5-氟尿嘧啶多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备5-氟尿嘧啶(5-FU)免疫原并制备其多克隆抗体。方法采用化学合成法对5-FU进行修饰制备5-氟尿嘧啶-1-基乙酸半抗原(5-FUAA),并经碳酰二亚胺盐法将其分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接以制备免疫原。采用5-FU与BSA结合的免疫原(5-FUAA-BSA)免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,5-FU与OVA结合物(5-FUAA-OVA)包被酶标板经间接ELISA检测抗血清效价,并采用ELISA与Western blot法检测抗血清的特异性。结果成功合成半抗原5-FUAA,并分别制备5-FUAA-BSA和5-FUAA-OVA完全抗原。将5-FUAA-BSA免疫BALB/c小鼠制备的免疫血清效价达1∶1 280 000,且该多克隆抗体能特异地结合5-FU半抗原。结论成功制备了5-FU的多克隆抗体。     

环丙沙星特异性抗体的研制

目的:制备抗环丙沙星(CIP)的特异性抗体,以ELISA方法对其进行评价,为进一步研制CIP快速检测试剂盒打基础。方法:以阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)为载体合成免疫原CIP-cBSA,免疫新西兰长耳白兔和BALB/c小鼠,同时以天然、阳离子化鸡卵清白蛋白(nOVA、cOVA)为载体合成包被原CIP-nOVA、CIP-cOVA进行抗血清的筛选,以间接(竞争)ELISA法测定抗血清的效价及特异性。结果:本试验获得7种抗血清,其中2种高特异性CIP抗血清,IC50达1μg/L,效价分别为4000和2000(以A450值为1.0时的抗血清稀释倍数表示),两种抗血清与恩诺沙星(ENR)、诺氟沙星(NOR)、氧氟沙星(OFL)存在不同程度的交叉反应,与青霉素(PEN)、卡那霉素(KAN)和庆大霉素(QEN)无交叉。结论:可满足目前中国动物性食品安全检测的需要,为研究组织中CIP残留及开发CIP快速检测试剂盒奠定了基础。     

双烯雌酚人工抗原的合成及特异性抗体的制备

目的制备抗双烯雌酚(DIEN)特异性抗体,为进一步研制DIEN免疫检测试剂盒打基础。方法采用4-溴丁酸乙酯对DIEN进行活化,以活泼酯法与BSA偶联制备免疫原(DIEN-CP-BSA);经紫外扫描和飞行时间质谱扫描鉴定偶联情况;以DIEN-CP-BSA免疫Balb/c小鼠制备特异性抗体,间接(竞争)ELISA评价抗血清效价及特异性。结果本试验获得较高效价的DIEN抗血清,其效价达1∶64 000,双烯雌酚半抑制浓度(IC50)为62 ng/ml;抗血清与结构类似物己烷雌酚的交叉反应率仅为0.34%,与己烯雌酚和17-β雌二醇无交叉反应;利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,双烯雌酚在10～300 ng/ml呈线性关系。结论本研究制备了抗双烯雌酚(DIEN)特异性抗体,为研究畜产品中DIEN残留及开发DIEN免疫检测试剂盒奠定了基础。     

丙烯醛单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立

目的利用丙烯醛阳性杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,优化并建立丙烯醛的ELISA检测技术。方法采用直接人工合成法,将丙烯醛半抗原与载体耦合制备完全抗原(免疫原)。利用PEG法将免疫效价高的Balb/c小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用有限稀释法进行4次亚克隆,筛选得到1株能稳定分泌抗丙烯醛抗体的亚型为IgG2b的杂交瘤细胞株1G7G6,并制备腹水型抗体。在此基础上,优化并建立检测丙烯醛的间接竞争ELISA方法。结果合成适于免疫和ELISA检测的完全抗原丙烯醛-KLH(免疫原)和丙烯醛-BSA(包被原),制备的丙烯醛抗体(腹水)的效价均在8×104以上,与其他丙烯醛类似物交叉反应率均小于1%,特异性高。优化后丙烯醛ELISA方法的检测灵敏度(IC50)为43.2 ng/ml,检测线性范围为4.4~417.2 ng/ml,检测限(LOD)为1.8 ng/ml。结论成功制备得到高亲和力、高效价的丙烯醛腹水型单抗,筛选优化了间接竞争ELISA检测条件,建立了检测液相中丙烯醛的特异、快速、灵敏的ELISA检测技术。     

己烯雌酚免疫原的合成及其抗血清制备

目的: 制备人工合成的己烯雌酚 (DES)的多克隆抗体。方法: 采用碳二亚胺法将DES与牛血清白蛋白 (BSA)交联, 经紫外扫描估算其交联比为 22, SDS- PAGE实验初步表明DES与BSA发生交联。用双向免疫琼脂扩散实验检测经DES -HS- BSA多次免疫新西兰白兔的抗血清。结果: 合成的DES- HS- BSA复合物, 具有免疫原性, 并产生了针对小分子DES的抗体。结论: DES免疫原的合成是成功的, 为其试剂盒的研制提供了条件。     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

恩诺沙星完全抗原的制备试验

目的制备恩诺沙星(EF)的完全抗原,进而为EF单克隆抗体检测试剂盒的研制奠定基础。方法将小分子的药物EF和鸡血清白蛋白(OVA)以及牛血清白蛋白(BSA)分别采用碳二亚胺法和活化酯法两种不同的偶联方法合成完全抗原,通过紫外特征光谱和抗血清效价对完全抗原的合成效果进行分析。结果2种不同的偶联方法均使OVA和BSA与EF偶联成功。偶联方法对于完全抗原的合成效果也存在差异,从紫外吸光率和偶联物结合比判断,OVA采用活化酯法效果好,未经EDA处理的OVA、活化酯法和碳二亚胺法合成的偶联物的结合比分别为10.3、20.7、16.5;而BSA采用碳二亚胺法效果好,未经EDA处理的BSA、活化酯法和碳二亚胺法合成的偶联物的结合比分别为20.5、24.6和30.8。血清效价检测发现,以BSA-EF为完全抗原的效价为25600,以OVA-EF为完全抗原的效价为6400,这表明完全抗原的合成是成功的。结论2种不同方法合成的OVA-EF和BSA-EF完全抗原,可以作为免疫原用于制备抗体以及检测时的包被原进行ELISA检测。     

小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立北大核心CSCD

目的:通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体,优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法,以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法。方法:利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体;以纯化后的抗体作为标准品,建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法,并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证。结果:以KLH包被浓度为80μg/ml,山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1∶20000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证,检测线性范围为390.63~25000 ng/ml,R^(2)=0.9848,线性良好;批内和批间CV均<10%;检测限为194.83 ng/ml。结论:通过制备抗KLH多克隆抗体,并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法,其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求,是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法。     

人PIWIL3特异性抗体的制备和PIWIL3蛋白在肿瘤组织中的分布

目的:制备人Argonaute家族中PIWIL3蛋白的特异性抗体,并检测其在人多种肿瘤组织中的表达和分布.方法:根据序列同源性和多肽免疫性,利用内部多肽选择数据库选择最佳的多肽免疫原合成多肽,再与KLH结合用于免疫;免疫所得的抗血清经多肽包被的凝胶进行亲和层析纯化,酶联免疫吸附分析技术(ELISA)检测纯化后抗体与多肽的结合能力,Western blot检测抗体对相应蛋白的结合能力.人肿瘤组织芯片检测该蛋白在多种肿瘤组织的表达和定位.结果:成功制备特异性人PIWIL3蛋白多克隆抗体.ELISA和Westernblot检测均表明该抗体具有很好的结合能力.肿瘤组织芯片检测到PIWIL3蛋白在人星形细胞神经胶质瘤和脑脊膜瘤胞质中表达.结论:应用内部多肽选择数据库可以得到最佳的多肽免疫原,以区分亚家族中其他有高度序列同源性的蛋白,成功制备出纯度和结合能力均较好的特异性人PIWIL3抗体,对研究人类特定肿瘤的发病具有潜在的应用价值.     

百草枯人工抗原的合成及抗体的制备

目的: 制备百草枯人工抗原和抗血清, 为建立酶联免疫吸附法提供技术储备.方法: 以4, 4'-联吡啶和碘甲烷为起始原料, 于暗处通氮气保护下合成了百草枯半抗原; 混合酸酐法偶联大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原和包被抗原; 免疫新西兰大白兔, 制备多抗.结果: 合成的半抗原经HPLC-MS、 1HNMR和IR鉴定, 初步确定合成成功; 百草枯半抗原与BSA和OVA的结合比分别为19∶ 1和14∶ 1; 抗血清经间接ELISA法检测, 效价达1∶ 2.56×104, 经饱和硫酸铵沉淀法纯化后抗体的效价达1∶ 5.12×104.结论: 合成的百草枯人工抗原具有较好的免疫原性, 为百草枯酶联免疫检测(ELISA)试剂盒的研制提供了基础.     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.