应用基因芯片技术检测四种结核药物敏感试验的研究

目的：探讨基因芯片技术在结核病临床快速诊断中的应用价值。方法应用基因芯片技术对74例临床标本进行链霉素、乙胺丁醇、异烟肼和利福平耐药检测,以罗氏(L-J)绝对浓度法药敏试验为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价。结果有39例结果完全符合,符合率为52.7%;基因芯片技术检测链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的结核菌药物敏感试验的敏感性分别为91.2%、57.7%、87.3%和78.1%,特异性均为100%,其中异烟肼和乙胺丁醇结果的差异有统计学意义。结论应用基因芯片技术检测四种抗结核药物敏感性试验,可弥补传统药敏试验方法耗时长的不足,为临床使用链霉素、乙胺丁醇、利福平和异烟肼提供预见性用药建议,可与罗氏金标准方法互为补充检测。     

BACTEC-MGIT 960快速药敏与罗氏比例法药敏检测方法对比

目的:比较BACTEC-MGIT960全自动分枝杆菌快速药敏与罗氏比例法药敏检测方法的一致性。方法:平行检测住院患者分枝杆菌临床分离株245株的利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)的药物敏感性。结果:经对比检测,BACT-MGIT960全自动分枝杆菌药敏测定可在4~13 d内检测RFP,INH,SM,EMB的药物敏感性,平均7.8d。与罗氏比例法药敏的符合率分别达到98.78%,97.55%,96.73%,96.73%。平均符合率为97.45%。结论:BACTEC-MGIT 960分枝杆菌液体药敏系统,可快速准确获得药敏检测结果,尤其适用于临床分离株的快速药敏筛检。     

显微镜观察药物敏感性检测技术在结核性脑膜炎诊断及其耐药性检测中的应用

目的评价显微镜观察药物敏感度检测技术(microscopic observation drug susceptibility,MODS)在结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)诊断及耐药性检测中的应用效果。方法随机选择50例临床诊断TBM患者,用MODS技术对50例患者脑脊液进行培养,同时行异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇4种抗结核药物药敏测定,并与传统罗氏培养及罗氏药敏结果进行比较。结果本法与罗氏培养阳性结果符合率为88%,培养阳性结果平均时间分别为8d和26d。本法检测异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为88%、96%、92%、84%,药敏检测所需平均时间分别为8d和31d。结论 MODS诊断TBM及耐药性检测具有快速、操作简便、价廉等优点。     

住院痰阳老年肺结核患者耐药特点分析

目的分析安徽省胸科医院71例痰阳老年肺结核患者的耐药情况,为老年肺结核患者的抗结核方案制定提供依据。方法收集2016年1-12月收治的痰抗酸染色阳性的老年肺结核患者,经痰分离培养并进行9种抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、左氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、丙硫异烟胺、对氨基水杨酸钠)的药物敏感性试验,对其结果进行分析。结果对一线药物的耐药情况:异烟肼(18.31%)=链霉素(18.31%)>利福平(12.68%)>乙胺丁醇(1.41%)。对二线药物的耐药情况:丙硫异烟胺(12.68%)>左氧氟沙星(11.27%)>阿米卡星(4.23%)>对氨基水杨酸钠(2.82%)>卷曲霉素(1.41%)。初治患者与复治患者比较,对异烟肼、利福平、链霉素以及多耐药差异有统计学意义。60～69岁老年患者耐药情况最为严重,75～79岁年龄段出现一次小高峰。结论老年结核病的耐药情况应引起重视,乙胺丁醇、卷曲霉素、阿米卡星的耐药率较低,可考虑在耐药老年患者中首选应用,应注意早期进行药敏检测,并合理制定抗结核方案,遏制耐药结核病流行。     

噬菌体检测技术(PhaB)检测抗结核药物乙胺丁醇的耐药性

目的探讨噬菌体检测技术(PhaB)在检测抗结核药物乙胺丁醇耐药性中的价值。方法应用PhaB测定30株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对乙胺丁醇(E)的耐药性,并与罗氏药敏结果比较。结果PhaB检测E药敏结果与罗氏药敏结果符合率为90%。如以绝对浓度法为判断标准,则PhaB检测E药敏的敏感性为95.6%,特异性为71.4%,阳性预测值(PPV)为91.6%,阴性预测值(NPV)为83.2%,准确性为90%。结论PhaB检测E药敏结果与绝对浓度法符合率较高,可作为结核分枝杆菌耐药性的快速筛选方法。     

不同方法检测结核分枝杆菌药物敏感性分析

目的 探讨不同方法检测结核分枝杆菌药物敏感性结果的一致性.方法 分别采用比例法和绝对浓度法对1824株结核分枝杆菌进行4种抗结核药物[异烟肼（INH）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、利福平（RFP）]的耐药性测定.结果 RFP、EMB、SM、INH 用绝对浓度法与比例法药敏测试结果一致率分别为：94.0%、93.6%、93.4%、92.4%.经统计学分析,两种方法测试1824株4种药物敏感性比较,差异有显著性（P＜0.05）.结论 绝对浓度法与比例法进行结核分枝杆菌测定总的一致率较高,但仍存在统计学差异,在进行耐药性评价时应考虑药敏方法是否一致.     

结核分枝杆菌药物敏感试验检测方法的研究

目的 建立一种结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）药敏试验的快速荧光检测法。方法 用自制的荧光检测管检测异烟肼（INH）、利福平（RFP）、乙胺丁醇（EB）、丁胺卡那霉素（AMK）、左旋氧氟沙星（LVFX）对结核分枝杆菌的体外抑菌活性,并用82例临床菌株与改良罗氏法进行了配对比较,确定各药物在药敏试验中的应用浓度。结果 5种药物的应用浓度分别确定为IHN：0．1μg／ml、RFP：1μg／ml、EB：2μg／ml、AMK：2μg／ml、LVFX：2μg／ml;本法进行结核分枝杆茼的药敏试验仅需7～10天（d）,较改良罗氏法的28d缩短了18～21d。两种方法的药敏试验结果无显著性差异。结论本法经济实用,并缩短了结核分枝杆菌药敏的报告时间。     

2014-2015年西安市胸科医院结核分枝杆菌耐药性分析

目的 回顾性分析西安市胸科医院2014—2015年结核分枝杆菌的耐药情况,为本地区结核病的诊断、治疗以及预防提供参考.方法 收集西安市胸科医院2014—2015年门诊、住院患者结核分枝杆菌阳性菌株2583株,采用比例法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、丙硫异烟胺、卷曲霉素、莫西沙星、利福喷丁、阿米卡星、对氨基水杨酸钠、左氧氟沙星共11种抗结核药物的耐药性进行测定.结果 共分离出2583株结核分枝杆菌,其中耐多药、广泛耐药、一线4种全耐药、二线7种全耐药、11种药物全耐药菌株分别为258、139、116、17、16株,耐药率分别为9.99%、5.38%、4.49%、0.66%、0.62%.对11种抗结核药物单一耐药率,由高到低分别为:异烟肼(23.96%)、链霉素(21.76%)、利福喷丁(14.83%)、利福平(14.05%)、左氧氟沙星(10.69%)、乙胺丁醇(9.33%)、莫西沙星(6.93%)、对氨基水杨酸钠(5.81%)、卷曲霉素(3.29%)、阿米卡星(2.09%)、丙硫异烟胺(1.55%).耐多药菌株对利福喷丁和左氧氟沙星的耐药率较高,分别为87.98%、53.88%.对利福喷丁+左氧氟沙星、莫西沙星+利福喷丁组合的耐药率分别高达51.94%、39.92%.广泛耐药菌株对对氨基水杨酸钠的耐药率最高,为32.37%.结论 2014—2015年西安市胸科医院抗结核病药物单一耐药率虽然呈下降趋势,但耐多药、广泛耐药和全耐药菌株的出现和增加提示还需要更加严格的执行结核病防控策略,防止各种耐药菌株的产生、增加和传播.     

噬菌体法检测结核分枝杆菌及其耐药性的研究

目的：利用噬菌体法进行结核分枝杆菌检测,对链霉素、异烟肼、利福平药物敏感性测定,来分析其实验方法的灵敏度、特异性及药物敏感性同比例法的符合率,指导临床诊断和合理用药治疗。方法利用噬菌体法进行结核分枝杆菌的检测,链霉素（S）、异烟肼（H）和利福平（R）药物敏感性测定,以比例法为对照,来分析噬菌体法的灵敏度、特异性及符合率。结果噬菌体法药物敏感测定结核分枝杆菌同比例法的符合率为90.2%,分别为S 92.6%、R 91.1%、H 88.6%;噬菌体法直接检测肺结核患者痰样本结核分枝杆菌,涂阳培阳、涂阴培阳、涂阴培阴样本检出率分别为96.2%、80.0%、26.2%。结论噬菌体法可快速检测肺结核患者痰样本中结核分枝杆菌,检出率明显高于涂片法,敏感性、特异性较高;噬菌体法对临床分离株进行药物敏感性测定,与比例法比较符合率较高,报告时间只需3 d,且无需特殊仪器、费用低,对临床早期诊断与治疗具有重要意义。     

非结核分枝杆菌临床药敏结果分析

目的 为探讨非结核分枝杆菌变化以及耐药性,临床对其进行药敏试验并对结果进行分析.方法 选取本院2013年7月至2015年6月期间从肺部疾病患者痰、支气管冲洗液中分离得到的196株非结核分枝杆菌,分析其细菌种类、耐药性等情况.结果 病菌多分布在鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌中,其依次所占比例为31.6％、17.3％、14.8％、12.2％,克拉霉素对鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌等菌种敏感性较高,利福平、链霉素、异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、丙硫异烟胺对非结核分枝杆菌均有较高耐药性,且耐药性均在60.0％以上.结论 通过临床对非结核分枝杆菌进行药敏实验,对临床医师选药治疗,提高治疗效果有重要意义.     

黄芩苷对结核分枝杆菌抑菌作用的初步研究

目的:通过体外抑菌试验探讨黄芩苷对结核分枝杆菌的体外抑菌活性.方法:采用改良罗氏培养基绝对浓度法检测黄芩苷对37株结核分枝杆菌的抑菌作用.结果:黄芩苷对37株结核分枝杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)最低为1.5 g/L,最高＞48 g/L,MIC90为12g/L,MIC75和MIC50均为6g/L.全敏感菌株在MIC为6g/L时数量比例最大,随着MIC值向两侧递减;异烟肼(INH)低耐菌株的数量与MIC值无明显关联,乙胺丁醇(EMB)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而显著增多;利福平(RFP)低耐菌株数量随着MIC由低到高的变化而逐步减少.结论:黄芩苷在体外对结核分枝杆菌具有一定的抑菌作用.     

结核杆菌对异烟肼药物的敏感性试验

目的研究结核分枝杆菌对异烟肼药物的敏感性状况，为结核病的防治提供理论依据。方法采用直接涂片检查法和培养法。对肺结核患者的痰液进行检查，阳性标本经抗酸染色镜检确认后，采用绝对浓度法的间接法进行耐药性测定。结果131例疑似肺结核患者痰标本中，直接涂片法检出阳性标本21例，阳性检出率为16．0％（21／131）；培养法共检出阳性标本56例，阳性检出率为42．7％（56／131）。比较2种检测方法的阳性检出率，差异有统计学意义（P〈0．05）。培养法高于直接涂片法。56株结核杆菌标本进行异烟肼的药物敏感性试验，其中有47株发生耐药，耐药率为83．9％，且都是高浓度耐药。结论结核分枝杆菌对异烟肼的初始耐药率处于较高水平，必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。     

超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的体外抗结核分枝杆菌药敏实验

目的:检验制备的超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球(spSPM)的体外抗结核分枝杆菌活性,为靶向治疗儿童骨关节结核提供实验基础。方法:用制备的spSPM溶出液制成药敏培养基,与硫酸链霉素标准品制备的药敏培养基进行对照,采用绝对浓度法接种,观察比较其抑菌效果。结果:4周后,15株菌在空白培养基上均生长旺盛(+++~++++),在TCH培养基均为阳性(+),在PNB培养基均为阴性(-)。spSPM组高浓度(100 mg/L)培养基7株阴性,低浓度(10 mg/L)仅1株阴性。硫酸链霉素标准品溶液组培养基高浓度(100 mg/L)7株阴性,低浓度(10 mg/L)2株阴性。spSPM组与溶液组在分枝杆菌生长情况上差异均无统计学意义(高、低浓度培养,χ2分别为0.1408、0.0997,P均>0.05)。spSPM组耐药菌株为11株(73.33%),溶液组耐药菌株为12株(80.00%),两组耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验制备的spSPM溶出液与硫酸链霉素标准品抑菌效果无明显差异,因此可应用于进一步的研究中。     

硝酸盐还原试验、DNA线性杂交检测结核分枝杆菌耐药性的比较

目的比较生物化学检测方法和基因检测方法在结核分枝杆菌耐药性检测中的优劣,以提高耐药性检测方法的准确度。方法以绝对浓度法为“金标准”,对已知耐药浓度的耐药结核分枝杆菌菌株及敏感株采用硝酸盐还原试验（Nitrate Reducrase Assay,NRA）、DNA线性杂交法（Applicating Line Probe Assay LiPA）检测其对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）的耐药性。结果硝酸盐还原试验与绝对浓度法比较,异烟肼（INH）耐药菌株符合率为77．6％,敏感菌株符合率为86．6％;利福平（RPF）耐药菌株符合率为95．8％,敏感菌株符合率为92％;链霉素（SM）耐药菌株符合率为84．1％,敏感菌株符合率为100％;乙胺丁醇（EMB）耐药菌株符合率为94．1％,敏感菌株符合率为85．7％。DNA线性杂交与绝对浓度法比较,异烟肼（INH）耐药菌株符合率为89．6％,敏感菌株符合率为93．3％;利福平（RPF）耐药菌株符合率为98．6％,敏感菌株符合率为100％;链霉素（SM）耐药菌株符合率为78．3％,敏感菌株符合率为100％;乙胺丁醇（EMB）耐药菌株符合率为88．2％,敏感菌株符合率为100％。硝酸盐还原试验与DNA线性杂交比较,异烟肼（INH）耐药菌株符合率为80．6％,敏感菌株符合率为82．9％;利福平（RPF）耐药菌株符合率为100％,敏感菌株符合率为100％;链霉素（SM）耐药菌株符合率为97．2％,敏感菌株符合率为96．7％;乙胺丁醇（EMB）耐药菌株符合率为100％,敏感菌株符合率为83．5％。结论硝酸盐还原试验和DNA线性杂交法检测匀可作为快速结核分枝杆菌耐药性试验方法,两方法具有一致性。     

链霉素对结核杆菌的药物敏感性试验

目的分析结核分支杆菌对链霉素药物的敏感性状况,为结核病的防治提供理论依据。方法将标本经抗酸染色确认后,采用绝对浓度法的间接法进行耐药性测定。结果60株结核杆菌标本直接涂片,经抗酸染色确认,阳性率为100％,进行链霉素的药物敏感性试验,共有59株发生耐药,总耐药率为98．3％（59／60）。结论结核分枝杆菌对链霉素的初始耐约半处于较高水平,必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。     

淋巴结结核患儿分枝杆菌检测结果研究

目的:研究淋巴结结核患儿分枝杆菌检测结果。方法:选取2015年9月~2018年9月某院确诊的淋巴结结核患儿157例,经细针穿刺获取病理组织后,全部患儿均行罗氏培养和涂片镜检检验,分析分枝杆菌检测结果,采用硝基苯甲酸生长试验(PNB法)鉴别培养菌菌型。结果:157例患儿分支杆菌罗氏培养阳性率为30.57%,涂片镜检阳性率为63.69%,二者结合可明确诊断者占比57.96%;涂片镜检阳性率明显高于罗氏培养阳性率(P<0.05);48株病菌分离株中结合杆菌复合群占比97.92%,非结核分枝杆菌占比2.08%。结论:儿童淋巴结结核多由结核分枝杆菌复合群感染所致,与罗氏培养法相比较,涂片镜检法可有效提高分支杆菌检验阳性率。     

Synthesis and antimycobacterial activity of novel amino alcohols containing central core of the anti-HIV drugs lopinavir and ritonavir

Eleven new amino alcohol derivatives have been synthesized from reactions of lopinavir intermediate and heteroaromatic aldehyde in good yields. These compounds, the antiretrovirals (lopinavir and ritonavir) and lopinavir key intermediate were evaluated as antibacterial agents against Mycobacterium tuberculosis H37Rv using the Alamar Blue susceptibility test and their activity expressed as the minimum inhibitory concentration (MIC) in μM. Ten amino alcohols evaluated displayed significant activity (MIC between 6.15 and 108.4 μM) when compared to first-line drug ethambutol (MIC = 15.9 μM). Three of them showed more activity than ethambutol (MIC = 6.15; 6.21 and 13.4 μM). The appreciable activity of these compounds can be considered an important finding for the rational design of new leads for anti-TB compounds.     

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用

目的探讨气管镜刷检物实时荧光PCR熔解曲线耐药法检测对复治结核病耐药早期诊断的价值,同时根据支气管刷检深部痰液结核菌耐药检测结果,进一步分析指导可疑耐药结核病治疗,规范临床合理用药,为耐药结核病的诊断及治疗提供科学依据。方法纳入160例结核分枝杆菌(MTB)患者为本研究对象。每例患者采用同一标本进行绝对浓度法和熔解曲线法耐药基因检测,观察熔解曲线法对利福平、异烟肼的检测敏感度、特异度、准确度。结果同一标本应用两种方法检测时,绝对浓度法检出利福平21例耐药,139例敏感;检出异烟肼68例耐药,92例敏感。熔解曲线法检出利福平17例耐药,139例敏感,4例未检出结果;检出异烟肼61例耐药,99例敏感。熔解曲线法对利福平的检测准确度为96.15%、敏感度为87.50%、特异度为98.39%;对异烟腓的检测准确度为95.00%、敏感度为88.57%、特异度为96.80%。两种检验方法对利福平及异烟肼的耐药及敏感率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论荧光PCR熔解曲线法能够快速检测出MTB对药物的耐药基因检测,而且有良好的敏感度和特异度,有效节约时间、安全高效,是临床检验及诊治耐药结核的有效手段。     

结核分支杆菌耐药基因检测结果分析

目的 分析肺结核患者结核分支杆菌获得性耐药情况,比较两种耐药性检测方法的检测效果.方法 用药敏试验(绝对浓度法)检测结核分支杆菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)的耐药情况,采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分支杆菌耐药rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变.结果:400例肺结核耐药患者常规药敏试验耐药316例(79.8%);耐药基因检测耐药株288株,突变率72.0%.RFP耐药例数和耐药率明显高于SM、PZA和EMB(耐药例数:F=2.45,2.56,2.69,P＜0.05;耐药率:F=2.55,2.66,2.79,P＜0.05),rpoB突变株和突变率明显高于katG、rpsL、pncA和embB(突变株:F=2.28,2.46,3.19,3.33,P＜0.05～0.01;突变率:F=2.36,2.61,3.25,3.45,P＜0.05～0.01),高浓度药物耐药菌株的突变株和突变率显著高于低浓度药物耐药菌株,随着不规律用药时间的延长,耐药率和突变率均逐渐上升(耐药率:F=2.77,2.88,P＜0.05;突变率:F=2.72,2.85,P＜0.05).结论 PCR-SSCP是一种快速检测结核杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变敏感、特异的方法.     

Potential tuberculostatic agents: micelle-forming copolymer poly(ethylene glycol)-poly(aspartic acid) prodrug with isoniazid

With the objective of obtaining slow-acting isoniazid derivatives, of potential use as chemoprophylactics or chemotherapeutics in tuberculosis, the micelle-forming copolymer of poly(ethylene glycol)-poly(aspartic acid) prodrug with isoniazid was synthesized. The derivative obtained was found to be active in Mycobacterium tuberculosis culture, with a minimal inhibitory concentration (MIC) 5.6 times lower than that of the tuberculostatic drug.