4’-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞内Ca^2＋浓度的影响

目的：探讨4＇-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及细胞内Ca^2＋浓度的影响。方法：应用MTT法、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜技术，体外观察该化合物对JAR细胞的影响。结果：4＇-甲醚-黄芩素对JAR细胞的生长具有抑制作用。随着药物浓度与作用时间的增加，Annexin V-FITC^＋／PI-细胞、细胞内Ca^2＋浓度逐渐增加，与对照组相比差异有显著性。结论：4’-甲醚-黄芩素能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖，诱导凋亡，其机制与提高细胞内Ca^2＋浓度有关。     

4’-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞内Ca2+浓度的影响

目的:探讨4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及细胞内Ca2 浓度的影响.方法:应用MTT法、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜技术,体外观察该化合物对JAR细胞的影响.结果:4'-甲醚-黄芩素对JAR细胞的生长具有抑制作用.随着药物浓度与作用时间的增加,Annexin V-FITC /PI-细胞、细胞内Ca2 浓度逐渐增加,与对照组相比差异有显著性.结论:4'-甲醚-黄芩素能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2 浓度有关.     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

4’-甲醚-黄芩素逆转人绒毛膜癌耐药细胞株多药耐药性的相关机制研究

目的:探讨4’-甲醚-黄芩素(4’－m－s)逆转人绒毛膜癌耐药细胞株jar/vp16多药耐药性的可能机制?方法:采用流式细胞术测定4’－m－s作用前后耐药细胞内罗丹明(rh123)潴留量的变化,以检测4’－m－s对p－糖蛋白(p－gp)功能的影响;用半定量逆转录聚合酶链反应(rt－pcr)检测多药耐药基因mdr1 mrna的表达,并进一步采用western blot及免疫组织化学法测定mdr1基因产物p－gp的表达?结果:流式细胞术结果表明,20 μg/ml 4’－m－s可明显增加耐药细胞内潴留的rh123浓度;rt－pcr及western blot结果显示,4’－m－s可抑制耐药细胞中mdr1 mrna和p－gp的表达;免疫组化实验显示,4’－m－s 处理后,耐药细胞中p－gp的表达下降,表现为细胞膜上阳性颗粒数量减少?着色变浅?结论:4’－m－s对人绒毛膜癌耐药细胞株多药耐药性的逆转,与抑制mdr1 mrna及其产物p－gp的表达?增加细胞内化疗药物的浓度有关?     

甘草酸诱导人乳腺癌细胞凋亡和细胞内Ca2+的相关性研究

目的 探讨甘草酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖抑制和诱导凋亡的作用,了解凋亡发生与细胞内Ca2 的相关性.方法 MTT比色法测定细胞增殖能力,末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法、Annexin V流式细胞仪法和单细胞凝胶电泳(彗星试验)法检测凋亡细胞,Fura-2荧光负载方法测定[Ca2 ]i的变化.结果 从5 mmol/L甘草酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P＜0.01),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为15.84 mmol/L.7.5 mmol/L和10.0 mmol/L甘草酸使细胞凋亡率显著升高(P＜0.05和P＜0.01).甘草酸处理组的[Ca2 ]i明显低于对照组(P＜0.05).甘草酸与BAPTA-AM组合处理组的凋亡率明显高于单纯的7.5 mmol/L处理组(P＜0.05和P＜0.01).结论 甘草酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用;其诱导凋亡可能与细胞内Ca2 水平下调有关.     

黄芩苷联合黄芩素诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的：探讨黄芩苷和黄芩素联合应用对乳腺癌细胞凋亡的诱导作用及其相关机制。方法将不同浓度的黄芩苷、黄芩素以及两者联合作用于人乳腺癌（Michigan Cancer Foundation 7,MCF-7）细胞。检测上述化合物对乳腺癌细胞的活力、凋亡情况以及凋亡相关蛋白表达的影响。结果黄芩苷或黄芩素作用于乳腺癌细胞后,与作用前相比细胞生长抑制率显著升高（P〈0.05）;两者联合应用,与两者单独作用相比抗增殖作用明显增强（P〈0.05）。流式细胞术检测发现两者作用后尤其是两者联用后细胞凋亡显著增加。蛋白印迹分析显示黄芩苷和黄芩素联合作用后Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53的表达增加而Bcl-2表达下降,同时p-38活化亦增加。结论黄芩苷和黄芩素均能诱导乳腺癌细胞的凋亡,两者联合应用后作用明显增强,其机制可能与其促进促凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax和p53等的表达,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

黄芩苷联合顺铂体外诱导人肝癌细胞HepG2.0凋亡的实验研究

目的观察黄芩苷联合顺铂是否能诱导HepG2.0细胞凋亡及探讨其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法采用体外细胞培养方法,分别用黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂干预HepG2.0细胞。用CCK-8法检测细胞活性;光学显微镜观察HepG2.0细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测HepG2.0细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc表达的影响。结果光学显微镜下可观察到药物组细胞凋亡的形态改变;各药物组细胞早期凋亡率显著升高;各药物组细胞Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、c-myc和Caspase-3表达升高。结论黄芩苷、顺铂及黄芩苷联合顺铂均能诱导HepG2.0细胞凋亡,其机制可能通过调控Bcl-2、Bax、Caspase-3、c-myc蛋白的表达有关。     

齐墩果酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及与细胞内Ca2+水平关系的研究

目的研究齐墩果酸对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖抑制和诱导凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的关系.方法25～125μmol/L浓度梯度的齐墩果酸处理MCF-7细胞24h,用MTT比色法测定细胞增殖能力.50μmol/L,75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸处理细胞24h,用末端脱氧核苷转移酶介导dUTP末端标记法和Annexin Ⅴ流式细胞仪法检测凋亡细胞.75μmol/L齐墩果酸处理细胞24 h,用Fura-2荧光负载方法测定[Ca2 ]i的变化.结果从50μmol/L齐墩果酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P＜0.05和P＜0.01),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC50)为88.36μmol/L.75μmol/L和100μmol/L齐墩果酸使细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);齐墩果酸处理组的[Ca2 ]i也明显高于对照组(P＜0.01).结论齐墩果酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导调亡的作用;其诱导凋亡可能依赖于细胞内Ca2 水平上调.     

白杨素提高肿瘤坏死因子-α诱导肝癌细胞HepG2凋亡能力的研究

目的 研究白杨素提高肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肝癌细胞 HepG2 凋亡的能力,并对其分子机制进行初步探讨。方法 白杨素以不同浓度 (10、20、40 μmol/L) 单独或联合 TNF-α(10 ng/mL) 处理 HepG2 细胞后,于普通及荧光倒置显微镜下观察细胞形态变化,获得细胞死亡的定性资料;流式细胞术检测 sub-G1 峰,分析峰值变化规律,获得细胞死亡的定量资料;并以 Western blotting 方法检测凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白和相应的裂解产物的变化情况及凋亡抑制蛋白 Bcl-xL、cIAPs、xIAP、cFLIP 的时间-效应变化规律。结果 形态学观察可发现白杨素联合 TNF-α处理 HepG2 细胞后,与对照组比较细胞出现明显的死亡数量增加,而单独白杨素组、TNF-α组与对照组比较则未观察到明显的细胞减少 (P＞0.05);流式细胞术分析 sub-G1 的定量资料也支持这一结果,联合处理组 sub-G1 值随着白杨素剂量增加而增大,最高达到 (27.84±0.54)%,与对照组比较有显著差异 (P＜0.05),Hochest 33342 荧光染色在联合处理组可观察到明显的核固缩细胞增加;Western blotting 检测到凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 原蛋白减少、相应的活化裂解片段出现;全 caspase 酶抑制剂 z-VAD-fmk 可有效抑制联合处理组 HepG2 细胞死亡、sub-G1 峰消失比值减少,阻止凋亡标志蛋白 caspase-3、caspase-8 和 PARP 的活化降解;TNF-α 引起的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达量增加,随联合处理时间延长而明显下调,与对照组比较有明显差异,Bcl-xL、xIAP 等其他凋亡抑制蛋白没有明显改变。结论 白杨素能够有效提高 TNF-α诱导 HepG2 细胞凋亡的能力,NF-κB 调节的凋亡抑制蛋白 cFLIP-1 表达减少是其重要的分子机制。     

曲古抑菌素A诱导MOLT-4细胞凋亡的机制

目的 通过研究曲古抑菌素A（trichostatinA，TSA）作用前后MOLT-4细胞基因表达谱的差异，初步探讨TSA诱导细胞周期阻滞和凋亡的机制。方法 TSA以不同浓度和不同作用时间作用MOLT-4细胞，通过流式细胞仪检测其凋亡率的变化。提取细胞RNA，应用基因芯片方法分析TSA作用前后的基因表达变化，RT-PCR验证芯片结果的可靠性。结果 MOLT-4细胞对TSA非常敏感，纳摩尔级水平即可诱导显著的细胞凋亡，而且这种凋亡与TSA作用浓度及时间呈现明显的线性关系。基因芯片结果显示，200nmol／LTSA作用MOLT-424h后共有952个基因发生不同程度的变化，其中上调的有477种，下调的有475种，部分结果经RT-PCR证实。结论 TSA诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡是一个多基因参与的复杂过程。     

植物凝集素刺激下人外周血淋巴细胞端粒酶催化亚单位(hTERT)表达上调

目的通过测定正常人外周血淋巴细胞中hTERT在植物凝聚素(PHA)刺激前后的表达水平的变化,评估正常人淋巴细胞对PHA刺激的反应能力。方法采集40例正常人外周血,分离淋巴细胞后,一部分在含0.5%PHA的培养液中培养,分别于24h、48h收集细胞,提取总RNA后,用RT-PCR法测定其hTERT合成水平的相对含量。结果淋巴细胞受到PHA刺激前hTERT的表达相对水平为0.575±0.231。刺激后24h、48hhTERT的表达相对水平分别为0.723±0.294,0.931±0.342,刺激后较刺激前明显升高(P<0.01)。结论正常人外周淋巴细胞活化时,hTERT的表达水平随时间延长明显升高。     

姜黄素改变端粒酶活性对肝癌细胞体外增殖的影响

目的 观察姜黄素对人肝癌细胞株HepG2体外增殖和端粒酶活性的影响，为彰明其抗肝癌机制提供依据。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验检测细胞生长抑制率；流式细胞法检测细胞周期的分布；端粒片断重复扩增-酶联免疫吸附法（TRAP-ELISA）测定细胞端粒活性的变化；并用RT—PCR法检测细胞端粒酶hTERT—mRNA的表达。结果 姜黄素对HepG2细胞生长有显著的抑制作用，并呈明显的量效依赖性；不同浓度的姜黄素使G2／M期细胞比例明显增加，G1期／细胞比例明显降低；随姜黄素浓度的增加，HepG2细胞端粒酶活性依次下降；不同浓度提取物对HepG2细胞的hTERT—mRNA表达均有明显抑制作用，具有显著的量效关系。结论 姜黄素对HepG2细胞有明显的生长抑制作用，可能作用机制为诱导细胞周期G2／M期阻滞并抑制HepG2细胞端粒酶hTERT-mILNA的转录，从而降低端粒酶的活性。     

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的：观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0．5g／L、1g／L、5g／L、10g／L、15g／L、20g／L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果：乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0．412,r=0．339．P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0．753,P均=0．000)关系、5g／L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论：乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。     

人端粒酶逆转录酶基因启动子区的克隆及其真核表达载体的构建

目的：构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体。方法：用核酸内切酶NotⅠ和KpnⅠ酶切报告基因GFP,插入pcDNA3．1( )载体,得到pcDNA3．1( )-GFP(PG)载体;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列,测序后用核酸内切酶BglⅡ和KpnⅠ酶切插入PG载体,得到pcDNA3．1( )-GFP—hTERT(PGT)载体。将PGT载体转染人食管癌EC9706细胞系,经G418筛选,荧光显微镜下观察。结果：克隆得到的启动子序列与文献相符,重组载体经酶切鉴定方向正确,含有人端粒酶逆转录酶基因启动子序列。经转染人食管癌EC9706细胞系,在荧光显微镜下观察到绿色的阳性克隆。结论：克隆的人端粒酶逆转录酶基因启动子序列在真核细胞中具有启动子活性。     

三氧化二砷对Hela细胞hTERTmRNA表达的调节和对端粒酶活性的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌细胞(Hela细胞)端粒酶活性及端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)表达的影响。方法：以2μmoL／L的As2O3作用于人宫颈癌Hela细胞，在不同时间点用MTT法检测Hela细胞活力的变化，用流式细胞仪检测细胞周期的变化，用RT-PCR法检测hTERTmRNA表达的变化，用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性的变化。结果：随着As2O3作用时间的延长，Hela细胞的活力逐渐降低，G0／G1期细胞所占比例升高，S期细胞所占比例减少，hTERTmRNA表达水平逐渐降低，端粒酶活性逐渐下降。结论：As2O3可引起Hela细胞周期阻滞，hTERTmRNA的表达水平下调，端粒酶活性降低。     

显性负突变hTERT在TSA诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的通过转染显性负突变hTERT探讨其在TSA诱导宫颈癌细胞株Hela凋亡中的作用。方法PCR-TRAP-ELISA法检测转染显性负突变,野生型hTERT和对照质粒以后Hela细胞的端粒酶活性。磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法检测细胞生长率;AnnexinⅤ/PI法检测各组转染细胞在TSA作用下的早期凋亡。结果转染显性负突变hTERT的Hela细胞的端粒酶活性显著低于对照组,2μmol/LTSA作用对照细胞Hela-puro、Hela-DNhTERT和Hela-WThTERT细胞,Hela-DNhTERT相对于Hela-puro生长率差异明显,Hela-DNhTERT细胞凋亡率明显高于Hela-WThTERT和Hela-puro组。结论转染DNhTERT对TSA诱导的Hela细胞凋亡具有协同作用。     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。