薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选中的应用

薄层色谱-生物自显影技术(TLC-bioautography)将薄层色谱分离和生物活性测定相结合,是一种活性指导下的快速靶向追踪分离、筛选活性成分的方法。此法操作简单、耗时短、灵敏度和专属性高,常应用于抗细菌、抗真菌、抗氧化,以及对乙酰胆碱酯酶抑制剂、葡萄糖苷酶抑制剂等活性天然产物的筛选。笔者对薄层色谱-生物自显影技术在活性物质筛选方面的应用进行综述。     

新型BCR-ABL激酶抑制剂的研究进展

融合基因BCR-ABL在人体内表达的蛋白质是一种异常的酪氨酸激酶,可导致慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia, CML)。随着对CML发病机制的进一步研究,人们发现开发选择性抑制异常BCR-ABL酪氨酸激酶的化合物是值得关注的研究方向。前三代BCR-ABL抑制剂为正构抑制剂,该抑制剂竞争性阻断ABL蛋白酪氨酸激酶与ATP的结合,阻止其激活下游信号。第四代BCR-ABL抑制剂通过与肉豆蔻酰口袋结合,变构抑制ABL蛋白酪氨酸激酶,具有更强的选择性且保持对耐药性突变蛋白的活性。蛋白水解靶向嵌合(proteolytic targeting chimera, PROTAC)、共价抑制剂和双重靶向抑制剂等新型药物设计策略也为BCR-ABL激酶抑制剂的开发提供了新的方向。本文综述了近年来有关BCR-ABL激酶抑制剂的研究进展,并讨论了各种新型BCR-ABL抑制剂的药物设计策略。     

非小分子蛋白降解靶向嵌合体的研究进展

靶向蛋白降解(targeted protein degradation, TPD)策略作为有前景的新药开发技术之一,已经被学术界和工业界用来解决传统小分子抑制剂无法有效作用的靶向蛋白。蛋白水解靶向嵌合体(proteolytic targeting chimera, PROTAC)已逐渐成为TPD领域研究最为成熟的蛋白质靶向降解技术,其由一个靶蛋白(protein of interest, POI)配体、一个E3连接酶配体以及连接2个配体的连接子构成。POI配体与受体蛋白结合后,PROTAC就会招募E3连接酶对该蛋白进行泛素化,最后通过泛素-蛋白酶体系统将其降解。PROTAC可以针对缺乏明显活性位点的蛋白质进行降解,这些蛋白质往往参与癌症和其他类型疾病的发展,因此PROTAC技术在临床应用方面具有很大潜力。为了更好地实现PROTAC的靶向传递和组织选择性,业界已经开始探索更多的策略,如通过寻找新的E3连接酶和开发相应的配体,研究更多新兴的PROTAC模式进一步促进PROTAC的发展,本文将对这些技术以及相关研究进行讨论。     

大蒜抗氧化活性成分的测定及薄层生物自显影技术分析

目的测定和分析大蒜抗氧化活性成分。方法利用1,1-二苯基苦基苯肼法(DPPH·)测定大蒜灭酶体系和蒜酶激活体系抗氧化活性成分,利用大蒜氨基酸展开系统(正丁醇-冰乙酸-水)、大蒜辣素展开系统(甲苯-乙酸乙酯)和大蒜多糖展开系统(冰乙酸-氯仿-水)对大蒜抗氧化活性成分进行分析。结果大蒜灭酶体系中氨基酸、大蒜多糖和蒜酶激活体系中的大蒜含硫化合物的半数抑制质量浓度(IC50)分别为0.058,0.170和0.068mg·mL-1。大蒜灭酶体系中的蒜氨酸和蒜酶激活体系中的大蒜辣素有抗氧化活性,其他抗氧化活性成分有待进一步确定。结论大蒜中氨基酸和含硫化合物有一定的抗氧化活性,具有研究价值。     

155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化结果的影响

目的 比较重组人干扰素ε(recombinant human interferon-ε,rhIFN-ε)Cys155和rhIFN-εSet155两种蛋白质的回收率和抗病毒活性,以研究155位Cys突变成Ser对IFN-ε纯化和生物学活性的影响.方法 对rhIFN-εCys155和rhIFN-εSer155两种蛋白质分别进行纯化和抗病毒活性鉴定,并进行数据比对.结果 得到rhlFN-εCys155和rhlFN-ε Ser155两种活性蛋白,回收率分别为15.41%和29.18%,抗病毒活性分别为(1.293±0.268)×105IU/mg和(1.026±0.172)×105IU/mg.结论 两种蛋白质相比.突变样品回收率明显高于未突变样品,但氨基酸突变对rhlFN-ε的抗病毒活性没有明显影响.     

弗林蛋白酶(furin)多肽抑制剂的合成研究

目的以绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)Lys活性片段22肽为模板,设计能抑制弗林蛋白酶(furin)的多肽抑制剂。方法根据furin的专一性底物的特定氨基酸序列来改造设计抑制剂,用Fmoc法固相合成了两条多肽抑制剂(MBI 13和MBI 14)。结果纯化的MBI13和MBI14经HPLC和质谱鉴定合成正确,对furin的抑制常数分别为:5.6×10-7M和2.3×10-7M。结论以MBTI Lys片段为模板经过突变和优化设计,得到了较为理想的furin抑制剂,为进一步的药物设计提供依据。     

维生素类药物在肿瘤治疗中的应用

综述维生素类药物的抗肿瘤作用机制和药理作用以及在肿瘤靶向给药系统中的应用。维生素及其衍生物不仅具有良好的抗肿瘤活性和毒副作用小的特点，且有独特的肿瘤靶向性，如叶酸和生物素，其应用于肿瘤靶向给药系统，可大大提高药物疗效及减小药物毒副作用。     

新型β-肽环氧酮类蛋白酶体抑制剂的合成与活性评价

目的 设计合成新型的β-肽类蛋白酶体抑制剂,并对其活性进行评价。方法 根据先导化合物Carfilzomib与蛋白酶体的作用方式,保留其与蛋白酶体结合的关键环氧酮片段,并结合β-氨基酸的特点,采用氨基酸替换、生物电子等排等药物设计的方法,设计一类结构新颖的蛋白酶体抑制剂;采用缩合、氧化、还原等反应,合成系列目标化合物;通过体外酶抑制活性实验检验化合物活性。结果 合成了8个结构新颖的β-肽环氧酮类衍生物,化合物结构经1H-NMR、ESI-MS确证,部分化合物体现了一定的蛋白酶体抑制活性。结论 β-氨基酸作为一种重要的α-氨基酸替换结构,有望能够丰富短肽类蛋白酶体抑制剂的结构类型。     

小分子 c-Met 激酶抑制剂的研究进展

c-Met 激酶与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。c-Met 激酶小分子抑制剂的研究为多种类型肿瘤提供了一种新的靶向治疗手段。该文重点介绍近年来报道的不同结构类型的 c-Met 激酶小分子抑制剂，并对其活性和构效关系进行综述。     

α-芋螺毒素LvIA特定氨基酸的突变对其活性的影响

α-芋螺毒素(α-Conotoxin, α-CTx)作为烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR)的专一性拮抗剂,是研究nAChRs相关药理和生理功能的重要工具。目的 对特异区分α6/α3β2β3和α3β2两种nAChRs亚型的α-CTx LvIA进行研究,确定影响其活性的关键氨基酸位点。 方法 通过序列比对,两步法氧化折叠、双电极电压钳和圆二色谱等技术确定LvIA中影响其活性的关键氨基酸位点,并探索该位点对LvIA影响的机制。结果 确定了LvIA中第五位组氨酸(His,H)的关键作用,当第五位的His分别被丙氨酸(Ala,A)、天冬氨酸(Asp,D)和色氨酸(Trp,W)分别取代后,都会导致LvIA对所有受体亚型的活性丧失。圆二色结果表明该位点的变化对LvIA的二级结构没有显著的影响。结论 第5位His是维持LvIA活性的关键氨基酸残基,该氨基酸极性和侧链的变化均会导致LvIA活性的丧失,但是对其二级结构影响较小。LvIA中第5位氨基酸与nAChR的相互作用力是保证其活性的关键。该结论为基于LvIA设计新型专一作用于乙酰胆碱受体的工具探针改造提供了重要信息。     

以DNA为作用靶追踪分离天然植物药活性成分

目的:从天然植物药中分离活性成分。方法:综述DNA与其靶向分子的作用方式以及DNA为作用靶的生物活性筛选系统跟踪分离天然植物药活性成分的情况。结果:应用DNA为作用靶的生物活性筛选系统跟踪分离天然植物药成分可快速有效地得到活性化合物。结论:DNA与其靶向分子相互作用的研究对阐述抗肿瘤、抗病毒药物及致癌物的作用机理和筛选新的药物活性成分具有重要的意义     

Survivin小分子抑制剂:肿瘤治疗和化学预防的新策略

Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在肿瘤组织中有特异性分布与表达,且与肿瘤的发生发展和预后以及血管生成密切相关,故其靶向抗肿瘤疗法,尤其是其小分子抑制剂作为肿瘤治疗和化学预防的新策略,已成为药学研究领域的热点.概述survivin的结构与活性、功能以及在肿瘤组织中的特异性分布与表达,并按作用机制的不同,分类介绍具代表性的各种survivin小分子抑制剂的研究进展.     

膜活性肽在胞内靶向给药系统中的应用

药物的靶向给药从到达的部位讲可以分为 3级 ,第 1级指到达特定的器官或组织 ;第 2级指到达器官或组织内的特定的细胞 (如肿瘤细胞而不是正常细胞 ,肝细胞而不是Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞 ) ,第 3级指到达靶细胞内的特定的细胞器 (例如溶酶体 ,线粒体 ) [1] 。至今 ,前两级的靶向给药系统研究已经取得了长足的进步。如 80年代发展的微粒类被动靶向给药系统已经在制备方法、质量标准、体内分布、药效、毒性等方面有了许多研究报道。又如很多学者致力于将药物与配体通过共价的或物理的方式相连 ,配体与细胞表面的特异性受体接合 ,而到达器官或组织内…     

蛋白质氨基酸分析新技术在生化新药分析研究中的应用进展

蛋白质是生物体赖以生存的物质，蛋白质由氨基酸所组成，生物体除含有组成蛋白质的各种氨基酸外，还有游离存在的各种氨基酸，由此可见蛋白质和氨基酸与人的生命有极其密切的关系，随着人们对蛋白质氨基酸的研究日趋重视，氨基酸分析技术也就随之得到了迅速发展[1-3]。新技术在生化新药分析研究中的应用一、氨基酸分析；氨基酸分析为测定蛋白质与多肽中氨基酸成分的蛋白质分析方法。先将蛋白质或多肽类新药水解成各成分氨基酸，然后进行定量分析。蛋白质与多肽类新药的氨基酸分析分为两步：一为水解，常用6mol／L盐酸于110℃水解24h，有些…     

枸杞糖缀合物LbGp2的理化性质和活性研究

目的　分离纯化枸杞糖缀合物(LbGp2 )并研究其理化性质及活性。方法　采用柱色谱法得到LbGp2 ,经HPLC ,CE ,GC ,SEC及糖含量分析、元素分析和氨基酸分析等研究其理化性质,并用半体内法、形态学计数法和比色法等研究了Lbp2对腹腔巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞的转化以及对小鼠血清半数溶血等的影响。结果　LbGp2是均一组份,其分子量为6.8×10⁴,糖含量为90.7% ,糖组成为Ara Gal 3∶4(摩尔比) ,并含有18种天然氨基酸。免疫活性试验表明Lbp2具有显著的免疫增强作用。同时还具有很好的抗氧化作用。结论　LbGp2是均一的糖缀合物,有免疫活性和抗氧化活性     

以DNA为作用靶追踪分离天然植物药活性成分

目的：从天然植物药中分离活性成分。方法：综述DNA与其靶向分子的作用方式以及DNA为作用靶的生物活性筛选系统跟踪分离天然植物药活性成分的情况。结果：应用DNA为作用靶的生物活性筛选系统跟踪分离天然植物药成分可快速有效地得到活性化合物。结论：DNA与其靶向分子相互作用的研究对阐述抗肿瘤，抗病毒药物及致癌物的作用机理和筛选新的药物活性成分具有重要的意义。     

赤芍抗凝血活性成分的筛选

目的 建立超滤质谱快速筛选赤芍活性成分的方法，从中得到可能的潜在抗凝血活性成分。方法 对赤芍不同极性部位成分进行鉴定，以凝血酶(thrombin, THR)为靶标，亲和超滤法逆靶向筛选赤芍中的凝血酶抑制剂，并对得到的活性成分进行分析、鉴定；采用生色底物法及体外抗凝法对其进行活性验证，通过分子对接对其结合能力进行初步分析。结果 经对赤芍不同极性部位成分进行定性分析，检测出17个成分，并通过亲和超滤质谱法筛选得到一个可能的抗凝血活性成分——鞣花酸。鞣花酸浓度为1 g·L^-1时对凝血酶百分抑制率可达98.34%;体外凝血实验发现鞣花酸凝血酶时间(thrombin time, TT)与空白组相比有显著性差别(P<0.01),表明其为潜在的凝血酶直接抑制剂；分子对接结果显示鞣花酸与凝血酶活性结合位点多、结合能低，具有良好的结合效果。结论 建立了一种快速筛选赤芍中抗凝血活性成分的方法，筛选结果表明鞣花酸可能为潜在的凝血酶抑制剂，为中药的靶向治疗、机制探索和质量控制提供了有价值的参考。     

一种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂RanacyclinE的活性研究

目的 评价一种两栖类动物皮肤分泌物中的多肽RanacyclinE(氨基酸序列SAPRGCWTKSYPPKPCK)的丝氨酸蛋白酶抑制活性。方法 RanacyclinE由Fmoc固相化学合成后经基质辅助激光解析质谱鉴定,测定胰蛋白酶抑制常数Ki。结果 RanacyclinE的酶抑制常数Ki值为95.96μM。结论 天然生物肽RanacyclinE是一种潜在的丝氨酸蛋白酶抑制剂。     

基于ZAc热点区域的BRD4 Bromodomain抑制剂设计与活性研究（英文）

Bromodomain是一种表观遗传读取器,在识别乙酰化组蛋白方面发挥关键功能而越来越受到关注。Bromodomain结构域的蛋白质与多种疾病的发展有关,靶向Bromodomain结构域已成为开发蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂的重要策略。本研究在BRD4的乙酰赖氨酸结合位点中发现了ZA通道上的新热点。为探究该热点的重要性,对基于结构的3,5-二甲基异恶唑基BRD4抑制剂(4)进行了药物设计,并围绕ZA通道热点合成了一系列具有结构修饰的衍生物。结构优化产生了具有纳摩尔蛋白和细胞效力的有前途的衍生物21。研究表明, ZA通道热点可能在BRD4抑制剂的活性和选择性中起重要作用。     

绵羊生殖道提取物生物活性物质检测

目的 检测绵羊生殖道提取物生物活性物质.方法 以健康、新鲜、雌性绵羊生殖器官为实验材料,采用各种生物活性检测方法对绵羊生殖道提取物的活性物质进行了检测.结果 绵羊生殖道提取物具有红细胞凝集、胰蛋白酶抑制剂活性、抗菌活性、抗血浆凝固活性、抗补体活性和低溶血活性,无胰蛋白酶水解活性、局部出血活性.结论 首次证实绵羊生殖道存在抗菌活性物质和蛋白酶抑制剂活性物质.