人毛乳头细胞条件培养液对斑秃患者的治疗作用

目的:观察人毛乳头细胞(DPC)条件培养液对斑秃患者的治疗作用,探讨DPC分泌促进毛囊生长的活性物质。方法:收集体外培养低传代DPC培养上清,制成冻干粉,用于治疗50例斑秃患者,并分别选择其中26例和10例作去炎松组和空白组自身对照。结果:DPC条件培养液组、去炎松组和空白组治愈率分别为74%、54%、10%,有效率分别为96%、73%、30%,DPC条件培养液组其治愈率和有效率均明显高于去炎松组和空白组(P<0.01)。结论:人DPC条件培养液有促进斑秃患者毛囊生长的作用。     

人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发的临床观察

目的:观察人毛乳头细胞条件培养液治疗雄激素源性脱发患者的临床疗效.方法:用人毛乳头细胞条件培养液皮下注射16例雄激素源性脱发患者的脱发区,每周1次,共4次.结果:人毛乳头细胞条件培养液治疗过的雄激素源性脱发区,可见到重新生长的毳毛和终毛.结论:人毛乳头细胞条件培养液对雄激素源性脱发患者有明显的治疗作用.     

人毛乳头细胞生长相关蛋白作用下细胞VEGF的表达

目的研究人毛乳头生长相关蛋白作用下不同代人毛乳头细胞VEGF的表达。方法通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,通过RT-PCR观察各代毛乳头细胞的VEGF变化。结果用低传代人毛乳头细胞的上清液培养过的9代人毛乳头细胞的VEGF表达不仅明显好于对照组(P<0.01),而且明显好于基础培养基作用下的7代人毛乳头细胞的VEGF表达(P<0.01)。结论低传代人毛乳头细胞的培养液在体外能明显地促进VEGF的表达。     

体外培养人毛乳头细胞特异性标记物表达的分析

目的 探讨人毛乳头细胞(human dermal papilla cells,HDPCs)经过体外长期的传代培养后,其与诱导毛囊生成能力相关的细胞特异性标记物的表达.方法 使用一步酶消化法将人毛乳头分离后,在体外进行HDPCs传代培养,取第1～8代HDPCs,在倒置显微镜下观察不同传代时期的生长情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色方法和实时定量基因扩增荧光检测系统(real-time quantitative PCR detecting system,QPCR),检测第1～8代HDPCs在不同传代时期其特异性标记物ALP和胰岛素样生长因子-1(insulin like growth factor-1,IGF-1)的表达.结果 HDPCs在体外传代培养过程中,不但逐渐丧失其聚集性、旋涡状生长的特性,而且ALP和IGF-1表达水平逐渐下降.第1代HDPCs的ALP和IGF-1表达水平分别是第8代的6.8倍和3.5倍.第1代和第2代HDPCs的ALP染色表达较明显,但是随着传代代数的增加,阳性表达的细胞逐渐变少,并且染色逐渐变浅.结论 HDPCs经过体外长期的传代培养后,其与诱导毛囊生成能力相关的特异性标记物ALP和IGF-1的表达水平逐渐下降,HDPCs失去聚集性、旋涡状生长的特性,从而导致高传代的HDPCs丧失诱导毛囊生长的能力.     

微载体技术高效扩增人毛乳头细胞的培养

目的探讨用微载体培养技术进行人毛乳头细胞高效扩增的培养方法，以满足对毛乳头细胞的大量需求。方法采用Cytodex-3为培养载体进行人第3代毛乳头细胞的微载体培养，定期观察培养液颜色的变化，采用苔盼蓝染色进行活细胞计数，倒置显微镜下观察生长状况。将微载体上消化的细胞进行传统培养，观察细胞生长情况，甲苯胺蓝染色，细胞免疫组织化学染色。结果培养至第12天，微载体上细胞数量最多，并且细胞聚集成团，类似毛乳头样结构。利用这时的细胞进行普通培养，仍然表现出凝集性生长特点，细胞呈异染性，免疫组织化学染色阳性。结论利用Cytodex-3培养可以收获大量具有生物活性的毛乳头细胞。     

毛乳头细胞在毛囊生长发育过程中的核心作用

1．1毛乳头的结构形态：通过光学显微镜观察，大多数毛乳头(dermal papilla，DP)呈梨形，是由结缔组织和一细胞群组成的一个小瘤样的结构，位于毛囊的底部。在电子显微镜下观察毛乳头细胞的胞核内可见棒状物质。除毛乳头细胞外，毛乳头中还含有细胞外基质(extracellular matrix，ECM)。随着毛囊的周期性循环，毛乳头的形态也发生着周期性的改变。     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响.方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养.采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞.然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响.结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05).10-9 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖.而10-10 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9 ml/L浓度、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用.结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关.在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用.     

雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究

目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响。方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养。采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞。然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响。结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05)。10-9ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖。而10-10ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9ml/L浓度、10-8ml/L浓度、10-7ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用。结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关。在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用。     

HSPC011基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能

目的 探讨HSPC011基因在人毛乳头细胞表达的生物学功能。方法 应用Nucleo-lector^TM基因转染技术，分别将质粒pCI-neo、绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1、真核表达重组质粒pCI-neo／HSPC011转染人毛乳头细胞和3T3细胞，了解HSPC011基因表达对这些细胞生长特性的影响。结果 通过观察绿色荧光蛋白在人毛乳头细胞和3T3细胞的表达，发现Nucleofector^TM基因转染效率分别约为70％和30％。HSPC011基因在人毛乳头细胞表达后，细胞形态幼稚而类似于3T3细胞，但其凝集性生长特性保持不变；HSPC011基因表达对毛乳头细胞的增殖活性无明显影响。HSPC011基因转染3T3细胞后，对3T3细胞的生长特性无任何影响。结论 初步体外实验表明，HSPC011基因在毛乳头细胞表达可能具有调节细胞分化的作用。     

高效的毛乳头细胞分离培养方法

目的 寻求一种洁净且无须显微镜下操作的毛乳头分离方法 ,培养高纯度的毛乳头细胞.方法 中性蛋白酶消化头皮组织,将含有毛囊的皮下脂肪层剪下切碎,并用Ⅰ型胶原酶消化,之后通过多次离心的方法 获得毛乳头;对培养出的毛乳头细胞进行形态学观察,并检测毛乳头细胞的标志物alfa-SMA和碱性磷酸酶的表达情况.结果 通过新型的两步酶消化法可获得洁净的毛乳头,培养出的毛乳头细胞标志物检测阳性.结论 新型的两步酶消化法是一种高效低劳动强度的毛乳头分离方法.     

应用抑制性消减杂交方法构建斑秃毛乳头差异表达基因文库

目的：构建斑秃区与正常毛囊毛乳头细胞（DPC）差异表达的cDNA正向和反向消减杂交文库，为从中克隆鉴定出斑秃特异性表达和生长期DPC特异性表达的基因奠定基础。方法：应用抑制性消减杂交技术，分别从斑秃区DPC及正常头皮DPC提取总mRNA；依次合成单链及双链cDNA，分别与2种不同的接头连接，再进行正向和反向的2次消减杂交及2次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接构建cDNA消减文库。结论：构建成功具有高消减效率的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库，文库扩增后得到120个阳性克隆，其中90个克隆含有100－500bp插入片段，结论：应用抑制性消减杂交技术所构建的斑秃区及正常头皮DPC cDNA消减文库，为进一步批量筛选，克隆斑秃区及正常头皮DPC特异性表达的基因奠定了基础。     

海藻多聚糖硫酸酯对人毛乳头细胞增殖的影响

目的:实验旨在观察褐藻多聚糖硫酸脂对体外培养人毛乳头细胞增殖的影响。方法:采用两步酶消化法分离纯化人毛乳头细胞,取第5代细胞用于实验,选择8个浓度的海藻多聚糖硫酸酯作用于体外培养的人毛乳头细胞72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性。结果:显示0.1～1.25mg/ml浓度范围的海藻多聚糖硫酸酯有明显的促进细胞增殖作用(P<0.05)。结论:海藻多聚糖硫酸酯在一定浓度范围内可促进毛乳头细胞增殖。     

一种适用于大规模高效快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法

目的:寻求适合于毛囊组织工程的大规模高效快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法。方法:将含有毛囊中下部的皮下组织剪碎,加入胶原酶Ⅰ消化2h,悬液经400目筛网过滤,收集被筛网截留的毛乳头进行培养,计算其贴壁率,绘制细胞生长曲线,并与显微解剖法相比较。结果:用这种方法成功分离培养了人头皮毛乳头细胞。结论:消化过滤法是一种能够大规模高效、快速分离培养人头皮毛乳头细胞的方法。     

微囊化人头皮毛乳头细胞移植诱导毛发形成

目的探索微囊化人头皮毛乳头细胞（以下简称毛乳头细胞）对裸鼠背部皮肤毛囊形成的诱导作用。方法胶原酶消化法体外分离、培养毛乳头细胞，再将毛乳头细胞以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine—alginate，APA）微囊包裹，以胶原凝胶作为载体，植入裸鼠背部皮下；移植空囊、游离毛乳头细胞各作为对照。观察移植部位毛发生长情况，利用组织学方法观测所形成的毛囊结构。结果微囊化毛乳头细胞皮下移植4周后，裸鼠背部移植区有白色、浓密、分布均匀的毛发长出。局部组织切片见大量发育完整的毛囊结构；而空囊及游离毛乳头细胞移植均未能诱导出上述现象。结论聚集性生长的微囊化毛乳头细胞能够保持诱导皮肤毛囊形成的作用，且这种作用无种属特异性。