瘤体内注射肿瘤坏死因子重组腺病毒对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的:观察腺病毒重组肿瘤坏死因子(TNF)基因转染对大鼠乳腺癌细胞Walker256体内致瘤性的影响及瘤体内注射TNF重组腺病毒对Walker256荷瘤大鼠的治疗作用.方法:Walker256乳癌细胞感染人TNF重组腺病毒后,观察其体外增殖能力、皮下致瘤性的变化及进行肿瘤局部病理学检查;瘤体局部注射TNF重组腺病毒(Ad.hTNF),观察荷瘤大鼠的肿瘤生长情况及生存期.结果:Walker256感染人TNF重组腺病毒后,培养上清中24 h TNF的分泌量达5.2 ng/106细胞,细胞形态学无明显变化,体外增殖能力和皮下致瘤性显著下降,瘤体周围有大量淋巴细胞及单核细胞浸润;肿瘤局部注射Ad.hTNF能显著抑制Walker256的生长,并延长荷瘤大鼠的生存期.结论:重组腺病毒能有效介导TNF基因转染Walker256细胞,瘤体内局部注射Ad.hTNF对Walker256荷瘤大鼠具有明显的治疗作用.     

自然杀伤(NK)细胞抗大鼠实验性肿瘤肺转移疗效的观察

用不连续Percoll密度梯度离心分层法将大鼠脾淋巴细胞中具有NK活性的细胞相对集中。这部分细胞主要为大颗粒淋巴(LGL)细胞并表达OX8和Asialo CM1抗原,体外杀伤试验结果显示其NK活性明显高于新鲜的脾淋巴细胞。将上述部分提纯之NK细胞输入大鼠体内,同时注入粗制白细胞介素2(IL2),能有效地抑制大鼠Walker 256(W256)癌肉瘤肺转移的形成,疗效优于脾细胞与IL2合用组。提示用NK细胞代替脾淋巴细胞与IL2合用,可以提高抗肿瘤效应。     

联合应用hIL-2和hGM-CSF基因瘤苗抗肿瘤作用的研究

目的：探讨联合应用人白细胞介素2（hIL-2)和人粒细胞巨呼细胞刺激因子（hGM-CSF)基因瘤苗抗肿瘤作用。方法：经逆转录病毒载体将hIL-2基因及hGM-CSF基因导入大鼠Walker瘤细胞WRC256中，制备瘤苗接种荷瘤大鼠。结果：经PCR－Southerm Blot检测证实hIL-2基因及hGM-CSF基因已成功导入WRC256细胞基因组中，经生物学活性检测证实转基因细胞具有分泌hIL-2及hGM-CSF活性。转基因瘤苗经60Gy X线灭活，接种荷瘤Walker瘤模型，两种瘤苗确可诱导有效抗肿瘤反应，但与单独应用一种瘤苗相比较，联合应用无相加或协同作用。结论：两种瘤苗可诱导有效抗肿瘤反应，但联合应用无相加或协同作用。     

病毒介导多种基因对胆管癌细胞免疫原性的影响

目的 探讨IFN－γ、IL－2或B7－1基因修饰对胆管癌细胞免疫原性的作用。方法 构建携带人IFN－γ或IL－2基因的逆转录病毒表达载体，和含人B7－1基因的腺病毒载体，导入胆管癌细胞系QBC939，运用淋巴细胞杀伤试验、肿瘤细胞在裸鼠体内成瘤性分析、混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养，研究导入的目的基因对QBC939细胞免疫原性的影响。结果 导入IFN－γ基因的QBC939细胞体外能增强胆管癌病人外周血淋巴细胞杀伤亲本瘤细胞的活性；导入IL－2基因的QBC939细胞在裸鼠体内的成瘤性降低；导入B7－1基因的QBC939细胞能刺激外周血T淋巴细胞的增殖。结论 人IFN－γ、IL－2和B7－1基因修饰能增强胆管癌QBC939细胞的免疫原性。     

In vitro induction of specific anti-tumoral immunity against laryngeal carcinoma by using human interleukin-12 gene-transfected dendritic cells

摘要：【目的】探讨经白介素-12（IL-12）基因修饰体外诱导的树突状细胞（DC）后激活细胞毒性T淋巴细胞（CTL）免疫杀伤喉癌细胞的效能。【方法】应用pAdEasy腺病毒表达载体系统构建重组IL-12腺病毒载体;体外诱导分化喉癌患者外周血单个核细胞来源的DC;用IL-12基因转染喉癌抗原致敏的DC,流式细胞仪分析DC表型的变化; ELASA法检测转染组DC分泌IL-12的水平及其刺激的T细胞分IFN-γ因子的水平; MTT法检测DC刺激的T淋巴细胞增殖反应及CTL特异性杀伤喉癌细胞的效能;统计学分析比较转染组与未转染组间的差异。【结果】成功构建IL-12重组腺病毒颗粒。经Ad-12转染的DC后能高表达成熟表面分子标志CD83,CD86,分别为 (60.2±1.8%), (88.9±2.1%)转染后DC疫苗的 IL-12的分泌水平、刺激同源T淋巴细胞增殖能力及其分泌IFN-γ的水平、诱导细胞毒T 淋巴细胞（CTL）对喉鳞癌细胞Hep-2的免疫杀伤能力明显高于未转染组（P<0.05）。【结论】经IL-12基因修饰的喉癌患者外周血单个核细胞来源的DC后其能促进DC成熟,提高其抗原提呈能力,有效的刺激T淋巴细胞增殖,诱导CTL特异性抗喉癌免疫应答。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外对自体肝癌细胞杀伤活性的研究

目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对自体肝癌细胞杀伤活性.方法:从肝癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC来激活TIL,观察TIL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL具有很高的对自体肝癌细胞杀伤活性,杀伤率为(89.39±3.05)%,明显高于未经DC激活的TIL、CD激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体肝癌细胞的杀伤率.结论:肝癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗肝癌免疫.     

人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞对T细胞的激活效应

目的：采用Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA电转染人外周血树突状细胞（Dendritic Cell,DC）,观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法：通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用细胞因子体外培养诱导其成为DC。Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入DC内;通过混合淋巴细胞实验,获取DC激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞的增殖率。结果：电转染方法可将人肝癌细胞总RNA导入DC;电转染前后DC分子表达无显著差异。转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异的激活T细胞且增殖率明显增强（P〈0.05）。结论：电转染为人肝癌细胞总RNA导入DC提供技术上的可行性;转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异激活T细胞。     

柞蚕雄蛾提取液抗肿瘤作用及其对大鼠免疫状态的影响的初步研究

目的:观察柞蚕雄蛾提取液对肿瘤的抑制效应及其对大鼠免疫状态的影响.方法:60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、柞蚕雄蛾提取液大、中、小剂量组.建立Walker-256(W256)荷瘤大鼠模型,每天灌胃给药,10天后称取荷瘤大鼠瘤重、胸腺及脾脏的重量,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数;HE染色观察肿瘤组织病理变化;采用流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群变化;用免疫组化SP法检测大鼠脾脏细胞表达IL-2、IFN-α和IL-4、IL-10水平的变化.结果:与模型组相比,大、中剂量组瘤重差异具有统计学意义(P<0 05);与模型组比较,实验组肿瘤组织细胞排列较为稀疏,病理性核分裂象略减少;与模型组和5-Fu组相比,实验组大鼠脾脏和胸腺指数明显升高(P<0.05).外周血中CD4+T细胞比例与CD4+T/CD8+T值升高(P<0.05),脾脏细胞因子IL-2、INF-α表达明显增加(P>0.05),而IL-4、IL-10表达无明显改变(P>0.05).结论:柞蚕雄蛾提取液有一定的抗肿瘤活性,其抗肿瘤效应可能是通过改善机体免疫系统的状态而实现的.     

IL-2和IL-12的单/联合基因治疗对肝癌大鼠体内IL基因表达和T细胞亚群的影响

目的:探讨大鼠诱发性肝癌模型中脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因对血清IL-2和IL-12,以及T细胞活性的影响.方法:全部肝癌大鼠(以二乙基亚硝胺诱发制备)48只分为4组(空载对照组、IL-2单基因治疗组、IL-12单基因治疗组、IL-2/IL-12联合基因治疗组),构建携带IL-2和(或)IL-12基因的逆转录病毒载体及其包装细胞,含IL-2和(或)IL-12基因的包装细胞于不同时间对诱发性肝癌大鼠进行脾内注射转染细胞,比较大鼠血清IL-2和IL-12浓度、T细胞活性和毒性反应.结果: IL单基因治疗后血清IL-2或IL-12明显增高,IL-2/IL-12基因联合治疗组中血清IL较单基因组显著增高(P<0.01),病理示肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多.IL单基因治疗组T细胞活性较对照组显著增高,IL-2/IL-12基因联合组T细胞功能较IL单基因组增强,且持续时间长.结论: 脾内直接注射IL-2和(或)IL-12基因可增强T细胞活性,IL基因联合治疗优于IL单基因治疗.     

HEffects of adenoviral vector-mediated transduction of human p53, B7-1 and GM-CSF genes on liver cancer cells

Hepatocarcinomaisoneofthemostcommonmalignancieswithpoorprognosis.Itafflictsabout1.25milIionpeopleworldwide.ThereareatleastlOOOoomorbidityand1lOOOOmortalityeachyearinChinaLl].Althoughmultipletreatmentmodali-tieshavebeenappliedtolivercancer[2],thecancerremainsoneofthetumorsthataredifficulttobecured.Itbecomesevenmoredifficulttobecuredwhenmultiplefocioftumoranddistantmetastasisoccur[a]-Sincethemajorityofpatientswithlivercancerarenotcandidatesforcurativesurgery,chemotherapyandradiotherapy['J,t…     

自然希伤（NK）细胞抗大鼠实验性肿瘤肺转移疗效的观察

Rat spleen cells with NK activity were enriched by discontinuous percoll density gradient centrifugation. Morphologically, about 50% were large granular lymphocytes (LGL), and the majority of these were OX8+ and Asialo GM1+. Cytotoxicity assays in vitro showed that the activity of enriched NK cells was significantly higher than that of unseparated rat spleen cells. Intravenous administration of enriched NK cells plus intraperitoneal crude IL2 led to the successful regression of pulmonary metastasis Walker 256 carcinosarcoma in rats. The effect was much stronger than that caused by unseparated spleen cells plus IL2. The results indicate that adoptive therapy using NK cells instead of spleen cells, in combination with exogenous IL2, might improve the efficiency of tumor immunotherapy.     

The effect of Astragapolysaccharide on the lymphocyte proliferation and airway inflammation in sensitized mice

Ａｉｒｗａｙｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｂｙｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｓ,ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓａｎｄａｃｔｉｖａｔｅｄＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ,ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｆｅａｔｕｒｅｓｏｆａｓｔｈｍａ...     

Walker256胫骨癌痛模型大鼠的脾脏T淋巴细胞功能评价

目的胫骨内注射Walker256肿瘤细胞制备骨癌痛大鼠模型,观察其脾脏T淋巴细胞的功能变化。方法健康雌性SD大鼠41只分两批实验进行。第一批实验动物16只,完全随机分为PBS组和模型组,模型组以胫骨内注射Walker256肿瘤细胞建立骨癌痛模型,PBS组仅注射相同剂量的无菌PBS。动态观察两组大鼠造模前、造模后4、6、8、10、12、14、16、18、20 d十个时间点的机械缩腿阈、热辐射刺激潜伏期和自发性疼痛。第二批实验动物25只,完全随机分为空白对照组、PBS组和模型组,观察各组造模后20 d脾脏T淋巴细胞增殖功能,T淋巴细胞及其亚群含量。结果第一批实验大鼠:造模前各组大鼠患侧足跖机械缩腿阈、热辐射刺激潜伏期和自发性疼痛差异无显著;造模后,模型组患侧足跖缩腿阈和自发性疼痛于模后4 d开始明显低于PBS组,并在整个实验过程中均低于PBS组,而其热辐射刺激潜伏期仅造模后8 d、10 d和12 d与PBS组比较有差异,其他时间点虽低于PBS组,但差异无显著性。第二批实验大鼠:PBS组大鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力,T淋巴细胞(CD3)及其亚群(CD4、CD8)含量与空白对照组比较均差异无显著性;模型组大鼠的上述各项指标均少于空白对照组和PBS组,且其T淋巴细胞增殖能力显著弱于空白对照组和PBS组,CD3含量明显少于空白对照组。结论骨癌痛大鼠模型可出现明显的机械痛觉异常和自发性疼痛,其热痛觉异常仅发生在骨癌痛的中期;骨癌痛模型大鼠脾脏T淋巴细胞含量及其亚群均有不同程度的减弱。     

腺病毒介导多基因对胆管癌细胞凋亡的诱 导和肝细胞毒性损害

目的：研究腺病毒介导的多基因（ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 凋亡的诱导作用和对正常肝细胞的作用。方法：应用ＴＵＮＥＬ细胞凋亡检测法和光镜观察,分析同时含ＧＭ－ＣＳＦ、Ｂ７－１、ｐ５３、ＩＬ－２ ４ 种目的基因的重组腺病毒载体（Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ）对胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９ 和肝细胞系Ｌ０２的作用以及对大鼠肝脏的毒性损害。结果：Ａｄ－ｍｕｌｔｉｇｅｎｅｓ与化疗药物顺铂协同,能诱导３０％ 左右的ＱＢＣ９３９发生凋亡,并对肝细胞系Ｌ０２ 和大鼠肝细胞无明显毒性损害。结论：Ａｄ－ｍ ｕｌｔｉｇｅｎｅｓ能诱导胆管癌细胞ＱＢＣ９３９ 发生凋亡,且与化疗药物顺铂具有协同增强作用。初步分析对人肝细胞及大鼠肝脏无明显毒性损害,具有一定的临床应用前景。     

调和肝脾法对肠易激综合征免疫学作用机制研究

目的：观察调和肝脾法对肠易激综合征患者免疫学指标的作用。方法：临床选择腹泻型肠易激综合征患者为研究对象,治疗前后分别检测患者血中IgG、IgA、IgM、C3、C4;血T淋巴细胞总数与亚群数目;IL-2水平,并设正常对照组。结果：腹泻型肠易激综合征患者治疗前血清IgM含量明显升高,外周血总T淋巴细胞、T8^＋细胞数目显著降低;淋巴细胞转化功能明显低下,IL-2低于正常组,经调和肝脾法治疗后过高的IgM含量显著下降（P〈0．01）,淋巴细胞转化功能增强,抑制性T淋巴细胞（T8^＋）恢复正常,IL-2也接近正常水平。结论：腹泻型肠易激综合征患者体液免疫亢进,细胞免疫功能低下,免疫调节机制紊乱,调和肝脾法中药能抑制某些亢进的体液免疫指标,增强细胞免疫功能,从而起到调节免疫功能的作用。     

IL-2-PE66~(4Glu)融合蛋白生物学活性测定

ＩＬ－２－ＰＥ６６４Ｇｌｕ是由白介素２同改构的绿脓杆菌外毒素通过基因融合构成的嵌合蛋白。我们研究了它对ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾母细胞和ＰＨＡ激活的人外周血淋巴细胞的细胞毒活性，结果显示其半数抑制剂量（ＬＤ５０）分别是５０ｎｇ／ｍｌ和２０ｎｇ／ｍｌ，而对ＩＬ－２Ｒ细胞则无明显的作用；同时，探讨了ＩＬ－２的浓度、ＭＴＴ浓度及作用时间对实验结果的影响     

胎肝细胞输注对W_(256)大鼠化疗后骨髓造血功能恢复的影响

对环磷酰胺(CTX)化疗后的瓦克癌肉瘤大鼠采用胎肝细胞输注(FLI)观察骨髓造血功能的变化。FLI 组和 CTX+FLI 组骨髓造血细胞的~3H-TdR 掺入量分别高于生理盐水组和 CTX 组(P<0.01和 P<0.05),CTX+FLI 组外周血白细胞计数和网织红细胞计数明显高于 CTX 组(P<0.001和 P<0.05)。FLI 具有促进化疗后骨髓造血功能恢复的作用。