APP17肽对IRS-1在糖尿病小鼠脑内分布的影响

为了观察 APP17肽对糖尿病小鼠胰岛素受体底物 -1( IRS-1)的影响 ,本研究用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型 ,并皮下注射 APP17肽 ( β-淀粉样肽前体蛋白 3 19～ 3 3 5 )给予治疗 ,4周后取脑组织进行 IRS-1免疫组化染色。结果显示 ,糖尿病组IRS-1阳性反应细胞广泛分布于皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位 ,而正常对照组及 APP17肽治疗组仅在皮层、海马见有阳性反应细胞 ,且着色淡。以上结果表明 :糖尿病小鼠脑内多个区域的神经元存在较多的 IRS-1阳性细胞 ,APP17肽能使 IRS-1阳性反应细胞出现的部位和数量正常化 ,从而改善糖尿病小鼠海马神经元的退行性变     

APP17肽对AT-8在糖尿病小鼠脑内分布的影响

为了观察 APP17肽对糖尿病小鼠 Tau蛋白 Ser2 0 2 / Thr2 0 5磷酸化的影响 ,用链脲佐菌素 (选择性地破坏胰岛β-细胞 ,导致糖尿病 )诱发小鼠糖尿病模型 ,并皮下注射 APP17肽 ( β-淀粉样肽前体蛋白 3 19～ 3 3 5 )给予治疗。 4周后取脑组织进行 AT-8(抗 Ser2 0 2 / Thr2 0 5特异单抗 )免疫组化反应。结果证明 :糖尿病组 AT-8阳性反应细胞广泛分布于压后颗粒皮层、海马、丘脑、下丘脑等部位 ,而正常对照组及 APP17肽治疗组仅在压后颗粒皮层、海马可见阳性反应细胞 ,且着色淡。本研究提示 ,糖尿病脑内多个区域的神经元存在较多的 AT-8阳性细胞 ,而 APP17肽可使 AT-8阳性反应细胞出现的部位和数量正常化。     

APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马IRS—1、IGF—1R表达的影响

目的 通过对胰岛素受体底物－1（IRS－1）、胰岛素样生长因子－1受体（IGF－1R）在海马表达的观察，研究APP17肽对糖尿病脑病小鼠海马神经元IRS－1、IGF－1R的影响。方法 用链脲佐菌素（STZ）诱发小鼠糖尿病模型，并皮下注射APP17肽对糖尿病小鼠进行治疗，4周后取脑组织做IRS－1、IGF－1R免疫组织化学染色。结果 糖尿病小鼠海马内IRS－1、IGF－1R阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APP17肽保护的糖尿病小鼠海马阳性细胞数目小，染色淡。结论 糖尿病小鼠海马IRS－1、IGF－1R广泛表达；APP17肽能影响糖尿病脑病小鼠脑内IRS－1，IGF－1R的表达，使之接近正常。     

App17肽对Tau蛋白超磷酸化表达的影响

目的 通过对Ｔａｕ蛋白磷酸化在脑内分布的观察,研究Ａｐｐ１７肽对糖尿病小鼠脑神经元Ｔａｕ蛋白磷酸化的影响。方法 用链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｉｏｎ,ＳＴＺ）诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射Ａｐｐ１７肽对糖尿病小鼠进行治疗,４周后取脑组织做ＡＴ－８、Ｔａｕ－１、蛋白磷酸酯酶（ＰＰ－２Ｂ）脱磷酸后的Ｔａｕ－１免疫组织化学染色。结果 糖尿病小鼠脑内ＡＴ－８阳性反应神经元广泛分布于压后颗粒皮层、海马、丘脑、下丘脑等倍位,胞浆深染,而正常小鼠及Ａｐｐ１７肽保护的糖尿病小鼠脑内阳性反应细胞仅在海马和压后颗粒皮层表达,阳性细胞数目少,染色淡;用Ｔａｕ－１单染正常小鼠脑及Ａｐｐ１７肽治疗的糖尿病小鼠脑的压后颗粒皮层及海马阳性反应神经元数目多,糖尿病小鼠只有用ＰＰ－２Ｂ脱磷酸后阳性反应神经元数目及染色程度才与正常组接近。结论     

APP17肽和救脑益智胶囊水提液对D-半乳糖脑老化小鼠海马PP-1表达的影响

为探讨 APP17肽及救脑益智胶囊水提液对 D-半乳糖脑老化小鼠海马蛋白磷酸酯酶 -1( PP-1)表达的影响。本研究将昆明小鼠随机分为 5组 :正常对照组、D-半乳糖对照组、APP17肽治疗组、小剂量中药治疗组、大剂量中药治疗组 ,每组动物 8只。用 D-半乳糖制备脑老化模型 ,并皮下注射 APP17肽或救脑益智胶囊水提液灌胃对 D-半乳糖脑老化小鼠进行治疗 ,3个月后取脑组织做 PP-1免疫组织化学染色。结果显示 :D-半乳糖小鼠和大剂量救脑益智胶囊水提液治疗组小鼠海马 PP-1阳性细胞数目少 ,染色淡 ;而正常小鼠、APP17肽保护和救脑益智胶囊水提液小剂量治疗的 D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元数目多 ,胞浆与突起深染。结果提示 :抑制凋亡的 PP-1在 D-半乳糖小鼠海马表达降低。 APP17肽和小剂量救脑益智胶囊水提液治疗能影响 D-半乳糖脑病小鼠脑内 PP-1的表达 ,使之接近正常。而大剂量救脑益智胶囊水提液治疗无此作用     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 用D-半乳糖制备脑老化模型，皮下注射APPl7肽治疗D-半乳糖脑老化小鼠，3个月后取脑组织做Bcl-2、Bax、cREB、AKt、AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APPl7肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2、CREB、AKt阳性细胞数日少，染色淡；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染。结论 促进凋亡的Bax、AIF在D-半乳糖小鼠海马表达增加；抑制凋亡的Bcl-2、CREB、AKt在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达，使之接近正常。     

APP17肽对D-半乳糖性脑老化模型小鼠学习、记忆功能和海马神经元NT-3、NGF表达的影响

目的与方法:用D-半乳糖(D-gal)复制脑老化模型,给模型小鼠皮下注射β-淀粉样肽前体蛋白319-335肽段(APP17p),8周后应用水迷宫实验、神经免疫组化法,观察APP17肽对D-gal脑老化模型小鼠学习、记忆功能及海马神经元中神经营养因子3(NT-3)、神经生长因子(NGF)表达的影响。结果:(1)水迷宫实验D-gal组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显高于对照组;APP17肽组小鼠游完全程时间及错误反应次数明显低于对照组和D-gal组。(2)APP17肽组海马神经元NT-3、NGF表达高于C组和D-gal组(P＜0.01)。结论:D-半乳糖性脑老化模型小鼠存在学习、记忆功能障碍,其海马神经元NT-3、NGF表达降低;APP17肽有保护模型小鼠学习、记忆功能的作用,并能促进其海马神经元NT-3、NGF表达的增加。     

糖尿病脑病机理的再探讨及APP17肽的作用

目的：检测糖尿病小鼠脑内Tau蛋白不同位点的磷酸化状态及β淀粉样肽表达的改变,进一步探讨糖尿病脑病的机理并观察APP17肽的作用。方法：用链脲佐菌素诱发小鼠糖尿病模型,并皮下注射,APP17肽进行保护。4周后,取小鼠脑组织做BT－2、Rlle免疫组织化学染色,另一部分小鼠断头取脑,分离海马,做Tau-1,AT-8,A β1－16和管蛋白（tubulin)抗体蛋白免疫印迹。结果：糖尿病小鼠脑海马神经元内正常Tau蛋白含量减少,Tau蛋白192／202位点及194／198位点过度磷酸化,而Thr231和Thr181位点未被磷酸化;管蛋白的表达明显减少,而APP的表达则增多,用APP17肽对糖尿病小鼠进行保护后,Tau蛋白的磷酸化程度降低,APP和Tubulin的表达恢复到接近正常水平。结论：糖尿病小鼠脑内Tau蛋白过度磷酸化、tubulin表达减少,微管结构受损,同时APP表达增加造成Aβ含量增多,引起神经元损害,对糖尿病小鼠应用APP17肽使Tau保持磷酸化程度、APP及tubulin表达接近正常,因此,APP17肽在防止神经元变性方面有重要意义.     

雌激素缺乏加重痴呆小鼠脑内炎症反应的机制初探

目的研究雌激素缺乏不同时间段APP/PS1双转基因小鼠脑组织细胞内线粒体结构、线粒体雌激素受体(mitochondrial estrogen receptorβ,mt-ERβ)、胰岛素生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)、星胶细胞(astrocyte, AS)以及神经炎性因子的变化,以明确雌激素缺乏促进阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)神经炎症发生的可能分子机制。方法对雌性3月龄APP/PS1双转基因AD小鼠行双侧卵巢切除(AD-OVX),以假手术AD小鼠(AD-Sham)及同月龄正常野生型小鼠(WT)为对照,于术后1周(模拟绝经早期)和3月(模拟绝经中晚期),采用免疫荧光、透射电镜、RT-PCR和Western blot,分别检测卵巢切除(ovariectomy,OVX)后不同时间段APP/PS1小鼠脑内胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞、炎症因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)以及脑组织细胞内线粒体超微结构、mt-ERβ和IGF-1R的变化。结果与正常野生型小鼠相比,无论OVX后1周还是3个月,AD-OVX组和ADSham组小鼠脑内GFAP阳性细胞数均显著增加;相应地,AD小鼠脑内炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA水平也较正常小鼠明显增高(P0.001);超微结构显示,与正常小鼠相比,AD脑组织细胞内线粒体肿胀明显,mt-ERβ和IGF-1R蛋白表达呈下调趋势(P0.001)。在APP/PS1双转基因AD小鼠中,OVX后1周,AD-OVX组小鼠脑内GFAP阳性细胞数量较AD-Sham组显著减少(P0.001),且脑内炎症因子IL-6、TNF-α的mRNA水平显著降低(P0.001),但线粒体结构、mt-ERβ和IGF-1R蛋白表达无明显差异(P0.05);而OVX后3个月,AD-OVX组脑内GFAP阳性细胞数量较AD-Sham组显著增多(P0.001),且脑内炎症因子IL-6、TNF-α明显升高(P0.001),线粒体肿胀明显,mt-ERβ蛋白表达有上调趋势(P0.05),但仍低于正常小鼠;IGF-1R蛋白表达呈下调趋势(P0.05)。结论痴呆小鼠脑内存在星胶细胞活化及炎症反应增强,雌激素缺乏早期可反应性的减少星胶细胞的增生及炎症反应,但随着雌激素缺乏时间的延长,痴呆小鼠脑内星胶细胞的活化及神经炎症反应进行性加重,该作用可能通过mt-ERβ介导的IGF-1R信号通路相关。     

APP17肽对快速老化小鼠SAMP10学习、记忆功能和海马神经 细胞线粒体氧化应激水平的影响

目的：观察APP17肽(β-Amyloid precursop protein,APP,319-335肽段)对快速老化小鼠SAMP10（senescence accelerated mouse/pr one 10）学习、记忆功能及海马神经细胞线粒体氧化应激的影响。方法:4月龄的SAMP10小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组，正常对照组采用抗快速老化小鼠SAM R1(senescence accelerated mouse/resistance 1)。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽 ，每只每次0.34 μg，每周3次；模型组和正常对照给予等量的生理盐水；28周后成模。应 用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化，应用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法 分析海马神经细胞线粒体氧化应激反应水平。结果:(1)水迷宫结果显示 ，模型组小鼠存在明显的学习和记忆功能障碍，其游完全程的时间和错误反应次数均较正常 对照组增多（P<0.05）;APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组，其上述 的水迷宫检测结果与正常对照组比较无显著差异。(2)模型组小鼠海马神经细胞线粒体SOD活 性明显低于正常对照组（P<0.01），MDA含量显著高于正常对照组（P<0.01）；A PP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近，SOD活性高于模型组（P<0.05），而MDA含 量低于模型组（P<0.01）。结论:快速老化小鼠SAMP10存在学习和 记忆功能障碍；而且其海马神经细胞线粒体氧化应激反应明显加剧。APP17肽具有清除自由 基和抑制氧化应激反应的作用，从而提高脑组织的抗氧化能力，保护学习、记忆功能。     

磷酸化PKCγ在正常小鼠脑内的免疫组织化学定位

为了研究磷酸化的蛋白激酶Cγ(pPKCγ)在小鼠脑内的区域分布,为进一步了解其在脑内的功能提供线索。我们将BALB/c小鼠脱臼处死,灌流取脑,行免疫组织化学染色,观察pPKCγ阳性反应产物在脑内的分布。观察到pPKCγ阳性产物主要见于神经元的胞浆和突起中,在正常小鼠脑内表达广泛。仅很少量胶质细胞被染色,着色浅淡。海马CA1区锥体细胞,小脑的浦肯野氏细胞,大脑新皮质V层细胞,边缘前皮质、岛皮质的深层细胞以及前梨皮质的颗粒层细胞,外侧嗅束核、杏仁基底外侧核和杏仁外侧核的神经元,以及穹窿、锥体束纤维等均有强或较强的pPKCγ表达;吻侧丘脑大多数核团,尾侧丘脑的内侧膝状体核及外侧膝状体的背侧核,脑干耳蜗背侧核的表浅部位,三叉神经感觉核簇及巨细胞网状结构神经元中均有弱阳性表达。本实验研究揭示正常状态下小鼠脑内pPKCγ表达广泛,但有区域特异性,提示PKCγ可能参与正常状态下脑内部分脑区/核团神经元的功能活动。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.     

白细胞介素6受体样免疫反应性细胞在大鼠脑内的分布

目的　研究白细胞介素６ 受体（ＩＬ－６Ｒ和ｇｐ１３０）免疫反应性细胞在大鼠脑内的分布。方法　采用ＡＢＣ免疫组织化学方法。结果　ＩＬ－６Ｒ免疫反应性细胞主要分布在下丘脑的视前区、腹内侧核、室旁核和弓状核;在海马,ＩＬ－６Ｒ阳性细胞呈强阳性,密集分布于齿状回颗粒细胞层和ＣＡ１ ～ＣＡ２ 锥体细胞层;在大脑皮层、嗅结节、丘脑腹内侧核、终纹床核等处也有ＩＬ－６Ｒ阳性细胞。ｇｐ１３０ 阳性细胞主要分布于下丘脑的室周核、室旁核的内侧小细胞部、弓状核及视上核,在大脑皮层也有ｇｐ１３０ 阳性大锥体细胞的分布。ｇｐ１３０ 阳性细胞亦见于尾壳核、杏仁核区、终纹床核,在海马结构内的ｇｐ１３０ 阳性细胞较ＩＬ－６Ｒ染色较浅。此外,ＩＬ－６ 两种受体亚单位的免疫反应性细胞也散在分布于小脑皮层、小脑外侧核以及延髓／脑干。结论　在大鼠脑内广泛分布着ＩＬ－６ 两种受体亚单位的免疫反应性细胞,提示ＩＬ－６ 及其受体可能具有重要的神经生物学意义。     

Noggin在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究Noggin基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记的cRNA探针原位杂交组织化学技术。结果 ISHH结果显示，在胚胎期(E16)大鼠，noggin mRNA阳性细胞主要位于大脑皮质、海马、丘脑与下丘脑的部分核团。新生期(P1-P2)大鼠，noggin在大脑皮质与海马的表达均降低，而在丘脑与延脑的表达增强；生后1周(P1W)noggin在脑内的表达明显降低，生后2周noggin在脑内的表达开始升高，在大脑皮质与海马升高尤为明显。生后1个月，noggin表达继续升高，在额叶皮质、顶叶皮质、扣带皮质、梨状皮质及海马的齿状回可检测到强阳性信号；而在丘脑的侧核、网状核、腹内侧核与腹外侧核可见中等强度的阳性信号。此外，在下丘脑的室旁核和视上核亦可见密集深染的阳性神经元。生后3个月，noggin阳性细胞在脑内的表达开始降低；生后18个月，noggin表达降至最低，仅见散在的阳性神经元。此外，在不同发育期大鼠的脊髓亦未观察到noggin mRNA阳性细胞。结论 提示noggin基因参与大鼠生后CNS的发育。