新型2,3-二甲基-2-丁胺衍生物对动脉平滑肌细胞钾通道功能的调节作用

目的　研究 2 ,3 二甲基 2 丁胺化合物对动脉平滑肌钾通道的作用 ,分析其化学结构与钾通道调节作用之间的构效关系 ,从而初步推断其是否具有钾通道开放活性。方法　在急性分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上 ,采用膜片钳全细胞记录技术研究脂肪胺新结构衍生物对钾通道的影响。结果　通过对 14种化合物的研究发现 ,当一侧取代基碳原子数为 3～ 5个时 ,该类化合物对钾电流有明显的增强作用。结论　具有特定化学结构的 2 ,3 二甲基 2 丁胺衍生物对钾通道有激活作用 ,为一类新结构类型的钾通道开放剂。     

白藜芦醇对HERG钾通道电生理功能的影响

目的探讨白藜芦醇对稳定转染HERG基因的HEK293细胞上HERG钾通道的影响,进一步了解其抗心律失常的作用机制。方法传代得到单个HERG-HEK细胞,应用全细胞膜片钳技术记录HERG-HEK细胞上的HERG钾电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去活化)。结果白藜芦醇(1、10、100μmol·L-1)浓度依赖性的抑制HERG步阶电流(IHERG)及其尾电流(IHERGtail),0mV电压下1μmol·L-1白藜芦醇抑制IHERG25.3%±9.4%,IHERGtail23.6%±11%;10μmol·L-1白藜芦醇抑制IHERG28%±8.4%,IHERGtail28.8%±9.1%;100μmol.L-1白藜芦醇抑制IHERG43.7%±1.5%,IHERGtail47.9%±11%(P<0.05,n=12)。100μmol·L-1白藜芦醇作用后失活时间常数减小,失活速率变快;去活化时间常数明显减小(P<0.05,n=12)。激活、瞬时失活和复活动力学没有明显变化。结论白藜芦醇通过影响通道的开放状态和失活状态抑制HERG钾电流,从而使得心肌细胞复极时间延长,改善快速性心律失常。     

黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙激活钾通道和延迟整流钾通道的影响

目的　研究黄连素对结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道 (IK(Ca) )和延迟整流钾通道 (IK(V) )的影响以初步探讨其治疗运动性腹泻的机制。方法　酶解法急性分离单个豚鼠结肠平滑肌细胞 ,运用膜片钳方法检测 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素对结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) 和IK(V) 的影响。结果　 10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(Ca) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(Ca) 分别为生理盐水对照组的 (6 8 2 0± 5 17) % ,(5 5 89± 1 6 1) % ,(4 8 0 8± 2 4 5 ) % (P <0 0 1) ;10、5 0、10 0 μmol·L-1的黄连素可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(V) (P <0 0 1) ,当阶跃刺激为 +80mV时 ,其IK(V) 分别为生理盐水对照组的 (77 0 6± 6 4 2 ) % ,(6 8 6 7± 6 79) % ,(6 1 0 7±7 72 ) % (P <0 0 1)。结论　Ber能抑制豚鼠结肠平滑肌钙离子激活钾通道和延迟整流钾通道的开放 ,这可能是其治疗运动性腹泻的机制之一。     

Svate-Ⅲ对原代培养的大鼠皮层神经元钙激活钾通道作用

目的 观察Svate-Ⅲ对原代培养新生SD大鼠皮层神经元上钙激活钾通道作用。方法 采用膜片钳单通道记录技术。结果 Svate-Ⅲ在胞外可使钙激活钾通道开放概率增加,开放时程延长,在一定范围内表现出浓度依赖性。结论 Svate-Ⅲ可激活钙激活钾通道,可能对神经元有直接保护作用。     

大黄素对大鼠近端结肠平滑肌细胞电压依赖性钾通道的影响

目的研究大黄素对大鼠近端结肠电压依赖性钾离子通道的影响，以探讨其增强结肠运动的机制。方法 采用全细胞膜片钳技术测定电压依赖性钾离子通道快速激活型钾电流及延迟整流型钾电流。结果大黄素(1～30 μmol·L^-1)浓度依赖性地阻断延迟整流性钾通道，加快电流失活，其阻断作用不需要钾通道的开放。30 μmol·L^-1大黄素可抑制快速激活型钾电流。5 μmol·L^-1大黄素对钾通道的激活动力学及失活动力学没有影响，但30 μmol·L^-1大黄素使其激活动力学曲线明显右移，斜率常数由(13.0±0.6)上升至(19.6±2.5) mV，同时也使失活动力学曲线明显右移。结论大黄素可阻断延迟整流型钾通道及快速激活型钾通道，其阻断作用不是开放阻断。     

甲基莲心碱对豚鼠心肌及猪冠状动脉平滑肌细胞钾通道的作用

用膜片钳单通道技术,观察在细胞膜内侧加入甲基莲心碱(Nef)后K⁺通道特性的改变, 以研究Nef对豚鼠心室肌细胞及猪冠状动脉平滑肌细胞K⁺通道的作用. 结果：Nef可使心肌细胞及冠脉平滑肌细胞上K⁺通道开放概率（P_O）降低. 10, 20 μmol·L^-1 Nef分别使心肌细胞K⁺通道降低（50±32）%和（96±5）%, 30, 50 μmol·L^-1的Nef分别使猪冠脉平滑肌细胞上K⁺通道P_O降低(51±21)%和(71±14)%. 结果表明,Nef可从通道内口阻断心肌及平滑肌细胞上K⁺通道,但对前者的作用更强.     

内皮素对大鼠肺动脉平滑肌细胞膜钾通道的影响

目的观察内皮素(ET-1)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)膜电压门控钾通道(K_V)的作用。方法用全细胞膜片钳记录方法研究ET-1对膜电位(E_m)、膜电容(C_m)、电压门控钾电流(IK_V)的影响。结果ET-1可引起PASMCs去极化,并抑制IK_V,抑制IK_V时间明显早于其对E_m变化的影响,ET-1对IK_V的影响呈可逆性和浓度依赖性,在有钙的环境中,ET-1对IK_V峰电流的抑制率明显高于无钙时。结论ET-1可浓度依赖性的抑制IK_V,使常氧大鼠PASMCs去极化,且ET-1对IK_V的抑制作用早于对E_m的影响,这些作用不完全依赖于钙的参与,但钙可加强ET-1对IK_V的抑制作用。     

水杨酸钠对大鼠颞皮层神经元延迟整流钾通道的抑制作用

目的了解延迟整流钾通道在水杨酸钠导致耳鸣的机制中所起的作用。方法利用全细胞膜片钳技术研究水杨酸钠对急性分离的大鼠颞皮层神经元延迟整流钾通道的影响。结果水杨酸钠能够抑制延迟整流钾通道电流(IK(DR))的幅度,而且此抑制作用具有浓度依赖性(0.1～10 mmol.L-1)。水杨酸钠抑制IK(DR)的半抑制浓度(IC50)值为2.13mmol.L-1。1 mmol.L-1水杨酸钠将IK(DR)的激活曲线向超极化方向移动14 mV,将失活曲线向超极化方向移动17mV,并将失活后恢复曲线的时间常数(τ)延长为加药前的171%。结论水杨酸钠以浓度依赖的方式抑制IK(DR),而且影响IK(DR)的激活和失活动力学特征。水杨酸钠对IK(DR)的影响可能与水杨酸钠导致耳鸣的机制有关。     

过氧化氢对培养大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的影响

目的　研究过氧化氢对海马神经元上瞬时外向钾电流的影响。方法　采用全细胞膜片钳技术记录培养大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的变化。结果　 3 0 μmol·L-1H2 O2 孵育 12h后 (1)明显抑制IA,电流密度由 (5 3 8±15 8) pA·pF-1变为 (18 5± 6 2 ) pA·pF-1(n =10 ,P <0 0 1) ;(2 )明显抑制IA 激活作用 ,半数最大激活电压由 (-15 2± 3 6)mV左移至 (- 18 2± 2 7)mV(n =10 ,P <0 0 1) ;(3 )明显抑制IA 失活作用 ,失活常数由 (42 2± 10 1)ms变为 (81 9± 3 5 0 )ms(n =10 ,P <0 0 5 ) ,半数最大灭活膜电位V1/ 2 由 (- 87 5± 12 6)mV变为 (- 99 8± 2 1)mV(n =10 ,P <0 0 1) ;(4)明显抑制IA 电流失活后复活作用 ;恢复时间常数由 (2 7 9± 14 1)ms变为 (5 8 6± 10 0 )ms(n=10～ 11,P <0 0 1) ;(5 )降低静息膜电位 ,由 (- 64 9±9 4)mV变为 (- 46 0± 12 8)mV(n =6～ 11,P <0 0 1) ,延长动作电位时程 ,由 (8 7± 3 4)ms增至 (16 0± 6 2 )ms(n =6～ 11,P <0 0 5 )。结论　H2 O2 对IA 的抑制作用可能参与其对神经元的氧化应激损伤毒性     

人参二醇组皂甙对大鼠皮层神经元钙通道的影响

目的研究人参二醇组皂甙（ＰＤＳ）对大鼠大脑皮层神经元膜Ｌ－型钙通道单通道电活动的影响。方法急性分离大鼠皮层神经元和细胞贴附膜片钳技术。结果ＰＤＳ（１．５ｇＬ－１）可明显缩短大鼠皮层神经元Ｌ－型钙通道的平均开放时间，延长其平均关闭时间，降低其开放概率，而对该通道的电流幅值无明显影响，其作用与经典钙通道阻断剂ｖｅｒａ－ｐａｍｉｌ相似但较弱。结论ＰＤＳ对大鼠皮层神经元Ｌ－型通道有明显阻滞作用。     

粉防己碱对缺氧所致大鼠皮层神经元钙通道功能变化的影响

用细胞贴附式膜片钳单通道记录技术 ,研究了粉防己碱 ( Tet)对缺氧状态下大鼠大脑皮层神经元L-和 N-型钙通道变化的影响 .结果发现 ,Tet7.5,1 5和 30 μmol·L-1浓度依赖性缩短由缺氧诱导的L-和 N-型钙通道开放时间增加 ,降低开放概率 .Tet对皮层神经元 L-和 N-型钙通道的这一作用可能是其脑缺氧保护作用的机理之一 .     

dl—白花前胡甲素对人大脑皮层ATP敏感钾通道的作用

目的:研究白花前胡甲素(Pd-Ia)对人大脑皮层神经元ATP敏感钾通道的作用。方法:应用膜片箱全细胞记录技术,采用累积给药方式。箝制电压-40mV,指令电压-30到 100mV,时程600ms。结果:Pd-Ia以浓度依赖方式激活ATP敏感钾通道。当用含不同浓度的(0.01,0.01,0.1和1μmol/L)Pd-Ia细胞外液灌流时,电流值分别从给药前的(0.9±0.4)nA增大到给药后的(1.0±0.4)nA,(1.1±0.4)nA,(1.2±0.4)nA和(1.3±0.4)nA(P<0.01,n=5)。然后用含ATP敏感钾通道的特异抑制剂格列苯肥(10μmol/L)的细胞外液冲洗,电流减小至(0.90±0.37)nA(P<0.01,n=5)。结论:Pd-Ia可开放ATP敏感钾通道,是一种钾通道开放剂。     

Proton-gated ion channels in cultured mouse cortical neurons

Proton-gated ion channels in cultured mouse cortical neurons were characterized using the patch clamp technique. In voltage clamp, rapid shifts of the extracellular saline from pH 7.4 to <7.0 invariably triggered inward currents carried by sodium. The currents were inhibited by Amiloride (IC₅₀: 6.2 μM). In current clamp, acidic saline depolarized the neurons and triggered trains of action potentials. Concentration–response experiments revealed an extreme intercell variance as the EC₅₀-value for protons varied from pH 6.8 to 5.6, indicating heterogeneity in channel type expression from cell to cell. The possible involvement of acid sensing ion channels in ischemic neurodegeneration is discussed.     

青蒿素对克隆的内向整流钾通道的抑制作用

采用双电极电压钳技术观测了青蒿素对表达于非洲蛙卵的克隆内向整流钾通道(K_ir2.1)的影响. 当蛙卵注射K_ir2.1 cRNA后灌注不同浓度青蒿素时, 青蒿素呈浓度依赖关系降低K_ir2.1钾通道在非洲蛙卵细胞膜的功能表达. 青蒿素阻断K_ir2.1钾通道亦呈电压依赖性. 当指令电压为-140, -130和-120 mV时, 5和50 μmol·L^-1的青蒿素可使K_ir2.1钾通道的内向电流分别下降14.2%, 34.5%; 12.0%, 24.6%; 4.3%, 19.1%. 当指令电压为-50, -40和-30 mV时, 5和50 μmol·L^-1的青蒿素则使K_ir2.1钾通道的外向电流分别增加22.2%, 72.2%; 28.0%, 80.0%; 24.1%, 69.0%. 青蒿素对K_ir2.1通道的阻断作用在用正常灌注液冲洗后可恢复. 青蒿素的抗心律失常作用与它阻断K_ir2.1通道电流有关.     

木犀草素对大鼠皮层神经元氧化损伤的保护作用

目的研究木犀草素对于皮层神经元氧化损伤的保护作用及其机制。方法用200μmol·L-1H2O2处理皮层神经元造成神经元的氧化损伤,用LDH活性检测细胞死亡,MTT测定线粒体活性,荧光分光检测神经元线粒体膜电位,细胞内ROS的积累以及过氧化氢酶和谷胱甘肽的含量变化。结果20μmol·L-1的木犀草素能有效的保护H2O2导致的神经元死亡,有效维护线粒体膜电位和线粒体活性,减少细胞内ROS的累积,并能通过提高细胞内谷胱甘肽的含量有效对抗氧化损伤,同时对于H2O2造成的过氧化氢酶活力和谷胱甘肽含量的急剧下降也有很好的保护作用。结论木犀草素是一种比较有效的对抗神经元氧化损伤的保护剂,它很可能通过维持线粒体的活性而达到神经保护作用,并通过提高细胞内谷胱甘肽的水平,增强神经元抗氧化损伤的能力。