at 0, 1, 3, 6, 12, 24 and 48 h of reperfusion (T0-6) and the rats were then sacrificed and kidneys removed to detect the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein in renal tissues. The blood samples obtained at T3 were used to determine serum creatinine (Cr) and urea nitrogen (BUN) concentrations and the expression of caspase-3 mRNA . The apoptosis in the renal tissues was detected using TUNEL and apoptotic index ( AI) was calculated. Microscopic examination was performed with light microscope. Results Compared with group S, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3,the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T0-6 in the other groups (P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly decreased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was down-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T1-5 in group IPo ( P ＜ 0.05) . Compared with group IPo, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was down-regulated at T1-5, in group Q + IPo ( P ＜ 0.05) . The microscopic examination showed that the renal I/R injury was significantly attenuated by ischemic postconditioning and the degree of injury in group IPo was similar to that in group I/R. Conclusion The expression of HSP70 and HO-1 is involved in the reduction of renal I/R injury by ischemic postconditioning in rats.     

左卡尼汀对肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用及其机制

目的研究左卡尼汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用并探讨其机制。方法将大鼠随机分为3组：对照组（C组）,缺血再灌注组（IR组）,左卡尼汀组（LC组）。C组不予缺血再灌注处理,IR组及LC组建立肾脏IR模型。再灌注6h后检测各组血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平;测定肾组织超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量;RT-PCR检测肾组织核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧化酶-1（HO-1）mRNA含量;Western-blot检测各组肾组织Nrf2及HO-1蛋白表达水平。结果 LC组血清Cr、BUN水平低于IR组[（74.17±12.80）μmol/L、（24.28±2.58）mmol/L vs.（112.83±17.45）μmol/L、（35.13±6.01）mmol/L],差异具有统计学意义（P〈0.01）。LC组肾组织SOD活性高于IR组[（39.55±6.61）kU/g vs.（28.05±4.37）kU/g],差异具有统计学意义（P〈0.01）;MDA显著降低于IR组[（4.15±0.69）μmol/g vs.（6.12±1.08）μmol/g],差异具有统计学意义（P〈0.01）。IR组Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达水平高于C组（P〈0.01）,低于LC组（P〈0.01）。结论左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能为激活Keapl-Nrf2-ARE通路进而诱导HO-1的表达。     

Tubular proteinuria in reflux nephropathy: post ureteric re-implantation

We studied urine protein excretion in 55 adults with reflux nephropathy (median age 26.9 years) who had had normal blood pressure, renal function and ureteric re-implantation in childhood. Urine retinol binding protein (RBP), N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAG), albumin, bacteriuria, systolic blood pressure, glomerular filtration rate (GFR), peripheral plasma renin activity (PRA) and the degree of renal scarring were measured in each subject; 20 had bilateral and 35 unilateral renal scarring; 5 were hypertensive and none were in renal failure. Urinary NAG and RBP excretions were significantly greater in the study group than in 34 healthy controls (median age 29.7 years). Within the study group, NAG excretion significantly correlated with PRA (P = 0.02). RBP excretion correlated with PRA, systolic blood pressure and the laterality (bilateral vs. unilateral) of scarring (P<0.01). Urinary albumin excretion correlated with systolic blood pressure (P = 0.03). We conclude that increased urinary protein, especially NAG and RBP excretion, occur late after ureteric re-implantation in reflux nephropathy independent of GFR. Its association with PRA supports the concept of segmental perfusion and filtration as an important mechanism that may explain the above findings. Received June 26, 1995; received in revised form and accepted March 6, 1996     

卡维地洛改善顺铂致肾小管上皮细胞凋亡

目的 观察顺铂致急性肾衰竭(ARF)中肾小管上皮细胞凋亡情况及卡维地洛(carvedilol)对其影响,并探讨其作用机制。方法 雄性Wistar大鼠随机分为盐水对照组、顺铂组、卡维地洛对照组、卡维地洛治疗组。测定BUN、Scr、尿乙酰氨基葡糖苷酶(NAG)、肾组织丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)的含量。苏木素-伊红染色(HE)观察肾脏病理改变。原位缺口末端标记法(TUNEL)与DNA电泳观察肾小管上皮细胞的凋亡。Western印迹检测caspase-3的蛋白表达。结果 顺铂组大鼠BUN、Scr、尿NAG升高;肾脏病理改变加重;大量的肾小管上皮细胞凋亡; MDA含量增加,SOD活性降低;caspase-3的蛋白表达增加。上述指标在卡维地洛治疗组均得到改善,BUN从(58.33±19.93)降至(28.74±19.62)mmol/L;Scr从(425.56±97.96)降至(253.90±134.87)μmol/L;NAG从(224.77±75.86)降至(137.52±26.38)U/L;MDA从(18.13±7.01)降至(9.74±1.68)nmol/mg蛋白;SOD从(30.05±12.20)升至(64.67±20.64)U/mg蛋白;caspase-3的蛋白表达从1.94±0.73降至1.25±0.52;细胞凋亡从(42.5±12.6)%降至(23.7±8.4)%;肾组织病理损害也明显改善。结论 肾小管上皮细胞凋亡是顺铂致ARF的重要原因之一。卡维地洛能减轻顺铂的肾毒性,降低肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与减少活性氧(ROS)的产生,部分抑制了caspase依赖的凋亡途径有关。     

Inhibition of heme oxygenase-1 in microvascular lung pericytes diminishes at high concentrations of an inflammatory mediator

Post-traumatic inflammation and sepsis induce changes in the lung microvasculature causing increased permeability. Pericytes, contractile cells positioned abluminally to endothelial cells, play a role in regulating this response. An in vitro model of microvascular lung pericytes (MLP) was used to investigate the effect of inhibiting heme oxygenase-1 (HO-1), a stress-induced enzyme, in the presence of varying levels of lipopolysaccharide (LPS), a mediator in the initiation of inflammation, on pericyte contractility. Rat MLP were cultured on collagen gel matrices. Cells were exposed to three concentrations of LPS in the presence of zinc protoporphyrin IX (ZnPP-9), a known inhibitor of HO-1. After 24 hours, the surface area of the collagen disks was quantified, thereby measuring pericyte contraction. ZnPP-9 caused a significant attenuation of the LPS-induced relaxation of the pericytes (P < or = 0.003). The effects of ZnPP-9, however, depended on the concentration of LPS to which the pericytes were exposed. Greater concentrations of LPS decrease the attenuating power of ZnPP-9. The inhibition of HO-1 diminished MLP relaxation triggered by LPS. The effect of ZnPP-9, however, is dependent on the concentration of LPS to which the MLP are exposed, indicating its saturation. ZnPP-9 may antagonize the microvascular response to trauma.     

乌司他丁对原位肝移植术患者围术期肾功能的影响

目的 评价乌司他丁对原位肝移植术患者围术期肾功能的影响.方法 拟行原位肝移植术的患者60例,性别不限,年龄35～64岁,体重50～75 kg,ASA分级Ⅱ或Ⅲ级,血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)未见异常.采用随机数字表法,将患者随机分为2组(n＝30):对照组(C组)和乌司他丁组(U组).麻醉诱导后U组经lh静脉输注乌司他丁400 000 IU(溶于20ml生理盐水中),然后每4h重复静脉输注200000 IU,直至术后48 h;C组给予等容量生理盐水.于无肝前期、无肝期和新肝期记录尿量和呋塞米用量.分别于麻醉诱导前(T1)、无肝期15 min(T2)、新肝期15 min(T3)、术毕(T4)和术后48 h(T5)时采集静脉血和尿液标本,测定血清BUN和Cr的浓度、肌酐清除率和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性、微量白蛋白浓度.结果 与C组比较,U组无肝期和新肝期呋塞米用量减少,尿量增加,T2～s时血清Cr浓度降低,肌酐清除率升高,T4,５时尿NAG活性和微量白蛋白浓度降低,T3～５时血清BUN浓度降低(P<0.05).结论 乌司他丁对原位肝移植术患者围术期肾功能有一定的保护作用.     

普罗布考防治大鼠顺铂急性肾损伤的实验研究

目的：复制大鼠顺铂急性肾损伤模型,研究氧化应激与核转录因子Sp1及凋亡的关系;探讨普罗布考对顺铂急性肾损伤的保护作用及作用机制。方法：24只SD雄性大鼠被随机分为生理盐水对照组、顺铂模型组、普罗布考干预组、普罗布考对照组,每组6只;检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖甘酶（NAG）、血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、肾组织匀浆液丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）,光镜观察肾脏病理改变;采用免疫组化染色检测肾组织Sp1蛋白表达;采用TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡。结果：与生理盐水对照组和普罗布考对照组相比,顺铂模型组大鼠血清BUN和Scr,尿NAG酶,肾脏组织匀浆MDA含量显著升高,肾组织匀浆GSH-Px活力显著下降（P〈0.01）;肾脏指数、肾小管损伤分数和肾小管上皮细胞凋亡百分比均明显增加（P〈0.01）;肾组织Sp1蛋白的表达上调。采用普罗布考干预后血清BUN和Scr,尿NAG酶,肾脏组织匀浆MDA含量显著下降（P〈0.05）;肾组织匀浆GSH-Px活力显著升高;肾脏指数、肾小管损伤分数和肾小管上皮细胞凋亡百分比均明显降低（P〈0.01）;肾组织Sp1蛋白的表达下调。结论：氧化应激和核转录因子Sp1在顺铂所致大鼠肾毒性中起一定作用;普罗布考对顺铂所致大鼠肾毒性有保护作用,其机制可能与抗氧化、抑制肾小管上皮细胞凋亡、下调肾组织Sp1蛋白表达有关。