全自动快速微生物质谱检测系统鉴定流感嗜血杆菌及其可靠性分析

目的分析全自动快速微生物质谱检测系统(VITEK MS系统)在鉴定流感嗜血杆菌(HI)中的应用及其可靠性。方法选取2016年1月至2017年1月该院生化实验室收集的咽拭子或痰液标本1 265份,利用细菌16SrDNA序列测序方法对细菌进行种属鉴定,得出HI菌株36株。然后分别使用3种不同方法[VITEK MS系统、常规生化鉴定系统(API NH系统)、M-H琼脂药敏试验]对所得到的36株HI菌株进行鉴定。观察3种不同方法对36株HI菌株的鉴定结果及临床使用特点。结果 VITEK MS系统对HI菌株的鉴别能力略高于API NH系统,但差异无统计学意义(P0.05);VITEK MS系统对HI菌株的鉴别能力显著高于M-H琼脂药敏试验(P0.05)。相比传统的API NH系统及M-H琼脂药敏试验,VITEK MS系统的优势为自动判读结果、检测时间短、操作简便及成本低。结论 VITEK MS系统能够准确、快速地对HI进行鉴定,且操作简便,在临床上对HI的鉴定具有一定的参考及指导价值。     

86株流感嗜血杆菌分离鉴定及耐药性分析

目的 探讨适合临床实际的流感嗜血杆菌分离鉴定方法,并了解本地区社区获得性下呼吸道感染患者分离的流感嗜血杆菌耐药性.方法 常规培养并结合标本直接涂片革兰染色镜检挑选可疑菌落,卫星试验和V+X、V、X因子需求试验进行初步鉴定,法国生物梅里埃公司API NH鉴定板条进行复核鉴定;K-B法药敏,结果判断依据CLSI2010版标...     

嗜血杆菌鉴定中X、V因子及溶血性测定影响因素探讨

目的：了解Haemophilus(嗜血杆菌）鉴定中X、V因子测定的各种影响因素。方法：用5种不同的琼脂平板，比较不同培养时间和8％CO2环境对嗜血杆菌X，V因子需求试验及溶血试验结果的影响。结果：X、B因子需求试验结果表明，脑心琼脂效果最好，其次为营养琼脂，MH琼脂与脑心琼脂结果比较有显著差异（P＜0．01），CO2对试验结果有影响；培养48h较24h的菌落大易辨认。结论：用脑心琼脂平板测试嗜血杆 对X、V因子的需求及以CO2环境中检测嗜血杆菌的溶血性结果较好。     

10株蜃楼弗朗西斯菌的鉴定与特征分析

目的对10株蜃楼弗朗西斯菌样细菌进行菌种鉴定和特征分析。方法对环境水源及临床患者样本中分离的10株实验菌株,进行菌体形态和生长特征观察、生化表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rRNA测序分析。E-test方法检测菌株对各种药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果该10株菌均为着色较淡的革兰阴性小球杆菌;尿素酶阴性、硝酸盐还原试验阴性、V因子和X因子需求试验阴性,氧化酶和触酶试验阳性;在M-H平板和麦康凯平板上不生长,血平板、巧克力平板和BCYE平板上生长迅速,可形成白色不透明型、无色透明型和灰色光滑型,直径约2 mm大小的菌落。16S rRNA基因测序显示,该10株菌与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015同源性在99.6%以上,系统发育分析亦位于同一个分枝上。MALDI-TOF MS分析显示,该10株均含有6 153 m/z、5 180 m/z、7 757 m/z和9 392 m/z等特征峰,与蜃楼弗朗西斯菌ATCC 25015类似。采用Vitek 2 GN卡及NH卡、API 20NE及NH试条则可能错误鉴定为少动鞘氨醇单胞菌、灰色奈瑟菌、气味黄杆菌和嗜血杆菌等。药敏试验显示,对氯霉素、多西环素、庆大霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星等均敏感。结论该10株菌可鉴定为蜃楼弗朗西斯菌,其生化反应不活泼,常规方法鉴定会发生错误,应予以重视。     

用于嗜血杆菌鉴定的卫星试验影响因素研究

目的了解嗜血杆菌鉴定中X、V因子测定的各种影响因素及可用于嗜血杆菌鉴定的卫星试验的细菌种类.方法用4种不同的琼脂平板,比较不同培养时间和CO2环境对嗜血杆菌X、V因子需求试验结果的影响,同时比较不同菌种在各种琼脂培养基上对嗜血杆菌琼脂卫星试验结果的影响.结果 X、V因子需求试验结果表明,脑心琼脂效果最好,其次为营养琼脂,M-H琼脂结果与脑心琼脂相比差异有显著性(P<0.01);CO2对试验结果有影响;培养48 h较24 h的菌落大,易于辨认;不同菌种在不同琼脂培养基上对嗜血杆菌琼脂卫星试验的结果有所不同.结论卫星试验应在CO2环境中进行,用脑心琼脂平板测试嗜血杆菌对X、V因子的需求结果较好,多数葡萄球菌及部分革兰阴性杆菌对嗜血杆菌的琼脂卫星试验结果较好.     

VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪与VITEK MS质谱仪在摩根摩根菌鉴定中的应用及评价

目的分析研究VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪与VITEK MS质谱仪在摩根摩根菌鉴定中的应用及对其鉴定结果的准确性做出评价,为临床精准治疗提供科学依据。方法收集2017年1月至2020年5月云南省第三人民医院送检的不同类型标本中分离出的50株摩根摩根菌;常规方法进行菌株培养;采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪,手工生化补充试验和VITEK MS质谱仪对菌株进行菌种鉴定,鉴定结果不一致的菌株采用16S rDNA测序验证。结果共分离出5株β溶血表型和45株非β溶血表型摩根摩根菌;VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪对非β溶血摩根摩根菌鉴定结果均符合,对β溶血摩根摩根菌鉴定结果均不符合,且均鉴定为奇异变形杆菌,鉴定符合率为90%;手工生化补充试验结果也符合奇异变形杆菌;VITEK MS质谱仪对非β溶血和β溶血摩根摩根菌的鉴定结果均符合,鉴定符合率为100%;16S rDNA测序对鉴定结果不一致的5株β溶血菌的测序结果均为摩根摩根菌。结论 VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪对非β溶血摩根摩根菌的鉴定结果准确可信;对β溶血摩根摩根菌鉴定结果均不准确,且鉴定为奇异变形杆菌的概率很高;VITEK MS质谱仪对摩根摩根菌的鉴定结果均准确快速且不受细菌β溶血与否影响。     

用于嗜血杆菌鉴定的卫星试验影响因素研究

目的　了解嗜血杆菌鉴定中X、V因子测定的各种影响因素及可用于嗜血杆菌鉴定的卫星试验的细菌种类。方法　用 4种不同的琼脂平板 ,比较不同培养时间和CO2 环境对嗜血杆菌X、V因子需求试验结果的影响 ,同时比较不同菌种在各种琼脂培养基上对嗜血杆菌琼脂卫星试验结果的影响。结果　X、V因子需求试验结果表明 ,脑心琼脂效果最好 ,其次为营养琼脂 ,M H琼脂结果与脑心琼脂相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ;CO2对试验结果有影响 ;培养 4 8h较 2 4h的菌落大 ,易于辨认 ;不同菌种在不同琼脂培养基上对嗜血杆菌琼脂卫星试验的结果有所不同。结论　卫星试验应在CO2 环境中进行 ,用脑心琼脂平板测试嗜血杆菌对X、V因子的需求结果较好 ,多数葡萄球菌及部分革兰阴性杆菌对嗜血杆菌的琼脂卫星试验结果较好     

86株流感嗜血杆菌分离鉴定及耐药性分析

目的探讨适合临床实际的流感嗜血杆菌分离鉴定方法,并了解本地区社区获得性下呼吸道感染患者分离的流感嗜血杆菌耐药性。方法常规培养并结合标本直接涂片革兰染色镜检挑选可疑菌落,卫星试验和V＋X、V、X因子需求试验进行初步鉴定,法国生物梅里埃公司API NH鉴定板条进行复核鉴定;K-B法药敏,结果判断依据CLSI2010版标准;Nitrocefin法测定β内酰胺酶。结果 86份流感嗜血杆菌培养阳性标本直接涂片镜检均为合格标本,并可见大量WBC吞噬和/或伴行革兰阴性小杆菌（形似流感嗜血杆菌）。86株流感嗜血杆菌中产β内酰胺酶17株,产酶率19.8%;对测试的8种药物中,复方新诺明敏感性最低（38.4%）,其次为氨苄西林（73.3%）、阿奇霉素（83.7%）和头孢呋辛（84.9%）,对亚胺培南、阿莫西林/克拉维酸、左旋氧氟沙星和头孢噻肟敏感性较好,均在95%以上。结论实验室人员应重视标本直接涂片镜检,并结合培养提高HIN分离率。HIN对常用抗生素的耐药率应引起临床医师重视,注意合理使用抗菌药物。     

高寒地区儿童鼻咽部菌群分布调查

目的 了解高寒地区儿童鼻咽部细菌的分布情况,为临床经验性用药提供依据.方法 采用血琼脂平板、中国兰平板和50 g/L万古霉素的兔血巧克力琼脂平板分离细菌,用API鉴定系统鉴定细菌至种.结果 副流感嗜血杆菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌的检出率分别为90.1%、36.5%和25.2%;分离出1株甲氧西林中介的金黄色葡萄球菌(MISA)和2株青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP).结论 临床常见条件致病菌的检出率明显高于国内报道,PRSP的出现应引起高度重视.     

MALDI-TOF-MS技术快速鉴定临床酵母样真菌的应用评价

目的评价基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)在快速鉴定临床分离的酵母样真菌中的应用价值。方法收集临床分离的酵母样真菌135株,分别用VITEK MS、API20C和CHROMargar显色培养同时进行鉴定与比较,χ2检验分析VITEK MS和API及显色培养基鉴定结果的准确率,以真菌内转录间隔区(ITS)基因测序作为鉴定结果的金标准,同时比较各种方法在临床使用中的优缺点。结果 VITEK MS、API20C和显色培养基鉴定的准确率分别为98.5%(133/135)、78.5%(106/135)、59.3%(80/135),经χ2检验分析,差异有统计学意义(χ2=51.996,P0.05)。结论 MALDI-TOF-MS可将酵母样真菌快速、准确地鉴定到种。     

MALDI-TOF质谱仪进行临床酵母菌鉴定的方法学评价

目的探讨MALDI-TOF质谱仪用于临床酵母菌鉴定的优越性,为临床真菌感染提供早期诊断、治疗的依据。方法收集该院2015年8月至2016年3月临床分离酵母菌206株,分别用MALDI-TOF质谱仪、VITEK2 Compact微生物鉴定仪和显色培养法进行鉴定,以内转录间区序列测序结果为最终确认结果。比较MALDI-TOF质谱仪、VITEK2 Compact微生物鉴定仪和显色培养法鉴定的准确性。结果 3种方法鉴定酵母菌的准确率分别为VITEK2 Compact鉴定仪82.5%,显色培养法67.0%,MALDI-TOF质谱仪92.7%。MALDI-TOF质谱仪与VITEK2 Compact鉴定仪比较,差异有统计学意义(P=0.006),MALDI-TOF质谱仪与显色培养法比较,差异有统计学意义(P=0.001)。结论 MALDI-TOF质谱仪与VITEK2Compact鉴定仪、显色培养法相比,具有快速、操作简便、结果准确等优点。     

215例慢性前列腺炎致病菌及药物敏感性分析

目的：了解慢性前列腺炎的致病菌及其对药物的敏感性。方法：对性病门诊２１５例前列腺液标本用常规血琼脂平板分离和纯化致病菌,采用美国Ｓｃｅｐｔｏｒ细菌鉴定仪及配套生化鉴定板和药敏试验板进行生化试验和药物敏感性试验。结果：分离出病原菌１３５株,分离阳性率为６２．８％。以表皮葡萄球菌（４５株）、金黄色葡萄球菌（３９株）、大肠杆菌（１６株）为最多见,药物敏感性试验结果显示,麦皮葡萄球菌对万古霉素,克林霉素和     

2016年山东省聊城市临床病例中2种罕见施万菌的鉴定

目的对2016年山东省聊城市临床患者分离株进行鉴定以及分析其生化特性和药物敏感性。方法对患者来源标本及6株菌株进行选择性培养基分离培养，并进行生化试验、溶血试验、耐盐耐热实验和药敏试验，使用API生化鉴定系统、VITEK 2 Compact、全自动快速微生物质谱检测系统进行鉴定，并进行16S rRNA和gyrB序列分析。结果8株菌在菌落形态和生化特性上差异无统计学意义，只有溶血状态有所不同，临床鉴定系统有局限性，只能分辨到海藻施万菌和腐败施万菌，进一步使用16S rRNA和gyrB序列检测方法，确认患者分离株属于2种罕见的施万菌，即鲍施万菌和优佩内施万菌。结论首次在中国大陆的临床病例中，鉴定了2株由罕见施万菌导致的感染病例。 由施万菌属引起的临床感染还需要进一步重视，并加强监测。     

流感嗜血杆菌耐药性分析

目的 了解我院2008年1月至2010年6月临床分离的136株流感嗜血杆菌耐药性及产β-内酰氨酶率.方法 采用常规方法进行分离培养,并采用法国生物梅里埃公司全自动微生物分析系统VITEK-2compact及配套试剂NHI鉴定卡和V+X、V、X因子进行鉴定,用K-B法测定其药敏结果,按CLS12009版判断结果,以Nitrocefin试剂做B内酰胺酶测定.结果 136株流感嗜血杆菌中产B内酰胺酶40株,产酶率29.4%;耐药主要集中在复方新诺明(57.4%)、氨苄西林(51.5%)、左旋氧氟沙星(27.9%);对亚胺堵南及头孢二、三代的敏感率达100%.结论 流感嗜血杆菌有较高的耐药率及β内酰胺酶产酶率,临床上应注意正确、合理使用抗菌药物.     

自动微生物分析快速链球菌生化鉴定系统鉴定猪链球菌的检测结果评价

目的采用自动微生物分析快速链球菌生化鉴定系统(ATBRapid32Strep)鉴定链球菌,并与国际公认细菌鉴定精标方法API20Strep(链球菌鉴定生化系统)比较,评价检测速度和准确性,使临床微生物室能正确使用ATBRapid32Strep鉴定系统,快速、准确鉴定出各种链球菌,及时为临床提供病原学依据。方法从患者血液、脑脊液,猪心、猪肉等标本中分离出形似链球菌的细菌再次分离分纯,转种于血平板上,置CO2培养箱,35℃24h培养后,用ATBRapid32Strep和API20Strep、传统手工方法分别对18株细菌进行鉴定和药敏试验。结果ATBRapid32Strep鉴定出16株猪链球菌Ⅱ型,2株牛链球菌Ⅱ型;API20Strep鉴定出17株猪链球菌Ⅱ型,1株不能鉴定;传统手工鉴定18株均为D群非肠球菌。这18株菌对氯霉素、克林霉素、红霉素、左氧氟沙星、青霉素、奎奴普叮/达福普叮、头孢噻肟、复方新诺明、万古霉素均敏感,对四环素耐药。结论ATBRapid32Strep4h能鉴定出猪链球菌,与API20Strep鉴定符合率为94.4%,是一种操作简单、快速、准确的细菌鉴定系统,能快速为临床提供感染性疾病病原学信息,满足临床医生和微生物检验人员工作需要。     

不同培养基与前处理方法对副溶血弧菌MALDI-TOF MS鉴定结果的影响评估

目的评估不同培养基及前处理方法在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对副溶血弧菌鉴定中的影响,并寻求最优化条件组合。方法收集副溶血弧菌40株,分别用血琼脂平板、TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板进行培养;用直涂法、扩展法(直涂后裂解)和萃取(裂解、萃取后涂靶)法进行质谱前处理。用SAS软件建立不同培养基及前处理方法对该菌质谱检出率影响的logistic回归分析模型,并进行卡方检验统计分析。结果 "血琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(100%鉴定到属,67.5%鉴定到种);在不使用血琼脂平板的前提下,"双洗琼脂平板+萃取法"条件组合检出率最高(70%鉴定到属,37.5%鉴定到种)。在"属"鉴定水平,前处理方法相同时,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P0.01);而培养基相同时,不同前处理方法的检出率差异无统计学意义(P0.05);直涂法和扩展法相对萃取法的相对危险度(OR)分别为0.66和0.95,检出率差异无统计学意义(P0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.06和0.10,对检出率差异有统计学意义(P0.05),logistic回归方程Y=2.95-0.41a-0.05b-2.83c-2.35d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。在"种"鉴定水平,采用扩展法或萃取法,不同培养基的检出率差异有统计学意义(P0.05);采用血琼脂平板,不同前处理方法的检出率差异有统计学意义(P0.01);直涂法和扩展法相对萃取法的OR分别为0.32和0.55,检出率差异有统计学意义(P0.05);TCBS琼脂平板和双洗琼脂平板相对血琼脂平板的OR分别为0.18和0.49,检出率差异有统计学意义(P0.05),logistic回归方程Y=0.20-1.15a-0.61b-1.72c-0.72d(a:直涂法;b:扩展法;c:TCBS琼脂平板;d:双洗琼脂平板)。结论欲提升副溶血弧菌MALDI-TOF MS鉴定效果,合适培养基的选择优于改善蛋白质提取的前处理操作。推荐萃取法作为常规前处理方法,培养基的选择建议依次为血琼脂平板、双洗琼脂平板和TCBS琼脂平板。     

两种MALDI-TOF MS系统快速鉴定血培养中白念珠菌以外酵母样真菌

目的评价2种基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统(Autoflex MALDI-TOF MS和Vitek MALDI-TOF MS)在快速鉴定血培养中分离的白念珠菌以外酵母样真菌的应用。方法收集复旦大学附属中山医院2010年10月至2013年1月住院患者血培养中分离的白念珠菌以外酵母样真菌59株,以真菌内转录间隔区(ITS)测序鉴定结果为金标准,比较Autoflex MALDI-TOF MS、Vitek MALDI-TOF MS和API 20C AUX 3种系统鉴定的准确性。结果 59株菌株包含了11种真菌,其中近平滑复合体30株(占50.8%)、热带念珠菌11株(占18.6%)、光滑念珠菌8株(占13.6%)、克柔念珠菌2株(占3.4%)、新生隐球菌2株(占3.4%)、异常威克汉姆酵母2株(占3.4%)、季也蒙念珠菌复合体1株(占1.7%)、葡萄牙念珠菌1株(占1.7%)、阿萨希毛孢子菌1株(占1.7%)和酿酒酵母1株(占1.7%)。3种系统鉴定真菌总的准确性分别为Autoflex MALDITOF MS 93.2%、Vitek MALDI-TOF MS 83.1%和API 20C AUX 79.7%,2种MALDI-TOF MS比较,差异无统计学意义(P=0.155)。其中对白念珠菌以外酵母样真菌的鉴定准确性分别为Autoflex MALDI-TOF MS 100.0%、Vitek MALDI-TOF MS 84.9%和API 20C AUX 84.9%,2种MALDI-TOF MS比较,差异具有统计学意义(P=0.006)。对念珠菌属外的少见真菌鉴定准确性分别为Autoflex MALDI-TOF MS 33.3%、Vitek MALDI-TOF MS66.6%和API 20C AUX 33.3%。结论 MALDI-TOF MS系统和目前常规生化鉴定方法相比,具有快速、操作简便、结果准确等优点;对于临床血培养分离真菌的鉴定,Autoflex MALDI-TOF MS鉴定准确性和Vitek MALDI-TOF MS相似,但对常见非白念珠菌的鉴定,Autoflex MALDI-TOF MS鉴定准确性优于Vitek MALDI-TOF MS。     

简单可靠消费低的临床酵母菌鉴定方案

从临床标本分离鉴定酵母菌到种级水平是困难的但又是必要的 ,用生化形态学研究鉴定酵母菌因费时费力常不能用于临床 ,试剂盒系统虽已被广泛使用但比较昂贵 ,数据库资料受限 ,自动系统也同样受限。随着深受好评的 Chorm念珠菌培养基 (CMA)问世 ,作者设计一个简单、迅速的方案 ,用于临床常规鉴定重要酵母菌 ,并研究 Chorm培养基扩大使用范围。作者将 Chorm培养基上菌落形态与玉米吐温80琼脂 (CTA)上形态结合 ,与 API2 0 c Aux或 API32 c系统获得的鉴定结果比较。共研究 35 2株酵母菌和 1株威克海母原藻 ,其中 11株酵母菌在CMA和 CTA…     

金黄色葡萄球菌的乳凝法鉴定

在革兰氏阳性球菌的鉴定中,我们用纤维蛋白原和人IgG 致敏乳胶,以此乳胶进行凝集试验.可同时检测金黄色葡萄球菌的凝固酶和A 蛋白,既简化了操作又提高了阳性率,取得了较好的效果,现报告如下.一、材料与方法1.本试验所用菌株均来源于临床标本,其中金黄色葡萄球菌35株,表皮葡萄球菌25株,全部菌株皆生长于血琼脂平板并经常规生化反应进行鉴定.     

国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定性能评估

目的 评估国产基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)系统microTyper MS鉴定革兰阴性菌的性能.方法 使用国产MALDI-TOF MS系统microTyper MS与进口质谱系统VITEK MS系统同步鉴定该实验室储存的标准菌株及2018年6月至2019年6月临床分离的革兰阴性菌株.鉴定结果不一致时,使用表型试验或16 s rDNA测序进行确认,以此评估microTyper MS对革兰阴性菌的鉴定能力.结果 纳入鉴定的革兰阴性菌株一共45属4509株.VITEK MS系统准确鉴定4419株,准确率为98.0％;microTyper MS准确鉴定4405株,准确率为97.7％.结论 microTyper MS在革兰阴性菌鉴定方面具有与VITEK MS系统相仿的临床细菌鉴定能力.