成人外周血αβ T细胞和γδT细胞体外活化CD69表达的比较性研究

目的：γδＴ细胞具有细胞毒效应，探讨γδＴ细胞体外活化的规律将有助于这类细胞的临床应用。方法：将成人外周血分别置于ＰＨＡ（４０ｍｇ／Ｌ）、ＰＤＢ（２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）及ＰＨＡ（４０ｍｇ／Ｌ）加上ＰＤＢ（２×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）的条件下进行全血培养，在培养２ｈ和６ｈ后分别用双色免疫标记流式细胞法对外周血Ｔ细胞的ＴＣＲαβ、ＴＣＲγδ和ＣＤ６９分子进行分析。结果：Ｔ细胞在受刺激后２ｈＣＤ６９分子即有所增高，但其增加的程度因Ｔ细胞亚群和刺激剂不同而有差别，ＰＨＡ和ＰＤＢ分别使αβＴ细胞ＣＤ６９表达百分率由对照组的４４８±１３６升高到８７９±１６７和７３３６±２９８；ＰＨＡ和ＰＤＢ分别使γδＴ细胞ＣＤ６９表达百分率由对照组的１３６５±１７４升高到３５８４±１４０和９９０３±０９７。与２ｈ的情况相比，αβＴ细胞在各种刺激剂作用６ｈ后ＣＤ６９表达均有进一步的增高，γδＴ细胞在ＰＨＡ作用６ｈ后ＣＤ６９表达继续上调。结论：γδＴ细胞对多克隆活化剂的反应比αβＴ细胞更早和更强。这一特征更有利于体外扩增γδΤ细胞并将其用于临床免疫治疗。     

白癜风患者外周血T淋巴细胞异常活化

本文以人类白细胞抗原ＤＲ位点（ＨＬＡ－ＤＲ）及白细胞介素２受体亚单位Ｐ５５和Ｐ７５（ＩＬ－２Ｒ，Ｐ５５和ＩＬ－２Ｒ，Ｐ７５）的表达为Ｔ淋巴细胞活化的指标，用双色免疫标记流式细胞法对白癜风患者外周血Ｔ淋巴细胞（ＶＰＢＴＬ）进行分析。实验发现：ＨＬＡ－ＤＲ在ＶＰＢＴＬ及其亚群Ｔ辅助细胞（Ｔｈ，ＣＤ４＾＋细胞）和Ｔ抑制细胞（Ｔｓ，ＣＤ８＾＋细胞）的表达均明显高于正常人，分别为：４９．６２％比１４．５４％     

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。     

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCR Vβ基因的 …

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹     

CD28与B7.1共刺激PBLs受肝癌细胞诱导后的TCR Vβ基因表达

目的 研究Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ在外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）中的表达。方法 用单克隆抗体ＣＤ２８＋Ｂ７．１（ＣＤ８０）共刺激正常人外周血淋巴细胞后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）。结果 发现ＰＢＬＳＴＣＲＶβ７基因在体外选择性扩增,表达水平为１５￣２５％,对照组为４￣８％。结论Ｖβ７基因对识别肿瘤抗原具有特异性,为肿瘤基因治疗和研究提供新的线索和实验依据。     

抗CD28＋B7.1单抗共刺激PBLs诱导肝癌细胞凋亡的蛋白激酶信号转导

目的 研究Ｔ淋巴细胞活化、增殖、介导肝癌细胞凋亡过程中其蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）和酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）的活性变化。方法 用抗ＣＤ２８＋Ｂ７．１（ＣＤ８０）单克隆抗体共刺激正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬｓ）后作用于肝癌细胞（ＢＥＬ－７４０２）。结果 激活的Ｔ细胞中ＰＫＣ、ＴＰＫ活性明显增强,并与肝癌细胞凋亡程度呈正相关。结论 ＰＫＣ、ＴＰＫ在Ｔ细胞活化、增殖及诱导肝癌细胞凋亡的信号转导中起重要作用。     

吸入糖皮质激素对哮喘儿童细胞免疫功能的影响

为了解糖皮质激素对免疫功能的作用，检测了哮喘发作期患儿。对经丙酸倍氯松（ＢＤＰ）吸入治疗的患儿及正常儿童外周血淋巴细胞膜ＩＬ－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）、超微结构、血浆游离ＩＬ－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、淋巴细胞亚群及ＢＤＰ对体外培养淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ的表达进行比较。结果显示，ＢＤＰ可以明显抑制ＰＨＡ刺激引起的体外培养淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ的表达，引起淋巴细胞的凋亡，而吸入ＢＤＰ（２００μｇ／ｄ）的哮喘患儿（缓解期）除ｓＩＬ－２Ｒ比哮喘发作期显著降低（Ｐ＜０．０５）外，外周血淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ及淋巴细胞亚群并未出现显著变化．结果提示，抑制淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ表达和淋巴细胞活化可能是ＢＤＰ治疗哮喘等变态反应的重要机制之一。吸入ＢＤＰ主要是呼吸道局部作用，对全身细胞免疫指标影响不大     

内毒素、地塞米松对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞中NF_(-k)B活化的影响

目的 探讨内毒素（ＬＰＳ）和地塞米松（Ｄｅｘ）对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）中ＮＦ－ＫＢ活化的影响，以及ＡＭ中ＮＦ－ＫＢ活化在急性肺损伤中的可能作用。方法 通过建立大鼠ＡＭ体外培养技术，应用免疫组化染色法，观察ＬＰＳ和Ｄｅｘ寸 ＡＭ中 ＮＫ－ＫＢＰ～（６５），ＩＫＢ－α、ＴＮＦ－α和 ＩＣＡＭ－ｌ蛋白表达的动态变化。结果 ＬＰＳ能使培养的ＡＭ中 ＮＦ－ＫＢＰ～（６５），ＴＮＦ－α和ＩＣＡＭ－ｌ的表达增加，ＩＫＢ－α的表达降低；Ｄｅｘ的作用与 ＬＰＳ恰相反。结论ＬＰＳ促进ＡＭ中的ＮＦ－ＫＢ活化，可能是急性肺损伤肺内炎症损害发生的启动及促进因素；Ｄｅｘ抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化，可能是其抗炎作用的重要机制之一。     

ConA激活的小鼠T细胞CD69表达动力学的体内外研究

目的 为明确ＣＤ６９体内外表达动力学并进一步探讨其作用。方法 ＣｏｎＡ体内外刺激小鼠Ｔ细胞后,选取不同时间点,流式细胞仪观察Ｔ细胞ＣＥ６９表达率。结果ＣｏｎＡ刺激后２ｈＣＤ６９即有明显表达,６～８ｈ达到峰值,ＣＤ８＾＝与ＣＤ８＾＋Ｔ细胞相比无明显差异。体外条件对ＣＤ６９的表达有显著的影响。结论 结果提示ＣＤ８＾－和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的活化均需要ＣＤ６９的参与,Ｔ细胞可能在活化早期一过性高表达ＣＤ６９     

真核细胞源性sCD23促T细胞增殖效应分析

用自然裂解法提取的可溶性ＣＤ２３分子（ｓＣＤ２３）作用于体外培养的扁桃体单个核细胞，没有观察到任何显著效应。在系统研究ＰＨＡ预处理与Ｔ细胞增殖之间关系的基础上发现：粗提天然ｓＣＤ２３对经ＰＨＡ预活化２４或３６小时的扁桃体Ｔ细胞具有明显的促增殖作用。但ｓＣＤ２３在高浓度（≥１２８ｎｇ／ｍｌ）时可抑制Ｔ细胞增殖。包被ＣＤ２３ＭｃＡｂ的羊红细胞（ＳＲＢＣ）吸收实验证实，对Ｔ细胞产生ＴＣＧＦ样效应的有效成份是ｓＣＤ２３。用亲和层析纯化的ｓＣＤ２３进行效应分析也得到与粗提ｓＣＤ２３相同的结果，我们认为，ｓＣＤ２３不能直接活化Ｔ细胞，但可能促进经适当诱导后Ｔ细胞的增殖。活化可能诱导Ｔ细胞表达ｓＣＤ２３受体的假说，为一步研究ＣＤ２３分子介导的免疫细胞间相互作用提供了充分依据。     

槲皮素对小鼠T细胞体外活化的抑制作用

目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P＜0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。     

通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响

目的：研究通痹灵（TBL）总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法：培养小鼠淋巴细胞，加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后，再加佛波醇酯（PDB）或刀豆蛋白（ConA).24h后，用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结果；不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69，均有明显的下调作用（对ConA激活的T淋巴细胞表达CD69。均有明显的下调作用（对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞）。呈明显的量效关系。结论：TBL总碱可明显抑制活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达，为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据。     

棉酚对多克隆激活剂活化人T淋巴细胞的抑制作用

目的:以体外培养的人外周血单个核细胞为材料,研究多酚类抗生育药物棉酚对正常人外周血T淋巴细胞体外活化作用的影响。方法:利用双荧光染色流式细胞术分析棉酚对人T淋巴细胞在丝裂原或佛波醇酯刺激下早期活化抗原CD69表达的影响。结果:100μmol/L的棉酚预先与T细胞温育,能完全抑制10mg/L植物血凝素(PHA)刺激的CD3^＋T细胞活化抗原CD69的表达,又可阻断10^－7mol/L佛波醇酯(PDB)对T细胞的活化作用。这种抑制作用呈剂量依赖性,棉酚对PDB及PHA抑制作用的IC₅₀分别为(35.7±2.9)μmol/L和(32.8±1.5)μmol/L。此外,棉酚对CD3^－的淋巴细胞CD69表达也有类似的抑制作用。然而,它对多克隆激活剂引起的T细胞表面分子CD3的下调无明显影响。结论:在体外活化模型中,棉酚能够同时抑制多克隆激活剂PHA和PDB对T细胞的活化作用,提示其作用部位可能位于PKC或下游,并提示棉酚具有潜在的免疫调节作用。     

黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

目的:研究黄连素(Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法:正常人外周血全血培养,以植物血凝素(PHA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,双荧光染色及溶血获取有核细胞后,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD69和CD25的水平,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果:浓度为100μmol/L和50μmol/L的Ber对PDB+Ion或PHA激活T细胞表达CD69有明显抑制,而25μmol/L的Ber抑制效应无显著性;随时间延长,对CD69表达的抑制程度下降;对于CD25表达,上述3个浓度的Ber抑制作用均有显著性,且呈剂量依赖性。同时,这3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G₂/M,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论:Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖,发挥其免疫抑制作用。     

Inhibitory effects of berberine on the activation and cell cycle progression of human peripheral lymphocytes

The immunosuppressive property of berberine, an isoquinoline alkaloid, has been well documented, but the mechanism of its action on lymphocytes has not been completely elucidated. The present study is to investigate the effect of berberine on the activation and proliferation of lymphocytes, in particular T lymphocytes. Whole peripheral blood from healthy donors was stimulated with phytohemagglutinin （PHA） alone or phorbol dibutyrate （PDB） plus ionomycin, and the expression of CD69 and CD25 on T lymphocytes was evaluated with flow cytometry. The distribution of cell cycles and cell viability were analyzed by staining with propidium iodide （PI） and 7-aminoactinomycin D （7-AAD）, respectively. The results showed that 100 μmol/L and 50 μmol/L of berberine significantly inhibited CD69 expression on T cells stimulated with PDB plus ionomycin or PHA, whereas the effect of 25 μmol/L berberine was not significant. As the incubation time increased, the extent of inhibition decreased. Similarly, the expression of CD25 was also reduced by berberine in a dose-dependent manner over the concentration range of 25-100 μmol/L. Besides, this alkaloid could block lymphocyte cell cycle progression from G0/G1 phase to S and G2/M phase without phase specificity. Moreover, analysis following 7-AAD staining revealed that berberine had no significant cytotoxicity on lymphocytes. Taken together, berberine significantly inhibits the expression of activation antigens on T lymphocytes and also blocks the progression of cell cycles of lymphocytes, suggesting that berberine may exert immunosuppressive effect through inhibiting the activation and proliferation of T cells.     

放线菌酮对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理评价

目的:利用淋巴细胞的早期活化标记物CD69的表达,探讨CHX对T淋巴细胞体外活化的影响。方法:分离小鼠淋巴结细胞,分别与放线菌酮(CHX)、CHX血清预孵1h,加入多克隆刺激剂继续培养,总计培养24h后收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果:在CHX(终浓度10μmol/L)、CHX血清作用下,ConA活化的T细胞CD69表达百分率依次为(12.33±4.75)%、(20.39±6.32)%,与相应对照[分别为(64.67±3.00)%、(64.35±10.13)%]比较均有显著差异(P＜0.01);相应的,药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率依次为(13.07±11.05)%、(6.10±4.91)%,与相应对照[分别为(84.79±6.87)%、(79.68±4.17)%]比较均有显著差异(P＜0.01)。结论:CHX(10μmol/L)、5%的CHX血清对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应,证明T细胞活化过程中CD69的表达存在蛋白质的从头合成,对"CD69表达中CD69分子可能储存于细胞浆及其表达的发生并不需要蛋白质的从头合成"这一观点提出质疑。     

染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记技术结合流式细胞术,分析PDB＋Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果:Gen对ConA刺激组T细胞CD69、CD25表达有明显抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,而对PDB刺激组T细胞CD69及CD25表达的抑制需要较高浓度(＞50μmol/L);Gen无论对ConA或PDB＋Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用(P＜0.01),且均呈剂量依赖关系。结论:Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。     

Forskolin对佛波醇酯类刺激的小鼠体外T淋巴细胞行为的影响

目的 分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69分子和中期活化标志CD25分子的影响,从而阐明其作用机制.方法 无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育48h后,运用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术和碘化丙锭(PI)染色技术结合流式细胞术、CRLLQuest 和ModFitLT软件,分别榆测Fomkolin对PDB+Ion刺激下小鼠CD3+T淋巴细胞增殖和周期的影响;与不同浓度的Forskolin孵育2 h、10 h,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测Fomkolin对PDB诱导下的小鼠CD3+T淋巴细胞CD69分子和CD25分子表达的影响.结果 Forskolin(10-7、10-6、10-5 mol·L-1)均能明显抑制PDB+Ion刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞的增殖并将细胞阻滞在G0/G1期;同时也能明显抑制单纯PDB刺激下的CD3+T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系.结论 提示Forskolin在CD3+T细胞活化过程中信号转导的某个环节上有抑制作用,从而通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂.     

红车轴草提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化的抑制作用

探讨红车轴草提取物(Trifolium pratense Leguminosae extract,TLE)对小鼠T淋巴细胞的体外活化的影响。无菌条件下制备小鼠淋巴细胞悬液;双色荧光抗体染色结合流式细胞术分别分析TLE对小鼠T淋巴细胞在刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PDB)刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达的影响。终质量浓度为20、30、40 mg/L的TLE对小鼠T淋巴细胞在ConA或PDB刺激下的体外分化抗原CD69、CD25、CD71表达具有明显的抑制作用(P<0.01)。TLE对ConA或PDB刺激的不同时期的小鼠T淋巴细胞的体外活化具有明显的抑制作用。     

蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表型和T细胞活化的研究

目的：观察蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表到和T细胞活化的变化,进一步探讨本病患者的免疫功能。方法：用流式细胞术检测8例活动性蚕蚀性角膜溃病患者外周血淋巴细胞对项免疫表型变化,用植物凝集素和沸被醉酯作为刺激剂,以HLA－DR,CD69、CD71、CD25的表达为T细胞活化的指标,用流式细胞术分析。结果：蚕蚀性角膜溃疡患者外周血CD4、CD5、CD8、CD10、CD11b、CD15、CD16、CD19、CD23、CD25、CD41、CD69、HLA-DP、HLADR抗原表达阳性淋巴细胞以及HLA－DR、CD69、CD71、CD25在CD3和CD8细胞的表达均明显高于正常对照组。结论：蚕蚀性角膜溃疡患者具有增强的细胞免疫和体液免疫,外周血T细胞及其亚群出现异常活化,反映患者体内存在自身免疫反应而支持该病发病之自身免疫学说。