线性探针技术诊断耐多药结核病的临床应用价值研究

目的探讨线性探针技术诊断耐多药结核病的临床应用价值。方法选取2017年1月至2019年2月在该院就诊的247例涂阳结核病患者为研究对象,采集晨起痰标本后3d内依次完成药敏试验和线性探针技术检测,以药敏试验检测结果作为诊断的金标准,应用灵敏度、特异度、准确性和约登指数评价线性探针技术的诊断价值。结果线性探针技术对异烟肼耐药性(53例,21.46%)、利福平耐药性(60例,24.29%)及耐多药结核病(50例,20.24%)的检出率与传统药敏试验比较,差异均无统计学意义(P0.05)。线性探针技术对异烟肼耐药性、利福平耐药性及耐多药结核病检测的灵敏度(88.89%、88.52%、84.62%)、特异度(97.41%、96.77%、96.92%)、准确性(95.55%、94.74%、94.33%)及约登指数(0.863、0.853、0.815)均较高。结论线性探针技术对耐多药结核病检测的灵敏度、特异度及准确性均较高,且检测所需时间短,对于耐多药结核病的早期诊断具有重要意义。     

线性探针技术用于快速筛查耐多药结核病的研究

目的评价线性探针技术(LPA)快速筛查临床耐多药结核病人的效能。方法应用病例对照研究方法,连续收集326例临床涂阳病人的痰标本,进行传统比例法药物敏感性试验和线性探针技术检测利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性,分析线性探针方法对诊断耐多药结核病的敏感度和特异度。结果以比例法为参照,线性探针技术诊断耐多药结核病的敏感度为70%,特异度为97%,结果无显著性差异,报告结果时间为20d,明显低于传统药敏试验报告时间。结论线性探针耐多药检测技术特异性高,快速便捷,可以用于临床耐多药结核病诊断。     

线性探针法与传统药敏法筛查耐多药肺结核符合性的研究

在防治肺结核的工作中,由于患者不规范治疗的原因,造成耐药肺结核的问题非常严重。中国耐多药结核病疫情居高不下,耐药性结核病的产生在很大的程度上影响了结核病治疗的疗效,尤其耐多药结核病（ multidrug resistance tuberculosis , MDR-TB）已成为当前结核病防治中的一个难题［1］,也是结核病患者死亡的最大杀手,所以早期能够及时、快速地对结核病耐药性进行检测,让患者得到科学治疗十分重要。目前肺结核耐药性主要靠细菌学检查（包括细菌培养、菌种鉴定与药物敏感试验）,由于结核分枝杆菌生长缓慢,整个培养、菌种鉴定加上药物敏感试验时间最快也要2个月,不能有效指导临床治疗同时也加大了病原菌传播机会。由此可见,寻找快速的检测方法意义重大。我们采用线性探针法用于快速筛查耐多药肺结核,只需要2 d时间［2］,就可以检测出利福平和异烟肼耐药的涂片阳性肺结核患者。     

耐多药结核分枝杆菌临床株耐药性分析

目的探讨贵阳市肺科医院住院结核病患者中的耐药情况,为临床诊断和治疗耐多药结核病（MDR-TB）提供可靠的科学依据。方法对2004年1月至2009年8月期间住院患者的临床分离株进行菌型鉴定后,进行药物敏感性试验,分析不同类型结核病患者的耐药情况。结果 2 318株结核分枝杆菌总的耐多药率为23.8%,初始耐多药率为12.1%,获得性耐多药率为63.8%。结论贵阳市肺科医院收治的结核病患者耐药率较高,应尽快加强耐药结核病患者的防治工作,减少和避免MDR-TB患者的产生。     

耐多药结核病研究进展

结核分枝杆菌是重要传染性病原体之一,其引起的结核病已成为全球性的社会公共卫生问题。结核分枝杆菌耐药性的发生是引起结核病治疗失败及结核病患者死亡的重要危险因素。耐多药结核病的出现和流行是造成结核病疫情回升的主要原因之一,随全球范围对耐多药结核病的重视,各种关于耐多药结核病的新耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究不断提出。本文就耐多药结核病的耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究进展做一综述。     

耐多药结核病研究进展

结核分枝杆菌是重要传染性病原体之一,其引起的结核病已成为全球性的社会公共卫生问题.结核分枝杆菌耐药性的发生是引起结核病治疗失败及结核病患者死亡的重要危险因素.耐多药结核病的出现和流行是造成结核病疫情回升的主要原因之一,随全球范围对耐多药结核病的重视,各种关于耐多药结核病的新耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究不断提出.本文就耐多药结核病的耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究进展做一综述.     

耐多药结核病研究进展

结核分枝杆菌是重要传染性病原体之一,其引起的结核病已成为全球性的社会公共卫生问题。结核分枝杆菌耐药性的发生是引起结核病治疗失败及结核病患者死亡的重要危险因素。耐多药结核病的出现和流行是造成结核病疫情回升的主要原因之一,随全球范围对耐多药结核病的重视,各种关于耐多药结核病的新耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究不断提出。本文就耐多药结核病的耐药机制、诊断方法及治疗方案的研究进展做一综述。     

耐多药结核病的研究进展

耐多药结核病(MDR-TB)是指至少对异烟肼(INH)及利福平(RIF)同时耐药的结核病，是由于不合理化疗造成的。MDR-TB严重危害人类健康，但如采取恰当的治疗措施，治愈率仍可达到90％。因此，人们必须对MDR-TB给予足够的认识、快速准确判定药敏结果、尽早确定个体化的治疗方案，确保有效治疗MDR-TB。MDR-TB的治疗方案通常以二线药物为主，该方案疗程长、价格昂贵、不良反应多。因此，MDR-TB重在预防。     

耐多药结核病的诊断、治疗和防治策略

耐多药（multidrug resistance,MDR）的定义是结核病患者感染的结核分枝杆菌经体外证实至少同时对异烟肼、利福平耐药。耐多药结核病（multidrug resistance tuberculosis,MDR-TB）包括原发性和获得性两种类型。原发性MDR-TB是由于耐多药结核杆菌的传播所引起的;而获得性MDR-TB是在治疗过程中出现的,     

耐多药结核病的治疗及预防

发现结核病已经 10 0多年 ,对其研究、控制、治疗成功使人们乐观地预言本世纪末即将消灭结核病。近 2 0年在美国及工业化国家的结核病平均以每年 6%速度下降 ,它已成为罕见病。但是 80年代末期ＡＩＤＳ的蔓延促使结核病卷土重来。目前世界上有三分之一的人感染结核分支杆菌 ,每年 80 0万新病人出现 ,30 0万人死于结核病 ,同时结核耐药菌株持续增加。据统计世界上约有 50 0 0万人携带结核耐药菌株 ,美国约有 13%的新病人至少耐受一个一线结核药 ,3 2 %耐受异烟肼 (ＩＮＨ Ⅰ )和利福平 (ＲＦＰ Ｒ) ,即耐多药结核病 (ＭＤＲ ＴＢ)。从 1985～…     

Genetic and phenotypic characterizations of drug‐resistant Mycobacterium tuberculosis isolates in Cheonan,Korea

Background

Mycobacterium tuberculosis (MTB) causes tuberculosis (TB), which is a fatal disease. Cases of drug‐resistant MTB have increased in recent years. In this study, we analyzed 7 sites of MTB DNA sequences, including the rpoB and inhA gene, to investigate the relationship between gene mutations and drug resistance in MTB.

Methods

Mycobacterium tuberculosis liquid culture samples (197 specimens from 74 cases) were collected between June 2015 and May 2016 and sequenced. The results were compared with those obtained from antibiotic susceptibility tests.

Results

In 65 (87.8%) cases, the antibiotic‐resistant phenotype was consistent with genotyping results, whereas in 9 (12.2%) cases, there was no match. Eight mutations were detected in the rpoB gene, which showed the highest mutation rate. Sequencing results indicated that these mutations were present in 12 cases.

Conclusion

Previously published data on antibiotic resistance genes are insufficient for effective prevention of multidrug‐ or extensive drug‐resistant TB. Additional studies are needed to characterize the complement of antibiotic resistance genes in MTB.

     

三磷酸腺苷发光法在耐多药结核分枝杆菌诊断中的运用

目的通过与罗氏固体培养法比较,评估三磷酸腺苷发光法检测耐多药结核分枝杆菌的可行性。方法采用三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法同时检测和分析149例临床分离的结核分枝杆菌。结果三磷酸腺苷发光法与罗氏固体培养法的一致率为92．6％（138／149）,差异无统计学意义（X^2=0．57,P=0．45）。三磷酸腺苷发光法检测时间为（6．6±2．1）d,明显快于传统罗氏固体培养法的28d（t=422．7,P〈0．001）。结论与常规检测方法比较,三磷酸腺苷发光法具有快速、简便、准确性高等优点,对耐多药结核患者的早期诊断和耐药结核分枝杆菌流行的控制有很大帮助,适合实验室开展。     

Comparison of rifabutin susceptibility and rpoB mutations in multi-drug-resistant Mycobacterium tuberculosis strains by DNA sequencing and the line probe assay

We compared rifabutin susceptibility and rpoB mutations in 98 multi-drug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis (MDR-TB) by DNA sequencing and with a line probe assay using the commercially available INNO-LiPA Rif. TB kit (the LiPA). Our results indicated that rifabutin continues to remain active against MDR-TB strains harboring certain genetic alterations and also that the LiPA might be useful in identifying MDR-TB strains susceptible to rifabutin.     

显微镜观察药物敏感性技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

目的探讨显微镜观察药物敏感性技术(MODS)在痰液标本中结核分枝杆菌(MTB)的检测效果,以评价其临床应用价值。方法收集150份患者临床痰标本,应用MODS技术、罗氏培养法进行MTB的检测,将两法的结果进行对比分析。结果 MODS技术与罗氏培养法结果符合率为77.8%,MODS技术检测痰标本中MTB的敏感性为93.3%,特异性为70.0%,阳性预测值(PPV)为60.8%,阴性预测值(NPV)为95.4%,正确性为77.8%。结论 MODS技术检测痰标本中MTB具有快速、灵敏、简便等优点,可作为结核病细菌学快速检测的新方法之一。     

刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性

目的用刃天青显色法检测结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药性,并探讨该法的临床应用价值。方法来自河南省3家结核病医院的共240株结核分枝杆菌分别用刃天青显色法检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、硫酸链霉素(SM)的耐药性,并与比例法作比较。结果刃天青显色法检测平均时间为8d,与比例法相比结果一致性好,INH、RFP、EMB、SM 4种药物的折点浓度分别为0.25、2.0、4.0、2.0μg/mL。结论刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。     

Analysis of drug resistance and mutation profiles in Mycobacterium tuberculosis isolates in a surveillance site in Beijing,China

ObjectiveThis study analyzed drug resistance and mutations profiles in Mycobacterium tuberculosis isolates in a surveillance site in Huairou District, Beijing, China.MethodsThe proportion method was used to assess drug resistance profiles for four first-line and seven second-line anti-tuberculosis (TB) drugs. Molecular line probe assays were used for the rapid detection of resistance to rifampicin (RIF) and isoniazid (INH).ResultsAmong 235 strains of M. tuberculosis, 79 (33.6%) isolates were resistant to one or more drugs. The isolates included 18 monoresistant (7.7%), 19 polyresistant (8.1%), 28 RIF-resistant (11.9%), 24 multidrug-resistant (MDR) (10.2%), 7 pre-extensively drug-resistant (XDR, 3.0%), and 2 XDR strains (0.9%). A higher rate of MDR-TB was detected among previously treated patients than among patients with newly diagnosed TB (34.5% vs. 6.8%). The majority (62.5%) of RIF-resistant isolates exhibited a mutation at S531L in the DNA-dependent RNA polymerase gene. Meanwhile, 62.9% of INH-resistant isolates carried a mutation at S315T1 in the katG gene.ConclusionOur results confirmed the high rate of drug-resistant TB, especially MDR-TB, in Huairou District, Beijing, China. Therefore, detailed drug testing is crucial in the evaluation of MDR-TB treatment.     

Slide drug susceptibility test for the detection of multidrug-resistant tuberculosis in Bangladesh

The present study attempted to comparatively assess and establish a suitable detection method of multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) from previously treated TB cases in Bangladesh. Of 130 Zeihl–Neelsen smear-positive fresh sputum specimens, 112 samples were found to contain viable bacilli as visualized under the light-emitting diode fluorescence microscope after fluorescein di-acetate staining, and 109 positive cases were detected through Löwenstein–Jensen culture. The samples were further tested to survey the drug resistance both by slide drug susceptibility test (DST) and by conventional DST: 94 MDR-TB cases were detected within 10 days through the slide DST, whereas 82 cases were observed through the conventional DST, requiring about 3 months. Because the rapidity, sensitivity and accuracy of the slide DST method were found to be comparatively satisfactory when compared to the conventional DST method; we recommend the slide DST method as the standard diagnostic tool in perspective of Bangladesh for the detection of MDR-TB.     

探针熔解分析法检测结核分枝杆菌异烟肼耐药突变的应用和评价

目的 评价PMA技术检测MTB对INH耐药突变的价值,调查INH耐药突变发生特征.方法 MTB标准株H37Rv来自国家结核病参比实验室,1株INH敏感株和1株katG S315TACC突变株来自厦门市疾病预防控制中心,7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株来自深圳慢性病防治中心、河南省疾病预防控制中心、中国人民解放军第309医院和厦门市疾病预防控制中心.707份MTB临床分离株来自厦门市疾病预防控制中心、厦门市第一医院和漳州市疾病预防控制中心,126份MTB涂阳痰标本来自厦门市同安区疾病预防控制中心.MTB标准株H37Rv、7株MTB INH耐药株和833份临床标本均采用厦门致善结核分枝杆菌异烟肼耐药突变检测试剂盒热裂解法提取基因组DNA,1株INH敏感株和1株katG S315T ACC突变株采用AxyPrepTM细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA.熔解曲线分析所检标本与野生型对照在katG315位密码子、inhA启动子区(- 17～-8位点)、ahpC启动子区(-44～-30以及-15 ～3位点)及inhA94位密码子的熔解温度(Tm值)差异判断标本是否发生INH耐药突变.3×105拷贝/反应的野生株和katG S315T ACC突变株以10倍梯度稀释至300拷贝/反应,分析PMA技术的灵敏度.用PMA技术检测7株含有已知INH耐药突变的结核耐药株,评价特异性,并就其中5种耐药突变进行重复性检验.测序验证PMA技术对833份标本INH耐药性的临床检测效能.结果 PMA技术从核酸提取到结果判断可在3小时内完成,在标准96孔实时PCR仪器上可同时检测46份标本.对野生株和katG S315T ACC突变株的灵敏度均为300拷贝/反应,能够同时区分9种INH耐药相关点突变或缺失,5种耐药突变的Tm值标准偏差均在0.5℃之内.检出的162份突变标本与测序验证结果均一致.临床标本验证突变率为19.4％( 162/833),在所检出的14种INH耐药突变katGS315T( AGC →ACC)、inhA启动子区- 15C→T和katG S315N (AGC→AAC)这3种突变占INH耐药突变标本的83.3％(135/162).结论 PMA技术可快速、灵敏、特异检测结核INH耐药突变.     

结核分支杆菌临床分离株耐药性调查与耐多药结核病流行特点探讨

目的调查结核临床分离株的耐药性,探讨多耐药结核病（MDR-TB）流行特点。方法采用匡氏琼脂培养基按比例法测定287株结核菌（56株来自初治病例）对8种抗痨药物的耐药性。结果初治病例菌株和复治病例菌株对异烟肼、利福平、链霉素、吡嗪酰胺高度耐药率分别为1．8％、3．6％、17．9％、0％和74．9％、58．0％、68．4％、32．0％,差异均极显著（P〈0．001）。复治病例MDR株占63．2％,广泛耐药（XDR）株占10％,15．8％的MDR株为XDR株;初治病例无XDR株感染,MDR株占1.8％,极显著低于复治病例MDR株比率（P〈0．001）。结论住院结核病患者MDR株和XDR株感染率高,且主要由获得性耐药产生。DOTS策略仍是我国耐药结核病防治重点。