长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探究长链非编码RNA (Long non-coding RNA,LncRNA)HOTAIR对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移能力的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U87、U251、U118和LN18中HOTAIR的表达水平和shRNA HOTAIR (sh-HOTAIR)转染U251细胞细胞后HOTAIR和miR-1的表达水平。生物信息预测HOTAIR和miR-1的靶向关系,荧光素酶报告实验验证两者靶向关系。将细胞分为Control、sh-HOTAIR、miR-1inhibitor和sh-HOTAIR+inhibitor组,用sh-HOTAIR和miR-1inhibitor分别或同时转染细胞,CCK8检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达。结果 HOTAIR在U251细胞中表达水平最高,因此选择U251细胞进行后续实验;sh-HOTAIR能显著降低U251细胞HOTAIR的表达水平,升高miR-1的表达水平;miR-1mimic能显著降低HOTAIR野生质粒的荧光素酶活性;与Control组比较,sh-HOTAIR组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显降低,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显升高;sh-HOTAIR组比较,sh-HOTAIR+inhibitor组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显升高,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显降低;同时,sh-HOTAIR组侵袭细胞数与Control组比较明显减少,划痕闭合率明显降低;sh-HOTAIR+inhibitor侵袭细胞与sh-HOTAIR比较显著增多,划痕闭合率明显升高;此外,sh-HOTAIR能显著降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平,miR-1inhibitor能显著减弱sh-HOTAIR对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向抑制miR-1的表达促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

MiR-17-5p在子宫内膜异位症间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨miR-17-5p在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的影响。方法:MiRNA芯片筛选EMs异位子宫内膜组织中差异表达的miRNA,qRT-PCR验证EMs异位、在位子宫内膜组织和子宫肌瘤正常子宫内膜组织(对照组)中miR-17-5p的表达;提取以上各组组织中原代间质细胞,免疫荧光鉴定表面标志物;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组间质细胞中miR-17-5p和MMP-2的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-17-5p和MMP-2的靶向关系;EMs异位间质细胞中转染miR-17-5p mimic和inhibitor,qRT-PCR、蛋白质印迹法和明胶酶谱法检测MMP-2的表达,克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwel l实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:EMs异位子宫内膜组织中miR-17-5p、miR-200b、miR-106b、miR-15b、miR-141、miR-22显著下降,miR-202、miR-150、miR-365表达显著上升;与对照组相比,miR-17-5p在EMs异位、在位子宫内膜组织和间质细胞中表达均显著下降(P<0.05),而MMP-2在EMs异位、在位子宫内膜间质细胞中表达均显著升高(P<0.05);与阴性对照组(negative control,NC)相比,过表达miR-17-5p抑制MMP-2的表达并显著抑制细胞克隆形成数,细胞侵袭数及细胞迁移率(P<0.05),敲低miR-17-5p,结果相反。结论:MiR-17-5p在EMs间质细胞中表达下降,抑制miR-17-5p的表达能够促进MMP-2表达升高同时增强细胞增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-381靶向HMGB1抑制子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探究miR-381调控高迁移率组蛋白1(HMGB1)对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR检测miR-381在子宫内膜癌细胞和正常子宫内膜细胞中的表达水平。转染miR-381mimic后,检测HEC1A细胞中miR-381和HMGB1的表达水平。生物信息学预测miR-381和HMGB1的靶向关系,并用荧光素酶报告实验加以验证。细胞分为HEC1A组、miR-381mimic组、pc-HMGB1组、mimic+pc-HMGB1组,采用CCK8法检测HEC1A细胞增殖能力,Transwell和划痕实验分别检测HEC1A细胞侵袭和迁移能力,蛋白印迹法检测HEC1A细胞中Ki67、PCNA、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平。结果 miR-381在正常子宫内膜细胞和癌细胞中存在表达差异。miR-381与HMGB1具有直接的靶向关系。与HEC1A组相比,miR-381组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达则增加(P0.01),pc-HMGB1组上述指标则相反(P0.01);与pc-HMGB1组相比,miR-381mimic+pc-HMGB1组细胞增殖倍数、侵袭细胞数、划痕闭合率、Ki67、PCNA、N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达均降低(P0.01),E-cadherin表达增加(P0.01)。结论 miR-381通过靶向下调HMGB1表达,抑制HEC1A细胞增殖、侵袭和迁移。     

miR-152对SHI-1细胞增殖、转移及致瘤性的调控机制

目的:探究miR-152对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1增殖、转移及致瘤性的调控机制。方法:将购买的SHI-1细胞系进行miR-152过表达(miR-152 agomir组)或抑制处理(miR-152 antagomir组)并设置阴性对照组(NC组)。应用CCK-8法检测各组细胞活力,划痕愈合实验检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞Cyclin D1、Caspase-3、MMP-2、TIMP-2、E-cadherin和N-cadherin的表达,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,裸鼠成瘤实验检测各组细胞的致瘤性。结果:与NC组相比,miR-152 agomir组细胞活力显著下降,细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P0.05),而miR-152antagomir组的细胞活力以及细胞迁移和侵袭能力均显著上升(P0.05)。与NC组相比,miR-152 agomir组细胞Cyclin D1、MMP-2、N-cadherin蛋白表达均显著下调(P0.05),但Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的表达在上述各组中明显升高;同时,细胞凋亡增强,裸鼠致瘤性降低(P0.05)。miR-152 antagomir组Cyclin D1、MMP-2和N-cadherin被显著诱导,但该组Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的蛋白表达显著下调;同时,细胞凋亡减少,裸鼠致瘤性增强(P0.05)。结论:miR-152能抑制SHI-1细胞系增殖、转移及致瘤的能力,同时诱导细胞凋亡,其机制可能与miR-152调控MMP-2以及TIMP-2等侵袭转移相关因子有关联。     

miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。     

miR-21在前列腺癌中的表达及抑制其表达对前列腺癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨抑制前列腺癌细胞中miR-21基因表达对癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 RTPCR检测前列腺癌及癌旁组织中miR-21基因的mRNA表达;空白对照组(Control)、阴性对照组(NC)和miR-21 inhibitor组转染人前列腺癌PC-3细胞,48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-21基因的mRNA表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-21的mRNA表达显著高于癌旁组织(P0.01);转染miR-21 inhibitor后miR-21的表达显著降低;NC组细胞存活率、细胞凋亡率及ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与对照组,差异无统计学意义(P0.05),miR-21 inhibitor组细胞存活率及ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P0.01)。结论抑制前列腺癌细胞中miR-21基因的表达可降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-1299通过靶向调控CCND1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响

目的 探讨miR-1299通过靶向调控细胞周期蛋白D1(CCND1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、转移和凋亡的影响。方法 回顾性收集2021年1月至2022年1月入青岛大学附属青岛市中心医院胸外科行原发性NSCLC手术的患者29例,取癌组织和癌旁正常肺组织,培养人正常肺上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1,RT-qPCR法检测组织和细胞中miR-1299和CCND1的表达,取生长良好的H1299细胞,将其分为对照组(转染miR-control)、miR-1299 NC组(转染miR-1299 NC)、miR-1299 mimic组(转染miR-1299 mimic)、miR-1299 inhibitor组(转染miR-1299 inhibitor)、PCDNA组(转染pcDNA3.1-NC)、PCDNA-CCND1组(转染pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)、miR-1299 mimic+PCDNA组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-NC)和miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1...     

miR-371在胃癌细胞中的作用及可能机制分析

目的 研究miR-371在胃癌细胞中的作用及可能机制.方法 利用q-PCR检测人胃腺癌组织和多种胃癌细胞系中miR-371的相对表达量.利用细胞转染的方法分别将miR-371的对照序列(对照组)、miR-371的模拟物(模拟物组)或miR-371的抑制剂(抑制剂组)转染到MNK-45后,继而利用q-PCR检测MNK-4...     

miR-153对肺腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨miR-153对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其相关作用机制.方法 构建SRC-3'UTR-WT和SRC-3'UTR-MUT载体,分别与miR-153 mimic,mimic control共转染至肺腺癌A549细胞,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-153与SRC的靶向关系.构建miR-153...     

miR-100对大鼠骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的:探讨MicroRNA-100(miR-100)对大鼠骨髓间充质干细胞(r BMMSC)迁移能力的影响。方法:分离培养r BMMSC,采用流式细胞术检测r BMMSC表面标志物CD105、CD45、CD34、CD29和CD44的表达。用miR-100类似物或抑制剂转染r BMMSC,应用实时定量PCR检测转染后细胞miR-100表达量。迁移实验测定转染后细胞迁移能力,观察miR-100对细胞迁移能力的影响。ELISA法定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平。结果:经鉴定所分离的细胞确定为r BMMSC。用miR-100类似物或抑制剂转染r BMMSC后,与对照组相比,转染miR-100类似物的细胞miR-100表达显著上调(P<0.01),转染miR-100抑制剂的细胞miR-100表达显著下调(P<0.01)。在迁移实验中,转染miR-100类似物可显著抑制r BMMSC迁移(P<0.01),而转染miR-100抑制剂可显著增强r BMMSC迁移(P<0.01)。转染miR-100类似物组、转染miR-100抑制剂组的培养上清中,SDF-1浓度与对照组相比未见明显变化(P>0.05)。结论:miR-100可显著抑制r BMMSC的迁移,但与趋化因子SDF-1无明显关系。     

幽门螺杆菌对胃癌患者微小核糖核酸-146、人类表皮生长因子受体2表达影响研究

目的 探讨幽门螺杆菌对胃癌患者微小核糖核酸-146(miR-146)、人类表皮生长因子受体2(HER2)表达的影响.方法 选取自2018年1月至2018年12月收治的54例胃癌患者为研究对象,根据幽门螺杆菌感染情况分为阴性组(n=16)与阳性组(n=38).收集胃癌患者胃黏膜标本,实时定量聚合酶链式反应检测标本中miR...     

miR-9对SGC-7901胃癌细胞株侵袭能力的影响

目的探讨miR-9表达对SGC-7901胃癌细胞株侵袭力的影响及其可能的作用机制。 方法培养SGC-7901胃癌细胞株,分组转染miR-9阴性对照（miR-9 NC）、miR-9模拟物（miR-9 mimics）和miR-9抑制剂（miR-9 inhibitor）,上调或下调细胞中miR-9表达水平。采用Transwell实验评价胃癌细胞侵袭能力,应用SYBR Green荧光实时定量聚合酶链反应和Western blot实验检测SGC-7901细胞中MMP-2 mRNA和蛋白表达水平。对miR-9空白对照组、miR-9 mimics组和miR-9 inhibtor组miR-9的相对表达量、MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量,Transwell侵袭实验SGC-7901细胞中侵袭细胞数量,多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（15.375±3.097）,P=0.012］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（0.279±0.039）,P=0.022］。与空白对照组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显减少,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（23.6±4.2）,P=0.026］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显增加,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（102.4±7.6）,P=0.037］。与空白对照组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白的相对表达量比较：miR-9 mimics组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（0.371±0.132）,P=0.011;（0.573±0.063）vs（0.261±0.159）,P=0.024］;miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（2.995±0.701）,P=0.015;（0.573±0.063）vs （0.708±0.079）,P=0.016］。 结论在SGC-7901胃癌细胞株中,miR-9可下调MMP-2的表达,抑制细胞的侵袭能力。     

MiR-101在乳腺癌中的表达及其意义

目的:探讨miR-101在乳腺癌组织中的表达变化。方法:收集乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以qRT-PCR方法测定miR-101在乳腺癌组织中的表达变化。在乳腺癌细胞中转染miR-101 mimics、mimics control,以qRT-PCR方法检测上调效果,MTT方法测定细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭数目变化,蛋白质印迹法测定细胞中cleaved caspase-3和MMP-2蛋白表达变化。结果:miR-101在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05)。与miR-NC比较,miR-101细胞中miR-101表达水平升高,细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移数目下降,细胞内的cleaved caspase-3蛋白水平表达升高,MMP-2蛋白表达水平减少(P<0.05)。结论:MiR-101在乳腺癌组织中表达下调,上调miR-101抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移并诱导细胞凋亡。     

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。 方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。 结果（1） A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍（P＜0.05）;A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的 7.40 ± 1.05 倍（P＜0.05）;而A549/DDP 细胞let-7b 的表达水平是A549 细胞的（26.54 ± 2.90）%（P＜0.05）;（2）A549 转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor 后对顺铂的敏感性下降（P＜0.05）;A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor, mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加（P＜0.05）;（3）A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor 后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组（P＜0.05）;而A549/ddp 转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor 以及 let-7b mimic 后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组（P＜0.05）;（4）A549 转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic 以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组（P＜0.05）;而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后, 细胞凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）。结论Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖, 抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。      

miR-422a通过ATG12调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的研究

目的探讨miR-422a调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的作用和机制及其与靶基因ATG12的关系。方法采用瞬时转染miR-422a模拟物和抑制物分别上调或下调骨肉瘤细胞的miR-422a表达水平,采用MTT法检测各时间点骨肉瘤细胞的增殖能力,瞬时转染miR-422a后采用流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测转染miR-422a对靶基因mRNA的影响。结果RT-qPCR结果显示,miR-422a在肿瘤组织及细胞中均高表达,ATG12在肿瘤组织及细胞中均低表达。MTT法结果显示,miR-422a-mimic组吸光度值明显升高,miR-422a-inhibitor组吸光度值明显降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,miR-422a-inhibitor组细胞凋亡率高于空白组与NC组(P<0.0001)。Western blot检测结果显示,miR-422a-mimic组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ蛋白量明显高于空白组与NC组,LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ明显高于空白组与NC组(P<0.05)。结论miR-422a/ATG12信号轴可能调控骨肉瘤细胞的自噬及凋亡。     

视网膜母细胞瘤组织中miR-142的表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的　探讨微小核糖核酸（ micro RNA, miR）-142在视网膜母细胞瘤（ retinoblastoma,RB）组织中的表达,以及对细胞增殖和侵袭力的影响。方法　选取 2013年 6月～ 2019年 6月在黄石市中心医院接受眼球摘除手术治疗的 RB患儿 79例（79眼）,培养人 RB细胞株 Y79并分为 miR-142模拟物组、阴性对照组和空白组,分别转染 miR-142模拟物、阴性对照序列和不作处理, RT-qPCR检测 RB和癌旁组织、细胞中 miR-142表达,MTT法检测细胞增殖活性, Transwell法检测细胞迁移和侵袭力。结果　 miR-142在 RB组织中表达量（ 0.34±0.12）低于癌旁组织（ 0.99±0.16）,差异有统计学意义（ t=29.102,P<0.01）;miR-142表达量在不同分化程度、是否神经浸润和淋巴结转移中差异均有统计学意义（ t=2.991～ 3.495,均 P<0.05）;miR-142模拟物组细胞中 miR-142表达量（ 2.42±0.11）高于阴性对照组和空白组（1.02±0.09,1.01±0.10）,差异有统计学意义（ F=398.036,P<0.01）;miR-142模拟物组 24 h,48 h,72 h和 96 h时吸光度 A值、迁移细胞数和侵袭细胞数均低于阴性对照组和空白组（F=5.519, 8.666, 12.926, 21.572, 28.394, 27.982, 均 P<0.05）。结论　RB患者组织中 miR-142表达量降低,且与分化程度、神经浸润和淋巴结转移有关。上调 miR-142表达可抑制 Y79细胞增殖、迁移和侵袭能力。