白芍总苷对胶原性关节炎大鼠滑膜β抑制蛋白的影响与其抑制滑膜细胞增殖的关系

目的探讨白芍总苷(TGP)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜β抑制蛋白1、2表达的影响与其抑制成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的关系。方法采用CCⅡ诱导大鼠CIA模型,TGP(25、50、100 mg.kg-1.d-1)、雷公藤多苷(GTW)(40 mg.kg-1.d-1)灌胃给药(d 14～28),进行大鼠多发性关节炎指数评分;MTT法检测FLS的增殖;Western blot法检测不同剂量TGP体内给药对β抑制蛋白1、2表达的影响。结果 TGP(25、50、100 mg.kg-1,ig,d 14～28)可明显减轻CIA大鼠多发性关节炎指数,抑制FLS增殖反应;TGP可下调β抑制蛋白2的表达;TGP对β抑制蛋白2表达的影响与其抑制FLS增殖作用呈高度相关。结论 TGP可抑制FLS的增殖,其机制可能与其下调β抑制蛋白2的表达有关。     

芍药苷通过调节前列腺素E_2受体抑制大鼠成纤维滑膜细胞增殖

目的从前列腺素E2(PGE2)受体EP2和β-arrestin 2的表达分布变化特点,探讨PGE2诱导大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)异常增殖的分子机制以及芍药苷(Pae)的作用。方法组织块培养法培养大鼠FLS,3H-TdR参入法检测FLS增殖情况,放免法测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度,流式细胞术检测FLS胞膜EP2受体水平,Western blot法检测FLS EP2和β-arrestin 2总蛋白和胞膜蛋白的表达。结果PGE2(125μg.L-1)刺激24 h,诱导FLS的异常增殖,降低细胞内cAMP浓度和胞膜EP2受体水平,但上调胞膜β-ar-restin 2表达和FLS中EP2、β-arrestin 2的总表达,Pae可抑制FLS过度增殖,恢复cAMP水平和胞膜EP2表达,下调胞膜β-arrestin 2和总EP2、β-arrestin 2水平。结论 Pae可能通过抑制β-arrestin 2的表达和转膜,减少EP2受体内吞而升高cAMP,抑制FLS在PGE2作用下的异常增殖。     

IL-1α对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞功能的影响及木瓜苷的作用

目的探讨rIL-1α对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞功能的影响及木瓜苷(GCS)的作用。方法采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型,分离培养大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),用MTT法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在10μg.L-1的rIL-1α(1、2、4、8、24 h)体外刺激下,AA大鼠FLS产生的PGE2水平升高,cAMP水平在1~8 h升高,24 h反而下降。GCS(100、50、25、12.5 mg.L-1)体外给药可不同程度的抑制FLS的增殖反应和PGE2的产生,升高cAMP水平。结论rIL-1α可以促进AA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2,GCS能明显逆转rIL-1α对FLS的影响。     

白芍总苷对IL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rIL-1α(0.01、0.1、1、10μg.L-1)和1μg.L-1rIL-1α(3、6、12、24h)体外刺激下,CIA大鼠FLS产生的PGE2和cAMP水平均升高;TGP(2.5、12.5、62.5、125、250mg.L-1)体外给药可不同程度地抑制FLS的增殖反应和PGE2产生,而进一步升高cAMP水平。结论在不同浓度同一时间和同一浓度不同时间的rIL-1α体外刺激下,FLS产生PGE2和cAMP水平均升高;TGP体外作用FLS可抑制其增殖和产生PGE2,进一步升高cAMP的水平。     

成纤维样滑膜细胞原代培养及其在类风湿关节炎治疗机制研究中的应用进展

目的:综述成纤维样滑膜细胞(FLS)及其在类风湿关节炎(RA)药效作用机制研究中的应用进展。方法:以"成纤维样滑膜细胞""类风湿关节炎""中药单体""滑膜细胞""Arthritis""Fibroblast-like synoviocytes"为关键词,组合检索2006年1月-2015年10月在Pub Med、中国知网、维普等数据库中对FLS原代培养及其在RA治疗机制研究中的应用文献进行总结和归纳。结果:共查阅到相关文献68篇,其中有效文献32篇。FLS原代培养成功率较高,培养方法多样且日趋完善,在RA的治疗机制研究中得到了广泛的应用;同时,中药及化学合成药、激酶抑制剂等可通过NF-κB、Akt等信号通路抑制炎症因子或相关蛋白基因从而达到治疗RA的目的。结论:FLS体外试验在RA相关研究中得到广泛的应用,治疗药物如中药及化学合成药、激酶抑制剂通过细胞分子水平研究在信号通路的介导下都对RA有治疗作用。     

芍药苷对重组人白细胞介素1α诱导的人成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的研究芍药苷(Paeoniflorin,Pae)对重组人白细胞介素1α(rhIL-1α)诱导的人成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。方法采用组织块培养法分离培养正常人FLS,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)检测FLS产生的TNF-α含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测FLS产生的PGE2和cAMP水平。结果在rhIL-1α(0.01、0.1、1、10、100μg.L-1)的刺激下FLS增殖能力增强,产生的TNF-α和PGE2水平均不同程度升高,cAMP水平下降。Pae(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol.L-1)体外作用可不同程度抑制由rhIL-1α诱导的FLS增殖,降低FLS产生的TNF-α和PGE2水平,升高cAMP水平。结论rhIL-1α体外刺激可以促进正常人FLS的增殖和分泌功能;Pae可以逆转rhIL-1α对人FLS功能的影响。     

丹参注射液诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞NF-κB表达研究

目的:探讨丹参注射液对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLSs) P65和P50表达及其在细胞内定位的影响.方法:RA患者关节液原代培养获取FLSs,终浓度为0、0.2和0.4 mg/mL的丹参注射液作用24 h后,采用细胞免疫化学方法对P65和P50表达定位进行分析;提取核蛋白,采用免疫印迹方法检测P65和P50表达.结果:细胞免疫化学结果显示,在无药物刺激的条件下,P65和P50均主要集中在细胞质中;当经0.2 mg/mL丹参注射液作用24 h,P65和P50均有向细胞核转移趋势;当丹参注射液浓度为0.4 mg/mL时,P65和P50在细胞核中有明显聚集.免疫印迹结果表明,P65和P50在细胞核中表达量随丹参注射液浓度升高而增加,并当丹参注射液浓度为0.4 mg/mL时,二者的表达相比药物作用前显著增加,具有统计学意义(P＜0.05).结论:丹参注射液可调节RAFLSs P65和P50从细胞质向细胞核转移.     

羟氯喹通过核因子-κB信号通路抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞白细胞介素-6的表达

目的探讨羟氯喹(HCQ)对活化的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)炎症因子白细胞介素(IL)-6表达的影响及分子机制研究。方法 RA-FLS细胞系MH7A细胞用10 ng/ml的肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导活化后,采用不同浓度的HCQ(2.5,5,10μmol/L)处理,使用MTS的方法检测细胞活力;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测培养液中IL-6的浓度,采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测IL-6 mRNA的表达水平。分子机制研究方面,采用蛋白质印迹法检测核因子(NF)-κB信号通路关键分子p-p65,p65蛋白的表达情况,qPCR检测NF-κB抑制剂对IL-6mRNA表达的影响。结果与空白对照组相比,TNF-α刺激MH7A后IL-6的分泌和mRNA表达显著升高(P<0.01),且p65磷酸化水平明显升高。用不同浓度的HCQ处理(2.5,5,10μmol/L)后,IL-6的分泌和mRNA表达均下降,呈浓度依赖性;同时p65蛋白的磷酸化水平明显降低,同样呈浓度依赖性。提前给予NF-κB激动剂佛波醇酯(PMA)预处理可逆转HCQ对MH7A细胞IL-6表达的抑制作用。结论 HCQ主要通过NF-κB信号通路抑制TNF-α诱导的MH7A细胞IL-6分泌和mRNA表达。     

芍药苷对肿瘤坏死因子-α诱导的人成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的 观察芍药苷(抗炎类中药活性成分)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人成纤滑膜细胞(FLS)功能的影响.方法 体外培养人FLS,考察TNF-α浓度在0.02-20μg·L-1时对FLS的增殖反应和FLS分泌前列腺素E2、环磷腺苷和白介素-1β的影响;加入芍药苷(1×10-8～1×10-4mol·L-1)后,观察对其增殖反应和分泌功能的影响;用MTT法检测FLS的增殖反应,用放射免疫测定法检测白介素-1β,用酶联免疫吸附法检测前列腺素E2和环磷腺苷的水平.结果 TNF-α浓度在0.02～20.00μg·L-1时,均显著抑制FLS分泌环磷腺苷,显著促进前列腺素E2和白介素-1β的分泌;芍药苷能显著抑制TNF-α对FLS的促增殖反应,明显上调降低的环磷腺苷水平,明显下调升高的前列腺素E2和白介素-1β水平,且具有一定的浓度依赖性.结论 TNF-α可以促进FLS的增殖,降低环磷腺苷,升高前列腺素E2和白介素-1β;芍药苷则能明显逆转TNF-α对FLS的影响.     

雷帕霉素通过调控NLRP3炎症小体抑制成纤维样滑膜细胞增殖

目的 探讨自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)通过调控含核苷酸寡聚化结构域样受体(NLR)家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)炎症小体对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法 培养FLS并分为3组：对照组、TNF-α组、RAPA组。采用CCK-8法检测细胞活力。采用免疫荧光法和透射电镜(TEM)检测FLS细胞自噬情况。采用Western blotting法检测NLRP3炎症小体关键蛋白NLRP3、caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1、P62的表达。结果 与对照组比较,TNF-α组FLS细胞明显增殖(P<0.05),并激活NLRP3炎症小体(P<0.01)。与TNF-α组比较,RAPA组FLS增殖明显抑制(P<0.05),LC3-II和Beclin1表达水平明显上调(P<0.01),P62、NLRP3和caspase-1的表达水平均降低(P<0.05)。结论 RAPA可以抑制TNF-α诱导的FLS增殖,其机制可能与提高自噬、抑制NLRP3炎症小体的激活有关。     

成纤维样滑膜细胞能量代谢异常关键分子在类风湿关节炎中的研究进展

代谢组学研究显示类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者代谢紊乱。然而,与RA相关单个类型细胞的代谢特征却很少被报道。成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)是关节滑膜处主要的细胞类型,通过侵袭关节软骨,导致关节破坏。在炎症组织微环境中,RA-FLS葡萄糖、脂质、氨基酸等关键营养素的代谢发生改变,这些代谢变化参与了FLS异常活化和滑膜炎症。该文总结了近年来关于RA-FLS能量代谢异常关键分子的研究进展,为阐明RA病理机制及发现新的药物靶点提供依据。     

尕代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞及成熟细胞系生长特性的比较

目的通过对原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞及成熟细胞系生长特性进行比较,为类风湿关节炎（RA）研究用细胞提供多重选择。方法分离培养原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞,传至第三代,与成熟细胞系镜下观察细胞形态。此外,以相同细胞数接种,观察细胞增殖速度。结果形态上原代类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞与成熟细胞系有所差别,且增殖速度细胞系快于原代细胞。结论成熟细胞系可在一定程度上反映原代细胞的状态,并用于RA相关疾病研究。     

黄芩苷经TLR2/NF-κB途径减轻类风湿关节炎大鼠滑膜炎

目的评价不同剂量黄芩苷对SD大鼠类风湿关节炎的疗效,并探讨其可能的作用机制。方法制备SD大鼠类风湿关节炎模型,测量后足的肿胀度;通过不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察膝关节滑膜HE染色切片病理变化;实时荧光定量PCR测定膝关节滑膜组织TLR2及MyD88mRNA表达;Westernblot测定滑膜组织TLR2、MyD88及NF-κBp65蛋白表达。结果黄芩苷30、60mg·kg~(-1)均能明显减弱滑膜组织中成纤维细胞的增殖及炎性损伤程度,明显降低滑膜组织TLR2及MyD88mRNA表达(P<0.01),明显减弱TLR2、MyD88及NF-κBp65蛋白表达(P<0.05)。结论黄芩苷具有良好的抗类风湿关节滑膜炎作用,其可能是通过抑制TLR2-NF-κB信号通路的活化来实现的。     

来氟米特活性代谢物teriflunomide联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的影响

目的观察来氟米特活性代谢物teriflunomide联合甲氨蝶呤对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及其破骨细胞分化因子表达的影响。方法滑膜组织分离培养滑膜成纤维细胞,加入不同浓度药液,使得终浓度分别为0.1,0.01,0.001 mg.mL-1 teriflunomide,0.1,0.01,0.001 mg.mL-1甲氨蝶呤,0.1 mg.mL-1 teriflunomide+0.1 mg.mL-1甲氨蝶呤,0.01 mg.mL-1 teriflunomide+0.01 mg.mL-1甲氨蝶呤,0.001 mg.mL-1 teriflunomide+0.001 mg.mL-1甲氨蝶呤,每组重复3个复孔,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞增殖的影响;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测药物对滑膜成纤维细胞核因子-κB(NF-κB)受体活化因子配体、骨保护素mRNA表达水平的影响。结果与对照组比较,药物处理后滑膜成纤维细胞的吸光度(A)值均有所降低,与单独用药组比较,0.1 mg.mL-1teriflunomide联合0.1 mg.mL-1甲氨蝶呤组A值降低最为显著(P<0.05),且该处理组骨保护素mRNA表达升高,NF-κB受体活化因子配体mRNA表达降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论来氟米特活性代谢物teriflunomide与甲氨蝶呤联合能够协同抑制滑膜成纤维细胞增殖,调节骨破坏相关基因表达,这可能是来氟米特与甲氨蝶呤联用治疗类风湿性关节炎的机制之一。     

肿瘤坏死因子-α对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用*

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞功能的影响及白芍总苷的作用。方法:制备大鼠CIA模型,并分离培养正常大鼠和CIA大鼠关节成纤维样滑膜细胞(FLS)。考察TNF-α在0.02～20μg.L-1浓度时对培养的正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)和白介素1β(IL-1β)的影响,选择TNF-α的最佳刺激浓度。观察不同浓度(15.625～250 mg.L-1)的白芍总苷在TNF-α的最佳刺激浓度时对CIA大鼠FLS的增殖反应和FLS分泌PGE2,cAMP和IL-1β的影响。用MTT法检测FLS的增殖反应,放射免疫测定法检测PGE2,cAMP和IL-1β的水平。结果:TNF-α在20μg.L-1的浓度时均显著抑制正常大鼠FLS和CIA大鼠FLS分泌cAMP,显著促进PGE2和IL-1β的分泌,故选20μg.L-1为TNF-α的最佳刺激浓度。TGP能显著抑制20μg.L-1TNF-α对CIA大鼠FLS的促增殖反应,明显上调降低的cAMP水平,明显下调升高的PGE2和IL-1β水平,且具有一定的浓度依赖性。结论:TNF-α可以促进CIA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2和IL-1β。TGP则能明显逆转TNF-α对FLS的影响。     

儿茶素对IL-1α诱导佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的:研究儿茶素(catechin,Cat)对重组大鼠白细胞介素1α(rIL-1α)诱导佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响,并探讨其部分机制。方法:采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型,分离培养大鼠成纤维样滑膜细胞,用MTT法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(R IA)测定FLS产生PGE2和cAMP水平。结果:选择10 ng.mL-1为rIL-1α的最佳刺激浓度,Cat(100,50,25 mg.mL-1)体外给药可不同程度地抑制rIL-1α对AA大鼠FLS的促增殖反应,明显下调升高的PGE2的水平,明显上调降低的cAMP水平。结论:rIL-1α可以促进AA大鼠FLS的增殖,降低cAMP,升高PGE2,Cat能明显逆转rIL-1α对FLS的影响。     

IL-6受体对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞致病信号及功能的抑制作用

目的 观察白介素-6受体（IL-6R）模拟表位肽活化免疫后产生的抗体结合类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）所表达的相应受体对相关致病信号及功能的抑制作用。方法 化学法制备模拟表位肽,后皮下免疫Wistar大鼠,取血清纯化抗体。酶联免疫吸附法评估血清抗体效价,免疫印迹法和免疫荧光法观察模拟表位肽诱导的抗体是否能结合IL-6R并促进其降解,免疫印迹法观察抗体对IL-6下游信号是否有抑制作用,应用CCK8试剂盒和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法观察诱导的抗体对细胞增殖和凋亡能力的影响。结果 IL-6R模拟表位肽免疫动物后获得的抗血清能够有效结合重组IL-6R,该血清经纯化后获得的抗体能够有效结合RA-FLS所表达的自然IL-6R并促进其降解,能进一步抑制下游信号通路、抑制RA-FLS的增殖,下调RA-FLS所具有的抗凋亡能力。结论 IL-6R受体模拟表位肽为潜在的控制RA-FLS恶性行为的多肽药物。     

蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞Bax、Bcl-2的影响

目的观察蜂毒注射液对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(类风湿关节炎-FLS)B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)m RNA和蛋白的影响,探讨蜂毒注射液治疗类风湿关节炎的作用机制。方法滑膜组织取自行关节置换或关节镜手术的4名活动期类风湿关节炎患者,分离出FLS并原代培养,逆转录–聚合酶链反应(RT-PCR)观察Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测Bax、Bcl-2蛋白水平的变化。结果与对照组比较,蜂毒注射液4、8、16 mg/L组能促进Bax mRNA表达(P<0.05),蜂毒注射液8、16 mg/L组抑制Bcl-2 mRNA表达(P<0.05、0.01);蜂毒注射液4、8、16 mg/L组提高Bax蛋白水平,降低Bcl-2蛋白水平(P<0.05、0.01),且有一定的剂量相关性。结论蜂毒注射液可能通过抑制Bcl-2蛋白、促进Bax蛋白的表达,达到促进类风湿关节炎-FLS凋亡的作用。     

雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞线粒体自噬、NLRP3炎症小体活化和细胞焦亡的影响

目的 探究雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLSs）线粒体自噬、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响。方法 将FLSs细胞和类风湿关节炎FLSs细胞进行传代培养。将类风湿性关节炎FLSs细胞采用0、10、20、40 ng/mL雷公藤甲素进行处理。采用蛋白质印迹法（Western blotting）检测线粒体自噬相关蛋白LC3B、p62、PHB2、NLRP3的蛋白表达。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL）-1β和IL-18的水平。采用流式细胞术检测细胞焦亡情况,并采用Western blotting法检测焦亡相关蛋白GSDMD和GSDMD-N表达。结果 采用10、20、40ng/mL雷公藤甲素处理类风湿关节炎FLSs后,雷公藤甲素各剂量组均能显著减弱类风湿关节炎FLSs细胞的线粒体自噬相关蛋白LC3B的表达,上调p62和PHB2的表达;NLRP3表达水平均显著降低,IL-1β和IL-18水平显著降低;细胞焦亡率显著降低;GSDMD蛋白表达显著上升,GSDMD-N蛋白表达下降（P<0.05、0.01、0.001）,且呈剂量...     

3-溴丙酮酸通过AMPK/mTOR信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬失衡的作用北大核心CSCD

目的基于AMPK/mTOR信号通路探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡、自噬的调控作用和机制。方法使用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导体外培养的大鼠FLS来构建类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型。MTT实验检测TNF-α诱导FLS以及3-BrPA治疗FLS的适宜浓度,划痕实验和Transwell实验检测3-BrPA对FLS迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术和JC-1线粒体膜电位实验检测FLS的凋亡情况,mCherry-EGFP-LC3B过表达质粒检测FLS自噬流变化,Western blot检测FLS凋亡/自噬相关蛋白及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果3-BrPA(15μmol·L^(-1))明显抑制了TNF-α(25μg·L^(-1))刺激下FLS的增殖、迁移和侵袭。此外,还促进FLS凋亡、下调FLS线粒体膜电位并阻断FLS的自噬流。Western blot检测结果显示,相比于TNF-α组,3-BrPA上调caspase-3、Bax、P62和p-mTOR/mTOR的表达,下调LC3B、Beclin1、Bcl-2和p-AMPK/AMPK的表达。结论3-BrPA能够在体外调节大鼠FLS凋亡/自噬失衡来抑制其异常活化,其机制可能与抑制AMPK/mTOR信号通路有关。