人外周血中γδT细胞亚群、表型和细胞因子产生的研究

目的进一步比较人外周血中γδT细胞及Vδ1^+、Vδ2^+、Vδ1^-Vδ2^-细胞频率、表型及功能方面异同,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术检测TCRγδ、Vδ1、Vδ2、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、Granzyme A。PMA+Ionomycin刺激前后检测细胞因子IFN-γ、IL-17A及转录因子T-bet、Ro Rγt水平。磁珠富集、流式分选和ELISA检测纯化细胞IFN-γ产生。结果根据γδT细胞受体(TCRγδ)δ链,将γδT细胞分为Vδ1^+,Vδ2^+,Vδ1^-Vδ2^-3群,TCRγδ高低表达与Vδ1、Vδ2表达相关。Vδ1^+、Vδ2^+细胞约有20%~40%细胞表达CD8,低表达CD4,而Vδ1^-Vδ2^-细胞约有60%表达CD8和20%表达CD4。约6%的Vδ1^+和30%的Vδ1^-Vδ2^-细胞表达CD45RO,而约有80%的Vδ2^+细胞表达CD45RO。刺激后,γδT细胞3个亚群均表达IFN-γ和IL-17,Vδ2^+细胞表达最高,3个亚群差异有显著性,与纯化细胞结果相符。3个亚群细胞均高表达转录因子T-bet和Ro Rγt,高表达颗粒酶A。结论人外周血中Vδ1^+、Vδ2^+及Vδ1^-Vδ2^-细胞在频率、表型及功能方面均有显著差异,均可产生高水平细胞因子IFN-γ,该结果将为γδT细胞进一步研究打下良好基础。     

人γδT细胞表型与功能特征的探讨

目的比较观察人外周血PBMCs和CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能特征,进一步了解γδT细胞在免疫应答中的作用。方法分离正常人PBMCs及脐带血CBMCs,检测表面分子的表达。PMA+Ionomycin刺激PBMCs或CBMCs后,利用流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生以及初始/记忆细胞标记的表达。结果与αβT细胞相比,γδT细胞高表达CD45RO,低表达CD25和CCR7;与CBMCs中γδT细胞相比,PBMCs中γδT细胞表达CD45RO升高,CD45RA与CD25降低。细胞因子表达的结果表明,与αβT细胞相比,γδT细胞分泌大量IFN-γ和TNF-α,较少分泌IL-2,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA-CD62L-CCR7-;与PBMCs中γδT细胞不同,体外刺激CBMCs中γδT细胞后,表达IFN-γ数量较低,且IFN-γ+细胞主要为CD45RA+CD62L-CCR7-/+。结论PBMCs与CBMCs中αβT和γδT细胞的表型与功能均存在差别,记忆性γδT细胞的增加可能与其活化和免疫应答的作用相关。     

八色流式细胞术检测人外周血BCG特异性效应型记忆CD4+T细胞的表型特征

目的:检测BCG刺激后,PPD+正常人外周血中细胞因子产生及其亚群.方法:分离PPD+正常人外周血单个核细胞(PBMC),BCG刺激后检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子分泌,并用八色流式细胞术分析BCG特异性T细胞亚群.结果:BCG刺激PBMC后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析分泌细胞因子的细胞亚群,主要是CD4+CD45RO+ CD62L(-)CD27(-)和CD4+ CD45RO+ CD62L(-)CD27+分泌细胞因子.结论:BCG刺激PPD+正常人外周血PBMC后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且该细胞表现出CD4+CD45RO+ CD62L(-)效应型记忆细胞特征,可能在预防结核感染中发挥重要作用.     

人外周血中HMBPP特异性Vδ2T细胞细胞因子的产生和表型特征分析

目的研究人外周血单个核细胞中HMBPP特异性Vδ2 T细胞细胞因子的产生和表型特征。方法分离人外周血单个核细胞(PBMCs)和Vδ2 T细胞,用不同剂量的HMBPP和抗人CD28联合刺激培养不同的时间。用酶联免疫吸附法和酶联免疫斑点法检测IFN-γ、TNF-α和IL-2的产生,利用流式细胞术检测Vδ2 T细胞中IFN-γ、TNF-α和IL-2的百分比及表型特征。结果 HMBPP以剂量依赖和时间依赖的方式刺激PBMCs产生IFN-γ。流式细胞术从单个细胞水平证实PBMCs中有(2.27±0.50)%CD3+T细胞表达Vδ2,HMBPP特异性刺激Vδ2 T细胞表达IFN-γ[(38.84±2.62)%]和TNF-α[(26.65±2.05)%],其中(19.43±2.10)%Vδ2 T细胞共表达IFN-γ和TNF-α。表型分析显示,HMBPP特异性Vδ2 T细胞主要为效应型和中央型记忆细胞的表型特征,即CD45RO+CCR7+/-CD62L-。HMBPP刺激纯化的γδT细胞获得相同的结果。结论 HMBPP特异性诱导人PBMCs中Vδ2 T细胞产生细胞因子IFN-γ和TNF-α,表现为记忆细胞的表型特征,本研究为探究感染和炎症性疾病中Vδ2 T细胞的功能和免疫学特征提供了依据。     

卡介苗刺激后CD8~+T细胞活化、增殖及其调节

目的:探讨卡介苗(BCG)刺激后,结核菌素试验阳性(PPD+)正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中CD8+T细胞的活化、增殖、细胞因子产生及调节性T细胞(Treg)对其调节作用。方法:体外用BCG刺激PPD+正常人PBMCs,检测CD8+T细胞的细胞因子产生、活化和增殖。纯化后获得调节性T细胞(Treg)和CD25-细胞,检测Treg对CD8+T细胞增殖的调节作用。结果:BCG诱导CD8+T细胞表达CD69和CD25等活化分子。在低剂量IL-2存在的条件下,BCG诱导CD8+T细胞发生增殖,且增殖的CD8+T细胞大部分表达Granzyme-B。体外BCG短期刺激PBMCs后,CD8+T细胞几乎不产生IFN-γ、IL-2和TNF-α。此外,调节性T细胞抑制CD8+T细胞增殖。结论:BCG诱导CD8+T细胞活化、增殖和表达颗粒酶,Treg抑制CD8+T细胞增殖。     

肿瘤特异性TCRαβ基因转染诱导记忆性T细胞分化及其免疫功能的研究

目的研究特异性TCR基因转染T细胞被肿瘤抗原激活后,记忆性T细胞的分化情况,并明确其表型特征和免疫功能。方法密度梯度离心法分离PBMC,重组TCR腺病毒感染T细胞,流式细胞术检测外源TCR表达效率。AFP表位肽刺激T细胞,流式细胞术检测TCR基因转染T细胞经抗原刺激后,记忆性T细胞标志分子表达。MTT法检测T细胞对不同肿瘤细胞株的杀伤活性。Annexin V-PI双染法检测靶细胞凋亡比例。ELISA法检测T细胞作用于靶细胞后IFN-γ与IL-2分泌水平。结果重组腺病毒载体感染3 d后,外源TCR表达比例接近30%。特异性TCR基因转染可有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化,CD45RO+细胞比例逐渐上升至接近50%。CD45RO+细胞以CD62L–CD44+表型为主。此后CD62L+细胞比例逐渐上升。最终出现分群明显的CD62L+CD44+TCM表型细胞。特异性TCR基因转染能够促进T细胞杀伤AFP+靶细胞,诱导靶细胞凋亡,并促进IFN-γ分泌。抗原预先刺激能够进一步增强TCR基因转染T细胞抗肿瘤免疫效应。结论 TCR基因转染能够有效促进T细胞识别肿瘤抗原后活化。经肿瘤抗原预先刺激的TCR基因转染T细胞将启动记忆性T细胞分化,在再次遭遇表达相同抗原的肿瘤细胞时发挥更为强烈的免疫效应。     

人外周血卡介苗(BCG)特异性中央型和效应型记忆CD4+T细胞的特征

目的：探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征。方法：分离PPD^-和PPD^＋正常人PBMCs，与BCG进行培养，采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平，ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及细胞内因子IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果：当BCG刺激后，PPD^＋正常人PBMCs不产生或只产生少量的IFN-γ，而PPD^＋者IFN-γ产生的量和细胞数均明显增加（P〈0．05）。流式细胞检测分析的结果表明，当BCG刺激后，主要是CD4^-而非CD8^＋T细胞表达IFN-γ和IL-2，两者相比具有显著差异。在CD4^＋T细胞中单独产生IFN-γ的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IL-2的细胞占少数。此外，85％～95％以上的CD4^＋IFN-γ^＋T细胞为CD45RO^＋，其中60％以上的细胞为CCR7^＋，其余的为CCR7^-。同样地，80％～95％左右的细胞为CD62L。。结论：BCG可以诱导抗原特异性记忆CD4^＋T细胞的产生，其中大多数为中央型记忆CD4^＋T细胞，少数为效应记忆CD4^＋T细胞，提示其在预防和控制结核分枝杆菌感染中发挥重要作用。     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~＋T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A（CsA）是否能够抑制正常人CD4＋T细胞产生白细胞介素22（IL-22）。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）,加入PMA＋Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22＋CD4＋T细胞亚群（Th22）;PMA＋Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A（CsA）后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22＋CD4＋T细胞和IFN-γ＋CD4＋T细胞的比例,以及IL-22＋CD4＋T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4＋T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4＋T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。     

结核性胸水中PPD特异性多功能效应型记忆T细胞表型和功能研究

目的:探讨结核性胸水中是否存在纯化蛋白衍生物(PPD)特异性T细胞,并对这群PPD特异性T细胞的表型特征和功能进行研究.方法:体外用PPD刺激结核性胸水细胞(PFCs),结合表面分子和细胞内因子染色方法,分析结核性胸水细胞中PPD特异性的T细胞的表型特征和功能.结果:在不刺激的条件下,结核性胸水细胞几乎不产生细胞因子.PPD刺激结核性胸水细胞后,主要使CD4+ T细胞产生Th1细胞因子.进一步分析Th1细胞因子产生之间相互关系,结果表明PPD特异性CD4+ T 细胞大多同时分泌两种细胞因子.表型分析表明,结核性胸水细胞中分泌Th1细胞因子的主要是CD45RA-CD62L-CD27-CCR7-CD4+ T细胞,即效应型记忆CD4+ T细胞.结论:结核性胸水中存在PPD特异性CD4+ T细胞,这群细胞是多功能效应型记忆CD4+ T细胞,而且可能对结核菌的控制和清除有重要作用.     

γδ T细胞诱导与分化的初步研究-Ⅰ

目的:探讨在异戊烯焦磷酸(IPP)作用下,健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞的增殖和亚型变化,以期获得足够的具有不同特征的γδT细胞用于后续的实验研究。方法:流式细胞术分析经IPP诱导的单个核细胞表面分子的表达状态,评估其γδT细胞的比例、亚型和表型格局。结果:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞数量虽占较低比例,但两者的γδT细胞存在显著异质性。健康人外周血γδT细胞主要以Vγ9Vδ2 TCR亚群为主;初始分选的外周血单个核细胞中Vγ9Vδ2T细胞主要为中央记忆型(CD27+CD45RA-)和效应记忆型(CD27-CD45RA-);IPP诱导后,γδT细胞显著扩增,Vγ9Vδ2 T细胞亚群转变为以效应记忆型为主,并高表达HLA-DR和B7分子。而新生儿脐带血来源的γδT细胞却呈现出较为复杂的亚群异质性,其Vγ9Vδ2 T细胞主要为CD27+CD45RA+的幼稚型细胞;经IPP诱导14天后,γδT细胞获得扩增(比例增高)且Vγ9Vδ2 T细胞趋向中央记忆型和效应记忆型分化,但仍以幼稚型为主。结论:健康人外周血和新生儿脐带血中γδT细胞在数量、亚群诸方面存在差异;IPP具有诱导和扩增外周血γδT细胞的生物学作用,而脐带血来源的γδT细胞还需相关细胞因子的协同作用,才能呈现出其分化成熟为可用于理论研究和临床实验的效应记忆型γδT细胞的潜能。关于其具有的免疫调节和效应功能将另文报道。     

不同治疗剂量白细胞介素2对人外周血γδT细胞增殖和表型的影响

目的研究治疗剂量范围内白细胞介素2(IL-2)对T细胞的增殖作用,特别是对人外周血γδT细胞数量和功能亚群的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,在不同浓度IL-2作用下培养2周,利用免疫荧光染色和流式细胞术分析培养前后不同淋巴细胞的表型和比例,采用台盼蓝染色和血球计数法进行细胞计数。结果Vδ1和Vδ2型γδT细胞的4个功能亚群中,CD27+细胞(包括CD27+CD45RA+和CD27+CD45RA-)可以表达淋巴组织归巢受体CCR7,CD27-细胞(包括CD27-CD45RA+和CD27-CD45RA-)不表达CCR7,具有分布于外周组织的潜能;各个γδT细胞的功能亚群均能表达活性相关受体,在丝裂原刺激下可以迅速产生不同水平的细胞毒作用相关效应分子。虽然高剂量IL-2对CD4 T细胞的增殖产生抑制作用,但对γδT的增殖反而有促进作用,增殖的γδT细胞以CD27-CD45RA-的效应细胞为主。结论治疗剂量范围内的IL-2具有刺激人外周血γδT细胞增殖的作用,在基于IL-2的抗肿瘤治疗中可能具有重要的生物学意义。     

人脐带血与周围血中NKT细胞频率、亚群、表型及功能的比较

目的比较足月产新生儿脐带血和正常人周围血NKT细胞的频率、亚群、表型特征及功能。方法分离足月产新生儿脐带血CBMCs和正常成年人周围血PBMCs,流式细胞术检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达及细胞因子IL-4和IFN-γ的产生。结果 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率分别为0.35%和0.33%,二者无显著差别。CBMCs中CD4+NKT细胞频率(67.39%)高于PBMCs中CD4+NKT细胞频率(54.08%),但CD8+NKT细胞,PBMCs明显高于CBMCs(22.35%对5.86%),CD4-CD8-NKT二者相差无统计学意义。CBMCs中CD3+TCRvβ11+CD45RA+NKT细胞的频率(88.37%)高于PBMCs(61.32%)。CBMCs中CD62L(56.66%对49.60%)和CCR7(22.64%对20.03%)的比例稍高于PBMCs,但其差别无显著性。未刺激CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞均不产生IL-4和IFN-γ,PMA+Ionomycin刺激后,CBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞仍不能产生IL-4和IFN-γ,但PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞却有6.74%产生IL-4、26.96%产生IFN-γ、1.26%同时分泌IL-4和IFN-γ,产生细胞因子的CD3+TCRvβ11+NKT细胞主要为记忆性NKT细胞。结论 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的亚群、表型和功能均存在一定差别,记忆性NKT细胞可能与其再次免疫应答相关。     

结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞IL-17A的表达研究1

目的:比较结直肠癌患者与正常人外周血单个核细胞来源的Vδ2 T细胞CD27、IL-17A、IFN-γ和TNF-α的表达变化。方法:抽取试验对象外周血,分离单个核细胞,采用流式细胞术分析其中CD27+Vδ2 T细胞与CD27-Vδ2 T细胞的IL-17A、IFN-γ和TNF-α的分泌表达情况。结果:结直肠癌患者外周血Vδ2 T细胞的IL-17A表达明显高于正常人[(5.99±0.80)%比(3.48±0.57)%,P=0.01;]IFN-γ与TNF-α的分泌表达具有明显正相关性(P0.0001)。结直肠癌患者和正常人CD27+Vδ2 T细胞的IL-17A表达均较CD27-Vδ2 T细胞低,而CD27+Vδ2 T细胞的IFN-γ和TNF-α分泌表达则高于CD27-Vδ2 T细胞。结论:结直肠癌患者Vδ2 T细胞的IL-17A表达是升高的,而IFN-γ与TNF-α的分泌表达之间具有显著正相关性;共刺激受体CD27影响VδT细胞的功能表达。     

异种HSP70及固相抗体法体外扩增人γδT细胞的比较

目的：比较异种HSP70及固相抗体法体外扩增人γδT细胞。方法：分别用固相抗体法、HSP70BCG及小鼠榄香烯复合瘤苗热休克蛋白70-肽复合物(HSP70m-肽复合物)体外扩增人PBMCs的γδT细胞，流式细胞仪检测细胞表型及亚型分布，RT-PCR检测各亚型基因的取用。MTT检测γδT细胞的细胞毒作用。结果：培养14天后，抗体法扩增的PMBCs总数增加30～40倍，御细胞的比率由3.2％提高到86．7％；HSP70BCG组PBMCs总数增加7—8倍，7趼细胞的比率由3．2％提高到71．32％；HSP70m-肽复合物组PBMCs总数增加4～5倍，γδT细胞的比率由3.2％提高到27.26％。抗体及HSP70BCG扩增的γδT细胞以表达Vγ9/Vδ2亚型为主，且Vδ1、Vδ2、Vδ3三种基因均得到取用，对Daudi具较高的杀伤活性。结论：抗体及HSP70BCG均能扩增出高纯度的γδT细胞，且具有完整的受体库，扩增的γδT细胞具细胞毒活性。     

C57BL/6小鼠γδT细胞的组织器官分布和功能特点

目的 比较C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结中γδT细胞占所分离的淋巴细胞及其CD3+T细胞的百分比、表型和功能的特点.方法 分离正常C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结的淋巴细胞,应用细胞表面分子染色的方法,使用流式细胞仪观察γδT细胞占从不同组织分离的淋巴细胞及CD3+T细胞的百分比及其表型的特点.细胞经PMA和离子霉素刺激后,应用细胞内细胞因子染色的方法,通过流式细胞仪观察γδT细胞产生IFN-γ、IL-4、IL-9和IL-17细胞因子的情况.结果 γδT细胞占分离淋巴细胞中的百分含量在肝脏明显高于肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结(P＜0.05),而γδT细胞在肠系膜淋巴结CD3+T细胞的百分含量要显著的低于其他脏器(P＜0.05).不同组织器官中γδT细胞以CD4-CD8-表型为主,还存在少量CD8+ γδT细胞.在肠系膜淋巴结γδT细胞中CD4+细胞的量明显高于其他器官,且明显可见一群CD4+ CD8+细胞.不同组织中γδT细胞中IL-17+的细胞量要明显高于IFN-γ+和IL-4+细胞.γδT细胞基本不分泌IL-9.肺脏的γδT细胞分泌细胞因子的能力最强,其IL-17+细胞的量达到(26.6±12.1)％.IFN-γ+细胞的量在肝脏和肺脏中较高,分别为(1.36±0.37)％和(1.6±0.7)％.结论 C57BL/6小鼠肝脏、肺脏、脾脏和肠系膜淋巴结γδT细胞的含量、表型和功能方面存在显著性差异.     

IL-12恢复化疗药物对人细胞免疫功能的抑制作用

目的探讨IL-12是否能够恢复化疗药物对人抗原特异性和非特异性细胞的免疫抑制功能及其机制。方法人PBMCs在抗CD3和抗CD28共刺激条件下,加或不加化疗药物和IL-12,不同的方法检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生及其mRNA的表达。利用流式细胞术或Western blotting检测T细胞不同亚群细胞因子IFN-γ和转录因子T-bet、p-STAT-1、p-STAT-4的表达。利用卡介苗(BCG)刺激PPD+PBMCs,检测化疗药物及IL-12对抗原特异性细胞IFN-γ和TNF-α的表达影响。结果化疗药物对人IFN-γ和TNF-α的产生有显著的剂量依赖性抑制作用,同时IL-12对其抑制作用的恢复也呈显著的剂量依赖性;BCG刺激PPD+PBMCs实验证明,化疗药物抑制抗原特异性细胞产生IFN-γ和TNF-α,IL-12能够恢复其免疫抑制功能。进一步研究发现,化疗药物通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达影响IFN-γ和TNF-α的产生,IL-12通过上调STAT-4的磷酸化恢复了免疫的抑制作用。结论化疗药物抑制人的细胞免疫应答,而IL-12通过上调STAT-4的磷酸化完全恢复其抑制作用,从而对肿瘤化疗病人重建免疫功能(包括抗感染和抑制癌细胞的复发)起到非常重要的作用。     

广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平分析

目的分析广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平。方法随机抽取288例广州市妇女儿童医疗中心儿童院区健康体检的0～14岁儿童静脉抗凝血,经BCG刺激后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th1细胞因子(IFN-γ,TNF-α和IL-2)的水平,并用流式细胞术(FACS)检测IFN-γ和TNF-α的细胞来源。结果 BCG刺激可显著诱导儿童外周血细胞产生IFN-γ(median=726.37 pg/ml),TNF-α(median=934.98 pg/ml)和IL-2(median=48.25 pg/ml)。与不刺激组相比,差别具有统计学意义(n=288,P<0.001)。此外,IFN-γ的产生水平与年龄呈一定的正相关(r2=0.4069,P<0.05)。流式分析结果表明,BCG刺激可诱导CD4+T细胞和非CD4CD8细胞分泌IFN-γ或TNF-α,而不诱导CD8+T细胞产生细胞因子。经BCG刺激后,分别有35.71%和39.29%的儿童CD4+T细胞能够产生IFN-γ和TNF-α。结论广州市0～14岁儿童外周血细胞经BCG刺激后,主要是由CD4+T细胞和非CD4CD8细胞产生Th1细胞因子,但是CD4+T细胞能够产生Th1细胞因子的儿童比例较低,这可能是卡介苗接种免疫效果并不理想的原因之一。     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119联合细胞因子促进CD45RA~+CD62L~+γδT细胞分化及功能

目的体外研究糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119联合细胞因子IL-7、IL-15和IL-21对CD45RA~+CD62L~+γδT细胞分化、凋亡及其功能的影响。方法采用帕米磷酸二钠和IL-2体外扩增健康人外周血单个核细胞中的γδT细胞或联合加入IL-7、IL-15、IL-21和TWS119进行诱导培养。采用细胞计数仪和流式细胞仪检测各培养组中γδT细胞的增殖、分化、凋亡、细胞因子分泌及其杀伤肿瘤活性。结果 IL-7、IL-15和IL-21联合TWS119可以促进γδT细胞分化、增殖和抗凋亡能力,尤其在TWS119+IL-7/15/21联合组中,CD45RA~+CD62L~+γδT细胞的比例与数量最高,且该群细胞在体外具有持续的增殖、IFN-γ分泌和杀伤人肝癌HepG2细胞活性。结论在帕米磷酸二钠和IL-2的培养条件下,TWS119体外联合细胞因子IL-7、IL-15和IL-21可以有效扩增CD45RA~+CD62L~+γδT细胞,为后期该群细胞体内抗肿瘤活性研究和临床应用提供依据。     

正常人外周血中效应记忆性Th9细胞表型及与其它Th亚群之间的关系

目的探讨正常人外周血中IL-9分泌细胞的表型及Th9细胞与其他Th细胞亚群的关系。方法分离正常人外周血单个核细胞(PBMCs),在不同的刺激条件下,使用ELISA及ELISpot检测IL-9的产生情况,使用流式细胞术(FACS)分析CD3、CD4细胞中IL-9、IL-4、IFN-γ的表达情况。结果正常人外周血PBMCs在不同的刺激条件下均有IL-9的产生,在anti-CD3、anti-CD3+anti-CD28及PMA+Ionomycin的刺激下IL-9的水平分别为(21.73±10.08)pg/ml、(74.14±11.76)pg/ml、(94.76±15.36)pg/ml,各组之间差异具有统计学意义(P0.05)。外周血中CD3-IL-9+及CD3+IL-9+细胞的频率分别为0.17%±0.05%和0.70%±0.23%。在CD3+IL-9+T细胞中,Th9细胞的比例为0.51%±0.22%。正常人外周血中Th9细胞表型以效应记忆性为主(CD45RO+CD62L+CCR7-),且比例与Th2细胞呈正相关,相关系数R=0.63。结论正常人外周血中存在的IL-9分泌细胞以效应记忆性Th9细胞为主,且其比例与Th2细胞呈正相关。