神经生长因子对胰淀素所致大鼠胰岛细胞功能障碍的保护作用

目的:评价神经生长因子(NGF)对高浓度胰淀素所致大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用.方法:以不同浓度胰淀素(1、5、10 μmol/L)孵育原代培养的大鼠胰岛β细胞,制备功能减退的细胞模型,再以不同浓度的NGF(50、100、200 μg/L)孵育高浓度胰淀素(10 μmol/L)作用过的胰岛细胞,分别设立空白对照组,比较各组细胞对四甲基偶氮唑盐(MTY)还原能力和胰岛素的分泌能力.结果:高浓度胰淀素(10 μmol/L)作用后胰岛细胞对MTF还原能力以及基础糖(5 mmol/L)和高糖状态(16.7 mmol/L)下胰岛素分泌量的影响与对照组相比均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞模型制备成功.用不同浓度NGF孵育24h后,随着NGF剂量的增加,此受损胰岛细胞胰岛素分泌量(即24 h胰岛素分泌量)、高糖(16.7 mmo/L)刺激下胰岛素分泌量均明显增加,受损胰岛细胞对MTT还原能力亦逐步增强.结论:NGF可减轻高浓度胰淀素对胰岛细胞活力的抑制作用,并促进胰岛B细胞分泌功能的恢复.     

芦丁对高糖模型大鼠肾小球系膜细胞的保护作用

目的:研究芦丁对高糖模型大鼠肾小球系膜细胞的保护作用。方法:以高糖(25 mmol/L)培养鼠肾小球系膜细胞。试验随机均分为正常对照(正常培养基)组、溶剂对照(0.1%DMSO)组、模型(正常培养基)组、卡托普利(1μmol/L)组与芦丁高、中、低质量浓度(40、10、5μg/ml)组,培养48 h。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞转化生长因子(TGF)-β1mRNA的表达,Western blot法检测细胞Smad 2/3与Smad 7的含量,分光光度法测细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平。结果:与溶剂对照组比较,模型组细胞Smad 2/3、TGF-β1mRNA的表达增强,T-SOD、CAT与GSH-Px活性减弱,MDA含量增加,Smad 7的表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芦丁高、中、低质量浓度组细胞Smad 2/3表达减弱,T-SOD、CAT活性增强,MDA含量减少,Smad 7的表达减弱;芦丁高、中质量浓度组TGF-β1mRNA表达减弱,GSH-Px活性增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芦丁通过TGF-β1/Smad通路对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞产生保护作用,具有潜在的防治糖尿病肾病作用。     

α-硫辛酸对高糖环境下大鼠INS-1细胞的保护作用

目的 观察α-硫辛酸对高糖环境下INS-1细胞的抗氧化作用及对胰岛素分泌的影响,探讨α-硫辛酸对胰岛β细胞的保护作用.方法 INS-1细胞分为3组:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖处理)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖处理)和观察组(30 mmol/L葡萄糖+200 μmol/L α-硫辛酸处理).分组培养48 h后检测活性氧生成的情况,行葡萄糖刺激胰岛素分泌试验(GSIS)测定胰岛素含量,测定各组氧化应激相关指标,测定核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶l(NQO1) mRNA表达情况.结果 高糖组细胞存活率、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶1(GPX-1)和过氧化氢酶(CAT)含量低于对照组(P＜0.05),活性氧和丙二醛含量高于对照组(P＜0.05).观察组细胞存活率、SOD、GPX-1和CAT含量高于高糖组(P＜0.05),活性氧和丙二醛含量低于高糖组(P＜0.05).高糖组基础胰岛素分泌和GSIS试验胰岛素分泌量以及SOD、GPX-1、CAT、HO-1和NQ01 mRNA表达低于对照组(P＜0.05).观察组基础胰岛素分泌和GSIS试验胰岛素分泌量以及SOD、GPX-1、CAT、Nrf2、HO-1和NQO1mRNA表达高于高糖组(P＜0.05).结论 α-硫辛酸显著降低胰岛β细胞在高糖环境下的氧化损伤,增强胰岛β细胞GSIS的功能,对胰岛β细胞具有保护作用.     

可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat(以下简称CIN)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:以33.3 mmol/L的葡萄糖作用于HUVECs细胞复制氧化应激损伤模型。将HUVECs细胞分为正常组、高糖组和高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组,采用MTT法检测细胞活力,计算细胞存活率;另将HUVECs细胞分为正常组、正常+CIN 1μmol/L组、高糖组、高糖+CIN 1μmol/L组,采用硫代巴比妥酯法、黄嘌呤氧化酶法检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)m RNA的表达。结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率降低(P<0.05);与高糖组比较,高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组细胞存活率升高(P<0.05),且呈浓度依赖性,但高糖+CIN 1μmol/L组与高糖+CIN 10μmol/L组间细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,高糖组细胞中MDA含量增加、SOD活性降低、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达增强(P<0.05),但正常+CIN 1μmol/L组细胞上述指标无明显变化(P>0.05);与高糖组比较,高糖组+CIN 1μmol/L组细胞中MDA含量降低、SOD活性增强、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达减弱(P<0.05)。结论:CIN对体外高糖诱导的HUVECs细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

生物素对高糖状态下大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的 探讨生物素对高糖损伤胰岛β细胞功能的影响.方法 采用Dextran密度梯度离心法分离纯化大鼠胰岛,在含5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖、5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖+1 μmol·L~(-1)生物素、含27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖及27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖+1 μmol·L~(-1)生物素的RPMI 1640培养基中培养48 h,分析3.3、27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖刺激的胰岛素分泌及胰岛细胞中胰岛素的含量;提取总mRNA,RT-PCR扩增前胰岛素源基因,电泳并进行灰度分析.结果 在5.5 mmol·L~(-1)葡萄糖培养条件下,生物素增加高糖诱导的胰岛素释放及胰岛细胞的胰岛素含量,前胰岛素源mRNA也增加;在27.0 mmol·L~(-1)葡萄糖培养铝h的胰岛中,胰岛细胞中的胰岛素浓度降低,高糖诱导的胰岛素释放及前胰岛素源mRNA显著减少;生物素的共培养,部分提高了高糖诱导的胰岛素释放及前胰岛素源mRNA含量.结论 生物素通过促进胰岛素的合成显著改善了高糖损伤胰岛β细胞的功能紊乱.     

胰岛素对高糖诱导HepG2细胞ACAT2表达的影响

目的探讨胰岛素对高糖诱导人肝癌组织(HepG2)细胞中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)表达的影响。方法将培养好的HepG2细胞以0.7×106L-1密度接种于6孔培养板内过夜培养,加入无血清培养基继续培养24 h后分别用正常培养基(对照组)、含终浓度为25 mmol/L甘露醇溶液(甘露醇组)和25 mmol/L葡萄糖溶液(高糖组)培养基分别与细胞孵育12 h;胰岛素组用含总浓度25 mmol/L葡萄糖培养基与细胞孵育4 h后,加入终浓度为30 mU/L胰岛素再孵育8 h。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测ACAT2的表达水平。结果高糖组HepG2细胞ACAT2表达明显高于对照组(P<0.01),胰岛素组ACAT2表达显著低于高糖组(P<0.01)。结论胰岛素可下调高糖诱导的ACAT2的表达。     

山茱萸最佳配伍组分对高糖致ECV304细胞氧化损伤的保护作用

目的研究山茱萸最佳配伍组分(环烯醚萜苷、三萜酸和多糖以2∶1∶2配伍)对高糖培养的内皮细胞(human um-bilical vein endothelium cells,ECV304)氧化应激的影响。方法体外培养细胞,在细胞板内加入含30 mmol.L-1高糖的10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)RPMI 1640培养液,加入空白、山茱萸最佳配伍组分大剂量、小剂量含药血清。同时设10%FBS RPMI 1640培养液作正常对照,川芎嗪作阳性对照。在37℃、5%CO2饱和湿度培养48 h后,取细胞上清液测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)。应用激光共聚焦显微镜检测进入细胞内2',7'-二氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)荧光强度来反映细胞内ROS含量。结果高糖组细胞上清液中SOD、GSH-Px活性降低,MDA、ROS含量增加(P<0.01),提示血管内皮细胞受损,抗氧化能力降低。而山茱萸最佳配伍组分能提高SOD、GSH-Px活力,降低ROS、MDA含量,与高糖组比较差异有显著性(P<0.05,0.01)。结论山茱萸最佳配伍组分能够保护血管内皮细胞,具有防治糖尿病血管病变的作用,其作用机制与抑制氧化应激有关。     

牛磺酸对高糖诱导的大鼠血管内皮细胞氧化应激与凋亡的保护作用

目的观察牛磺酸对高糖培养诱导大鼠血管内皮细胞氧化应激与凋亡的影响。方法组织块法原代培养大鼠胸主动脉内皮细胞,取对数生长期的第4代内皮细胞进行试验。培养体系中的葡萄糖浓度保持30 mmol/L,加入终浓度为0,2.5,5,10,20 mmol/L的牛磺酸共培养24 h,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平及细胞凋亡率,比色法测定细胞培养基中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与0 mmol/L比较,2.5~20 mmol/L组细胞内ROS水平依次降低,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);5和10 mmol/L牛磺酸抑制细胞凋亡作用明显。5~20 mmol/L组MDA含量逐渐降低,而SOD活性逐渐增强。结论牛磺酸能削弱高糖诱导大鼠血管内皮细胞的氧化应激,抑制细胞凋亡。     

棕榈酸对小鼠胰岛和INS-1E细胞作用的研究

目的:探讨高脂对INS-1E细胞和小鼠胰岛的慢性作用.方法:雌性NMRI小鼠6～10周龄,苯巴比妥腹腔麻醉,常规开腹,取小鼠胰腺组织,应用胶原酶技术消化胰腺分离胰岛.传代培养的INS-1E细胞和分离的小鼠胰岛分别在含与不含棕榈酸的RPMI1640中培养72 h,然后在含3.3、16.7 mmol/L葡萄糖的Krebs-Ringer缓冲液中培养60min,留取上清液行胰岛素测定.INS-1E细胞在含不同浓度的棕榈酸的RPMI1640中培养72 h,提取其总RNA,合成相应的cDNA,再行RT-PCR检测胰十二指肠同源异形盒1(Pdx1),胰岛素1、胰岛素2和葡萄糖转运子2的基因表达.结果:高脂培养后INS-1E细胞和小鼠胰岛的基础胰岛素分泌增加,糖刺激的胰岛素分泌减少,INS-1E细胞的胰岛素1,胰岛素2和葡萄糖转运子2的mRNA水平下降.结论:高脂显示了对胰岛B细胞的慢性毒性作用.     

罗格列酮对高糖诱导的β细胞胰岛素分泌功能的影响

目的 探讨罗格列酮对高糖诱导的β细胞胰岛素分泌功能及胰腺十二指肠同源盒因子-1(PDX-1)mRNA表达的影响.方法 应用正常浓度葡萄糖、正常浓度葡萄糖 罗格列酮、高浓度葡萄糖、高浓度葡萄糖 罗格列酮培养RIN-m细胞(大鼠胰岛细胞瘤细胞系).采用放射免疫的方法检测胰岛素水平,RT-PCR方法检测PDX-1及胰岛素mRNA表达水平.结果 (1)长期高糖培养引起RIN-m细胞胰岛素分泌水平降低(P<0.01).长期高糖作用使RIN-m细胞PDX-1及胰岛素mRNA的表达水平显著下降(P<0.01).(2)罗格列酮早期干预可以增加高糖环境下RIN-m细胞胰岛索分泌水平(P<0.01).罗格列酮早期干预可以显著上调高糖环境下RIN-m细胞PDX-1及胰岛素mRNA的表达水平(P<0.01).结论 罗格列酮可以通过上调PDX-1和胰岛素基因表达,延缓高糖环境下的β细胞胰岛素合成和分泌功能的下降.     

吡格列酮对高糖高脂诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的 影响及其机制探讨

目的 探讨吡格列酮对高糖高脂诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 体外培养H9C2心肌 细胞,通过 CCK-8 法进行细胞毒性试验分别确定高糖（HG）和棕榈酸（PA）最佳干预浓度,选取 0.1 mmol/L PA 和 50 mmol/L HG共同培养细胞建立高糖高脂损伤模型,不同浓度吡格列酮（PGZ）干预高糖高脂损伤细胞12、24及48 h 后通过CCK-8试验选取有效的干预浓度和干预时间。随后细胞分为：对照组（25 mmol/L葡萄糖）、溶剂组（棕榈酸溶 剂+二甲基亚砜）、HGPA 组（50 mmol/L 葡萄糖+0.1 mmol/L PA）、H-PGZ 组（10 μmol/L PGZ+HGPA）和 L-PGZ 组 （5 μmol/L PGZ+HGPA）,采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;DCFH-DA法检测活性氧簇（ROS）水平;微 板法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）水平;Western blot法检测蛋白激酶B（T-AKT）、磷酸化蛋白激 酶B（P-AKT）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3（Caspase3）、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3（C-Caspase3）、B-淋巴 细胞瘤基因-2（BCL-2）、BCL-2相关X蛋白（BAX）的蛋白表达。NAC（1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸）+HGPA组和HGPA 组干预24 h后检测上述AKT通路及凋亡相关蛋白表达。结果 48 h内0、0.05、0.1、0.2、0.4 mmol/L PA组H9C2细胞活力 依次降低;12 h时,与25 mmol/L葡萄糖组比较,50、75以及100 mmol/L葡萄糖组细胞活力增加,24 h、48 h时25、35、50、 75、100 mmol/L葡萄糖组细胞活力依次增加;与对照组比较,48 h内HGPA组细胞活力降低（P＜0.05）;与HGPA组比 较,12 h时80 μmol/L组细胞活力降低（P＜0.05）,24 h时10 μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80 μmol/L PGZ组细胞活 力降低（P＜0.05）,48 h时5、10和20 μmol/L PGZ组细胞活力增加,40、80 μmol/L PGZ组细胞活力降低（P＜0.05）;与 对照组比较,HGPA组凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX表达明显升高,SOD、P-AKT、BCL-2表达降低（P＜0.05）; HGPA组、L-PGZ组、H-PGZ组的凋亡率、ROS、MDA、C-Caspase3、BAX依次降低,SOD、P-AKT、BCL-2表达依次升高 （P＜0.05）。与 HGPA 组比较,NAC+HGPA 组 C-Caspase3 表达降低,P-AKT、Caspase3 表达升高（P＜0.05）。结论 PGZ对ROS有抑制作用,可以促进AKT通路的活化,减轻高糖棕榈酸诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

Improving effect and mechanism of fisetin on cell model of diabetic cerebral microangiopathy

OBJECTIVE To explore the effect and mechanism of fisetin on prevention and treatment of diabetic cerebral microangiopathy at the cellular and molecular level. METHODS In vitro experiments, high glucose(HG, 25 mmol·L~(-1)) and palmitic acid(PA, 200 μmol·L~(-1))were used to intervene in the mouse brain microvascular endothelial cells to establish the model of diabetic brain microangiopathy. Groups are divided into control, model(25 mmol·L~(-1) HG+200 μmol·L~(-1) PA, HG+PA) and fisetin(1, 5, 10 and 20 μmol·L~(-1)) groups. The effect of fisetin on hyperglycemic and hyperlipid-induced cell damage was detected by cell counting kit-(CCK-) 8 assay, cytotoxicity was detected by LDH assay. After treatment, the changes of oxidative stress related factors(ROS, NO, i NOS, MMP-2, MMP-9, TIMP-1, MDA, SOD, CAT) were detected by ELISA. RESULTS Compared with the control group, the cell viability of model group was significantly reduced(P<0.01), indicating that the model was successful y prepared.LDH content, the expression levels of ROS, NO, i NOS,MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and MDA in the model group significantly increased(P< 0.01), while the expression of SOD and CAT in the model group decreased significantly(P<0.01). Compared with the model group, the activity of the cells, in the fisetin group was significantly increased(P<0.01). LDH content, the expression levels of ROS,NO, i NOS, MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and MDA were decreased in the fisetin group(P<0.01), the expression of SOD and CAT, were significantly increased(P<0.01).The expression levels of antioxidant proteins HO-1 and NQO1 were significantly increased in the fisetin group(P<0.05). CONCLUSION Fisetin can improve the cell injury induced by HG and PA, which mimic the diabetic cerebral microvascular lesions, and its mechanism might be related to inhibiting the production of endogenous ROS in cells, activating the expression of antioxidant proteins and inhibiting the production of related oxidative factors.     

游离脂肪酸对胰岛BTC3细胞增殖及胰岛素分泌的影响

目的：观察游离脂肪酸（FFAs）慢性作用对胰岛BTC3细胞增殖及胰岛素分泌的影响。方法：将不同浓度油酸作用于培养的胰岛BTC3细胞,用MTT法分析细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,放免法检测基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌量（GSIS）。结果：与对照组相比,油酸作用后胰岛BTC3细胞MTF值明显低于对照组（P〈0．01）,并且有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪分析显示油酸作用使BTC3细胞G1期细胞比例增加（P〈0．05）,S期细胞比例明显减少（P〈0．01）。油酸作用后基础（2．8mmol/L葡萄糖）胰岛素分泌量明显增加,GSIS（16．7mmol/L葡萄糖）明显减少（均P〈0．01）,并且均有剂量依赖性和时间依赖性。结论：油酸能够抑制胰岛BTC3细胞的增殖及GSIS,并且有剂量和时间依赖性。     

白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的胰岛B细胞凋亡机制探讨

目的探讨白藜芦醇拮抗游离脂肪酸诱导的体外培养的胰岛B细胞凋亡的可能机制。方法将10μmol/L白藜芦醇和500μmol/L棕榈酸同时作用于体外培养的胰岛B细胞。共分为3组:空白组(不含棕榈酸)、棕榈酸组(PA组,含500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)、白藜芦醇组(Res组,含10μmol/L白藜芦醇+500μmol/L棕榈酸)。以流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2 mRNA水平。结果与PA组相比,Res能显著降低B细胞凋亡率(95.82%±1.94%vs.11.03%±1.08%,P<0.01),降低Bax mRNA(0.185±0.005 vs.0.161±0.003,P<0.01),升高Bcl-2 mRNA(0.004±0.001 vs.0.008±0.001,P<0.01)。结论白藜芦醇能拮抗棕榈酸诱导的胰岛B细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关蛋白有关。     

辛伐他汀对高糖诱导后人腹膜间皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在高糖刺激下血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组(每组设3个样本):正常对照组(完全培养液)、高糖对照组(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加辛伐他汀(浓度分别为2.5,5,10μmol/L)组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内VEGFmRNA的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中VEGF的蛋白质水平,用二喹啉甲酸蛋白检测法测定细胞中蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果高糖组与正常对照组相比VEGF表达增加,辛伐他汀各组与高糖组相比VEGF表达明显减少,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。结论辛伐他汀可以减少高糖刺激下人腹膜间皮细胞VEGF的表达,可能延缓腹透相关性腹膜纤维化的发展。     

α-硫辛酸对高糖作用后βTc6细胞的保护作用

【摘要】 目的 研究高糖毒性对βTc6细胞胰岛素基因及其转录因子MafA表达的影响及α-硫辛酸的保护作用,探讨α-硫辛酸在氧化应激状态下对β细胞保护作用的机制。方法 培养βTc6细胞,分组为5mmol/L葡萄糖（NG组）、16.7mmol/L葡萄糖（HG组）、16.7mmol/L葡萄糖及200μmol/L α-硫辛酸（HG+ALA组）。培养48h后收集细胞培养液,检测胰岛素浓度并提取细胞总RNA,RT-PCR法检测胰岛素基因及转录因子MafA mRNA水平。结果 HG组与NG组比较,胰岛素mRNA的表达下降了66.2％(P<0.05);MafA mRNA的表达下降了69.5％(P<0.01)。HG+ALA组与HG组相比,胰岛素mRNA的表达则提高了5.45倍(P<0.05);MafA mRNA的表达提高了4.49倍(P<0.05);而与NG组相比,胰岛素和MafA mRNA的表达差异均无统计学意义(均P >0.05)。结论 糖毒性可能是通过激活βTc6细胞内氧化应激使MafA的表达下降,而导致胰岛素基因表达下降,α-硫辛酸通过上调MafA的表达而对β细胞起到保护作用。     

全反式维甲酸对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

摘要： 目的 探讨全反式维甲酸 （ATRA） 对高糖诱导人 HK-2 细胞增殖及凋亡的影响, 以期延缓糖尿病肾病（DN）。方法 体外培养 HK-2 细胞, 随机分为 6 组： 空白组 （未加任何刺激物）、 高糖组 （加 D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高渗组 （加入甘露醇 24.5 mmol/L）、 低浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-7 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 中浓度 ATRA 组（加入 ATRA 1×10-6 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-5 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）。各组细胞培养 48 h。MTT 法检测各组细胞增殖情况, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 空白组与高渗组细胞光密度 （OD） 值和凋亡率差异无统计学意义。高糖组较空白组、 高渗组细胞增殖减少, 凋亡率增加; 低浓度、 中浓度、 高浓度 ATRA 组细胞增殖均较高糖组增加, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次增加, 凋亡率较高糖组减少, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次减少 （均 P＜0.05）。结论 ATRA 可促进高糖诱导的 HK-2 细胞增殖, 抑制其凋亡, 并与 ATRA 浓度可能具有一定的依赖性。     

有机磷诱导HUVEC-12损伤的实验研究

目的观察有机磷农药敌百虫对人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）损伤的时相特征,探讨敌百虫诱导内皮细胞损伤的作用机制。方法将HUVEC-12与含不同浓度敌百虫的DMEM培养基孵24h后,MTT法检测细胞的活性;以IC50浓度的敌百虫处理细胞一定时间后（0、4、6、8、12、24、48h）,观察敌百虫诱导内皮细胞损伤的时相特征;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度。结果敌百虫呈时间依赖性地促进内皮细胞凋亡及细胞上清液MDA产生。结论敌百虫刺激HUVEC-12氧化应激,致细胞损伤。     

脂联素对高糖环境下人肾小球系膜细胞增殖及氧化应激水平的影响

目的 探讨脂联素(Adiponectin,ADPN)对高糖环境下人肾小球系膜细胞(HMCs,human Mesangial Cells) 增殖及氧化应激水平的影响,揭示脂联素在糖尿病肾病中的保护作用.方法 ①体外培养HMCs:①将HMCs随机分为正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、脂联素组(30.0 mmol/L葡萄糖+2.5 μg/ml脂联素),分别培养24、48、72 h后,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组不同时间点HMCs的增殖情况.②将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 后运用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞上清液中MDA及SOD的含量.③再将HMCs随机分为上述3组细胞,分别培养24、48、72 h,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定HO-1 mRNA的表达,观察细胞氧化应激指标变化.结果 ①24 h高糖组与正常对照组比较细胞增殖无统计学差异(P>0.05),48、72 h两组比较,高糖组细胞增殖明显受抑制(P<0.05).加入脂联素促进细胞增殖,与高糖组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24、48、72 h高糖组MDA含量均升高,SOD含量及HO-1 mRNA的表达均下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05).加入脂联素后,观察上述氧化应激指标均得到明显改善,差异有统计学意义(P<0.05).结论长期高糖刺激抑制人肾小球系膜细胞增殖,外源性加入脂联素可促进细胞增殖.高糖组均引起氧化应激指标升高,加入脂联素可降低系膜细胞氧化应激水平,提示其对细胞起保护作用.