2018－2020年上海市B/Victoria系流感病毒的流行特征及基因特性分析

  目的  分析2018 — 2020年上海市分离的B/Victoria系流感毒株与疫苗株的匹配性及基因变异情况。  方法  利用血凝抑制实验,对142株B/Victoria系流感毒株进行了抗原性分析,并选取了63株开展了血凝素（HA）及神经氨酸酶（NA）基因序列分析。  结果  2018 — 2020年上海市流行的B/Victoria系流感毒株主要属于V1A.3分支,少数属于V1A.1分支及未缺失的V1A分支;抗原性分析显示,26.76%的流行株是疫苗株B/Colorado/06/2017鸡胚株的低反应株,与疫苗株相比,V1A.3分支流行株在HA蛋白的120环、150环、160环及190螺旋等关键的抗原决定簇及受体结合关键部位发生了5个氨基酸位点改变。  结论  2018 — 2020监测年度B/Victoria系流行株与世界卫生组织推荐的疫苗株组分B/Colorado/06/2017匹配性不佳,仍需密切监测流行株的谱系及变异情况,为疫苗株的筛选提供可靠的数据。     

2020-2021年广西Victoria系乙型流感病毒的抗原性及基因特性分析

目的 了解广西壮族自治区（广西）2020—2021年度B/Victoria(Bv)系流感病毒的抗原性及基因特征。方法 选取广西2020—2021年分离的36株Bv系流感毒株进行全基因组测序,并对血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因进行序列拼接和基因特性分析。同时采用血凝抑制实验进行抗原性分析。结果 2020—2021年广西分离的Bv系流感病毒与WHO推荐的疫苗株B/Washington/02/2019相比,HA和NA基因的核苷酸同源性分别为99.1%～100.0%和99.1%～99.9%。系统进化树分析发现这36株Bv系流感毒株均属于1A(?3)B分支,与疫苗株属于同一分支,但广西毒株又进一步分为两个小分支。抗原性分析显示这两个小分支没有明显差异,均为疫苗株的类似株。氨基酸变异位点分析发现,HA蛋白携带R133G、N150K、N197D的氨基酸突变,变异涉及3个抗原决定簇。NA蛋白的酶活位点和神经氨酸酶抑制剂耐药位点均未发生突变。结论 2020—2021年度广西流行的Bv系流感病毒与WHO推荐的北半球疫苗株的组分匹配但存在持续变...     

2009~2012年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA与NA基因的进化分析

摘要：目的：研究杭州地区2009年至2012年甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）与神经氨酸酶（NA）的基因进化特征,分析该病毒的遗传变异和抗原的分子水平转变。 方法：用RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA基因和NA基因片段并进行测序,用DNAMAN和MEGA 4.0生物信息学软件对HA和NA基因序列进行进化分析。 结果：建立的RT-PCR可成功检测HA(C)、HA(D)和NA基因,遗传进化分析结果表明,杭州地区甲型H1N1流感病毒的HA与NA氨基酸序列的亲缘系数与WHO推荐的病毒株及国内代表株的同源性均为98.9%~100%;三维构象结果表明,HA编码的蛋白质有5个位点发生改变,而NA编码的蛋白质仅发生2个位点改变。 结论：2009年至2011年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA和NA基因序列与世界范围内流行的病毒参考株具有高度同源性,但HA与NA蛋白质表位存在某些氨基酸位点的改变。     

2003-2014年浙江省宁波市乙型流行性感冒病毒血凝素和神经氨酸酶基因变化特征分析

目的 分析2003-2014年宁波市乙型流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子流行病学特征。方法 采集宁波市2003-2014年哨点监测医院的流感样病例标本进行流感病毒分离鉴定,选取不同时期的乙型流感毒株进行HA和NA基因序列测定,采用生物信息学软件分析变异和进化。结果 宁波市乙型流感病毒Victoria和Yamagata两大普系流行株的HA及NA基因在2003-2014年间每年均有不同程度的氨基酸序列变异,其中最明显的为2005年与2009年的Victoria系毒株及2007年与2010年的Yamagata毒株变异。每当HA基因序列发生明显变异时NA基因也同时出现明显的变异,而且有时NA基因的变异比HA基因更明显。同时发现2013-2014年流行的乙型流感病毒为Yamagata系HA与Victoria系NA的重配株。结论 乙型流感两大谱系流行株的HA基因发生变异时NA基因也会出现变异,甚至较HA基因更快。2013-2014年宁波市乙型流感高发的流行株为Yamagata系HA与Victoria系NA基因的重配株。     

2009年广东省深圳市B型流感病毒系统进化及分子变异分析

目的 了解2009年深圳市B型流感病毒的系统进化及分子变异情况。 方法 对2009年深圳市分离的B型流感病毒的时间分布进行统计分析,并通过MEGA等软件对其HA1基因的系统进化及分子变异情况进行研究。 结果 深圳市2009年1-10月均有B型流感病毒流行,3-5月为流行高峰;Victoria系分支D的毒株是优势流行株;与2008 - 2009年度的国际疫苗株相比,Victoria和Yamagata系的HA1分子在其抗原决定簇区均出现了多个氨基酸位点的变异。 结论 2009年深圳市B型流感病毒的流行时间长,一些氨基酸位点的变异并没有导致一个新流行株系的形成。     

2012-2013流感监测年度中国大陆B型流感病毒抗原性及基因特性分析

目的了解2012-2013流感监测年度中国大陆地区B型流感的流行状况,分析B型流感病毒的抗原性和基因变异情况。方法选择2012-2013年我国分离的B型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析。利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用Neighbor-Joining方法进行种系进化分析,通过基因进化树比较国内流行株与疫苗株的差异。结果 2012-2013监测年度内,B型流感病毒占所有流感病毒的9.93%,其中以B型Victoria系流感病毒为主。B型Victoria系流感病毒的抗原性与上一年度WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008(83.5%)以及我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1384/2010(94.7%)的抗原性类似;而B型Yamagata系流感病毒绝大多数为WHO疫苗株B/Wisconsin/01/2010(99.3%)、WHO疫苗种子株B/Hubei-Wujiagang/158/2009(98.0%)的类似株;基因特性分析显示有1株B-Victoria系病毒发生了HA与NA基因分支间的重配,有1株B-Yamagata系病毒B/Sichuan-Gaoxin/1110/2012的NA基因位于Victoria系病毒的NA进化分支,也表明发生了种系间的基因重配。结论 2012-2013流感监测年度我国B型流感病毒活动水平较低,主要以Victoria系为主,而WHO推荐的疫苗组分是B-Yamagata系病毒,可见部分B型流感流行株与疫苗株并不匹配。     

2017-2020年流感流行季节河北省甲型H1N1流感病毒耐药性及耐药基因分析

  目的  分析河北省2017 — 2020年流感流行季节甲型H1N1流感病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物（NAI）的耐药情况,为流感的预防控制提供依据。  方法  选取2017 — 2020年流感流行季节37株甲型H1N1流感病毒毒株进行生物学耐药实验,使用荧光发光法检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。 选取38株甲型H1N1流感病毒提取核酸后对神经氨酸酶NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。  结果  选取的“A/河北新华/SWL1106/2017”对奥司他韦敏感性降低（IC₅₀=30.98 nmol/L）,其余36株甲型H1N1流感病毒全部对奥司他韦和扎那米韦敏感,对奥司他韦的半数抑制浓度（IC₅₀）平均数为0.46 （0.07～1.14 ）nmol/L;对扎那米韦的IC₅₀平均数为0.27 （0.07～0.85 ）nmol/L。 序列分析发现1株发生了H275Y突变,为奥司他韦耐药株。  结论  2017—2020年河北省流行的绝大部分甲型H1N1流感病毒对NAI类药物敏感。     

宜春市2011年至2012年乙型流感病毒耐药基因分析

目的 分析宜春市2011~2012年B型流感病毒耐药基因位点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供依据.方法 采集宜春市流感监测医院和疑似流感疫情的流感样病例鼻咽拭子标本进行流感病毒分离,选择分离到的16株B型流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒NA基因后进行基因序列测定,用DNAStar5.0,Mage3.1生物软件对测序结果进行分析处理,翻译出氨基酸序列,进行基因特性分析.结果 16株B型流感病毒NA区域核苷酸序列长度均为1140bp,编码380个氨基酸,所有毒株的NA蛋白催化活性位点和辅助位点均未发生氨基酸替换.结论16株毒株均对流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物敏感,我们应该继续对流行株耐药情况进行检测.     

吉林省2018-2020年甲型H3N2亚型流感病毒耐药基因分析

目的 掌握2018-2020年吉林省内H3N2亚型流感流行株对金刚烷胺类药物以及神经氨酸酶抑制剂类药物的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供参考依据.方法 选取甲型H3N2亚型流感毒株34株,对M2和NA基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析.结果 2018-2020年吉林省分离到流感毒株981株,其中甲型流...     

2009-2012年浙江省湖州市甲3亚型流行株基因特性分析

目的 分析2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒主要抗原基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子变异特征。 方法 选择浙江省湖州市2009-2012年流感流行期间分离的甲3亚型代表株11株,提取病毒RNA,扩增HA1和NA基因,进行序列测定,用MegAlign软件分析处理。 结果 湖州市近几年甲3亚型流感流行株在HA1区的核苷酸长度均为987 bp,编码329个氨基酸;在NA区的核苷酸长度为1362 bp,编码454个氨基酸。2009-2012年甲3亚型流感病毒分离株HA1区与NA区的氨基酸同源性分别在94.7%～99.9%与96.2%～100.0%之间,HA1区的变异较NA区更大。4个流感流行期分离的甲3亚型流感毒株相比HA和NA发生了多个氨基酸位点的替换。此外,近几年来世界卫生组织推荐的甲3亚型流感疫苗株与当年的流感流行株之间存在一定的差异。 结论 2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒流行株发生明显变异,基因重配和抗原漂移是病毒发生变异的主要机制。     

杭州市2013~2014年流感暴发流行期甲型流感病毒H3N2亚型基因特性分析

目的分析杭州2013~2014年冬春季流感暴发期间流行的甲型流感病毒H3N2亚型的分子特性。方法选取H3N2阳性标本提取病毒RNA,PCR扩增全基因组并测序,构建血凝素(HA)及神经氨酸酶(NA)分子进化树,对H3N2亚型的病毒进化进行分析。结果 6个代表株中H3N2未发生片段间的重配。以WHO推荐流感疫苗株A/TEXAS/50/2012为参考,HA1蛋白主要抗原决定区发生N145S氨基酸替换,并有其他多个位点的突变。病毒基质蛋白(M2)的金刚烷胺耐药位点全为S31N,神经氨酸酶抑制剂耐药位点未发生突变。结论 H3N2亚型甲型流感病毒HA1蛋白的氨基酸变异与2013~2014年杭州地区暴发流行有关。另外,病毒已出现对金刚烷胺的耐药突变,而对神经氨酸酶未发生耐药突变。     

2010-2011年广东省东莞市甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素基因变异特征研究

目的 了解2010-2011年广东省东莞市甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒血凝素(HA)基因的特征及变化。 方法 反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、基因扩增、测序得到标本HA基因的核酸序列,利用生物信息软件对序列的特征及变化情况进行分析。 结果 通过测序得到各标本HA基因1701 bp长度的核苷酸序列,566个氨基酸。2年间有24个氨基酸位点发生变异,但其中有12个位点的改变只出现在单个毒株上。发生明显变化趋势的位点只有145、202、391、468,其中202位点属于Sb抗原决定簇区。受体结合位点、潜在糖基化位点及二硫键比较稳定,2年间没有发生变化。 结论 主要功能区域比较保守,无变化。序列中发生明显变化趋势的位点只有4个,其中1个位于抗原决定簇区,属于流感病毒抗原漂移过程中突变的累积。     

2005-2007年吉林省乙型流行性感冒病毒HA1基因序列分析

目的了解2005-2007年吉林省乙型流行性感冒（流感）病毒HA1基因的演变特征。方法采用MDCK分离培养流感病毒,提取病毒RNA,经反转录和聚合酶链式反应扩增后测序。结果2005-2007年吉林省同时流行着乙型Victoria系和Yamagata系流感毒株。与B/Shanghai/361/02相比,2005年流行的乙型Yamagata系病毒有8个氨基酸位点发生改变;2007年流行的乙型Yamagata系病毒有10个氨基酸变化位点;2007年流行的乙型Victoria系毒株与B/Malaysia/2506/04相比,只有3个氨基酸位点发生替换。结论2005-2007年吉林省流行的乙型Yamagata系病毒与B/Shanghai/361/02相比已经发生变化;吉林省2007年Victoria系毒株与疫苗代表株B/Malaysia/2506/04比较接近。     

流行性感冒病毒血凝抑制试验及其临床应用

目的　采用病毒培养与血凝抑制 (HI)试验调查京津地区 6所医院流行性感冒 (流感 )情况 ,评价HI试验的临床诊断价值。方法　采用病毒培养检测 6 0份流感样症状患者鼻吸液标本 ,确定阳性标本流感病毒型别 ;采用HI试验检测 6 0组共 12 0份血清(每组含急性期、恢复期血清各 1份 ) ,比较急性期、恢复期血凝素IgG抗体效价有无≥ 4倍升高、判断所感染流感病毒型别及与培养结果是否符合。结果　培养阳性率甲型流感病毒为 2 5 .0 % ,乙型流感病毒为 15 .0 % ;合计 4 0 .0 % ;血凝素抗体效价≥ 4倍升高率 :A1/上海 /7/991.6 7% ,A3/福建 /15 1/2 0 0 0 2 6 .6 7% ,B/浙江 /2 /2 0 0 11.6 7% ,B/上海 /2 0 /2 0 0 16 .6 7%合计 36 6 7% ;HI试验诊断流感的敏感性 (SN)、特异性 (SP)、误诊率 (FPR)、漏诊率 (FNR)、正确率 (π)、Youden指数 (YI)、阴阳性似然比 (LR± )及阴阳性预测值 (PV± )分别为 6 6 .6 7%、83.33%、16 .6 7%、33.33%、76 .6 7%、0 .5 0 0 0、0 .4 0 0 0、3.999、78.95 %、72 .72 %。结论　HI试验测定流感患者急性期和恢复期血清的血凝素抗体水平可确诊流行性感冒 ,并能提供流感病毒分型报告     

2003-2009年宁波市乙型流感病毒监测与HA_1序列分析

目的分析近年来宁波市乙型流行性感冒(流感),两大谱系毒株流行情况和病毒血凝素基因特性。方法用犬肾传代细胞(MDCK)分离流感病毒,对2003-2009年分离的乙型流感病毒按不同的谱系选择每年的代表株,经聚合酶链反应扩增目的基因后进行乙型流感病毒的血凝素基因HA1区域(HA1)核苷酸序列测定。结果乙型流感两大谱系的病毒在宁波市几乎每年均有出现,相互交替成为优势株。其中Yamagata系在2004及2007年相对占优势,而Victoria系在2006年3月及2009年6月2次出现了流行高峰。HA1序列测定结果Yamagata系毒株在2003、2007年HA1区出现2次出现明显的氨基酸替换,Victoria系在2005年底及2009年初发生2次明显氨基酸替换。结论2003-2009年乙型流感的两大谱系病毒的HA1序列均存在较大差异,本市2004及2007年Yamagata系2次在乙型流感中相对占优势和2006及2009年Victoria系出现的2次乙型流感流行高峰均与病毒HA1区的氨基酸替换有关。     

2009-2011年北京市西城区乙型流行性感冒病毒流行特征分析

目的 通过2009 -2011年的连续监测,了解北京市西城区乙型流行性感冒(流感)病毒的流行规律,为制定预防控制措施提供依据.方法 在北京市西城区两家流感哨点医院采集流感样病例的咽拭子3393份,用犬肾传代细胞进行病毒分离,分离阳性的病毒进一步用血凝抑制试验进行流感病毒株型别鉴定.结果 从2009年10月到201...     

乙型肝炎基因分型同耐药位点突变的关系研究

目的：探讨耐药位点突变与乙型肝炎病毒(HBV)基因分型及其他临床信息的相关性。方法以358例慢性乙型肝炎(CHB)患者为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-反向点杂交法检测耐药位点及基因分型。收集患者血清 HBV DNA 载量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以及乙型肝炎病毒 e 抗原(HBeAg)、性别、年龄、核苷(酸)类似物用药时间等临床资料。结果所有标本均成功扩增阳性条带。HBV 基因型以 B 型(267例)为主,其次为 C 型(81例)、D 型(10例)。使用核苷(酸)类似物的311患者中完全野生型269例,未用药的47例患者均未见耐药突变。耐药位点突变以204及180/204位点突变为主。耐药突变与患者性别、年龄、血清 HBV DNA 载量、病毒基因型、ALT 水平及 HBeAg 无明显相关性(P >0.05);用药时间越长,耐药突变率越大(P <0.05);180位点突变与204位点突变有一定相关性(P <0.05)。结论PCR-反向点杂交技术可有效检测 HBV 基因型及突变位点,可有效指导临床用药。     

济南市乙型流感暴发疫情调查分析

目的 分析济南市6起乙型流感暴发疫情的流行病学特征,对疫情控制措施做出评价.方法 用描述性流行病学方法对6起暴发疫情进行分析,采集患者鼻咽拭子进行流感病毒分离鉴定.结果 6起流感暴发疫情均发生于6所农村中小学,发生病例498人,平均罹患率为7.97%.疫情发生在2006年2～4月,以12岁以下小学生罹患率较高.以发热、咳嗽、流涕、头痛为主要症状.病程一般3～5d.采集患者鼻咽拭子117份,分离到维多利亚(victoria)乙型流感病毒33株.阳性率为28.21%.结论 6起流感样病例暴发疫情均为维多利亚(victoria)乙型流感暴发.加强学校晨检.严格隔离传染源,是及时发现、预防和控制流感疫情的重要措施.     

流感病毒变异及流感监测技术

流感与禽流感病毒的类型繁多,极易产生变异,其监测技术是预防和控制流感流行的重要途径。本文对不同流感病毒的变异类型及其机制进行了分析,介绍了流感病毒监测的常用技术,讨论了生物学技术和地理信息系统监测技术及其应用前景。