姜黄素对人卵巢畸胎瘤PA-1细胞株增殖及凋亡的影响

[目的]探讨姜黄素对人卵巢畸胎瘤PA-1细胞株体外增殖、凋亡的影响。[方法]MTT法观察不同浓度不同作用时间下姜黄素对细胞体外增殖的影响，荧光显微镜观察不同药物浓度下DAPI染色凋亡小体。流式细胞仪测量药物对细胞凋亡和细胞生长周期的影响．Real-time PCR检测不同药物浓度下凋亡相关基因bcl-2／bax的表达。[结果]随着药物浓度的增高，姜黄素对细胞增殖有明显的抑制作用，并有时间依赖性，凋亡率呈药物浓度依赖性，细胞周期S期比例下降、G2/M期比例升高。Real-time PCR结果示bax相对值增高。bcl-2／bax比值呈下降趋势。[结论]姜黄素在体外对PA-1有抑制增殖、促进凋亡作用，提示其在肿瘤的治疗中可能有一定的价值。     

突变型CD59蛋白对卵巢癌细胞的抑瘤效应

背景与目的：国外报道已在多种实体肿瘤细胞中发现有CD59分子的过表达,并与肿瘤的失控性生长和恶性转化密切相关。本研究探讨突变型CD59在卵巢癌细胞A2780表面的抗补体活性以及与LPS联合抑制A2780细胞增殖的活性。方法：取突变型CD59质粒、野生型CD59质粒分别转染A2780细胞．G418筛选稳定表达细胞克隆,并从基因水平和蛋白水平鉴定CD59突变基因和野生型基因的转染情况。MTT法观察野生型CD59与突变型CD59在A2780细胞表面的抗补体活性,以及突变型CD59在LPS存在时对细胞的抑瘤效应。结果：通过荧光免疫检测、流式细胞术分析、RT—PCR鉴定证明建立了稳定转染野生型和突变型CD59的A2780细胞。MTT结果显示,与野生型CD59相比,突变型CD59失去对补体的抑制功能,与对照组未转染的A2780细胞相比无显著性差异。MTT检测5μg／mLLPS作用30min．对转染野生型CD59、突变型CD59及未转染A2780细胞的增殖抑制率分别为（26．9±2．95）％、（36.3±4．87）％、（29．6±3．16）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭该位点能够提高补体溶细胞作用,并有助于LPS发挥抑制瘤细胞增殖活性．有望应用于肿瘤治疗。     

Genistein 对人卵巢癌细胞系3AO诱导内皮细胞迁移作用的研究

目的研究Genistein对人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO诱导人内皮细胞系ECV-304迁移的作用,以探讨Genistein抑制血管生成作用的机理.方法采用微孔滤膜培养小室及双室联合细胞培养方法,观察在无血清培养条件下,3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移以及Genistein对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移的影响;用免疫组化方法检测血管生长因子VEGF、bFGF及TGFβ-1蛋白的表达水平.结果3AO或其条件培养基对内皮细胞均有较强的趋化作用,Genistein不但对3AO细胞或其条件培养基诱导的ECV-304细胞迁移有抑制,对ECV-304细胞本身的非定向性运动也有抑制,且这种作用呈Genistein剂量依赖性.20 μmol/L Genistein处理ECV-304细胞48 h后,VEGF、bFGF蛋白的表达水平降低,而TGFβ-1蛋白的表达水平升高.结论Genistein可明显抑制人卵巢粘液性囊腺癌细胞系3AO及其条件培养基对人内皮细胞系ECV-304细胞的诱导迁移作用;Genistein可能通过抑制促血管生成调节因子VEGF、bFGF的蛋白表达,增强血管生成的负性调节因子TGFβ-1的蛋白表达来抑制这种迁移诱导作用.这可能为其抗血管生成作用的机理之一.     

紫杉醇脂质体对卵巢癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的分析紫杉醇脂质体对卵巢癌SKOV-3细胞的生长抑制作用,观察药物作用的时间-浓度关系,探究药物作用机制。方法应用不同剂量紫杉醇脂质体对SKOV-3细胞进行处理,通过MTT检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡作用及其对细胞周期的阻滞状态,Western blot分析Bcl-2基因蛋白表达情况。利用SPSS 13.0对数据进行统计学分析。结果紫杉醇脂质体对SKOV-3细胞有明显的剂量-时间依赖效应。紫杉醇与紫杉醇脂质体均可将SKOV-3细胞阻滞在G2/M期,且随药物浓度增加,凋亡细胞所占比例逐渐增加。通过Western blot方法发现,紫杉醇脂质体作用后SKOV-3细胞Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达明显上调,Bax/Bal-2比例明显上调。结论紫杉醇以脂质体为转运载体后,并未改变其对卵巢癌SKOV-3细胞的抑制作用及作用周期,具有较好的临床应用前景。     

bcl—Xs基因转移与羟基喜树碱对卵巢癌细胞生长抑制的协同效应

目的 用复制缺陷型腺病毒介导bcl-Xs(Adv-bcl-Xs)对卵巢癌细胞作基因转移,联合使用羟基喜树碱,观察它们对卵巢癌细胞产生的生长抑协同效应。方法 用不同浓度的Adv-bcl-Xs感染卵巢癌细胞株NuTu-19,同时联合使用不同浓度的羟基喜树碱。3天后,用噻唑蓝法检测各实验组之存活细胞。统计学软件分析结果并作图。结果Adv-bcl-Xs与羟基喜树碱联合使用同它们单独作用相加效应比较,对卵巢癌细胞生长抑制效果明显增强（P＜0．01）。结论 Adv-bcl-Xs与羟基喜树碱联合使用,对卵巢癌细胞生长抑制存在协同效应。     

人口腔癌细胞株SAS裸鼠移植肿瘤内的Apollon基因表达

目的检测人口腔癌细胞株SAS裸鼠移植肿瘤经治疗后的Apollon基因表达。方法 移植SAS细胞干裸鼠而形成肿瘤模型，并采用放射线硬化疔药物对荷瘤鼠进行治疗，最后应用Real Time PCR解析治疗后肿瘤组织内的Apollon基因表达。结果X线照射后，SAS裸鼠移植肿瘤内的Apollon基因过表达（P〈0．001）。另一方面，化疗药物未影响。Apollon基因表达，但消除了由X线照射所诱导的Apollon基因过表达（5-FU：P〈0．01；CDDP：P〈0．001；5-FU＋CDDP：P〈0．001）。结论 X线上测裸鼠移植肿瘤内的Apollon基因表达。     

双基因shRNA干扰乙酰肝素酶在卵巢癌细胞中表达的实验研究

目的：采用编码2条短发卡式RNA(shRNA)的抗乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)特异性载体干扰卵巢癌细胞中Hpa的表达,观察其对肿瘤生长转移的抑制作用。方法：以脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗Hpa短发卡式RNA (Hpa-shRNA)基因真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞SKOV3；流武细胞仪鉴定转染效率,免疫组化和实时定量RT-PCR检测转染前后卵巢癌细胞中Hpa蛋白和mRNA表达,Boyden小室观测细胞增殖和侵袭能力的变化,透射电镜观察卵巢癌细胞超微结构改变。结果：Hpa mRNA表达在SKOV_3-Hpa(转染Hpa)明显升高(P＜0．01),SKOV3-Hpa-shRNA(转染Hpa- sh RNA)显著降低(P＜0．01),SKOV3-DZ-shRNA(转染非特异性sh RNA片段)和SKOV3无显著性差异(P＞0．05)。电镜下,SKOV3-Hpa组Hpa蛋白表达最为明显,SKOV3-Hpa-shRNA Hpa蛋白则最低,各组间比较差别有显著性意义(P＜0．01)。SKOV3-Hpa细胞器发达,细胞表面绒毛丰富,细胞间连接稀少。SKOV3-Hpa-shRNA以变形为主,细胞表面绒毛少,细胞器不发达,部分见线粒体皱缩,肿胀和空泡样改变。SKOV3-Hpa、SKOV3-DZ-shRNA和SKOV3-Hpa-shRNA 3种细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为82．3±9．16,36．1±8．73和18．6±10．5,各组间比较有显著性差异(P＜0．01)。结论：双基因Hpa特异性shRNA可显著抑制卵巢癌细胞Hpa表达,降低细胞侵袭能力。     

整合常规技术探索肿瘤差异表达基因

目的建立一种简单实用的、探索肿瘤差异表达基因的方法.方法从骨髓瘤细胞株U266中分离出CD45 和CD45－细胞,结合应用减法杂交、抑制性PCR、T/A克隆、测序等技术,寻找CD45 和CD45－细胞间的差异表达基因.结果减法杂交可缩减约20倍的高丰度表达基因,意即低丰度表达基因富聚约20倍. 用正向或负向减法探针,分别和来源于CD45 细胞克隆的质粒DNA杂交,筛选500个表达克隆,发现了几个差异表达基因,并经RT-PCR证实.结论采用常规分子生物学方法建立起来的综合技术,可以用来研究肿瘤性疾病的差异表达基因,且简单实用,能在普通分子生物学实验室开展.     

畸胎瘤细胞源性生长因子与肿瘤关系的研究进展

0引言PCDGF属于GRN基因家族,又称颗粒素-上皮素前体(granulin-epithelin precurs or,GEP orprogranulin),颗粒蛋白(acrogranin)。它可与胰岛素样生长因子受体(IGFR)结合促进肿瘤的浸润和转移,更值得注意的是当部分肿瘤细胞在缺乏IGFR时,如果存在PCDGF、缺乏胰岛素样生长因子     

手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨手霉素对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:MTT法检测手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用;Giemsa染色、透射电子显微镜下观察及FCM分析手霉素对3AO细胞的凋亡诱导作用;FCM检测手霉素对3AO细胞 ras、survivin和核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)(p65)蛋白表达的影响.结果:手霉素能显著抑制3AO细胞的增殖(P<0.05),并且这种抑制作用随着手霉素浓度的增加和作用时间的延长而增强.Giemsa染色和透射电子显微镜下观察发现,手霉素可诱导3AO细胞出现典型的凋亡形态学变化及超微结构改变.FCM分析结果显示,与对照组相比,手霉素诱导3AO细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞周期中的G2/M期细胞也明显增加(P<0.05);3AO细胞的ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达水平明显下降(P<0.05).结论:手霉素可明显抑制人卵巢癌3AO细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调细胞ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达有关.     

G-CSF在人实体肿瘤细胞株中的表达及其对细胞增殖的影响

目的:探讨G-CSF在人实体肿瘤细胞株中的表达及外源性rhG-CSF对肿瘤细胞增殖的影响及机制。方法:人G-CSF ELISA试剂盒检测肿瘤细胞G-CSF的分泌水平,细胞计数法和MTT法检测rhG-CSF对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪分析rhG-CSF对KB细胞周期和细胞凋亡的影响,免疫细胞化学检测G-CSF受体在肿瘤细胞中的表达。结果:T-24细胞分泌大量G-CSF;rhG-CSF呈剂量依赖性促KB细胞增殖,并在质量浓度为100 ng/mL达最大值,与对照相比,差异有统计学意义(P<0.05);KB细胞表达G-CSF受体,rhG-CSF拮抗KB细胞的G0/G1期阻滞,降低KB细胞凋亡率。结论:T-24细胞表达G-CSF;rhG-CSF通过作用于KB细胞表面的G-CSF受体拮抗G0/G1期阻滞、抑制凋亡而发挥促增殖作用。     

畸胎瘤细胞源性生长因子反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞增殖和侵袭的抑制效应及相关机制

目的 观察畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)反义核酸载体对高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626和A2780增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其相关机制.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法和Boyden小窒体外侵袭实验,检测PCDGF反义RNA真核表达载体对Sw626和A2780细胞增殖和侵袭能力的影响.采用Western blot技术,检测转染PCDGF反义RNA真核表达载体前后Sw626细胞cyclin D1和CDK4蛋自表达的变化.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和明胶酶谱法,分析PCDGF反义RNA真核表达载体对Sw626细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达和活性的影响.结果 与空白对照组相比,PCDGF反义核酸载体转染组Sw626和A2780细胞的增殖抑制率分别为72.9%和70.9%,侵袭能力分别被抑制了62.9%和59.0%.转染组Sw626细胞cyclin D1和CDK4蛋白的表达水平分别为0.38±0.08和0.37±0.13,明显低于空白对照组(0.84±0.11和0.64±0.11,P<0.01).与空白对照组(0.89±0.09)相比,转染组Sw626细胞MMP-2 mRNA的表达水平(0.66±0.11)虽未见降低(P>0.05),但MMP-2酶原的活性被叨显抑制.结论 PCDGF反义核酸可显著抑制高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626和A2780的增殖和侵袭能力,并逆转其部分恶性表型,这可能与其能下调cyclin D1和CDK4蛋白的表达并抑制MMP-2酶原的活性有关;PCDGF可以作为卵巢癌治疗的新靶点.     

端粒酶活性与卵巢癌细胞系药物敏感性的关系

目的探讨端粒酶活性与上皮性卵巢癌细胞系药物敏感性的关系.方法使用顺铂作用于敏感细胞株A2780及耐药细胞株AD60.在四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定耐药倍数的基础上,应用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)方法测定端粒酶活性.结果经MTT测定卵巢癌耐药细胞株AD60的耐药倍数为2.4.A2780端粒酶活性随药物浓度的递增明显降低,而AD60降低不明显.结论端粒酶活性与上皮性卵巢癌细胞对细胞毒性药物的敏感性相关.     

人卵巢癌组织肿瘤干细胞的分离和鉴定

目的 从人卵巢癌组织中分离并鉴定卵巢癌干细胞.方法 取新鲜卵巢癌组织,以胶原酶和透明质酸酶充分消化,获得单细胞悬液,经红细胞裂解液处理,CD133磁珠孵育进行磁性细胞分选,流式细胞仪验证分选效率.将阳性细胞置于含人表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、牛血清白蛋白和人胰岛素的无血清培养基中,待细胞成球状生长后进行免疫荧光、分化实验和成瘤实验,鉴定其干细胞特性.结果 从人卵巢癌组织中成功分离出肿瘤干细胞,流式细胞仪检测其CD133的表达率为82.5％.该细胞在无血清培养基中呈悬浮球状生长,具有自我更新能力、分化潜能和更强的致瘤能力,具备干细胞特性.结论 人卵巢癌组织中存在卵巢癌干细胞,利用CD133磁珠分选得到的肿瘤干细胞具备干细胞的相关特性,可用于后续卵巢癌干细胞生物学特性的研究.     

抑癌基因DOC-2对卵巢癌细胞增殖的影响

目的:探讨抑癌基因DOC2对卵巢癌细胞系HO8910在生长代谢、超微结构及细胞周期等方面的影响及其作用机制。方法:实验分3组:卵巢癌细胞系HO8910、8910P93(转染并表达DOC2基因)、8910pcDNA3.1(转染空载体pcDNA3.1),通过细胞消化计数法和3HTdR掺入法分别测定3组细胞的生长曲线及DNA合成代谢情况;利用透射电镜对细胞的超微结构进行观察比较;最后利用流式细胞仪观察卵巢癌细胞转染前后细胞周期的变化。结果:8910P93在生长增殖及DNA合成方面均明显低于HO8910和8910pcDNA3.1(P<0.05),而后两者之间无明显差异;电镜结果显示,8910P93存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变;细胞周期检测结果显示,处于G1和G2期的8910P93细胞明显增多而S期细胞明显减少。结论:抑癌基因DOC2可通过改变卵巢癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖。     

AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响

目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.     

纤粘连蛋白诱导卵巢癌细胞基质金属蛋白酶-2基因表达

目的　研究细胞外基质蛋白对肿瘤细胞基质金属蛋白酶 (MMP)基因表达的影响及机理。方法　以纤粘连蛋白处理SKOV3卵巢癌细胞后 ,用明胶 酶谱法和反转录PCR观察MMP分泌及基因表达。以MMP 2启动子转染细胞 ,通过测定萤火虫酶活性 ,观察纤粘连蛋白对MMP 2启动子活性的影响。细胞p5 3含量采用Westernblot分析。结果　 5 μg/mL纤粘连蛋白刺激MMP 2分泌 ,但不影响MMP 9分泌 ,这一作用随纤粘连蛋白浓度增加而增强。经 10 μg/mL纤粘连蛋白刺激 1h后 ,细胞内MMP 2mRNA量显著增加 ;作用时间延长 ,诱导作用减弱。纤粘连蛋白可诱导转染细胞中萤火虫酶活性增加 ,AP 1功能抑制剂姜黄素 (5 0 μmol/L)不能阻断这一作用。经纤粘连蛋白处理后 ,细胞内p5 3含量明显增加。结论　纤粘连蛋白可刺激卵巢癌细胞中MMP 2分泌 ,诱导MMP 2启动子活性增强及mRNA含量增加 ,这一作用可能与p5 3蛋白转录因子活性有关 ,而与AP 1通路无关。     

丹皮酚对人卵巢癌细胞A2780s增殖的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)在体外对人卵巢癌A2780s细胞增殖的影响。方法:将不同浓度的Pae作用于人卵巢癌A2780s细胞,应用MTT法检测Pae对细胞增殖的抑制作用,FCM法检测Pae对细胞周期分布及细胞凋亡率的影响。结果:7.81～250.00mg/LPae对A2780s细胞的增殖均有抑制作用,且随着Pae浓度的增加和作用时间的延长,其增殖抑制作用增强。FCM检测结果显示,31.25～250.00mg/LPae作用48h后,G0/G1期和G2/M期细胞比率下降,S期细胞比率上升;细胞出现凋亡,凋亡率随着Pae浓度的增加而上升。结论:一定浓度的Pae具有抑制人卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用。