不同转移潜能人前列腺癌细胞KAI1基因的表达

目的：探讨人前列腺癌细胞转移潜能与ＫＡＩ１基因表达的关系。方法：运用Ｎｏｒｔｈｅｍ印迹杂交检测ＫＡＩ１基因在不同转移潜能人前列腺癌细胞中的表达，以甲基化分析与聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）研究ＫＡＩ１低表达的机制。结果：在转移性人前列腺癌细胞系ＰＣ３和ＰＣ３Ｍ中不论其转移潜能强弱，ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ表达均降低。甲基化分析未发现ＫＡＩ１基因５’－启动子部位ＣＣ＾ｍ５ＧＧＧＧ甲基     

不同转移潜能人肺癌细胞系KAI1基因的表达

目的:探讨KAI1基因与人肺癌细胞系转移潜能的关系.方法:利用逆转录-PCR和Northern blot杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中KAI1 mRNA的表达,并用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测与突变的关系.结果:在高转移潜能细胞系PG中KAI1 mRNA表达降低,在无转移潜能的PAa细胞中KAI1的表达量比PG细胞高10倍以上(积分光密度比值分别为0.7313和0.0549).PCR-SSCP结果显示在PG细胞KAI1基因第7外显子出现异常改变.结论:肺癌细胞的转移潜能可能与KAI1基因表达量有关,KAI1基因的低表达可能由基因突变所致.     

KAI1和nm23与人黑色素瘤细胞转移潜能的相关性

目的:探讨肿瘤转移抑制基因KAI1和nm23与人黑色素瘤细胞转移潜能的关系.方法:应用Northern blot杂交检测不同转移潜能人黑色素瘤细胞中KAI1和nm23基因的表达.结果:4种不同转移潜能的人黑色素瘤细胞中(WM35,WM451,WM983a,WM1341b),KAI1 mRNA和nm23 mRNA均有表达且表达量基本一致,KAI1在4种细胞中的积分光密度值分别为0.1798,0.1800,0.1501,0.1582;nm23分别为1.0428,1.0607,1.0141,1.0754.结论:KAI1基因与nm23基因的表达降低与人黑色素瘤的浸润转移无关.     

8种不同转移潜能人癌细胞系中nm23基因的表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因nm23在人前列腺癌细胞、肺癌细胞和人黑色素瘤细胞系中的转移抑制作用.方法:应用Northern blot杂交法检测8种不同转移潜能人癌细胞中(PC3,PC3M,PAa,PG,WM35,WM1341b,WM983a和WM451) nm23基因的表达.结果:nm23 mRNA在8种不同转移潜能的人癌细胞中都有表达,且nm23表达水平也未见差异.结论:nm23基因可能与这些细胞系(前列腺癌细胞、肺癌细胞及黑色素瘤) 的转移抑制无关.     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对前列腺癌PC3细胞系生长以及抑癌基因GSTP1、RASSF1A转录的影响

目的:观察DNA去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对前列腺癌细胞株PC3抑癌基因GSTP1和RASSF1A 转录改变以及细胞增殖活性的影响.方法:用不同浓度5-aza-CdR(2、5、10 μmol/L)处理前列腺癌细胞株PC3,利用甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前PC3细胞株GSTP1、RASSF1A启动子甲基化状态;采用实时荧光定量RT-PCR法检测用药过程中GSTP1和RASSF1A mRNA转录改变;用MTT法和流式细胞术检测用药前后PC3肿瘤细胞增殖活性改变.结果: GSTP1、RASSF1A启动子区域出现甲基化现象.与对照组相比,药物组培养24 h后 GSTP1和RASSF1A mRNA表达未发生明显改变;培养48 h后5、10 μmol/L药物组GSTP1和RASSF1A mRNA表达出现上调;72 h后各浓度药物组均检测出两基因mRNA表达升高(P<0.05).药物组培养24和48 h未出现明显的细胞增殖抑制现象和细胞周期改变;培养72 h后,药物组细胞增殖抑制显著(P<0.05),细胞周期改变明显(P<0.05),阻滞于G0/G1期.结论:GSTP1和RASSF1A基因在PC3前列腺癌细胞系中的失表达可能与其启动子CpG岛高甲基化有关;5-aza-CdR能在一定程度上抑制PC3细胞增殖,干扰细胞周期,提高GSTP1和RASSF1A的转录水平.     

食管鳞状细胞癌中MT-3基因表达与启动子区CpG岛甲基化相关性

目的:使用启动子区CpG岛的甲基化特异性PCR(MSP),分析食管鳞状细胞癌中MT-3基因表达与启动子区CpG岛甲基化的相关性。方法:对MT-3基因启动子区的用MSP检测方法,并以DNA甲基转移酶(DNMT)抑制剂5-氮2'-脱氧胞(5-aza-CdR)分别处理食管鳞状细胞癌组织及HET-1A细胞株,检测MT-3基因启动子区甲基化状态变化,Western blot检测蛋白表达。结果:食管鳞状细胞癌组织中MT-3基因启动子区呈甲基化状态,HET-1A细胞株MT-3基因启动子区呈非甲基化状态。采用5'-Aza-dC去除食管鳞状细胞癌组织中MT-3基因启动子区甲基化后,金属硫蛋白3表达水平上升了9.2倍。结论:MT-3启动子区CpG岛甲基化可能是导致金属硫蛋白3低表达的重要机制,其结果则导致食管癌发生。     

前列腺癌相关基因PAX5启动子甲基化的临床意义

目的：探讨PAX5基因启动子甲基化作为前列腺癌生物标志物的临床价值。 方法：采用Real time RT-PCR检测前列腺细胞系（RWPE-1、LNCaP、PC-3、DU145）中PAX5 mRNA的表达,甲基化特异性PCR(MSP)法分析4株前列腺细胞的甲基化状态;去甲基化药物处理后,Real time RT-PCR法检测肿瘤细胞PAX5基因mRNA表达; Real time MSP法检测64例前列腺癌患者、22例前列腺增生患者与47例健康体检者血清中PAX5基因启动子甲基化水平,并统计分析血清PAX5基因启动子甲基化水平与临床病理参数的相关性;运用ROC曲线分析PAX5基因启动子甲基化在前列腺癌诊断中的价值。结果：Real time RT-PCR结果显示,与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,PAX5 mRNA在3株前列腺癌细胞中均表达下调;LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞均可检测到PAX5基因启动子甲基化,而正常前列腺上皮细胞RWPE-1不存在PAX5基因启动子甲基化;去甲基化药物可恢复PAX5基因mRNA表达;Real time MSP结果显示,前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化水平显著高于前列腺增生患者和健康体检者;前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化率与Gleason评分和TNM分期有关;ROC结果显示PAX5基因的诊断价值优于PSA。结论：本研究结果提示启动子甲基化是前列腺癌细胞中PAX5基因表达下调的主要原因,血清PAX5启动子甲基化是一种潜在的前列腺癌诊断标志物。     

启动子甲基化导致人前列腺癌雄激素非依赖性细胞株PC-3中EphA1基因低表达

目的:观察前列腺癌细胞株中EphA1基因表达及甲基化情况,探讨DNA甲基化酶抑制剂对其表达及甲基化的影响。方法:采用实时定量RT-PCR法检测雄激素依赖性、非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP、PC-3中EphA1基因表达情况;用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-dC)处理细胞,实时定量RT-PCR法观察处理后EphA1基因表达的变化。亚硫酸氢钠处理后,采用DNA测序法对前列腺癌细胞EphA1基因进行甲基化状态分析。结果:LNCaP、PC-3细胞中EphA1基因表达低下;5-Aza-dC作用后,LNCaP细胞EphA1基因无明显变化,而PC-3细胞中EphA1基因表达显著恢复(P<0.001)。PC-3细胞中EphA1基因启动子区存在高甲基化,而LNCaP细胞该区域较少发生甲基化。结论:启动子甲基化可能是导致雄激素非依赖性PC-3细胞EphA1基因表达下调的重要机制。     

肾透明细胞癌中谷胱甘肽S-转移酶M3基因的表达及其启动子区CpG岛的甲基化水平

目的:检测肾透明细胞癌(ceRCC)中谷胱甘肽S-转移酶M3(GSTM3)基因表达水平,观察其启动子区CpG岛的甲基化水平,探讨GSTM3基因甲基化与ccRCC发生和转移的关系.方法:半定量RT-PCR检测ccRCC高转移潜能细胞系(RCC05-TXJ)、低转移潜能细胞系(RCC05-ZYJ)、24例原位ccRCC及其癌旁肾组织和14例ccRCC转移组织的GSTM3基因的表达水平.用去甲基化剂5-Aza-CdR干预RCC05-ZYJ,RT-PCR检测处理前后GSTM3基因的表达变化.用巢式BSP(nes-ted bisulfite sequencing PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织的GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点.采用巢式MSP(nested methylation specific PCR)检测10例原位ccRCC及其癌旁肾组织、8例ccRCC转移组织甲基化情况.结果:RCC05-TXJ中GSTM3基因表达强度低干RCC05-ZYJ.5-Aza-CdR处理RCC05-ZYJ后,GSTM3基因表达强度高于处理前.24例原位ccRCC中17例GSTM3基因的表达强度低于其在癌旁肾组织中的表达强度,其余7例原位ccRCC中GSTM3基因的表达强度不低干其在癌旁肾组织中的表达.10例原位ccRCC及其癌旁和8例转移组织中,癌组织GSTM3基因启动子甲基化阳性为4例,癌旁组织2例(P=0.628),转移组织1例(P=0.314),差异无统计学意义.结论:GSTM3基因表达与ccRCC的发生、转移密切相关,其启动子区CpG岛甲基化会降低该基因的表达;初步筛选出ecRCC中GSTM3基因启动子区CpG岛甲基化位点,为后续研究奠定了基础.     

3种结肠癌细胞株中DLC-1基因的表达及其启动子区的甲基化状态研究

目的:研究候选抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨结肠癌细胞株DLC-1基因表达水平与其启动子区甲基化的相关性.方法:采用RT-PCR技术分别检测DLC-1基因在人结肠癌细胞株CaCo-2、HT-29和LoVo中的表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)方法和亚硫酸氢盐修饰DNA测序检测启动子区域甲基化状态;分别用0、5、10 μmol·L-1浓度的去甲基化药物5氮杂胞苷处理DLC-1基因启动子区域高甲基化状态细胞后,再检测DLC-1基因mRNA表达水平.结果:人结肠癌细胞株CaCo-2和LoVo中DLC-1 mRNA呈阳性表达,HT-29中的表达呈阴性表达;CaCo-2和LoVo细胞DLC-1基因启动子区域未发生甲基化,而HT-29出现启动子区高甲基化状态;经5氮杂胞苷药物干预后,HT-29结肠癌细胞的DLC-1基因表达明显增强.结论:结肠癌细胞株HT-29中DLC-1基因表达沉默与启动子区高甲基化状态有关.     

肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达

目的 探讨新发现的肿瘤转移抑制基因ＫＡＩ１／ＣＤ８２与人癌细胞转移潜能的关系,方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,检测３组８种不同转移具有转移性的前列腺癌细胞系ＰＣ３和ＰＣ３Ｍ及高转移性的人肺ＰＧ细胞,ＫＡＩ１ｍＲＮＡ的表达降低（积分吸光度分别为０．０３１９,０．０２６６和０．０５４９）而在无转移性的人肺ＰＡａ细胞则为高表达（积分吸光度     

转移性和非转移性食管癌组织中KAI1基因的表达

目的:探讨KAI1基因与食管癌转移的关系.方法:应用原位杂交法分析KAI1基因在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中的表达.结果:在有淋巴结转移和无淋巴结转移的食管癌组织中KAI1 mRNA的表达未见显著差异 (P>0.05),且KAI1 mRNA表达与食管癌的分化无关(P>0.05).结论:KAI1基因对食管癌转移的发生无抑制作用;KAI1基因的表达也与食管癌的分化无关.     

转移性和非转移性乳腺癌组织中KAI1基因的表达

目的 :探讨肿瘤转移抑制基因KAI1与乳腺癌转移的相关性。方法 :运用原位杂交法观察KAI1mRNA在转移性和非转移性乳腺癌组织中的表达。结果 :在无淋巴结转移的 12例乳腺癌病例中KAI1mRNA阳性表达为 9例 ,有淋巴结转移的 8例中阳性表达 1例。前者阳性率显著高于后者 (P <0 0 5 )。结论 :KAI1基因的低表达或不表达可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征。     

KAI1基因在食管癌组织中的表达及其意义

目的:探讨KA I l基因的表达与食管癌发生及浸润转移的关系。方法:采用RT-PCR及免疫组化方法,检测食管癌组织及其正常粘膜中KA I lmRNA及蛋白的表达。结果:KA I lmRNA的表达在食管癌组织和其正常粘膜中未见显著性差异,且与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移无关;KA I l蛋白在癌组织中的表达明显低于其正常粘膜,在有淋巴结转移病例中的表达明显低于无淋巴结转移病例,但与肿瘤的分化程度、浸润深度无关。结论:食管癌癌变和转移可能与KM I1蛋白的低表达有关,但与KA I lmRNA的表达无关,推测这可能是由于翻译后修饰所致。     

不同转移潜能的人前列腺癌细胞原位转移模型的建立与比较

目的 建立不同转移潜能的人前列腺癌细胞转移模型，并比较其结果。方法 利用人前列腺癌细胞系PC3单克隆细胞株裸鼠皮下移植瘤，通过外科原位移植技术植入BALB／c-nu／nu雄性裸小鼠，建立人前列腺癌高、低转移细胞株转移模型；并观察比较两细胞株转移模型的原位成瘤率、自发转移率、两细胞株形态学特征和转移抑制基因CD44s的表达。结果 人前列腺癌高转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为100％，低转移细胞株裸鼠原位种植后原位成瘤率100％，主动脉旁淋巴结转移率为40％，两者主动脉旁淋巴结转移率差异有显著性（P〈0．05）。高、低转移细胞株形态学特征亦不同。CD44s蛋白在人前列腺癌高转移性单克隆细胞株PC3-H中的表达强度低于低转移性单克隆细胞株PC3-L。结论 遗传背景相似的人前列腺癌高、低转移细胞株原位移植转移模型为研究人前列腺癌转移机制提供了有力工具。     

探讨KAI1/CD82基因在鼻咽肿瘤中的意义

目的探讨KAI1/CD82基因在人鼻咽癌细胞株及鼻咽部组织中表达水平的差异。方法应用PCR法检测5种人鼻咽癌细胞株、28例鼻咽癌和15例非肿瘤性鼻咽部组织KAI1/CD82 mRNA的表达情况。结果不同转移习性的人鼻咽癌细胞均扩增出KAI1/CD82 mRNA,随细胞转移习性增高,KAI1/CD82 mRNA表达水平降低;KAI1/CD82 mR-NA在鼻咽癌组织中的阳性表达率为42.9%,低于非肿瘤性鼻咽组织的73.3%,两者差异无统计学意义;KAI1/CD82mRNA在鼻咽癌组织中的表达与患者的性别、年龄、病理类型、T分期等无相关性。随N分期进展,KAI1/CD82 mRNA阳性表达率逐渐降低。无淋巴结转移组(N0)85.7%比有淋巴结转移组(N1-N3)28.6%表达明显增高,两者差异有统计学意义。结论 KAI1/CD82基因在低转移性人鼻咽癌细胞株中高表达,而在高转移性人鼻咽癌细胞株中低表达。KAI1/CD82基因在鼻咽癌组织中低表达,在非肿瘤性鼻咽部组织中高表达,提示该基因在鼻咽癌的发生、发展中可能起到一定作用。KAI1/CD82基因在鼻咽癌组织的低表达与鼻咽部淋巴结转移有关,提示该基因在抑制鼻咽癌转移的过程中起重要作用。     

抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的研究抑癌基因KAI1对大肠癌细胞生物学特性的影响。方法用KAI1 cDNA质粒转染低表达KAI1基因的人大肠癌LoVo细胞。免疫组化和原位杂交检测转染后mRNA和蛋白的表达,利用体外肿瘤同质性粘附、异质性粘附实验和肿瘤侵袭模型等方法,检测KAI1/CD82对大肠癌粘附与侵袭的影响;以空白质粒转染组为对照组。结果体外实验发现转染KAI1质粒的LoVo细胞同质性粘附能力高于对照组,异质性粘附及侵袭能力明显低于对照组。抑癌基因KAI1对肿瘤的增殖能力没有影响。结论KAI1基因表达的减少可以导致大肠癌细胞同质性粘附降低,对基底膜粘附及侵袭转移的能力增加。因此,KAI1基因可以作为大肠癌的一种转移抑制基因。