经膀胱灌注阳离子脂质体介导的HVS-TK基因对大鼠膀胱癌的杀伤作用

目的观察阳离子脂质体介导的HSV—TK基因经尿道膀胱灌注对大鼠膀胱肿瘤体内杀伤作用。方法N-甲基亚硝基脲(MNU)膀胱灌注诱导雌性Wistar大鼠膀胱肿瘤。经尿道HSV—TK基因膀胱灌注后，RT—PCR检测肿瘤组织中TK基因表达；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡；荷瘤膀胱总重量测定。结果HSV—TK基因经尿道膀胱灌注后．RT—PCR检测膀胱肿瘤组织有TK基因mRNA表达；TUNEL法凋亡检测，荷瘤膀胱总重量测定，提示治疗组与对照组差异有显著性。结论经尿道膀胱灌注阳离子脂质体-TK复合物可转导TK基因；联合GCV治疗，肿瘤生长被抑制；诱导肿瘤细胞凋亡可能是HSV—TK／GCV系统作用机理之一。     

逆转录病毒介导的HSV-TK基因对人骨肉瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨骨肉瘤基因治疗的可行性。方法 采用逆转录病毒介导的HSV-TK基因转移和GCV治疗的方法进行研究。结果 成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK;采用DOTAP将其转入PA317细胞中进行包装,筛选,并进行病毒滴度测定。收获病毒上清体外感染骨肉瘤细胞株OS732和SAOS-2。分别用PCR和RNA斑点杂交的方法证明假病毒中不含有复制活性病毒,HSV-TK基因已整合到宿主细胞基因组中,并获得表达,MTT比色法测定结果显示GCV对OS732TK和SAOS-2TK细胞均有明显的杀伤作用。且前者强于后者,旁观者效应在高细胞密度接种条件下强于低细胞密度,在SAOS-2细胞中的作用强于OS732。结论 HSV-TK/GCV基因治疗系统可为骨肉瘤的治疗提供新途径。     

逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用

目的：探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 应用PA317细胞包装的逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统,在体外以逆转录病毒上清感染法将TK基因导入MKN28人胃癌细胞,并初步观察更昔洛韦（GCV）对转染TK基因的MKN28胃癌细胞的杀伤作用。结果：TK基因可成功转导入MKN28细胞,且对细胞的生长状态无明显影响。但对GCV的敏感性却显增加;同时还观察到显的“旁观效应”。结论：逆转录病毒介导的HSV-TK系统对人胃癌细胞有较高的转染效率,GCV对转染阳性的胃癌细胞有显的杀伤作用。     

阳离子脂质体介导的反应c—myb寡核苷酸对脑胶质瘤生长的抑制作用研究

目的：观察阳离子脂质体lipofectAMINE介导的反义c-myb寡核苷酸（LipoAON)对肿瘤生长的影响。方法：取雄性Wistar大鼠48只，行脑内C6胶质瘤接种，术后6天，将携瘤大鼠随机分成LiPoAON组，反义c-myb寡核苷酸组（AON组），阳离子脂质体lipofectAMINE组（Lipo组）和生理盐水对照组（NS组），每组各12只，经大鼠右股静脉给药，间隔1天后，再次用同法经大鼠左股静脉等量给药，给药后严密观察各组大鼠饮食，四肢活动及体重变化情况，并于给药后第4天和第10天每组分别处死6只大鼠，进行肿瘤的生长情况的大体形态学观察。结果：LipoAON组在静脉给药期间及停药后的短期内其肿瘤生长被明显抑制,c-myb表达下调，而AON组，Lipo组与NS组相比，其肿瘤生长未见抑制现象，c-myb表达亦未见下调，但随着停药时间的延长，LipoAON对肿瘤的抑制作用下降，结论：（1）阳离子脂质体LipofectAMINE作为c-myb AON转移载体，使水溶性c-myb AON容易透过BBTB进入瘤内发挥治疗作用，且具有操作简单，安全，转染率高等特点；（2）LipoAON对C6胶质瘤生长有明显抑制作用，用反义技术抑制c-myb的表达在胶质瘤的治疗中具有研究前景，（3）LipoAON对胶质瘤生长的抑制作用随时间延长而下降，如何让c-myb AON在瘤内高效，持久，稳定地表达和发挥治疗作用，是值得进一步探讨的课题。     

阳离子脂质体介导β干扰素基因转染对人胶质瘤细胞的抑制作用

目的:建立阳离子脂质体载体,介导β干扰素(IFN-β)基因转染人胶质瘤细胞系,观察其生长抑制作用.方法:以反相蒸发法制备含IFN-β的阳离子脂质体载体,转染SK-MG-1胶质瘤细胞系.MTT法观察其生长抑制情况,流式细胞技术检测肿瘤细胞的凋亡.结果:阳离子脂质体介导IFN-β基因转染可抑制SK-MG-1细胞的生长,抑制作用强于IFN-β蛋白.IFN-β蛋白和基因转染可以诱发SK-MG-1细胞的凋亡.结论:阳离子脂质体可作为一种有效的载体应用于胶质瘤的基因治疗中.IFN-β可抑制胶质瘤细胞系SK-MG-1的生长,诱发凋亡.     

B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的：探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）和共同刺激因子Ｂ７基因联合作用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法：应用重组技术,构建分别携带ＨＳＶ－ＴＫ,Ｂ７及ＨＳＶ－ＴＫ／Ｂ７双基因的逆转录现毒载体。以ＳＨＺ－８８细胞细胞株建立乳腺癌动物模型,随机分为组、ＴＫ组、Ｂ７组及ＴＫ／Ｂ７组,每组２０只。２周后于瘤体内分别注射转染有空载及不同的重组载体的乳腺癌细胞,３天后于腹腔内连续     

阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用

目的观察阳离子脂质体介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒载体,用阳离子脂质体ＬｉｐｏｆeｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导的含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒ＤＮＡ分别体外转染小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体－ＤＮＡ复合物,观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性,转染效率为１０％左右,瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子的治疗效果较佳。结论ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用,ＤＯＳＰＥＲ的效果较好。     

阳离子脂质体基因载体的研究进展

肿瘤基因治疗的最大挑战之一是研制安全有效的基因转染载体。基因治疗载体一般分为病毒性载体和非病毒性载体。由于病毒型载体存在安全性问题,目前非病毒性载体的研究越来越受到人们的重视。脂质体作为常用的非病毒性载体容易制备,安全性高,但亦存在质控要求高,体内基因导入效率较低,且无靶向性,使得其应用受到限制。pH敏脂质体、阳离子脂质体等大大提高了脂质体的转运效率,也为非病毒载体在临床上的应用开辟了广阔的前景,本文就阳离子脂质体作为基因载体的研究予以综述。     

阳离子脂质体介导血管内皮生长因子的基因表达

以ＲＴ－ＰＣＲ自人胎肝中克隆和筛选血管内皮生长因子全长ｃＤＮＡ，测序鉴定正确后，插入真核表达载体ｐＡｄＣＭＶｌｉｎｋ１中的ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ位点。用ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮＥ体外介导转染ＣＨＯ细胞，收集转染后２４ｈ至第５ｄ的培养上清，用ＲＴ－ＰＣＲ检测转染细胞中外源ＶＥＧＦ１６５基因的转当，Ｍｉｌｅｓ试验检测细胞培养上清中ＶＥＧＦ的生物活性。     

泌尿系统肿瘤HSV-TK基因治疗的研究进展

目前肿瘤的基因治疗越来越成为肿瘤防治研究中的一个活跃领域 ,ＨＳＶ ＴＫ基因是典型的自杀基因 ,现在该基因已被广泛应用于各种肿瘤治疗研究 ,美国等国家正式批准该基因进入临床治疗肿瘤 ,包括脑胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌等 ,其他如肝癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌等也正在研究中。本文就近年来该基因在泌尿系统肿瘤中的应用进展作一简介。1　ＨＳＶ ＴＫ基因简介　　单纯疱疹病毒 胸苷激酶 (ＨＳＶ ＴＫ) /ＧＣＶ(或ＡＣＶ)系统是目前研究最多、进展最快的一种自杀基因系统 ,单纯疱疹病毒(ＨＳＶ)染色体上有编码胸苷激酶的基…     

阳离子脂质体介导小干扰RNA转染EOMA细胞时转染条件的优化

目的 优化在阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000介导下将小鼠NF-κB的小干扰RNA（siRNA）转染入EOMA细胞时的转染条件.方法 将1.0 μl和1.5 μl的Lipofectamine^TM2000与20 pmol、30 pmol、40 pmol、50 pmol 、60 pmol的带荧光标记的siRNA分别组合,制备成相应的转染混合物,转染小鼠血管瘤内皮细胞（EOMA细胞）,于转染24 h后在荧光显微镜下计数阳性细胞率、MTT法检测各转染条件下EOMA的细胞活性.结果 在siRNA量相同的情况下,分别采用1.0 μl和1.5 μl的Lipofectamine^TM2000进行转染其转染效率、细胞毒性无明显差异（P＞0.05）;转染混合物中siRNA浓度为50 pmol时,转染效率最高达到86%,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高并不明显;siRNA浓度为60 pmol时转染混合物表现出较高的细胞毒性.结论 以1.0 μl Lipofectamine^TM2000与50 pmol的siRNA组成转染混合物可以实现对EOMA细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

新型阳离子脂质体的制备及其转染效率的测定

目的制备以新型细胞转染素为阳性成分的阳离子脂质体,作为基因载体,用于基因转染的实验研究和肺部疾病的基因治疗.方法用薄膜法制备N4-精胺胆固醇羰酰氨阳离子脂质体,通过电镜观察和电泳,检测其形态、结构和细胞转染条件,并对SPC肿瘤细胞进行转染,评估其转染效率.结果制备的新型阳离子脂质体具有良好的微囊形态,当脂质体∶质粒为(6～8)∶1时,其转染效率可达60%.结论成功制备了新型阳离子脂质体,在适当条件下其具有较高的转染活性,为以后的基因转染和基因治疗打下基础.     

腺病毒介导的HSV-TK基因系统联合羟基喜树碱对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的HSV-TK系统联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌细胞的体外杀伤作用.方法 使用含有HSV-TK基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞T-24细胞,表达GFP为转染成功标志,同时观察转染率,PCR检测TK表达.以正常T-24细胞为空白对照,转染成功后分别加入GCV、GCV HCPT,采用MTT法测定单纯HCPT作用于人膀胱癌细胞72 h细胞增殖抑制率、各组治疗转染后人膀胱细胞24、48、72 h细胞存活率;流式细胞仪检测GCV(0.5 mg/ml) HCPT(10 mg/L)作用T-24细胞4h后的凋亡情况.结果 随着浓度的增高,HCPT对T-24细胞的生长抑制率逐渐增高,HCPT浓度为0.01 mg/L时T-24生长抑制率为14%,50 mg/L时T-24生长抑制率为63%,当HCPT浓度大于100 mg/L时,抑制作用无明显增加(P=0.216).GCV组、GCV HCPT各组对转染后细胞有明显杀伤作用(P=0.00),GCV HCPT组随HCPT浓度增高和作用时间的延长,杀伤效率明显增高.0.5 mg/ml GCV单独作用于转染后的膀胱癌细胞72 h后,细胞存活率为34.6%,GCV(0.5 mg/m1) HCPT(10 mg/L)组的细胞存活率仅为8.07%(P=0.00).GCV 10 mg/mlHCPT作用后4h,T-24细胞出现M1期前典型的细胞凋亡峰,凋亡率达52.93%.结论 HSV-TK/GCV系统联合HCPT治疗能增强自杀基因系统对人膀胱癌的杀伤作用,能够良好地诱导人膀胱癌细胞的凋亡.     

The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

腺病毒介导HSV-tk/GCV系统杀伤脑胶质瘤C6细胞

目的 :观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /丙氧鸟甘 (herpessimplexvirusthymidinekinase/ganci clovir HSV tk/GCV)系统对脑胶质瘤细胞的杀伤作用 .方法 :将AdCMVLacZ感染胶质瘤细胞C6,X gal染色 ,测定腺病毒的转染率 .AdCMVtk感染C6细胞后加入 10mg·L-1GCV ,观察肿瘤细胞存活率及旁观者效应 .结果 :tk基因对C6细胞的转染率随着腺病毒的感染复数 (MOI)量增加而增加 (r=0 .819,P<0 .0 5 ) ,10 0 %转染所需要的MOI为 10 0 .AdCMVtk/GCV对C6细胞的杀伤强度与AdCMVtk的量成正相关 (r =0 .870 ,P <0 .0 5 ) .此杀伤作用存在旁观者效应 ,且较强 .结论 :腺病毒介导的HSV tk/GCV系统具有杀伤脑胶质瘤的作用     

神经胶质瘤中Rb基因存在状态检测

利用Ｒｂ３．８Ｋｂ特异性ｃＤＮＡ探针，采用ＳｔｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法，用脑外伤病人脑组织和正常胎盘组织作为对照，结果显示１２例神经胶质瘤标本中均未见有Ｒｂ基因的丢失或异常。检测结果表明Ｒｂ基因在神经胶质瘤中无显著缺失，但是否存在有Ｒｂ基因的微小缺失，点突变等当需用其它方法进一步证实。     

自制多聚胺阳离子脂质体转染效率及细胞毒性的评价

目的: 评估制备的多聚胺阳离子脂质体转染哺乳动物细胞的转染效率及细胞毒性. 方法: 多聚胺阳离子脂质TC-Chol与中性磷脂DOPE以3: 1摩尔比,制备多聚胺阳离子脂质体,通过转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2-EGFP入HeLa细胞, Hep2细胞,倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达,通过MTT法,检测细胞存活分数,并以Lipofectamine2000为对照,评价制备阳离子脂质体转染效率及细胞毒性. 结果: 多聚胺阳离子脂质体转染效率略低于Lipofectamine 2000,但细胞毒性较低,为一种相对高效低毒的阳离子脂质体. 结论: 多聚胺阳离子脂质体为一种相对高效低毒的阳离子脂质体,在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的前景.     

重组腺相关病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的制备大鼠脑胶质瘤模型,注射腺相关病毒血管抑素基因重组载体(AAV-AS),观察对脑胶质瘤的治疗效果。方法皮下接种C6脑胶质瘤细胞制备大鼠胶质瘤模型,皮下注射AAV-AS,24天后取材,观察瘤重、肿瘤坏死率和血管计数,RTP-CR法检测AS转录。结果AAVAS治疗组肿瘤体积明显缩小,坏死明显,血管计数减少,RT-PCR法检测到AS转录。结论AAV-AS在大鼠体内可以表达,通过抑制血管生成而抑制肿瘤生长,促进肿瘤坏死。     

Effect of Wild-type p53 Gene Transfection on the Growth and Radiotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

Ingliomas,p53mutationsareamongthemostfrequentlyobservedgeneticfindings[1].Asatumorsuppressorgene,p53mutationcanleadtouncon trolledcellproliferation[2].Itwasreportedthattransfectionofwild typep53genemayenhancetheradiosensitivityoftumorcellscontainingwild typep53[3].Inthisstudy,wild typep53genewasde liveredintohumangliomacelllineU251byusingliposome mediatedtransfectiontechniquetoob servetheeffectofp53genetreatmentandcom binedtreatmentofp53andirradiationtherapyongliomacell.1MATERIALSANDMET…