PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

原儿茶酸对β-淀粉样蛋白诱导神经细胞损伤的保护作用研究

目的 通过β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)处理SH-SY5Y细胞或原代海马神经元建立AD细胞模型，探讨原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对Aβ损伤后的神经细胞的保护效应及其可能机制。方法 应用MTT法筛选Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞的浓度，并筛选PCA作用于Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞的适宜浓度。通过DCFH-DA染色和JC-1染色探究PCA对Aβ_25-35损伤的细胞内ROS水平和线粒体膜电位的影响。结果 Aβ_25-35损伤SH-SY5Y细胞适宜的造模条件为10μmol/L处理24 h;800μmol/L的PCA对Aβ_25-35损伤的SH-SY5Y细胞保护效果最佳(P<0.001)。Aβ_25-35处理导致原代海马神经元细胞内ROS水平升高(P<0.001)而线粒体膜电位有降低趋势(P=0.287);PCA干预后，原代海马神经元的细胞内ROS水平显著降低(P<0.01)，线...     

二(噁)英对星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯并二(噁)英(TCDD)的神经毒性.方法 选择人星形胶质细胞和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),4个染毒组和对照组分别暴露于1、10、50、100 nmol/L TCDD和二甲基亚砜(DMSO)24 h.用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,用RT-PCR检测细胞的线粒体相关基因mRNA表达水平.结果 透射电镜观察到TCDD染毒组细胞线粒体嵴数目减少,出现空泡化.RT-PCR结果显示,与对照组相比,染毒组两种细胞HSPD1、MFN1、MFN2、SLC25A10mRNA的表达水平下降,TSPO和SLC25A 27 mRNA的表达水平升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TCDD对星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞具有损伤作用,可以影响神经细胞线粒体的正常形态、正常转运功能和动力学过程.     

线粒体分裂对甲苯二异氰酸酯诱导人支气管上皮细胞NLRP3炎性小体活化的影响

目的 探讨线粒体过度分裂对甲苯二异氰酸酯（TDI）诱导人支气管上皮细胞（HBECs）NLRP3炎性小体激活的影响。方法 （1）制备TDI-人血清白蛋白（HSA）偶联物，分别采用Gutmann法和BCA蛋白定量法测定偶联物中TDI和HSA的水平。（2）以不同浓度TDI-HSA（0.00、40.00、80.00和120.00 mg/L）处理HBECs 12 h，采用荧光探针法检测细胞中活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-18（interleukin-18，IL-18）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的水平，蛋白质印迹法（Western blot）检测NLRP3炎性小体相关蛋白（ASC、NLRP3、Caspase-1）的表达水平以及线粒体分裂蛋白DRP1、融合相关蛋白MFN2和OPA1的表达水平。（3）采用线粒体分裂抑制剂Mdivi-1（10 μmol/L）预处理HBECs 2 h后，再用TDI-HSA（120.00 mg/L）处理12 h，检测细胞中ROS及IL-18、IL-1β的水平，测定NLRP3炎性小体相关蛋白ASC、NLRP3、Caspase-1，线粒体分裂蛋白DRP1及融合相关蛋白MFN2、OPA1的表达水平。结果 （1）合成的TDI-HSA偶联物中TDI和HSA质量浓度分别为22.80、2 120.00 μg/L，摩尔比为4.19。（2）与对照组相比，随着TDI-HSA染毒剂量的增加，HBECs细胞中R0S和IL-18、IL-1β水平明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与对照组相比，TDI-HSA 80.00、120.00 mg/L剂量染毒组NLRP3炎性小体相关蛋白ASC、NLRP3、Cleaved Caspase-1的表达水平增加（P<0.05）；线粒体分裂蛋白DRP1表达水平增加，融合相关蛋白MFN2、OPA1表达降低（P<0.05）。（3）与TDI-HSA 120.00 mg/L染毒组相比，TDI-HSA+Mdivi-1组HBECs细胞中ROS和IL-18、IL-1β水平明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）；NLRP3炎性小体相关蛋白ASC、NLRP3、Cleaved Caspase-1的表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；线粒体分裂蛋白DRP1表达明显降低，融合相关蛋白MFN2、OPA1表达升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 TDI可以剂量依赖性方式促进HBECs线粒体过度分裂及融合抑制，促进NLRP3炎性小体活化。采用线粒体分裂抑制剂Mdivi-1处理HBECs后，可显著抑制NLRP3炎性小体的活化，表明TDI诱导的线粒体过度分裂是NLRP3炎性小体活化的重要原因。     

MPP+对PC12细胞增殖及外信号调节激酶影响

目的研究1-甲基-4苯基-吡啶离子(MPP⁺)对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法PC12细胞体外培养,分别以100,300,500μmol/L MPP⁺进行染毒。四甲基偶氮噻唑蓝法(MTT)观察MPP⁺对细胞的抑制作用;免疫印迹法检测细胞ERK1/2表达及磷酸化水平。结果不同剂量以及不同作用时间的MPP⁺对PC12细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率为18.86%~58.06%。MPP⁺可以抑制细胞外调节信号激酶(ERK)的磷酸化水平,其中300μmol/L MPP⁺染毒3 d时,ERK磷酸化水平约为对照组的4.7%。ERK通路阻断剂PD98059与300μmol/L MPP⁺共同作用时,对细胞增殖的抑制率增高至78.9%。结论MPP⁺可以明显抑制PC12细胞的增殖,降低ERK的磷酸化水平可能是其重要分子机制之一。     

二英对星形胶质细胞和神经母细胞瘤细胞线粒体的影响

目的探讨2,3,7,8-四氯二苯并二英(TCDD)的神经毒性。方法选择人星形胶质细胞和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),4个染毒组和对照组分别暴露于1、10、50、100 nmol/L TCDD和二甲基亚砜(DMSO)24 h。用透射电镜观察细胞线粒体超微结构,用RT-PCR检测细胞的线粒体相关基因m RNA表达水平。结果透射电镜观察到TCDD染毒组细胞线粒体嵴数目减少,出现空泡化。RT-PCR结果显示,与对照组相比,染毒组两种细胞HSPD1、MFN1、MFN2、SLC25A10m RNA的表达水平下降,TSPO和SLC25A27 m RNA的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TCDD对星形胶质细胞和SH-SY5Y细胞具有损伤作用,可以影响神经细胞线粒体的正常形态、正常转运功能和动力学过程。     

氟对SH-SY5Y细胞活性氧水平和线粒体融合影响

目的观察氟对人脑神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y细胞）体外培养细胞活性氧水平和线粒体融合的影响。方法在SH-SY5Y细胞中加入0.4、4 mmol/L NaF,孵育6、12、24和48 h;利用MitoTracker和ROS荧光染色试剂盒对线粒体和氧自由基进行染色。结果NaF作用6、12、24、48 h时,与对照组比较,0.4、4 mmol/L氟处理组SH-SY5Y细胞内ROS染色强阳性细胞计数[分别为（15.1±1.4）、（12.8±2.5）、（22.6±2.4）、（30±3.1）和（32.5±1.9）、（38.1±2.2）、（69.3±3.1）、（84.3±3.5）个/100细胞]和Ⅱ型线粒体细胞计数[分别为（13±1.4）、（15±1.7）、（22.9±1.9）、（23.7±1.6）和（15.2±2.3）、（23.8±1.8）、（29.1±4）、（47.7±3.3）个/100细胞]明显升高（P<0.05）。结论摄入过量的氟导致SH-SY5Y细胞氧自由基水平升高,线粒体呈分裂状,呈时间和剂量效应关系。     

金属对SH-SY5Y细胞氧化应激及A蛋白沉积影响

目的 探讨铜、铁、锌、铝金属对人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）的氧化应激及β淀粉样蛋白（Aβ）沉积影响,为预防老年性痴呆提供依据。方法 采用不同剂量的铜、铁、锌、铝分别作用于SH-SY5Y细胞,通过噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长活性,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力,硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化产物丙二醛含量,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平,酶联免疫（ELISA）试剂盒法测定细胞内Aβ_1-42蛋白含量。结果 铜、铁、锌、铝呈剂量依赖性地抑制细胞活性,50、200、400 μmol/L CuSO₄组SH-SY5Y细胞存活率分别为90.47%、74.81%、64.97%,1、2、4 mmol/L FeSO₄、AlCl₃组SH-SY5Y细胞存活率分别为93.08%、78.28%、56.10%和92.21%、85.30%、62.72%,50、100、200 μmol/L ZnSO₄组SH-SY5Y细胞存活率分别为91.76%、76.51%、61.27%;与对照组比较,各剂量金属组SH-SY5Y细胞存活率均明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,各剂量铜、铁、锌、铝组SH-SY5Y细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px活性明显下降,ROS水平和丙二醛、Aβ_1-42含量明显增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 铜、铁、锌、铝可致神经细胞毒性作用和Aβ蛋白沉积,其机制可能与金属诱导细胞内ROS产生并导致氧化损伤有关。     

鱼藤酮对SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

[目的]探讨环境毒素鱼藤酮对人多巴胺能神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位的影响以及线粒体ATP敏感性钾通道(MitochondrialATP-sensitivepotassiumchannel,mKATPchannel)在其中的作用。[方法]先用0、5、20、100nmol/L浓度的鱼藤酮单独处理SH-SY5Y细胞,观察鱼藤酮与线粒体膜电位下降的量效关系;然后在此4组中分别按加和不加mKATP通道抑制剂5-羟葵酸(5-Hydroxydecanoate,5-HD)0.5mmol/L和(或)激活剂二氮嗪(Diazoxide,DZX)1.0mmol/L与不同浓度鱼藤酮共同作用,观察细胞线粒体膜电位的变化。细胞线粒体膜电位的检测采用罗丹明绿色荧光负载、流式细胞仪测量荧光强度的方法。[结果]5、20和100nmol/L鱼藤酮作用24h分别导致SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降至对照组的91.76%、71.21%和49.65%,膜电位下降程度与鱼藤酮剂量相关;DZX单独作用使线粒体膜电位下降了13.45%,DZX与5和20nmol/L鱼藤酮共同作用分别下降至对照组的75.32%和66.06%,比同浓度鱼藤酮单独作用更加明显;5-HD可抵消DZX的上述作用,5-HD与5nmol/L鱼藤酮共同作用时可减轻鱼藤酮引起的细胞膜电位下降。[结论]鱼藤酮可以引起SH-SY5Y细胞线粒体膜电位下降;小剂量鱼藤酮(5和20nmol/L)能开放mKATP通道,该作用可被5-HD逆转;与DZX相比,小剂量鱼藤酮只能激活某一类型的mKATP通道,这是它导致线粒体膜电位下降的机制之一。大剂量鱼藤酮降低线粒体膜电位的机制中mKATP通道的作用较小。     

激动线粒体乙醛脱氢酶2可降低高糖诱导的A549细胞炎性小体生成

目的探讨激动线粒体乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)对高糖诱导的A549细胞炎性小体生成的影响。方法 25 mmol/L高糖完全培养基体外培养肺泡上皮A549细胞,实验分为4组:对照组,ALDH2激动剂20μmol/L Alda-1组,ALDH2阻断剂60μmol/L Daidzin组,20μmol/L Alda-1+60μmol/L Daidzin组。干预处理24 h后,四甲基噻唑盐(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测细胞增殖活力,二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)荧光染色检测细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测ALDH2及炎性小体主要成员核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific protease-1,caspase-1)蛋白的表达。结果与对照组相比,Alda-1特异性激动ALDH2后,细胞增殖活力无明显变化,细胞ROS水平和细胞迁移率均明显降低(P<0.05),ALDH2蛋白表达增加(P<0.05),炎性小体主要成员NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);Daidzin特异性阻断ALDH2后,细胞增殖活力、细胞ROS水平、细胞迁移率、ALDH2蛋白和ASC蛋白表达无明显变化,NLRP3蛋白表达明显升高(P<0.05),caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与Alda-1组相比,Alda-1+Daidzin组细胞增殖活力及ROS水平无明显变化,细胞迁移率明显增高(P<0.05),ALDH2蛋白表达降低(P<0.05),NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论提高ALDH2在肺泡上皮A549细胞中的表达可减轻高糖诱导的细胞炎症反应,可能是通过降低细胞ROS水平、降低炎性小体的表达来实现。     

多溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株氧化应激和凋亡的影响及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法实验共分4组,PDDE-47终浓度为0、2、4、8μg/ml,分别作为对照组,低、中、高剂量组。用2、4、8μg/ml PBDE-47对培养的SH-SY5Y细胞染毒,24 h后检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组细胞存活率略有上升,中、高剂量组细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P相似文献   

微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡作用。方法调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15μg/ml的MC-LR染毒24 h后,采用噻唑兰(MTT),法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50)。分别用终浓度为0(对照)、2.5μg/m(l1/4 EC50)、5μg/m(l 1/2 EC50)、10μg/m(lEC50)的MC-LR染毒24 h后,测定活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活力和细胞凋亡率。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均较高,线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均呈上升趋势,线粒体膜电位呈下降趋势。结论 MC-LR暴露可诱导体外培养的CHO细胞发生凋亡。     

线粒体膜通透性在微囊藻毒素诱导的小鼠肝细胞凋亡中的作用

目的从线粒体膜通透性(MPT)的角度去研究微囊藻毒素(MCs)诱导小鼠肝细胞凋亡的作用机制,并揭示活性氧(ROS)在其中的作用。方法将ICR雄性小鼠随机分成4组,A组:腹腔注射生理盐水;B组:腹腔注射MC-LR 50μg/kg bw;C组:腹腔注射线粒体膜通透性抑制剂环孢霉素A(CsA)100mg/kg bw;D组:提前1小时腹腔注射CsA 100mg/kg bw后再腹腔注射MC-LR 50μg/kg bw。分离小鼠血清,检测AST、ALT含量;分离小鼠肝脏,进行小鼠肝脏DNA片段化检测、线粒体膜电位检测、ROS水平检测和Bcl-2表达水平的western blotting检测。结果在50μg/kg bw MC-LR处理组中,血清中AST、ALT水平升高,肝细胞中出现明显的DNA ladder、Bcl-2蛋白水平的表达上调、肝组织线粒体膜电位降低、组织ROS水平升高;100mg/kgbw CsA处理组小鼠各项指标没有明显变化;而预处理100mg/kg bw CsA后再腹腔注射50μg/kg bw MC-LR则可以消除肝组织DNA ladder,并且使血清AST、ALT含量,肝脏Bcl-2蛋白的表达、线粒体膜电位和ROS水平恢复到对照组的水平。结论体内环境下,抑制线粒体膜转运通道可抑制MC-LR诱导的肝细胞凋亡。     

三氯化铝对SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化作用

目的 探讨三氯化铝对SH-SY5Y细胞及tau蛋白异常磷酸化水平的影响.方法 选取SH-SY5Y细胞进行三氯化铝染毒,实验分为对照组、200、400和800μmol/L Al3+染毒组,染毒48 h后观察细胞形态学变化,采用CCK-8法测定细胞活性,并提取细胞蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞蛋白P-tau181、231、262、396和tau5的表达情况.结果 随着染铝浓度增加细胞数目减少,突触回缩,细胞活性测定结果显示,800 μmol/L A13+组细胞活性明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Western-Blot结果显示200、400和800 μmol/L Al3+组P-taul81、231、396和tau5蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),800μmol/l.Al3+组P-tau262蛋白表达明显高于对照组,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 在本实验条件下,三氯化铝对SH-SY5Y细胞有毒性作用,低浓度就可引起tau181、231、396和tau5表达异常.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对体外Aβ1-42诱导PC12细胞凋亡的保护机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对体外Aβ1-42诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法 20μmol/L Aβ1-42诱导PC12细胞构建细胞损伤模型,设立对照组、模型组(20μmol/L Aβ1-42)、不同浓度EGCG干预组(5、10、20μmol/L EGCG+20μmol/L Aβ1-42)及VE阳性对照组(20μmol/L VE+20μmol/L Aβ1-42)。采用CCK-8法检测PC12细胞存活率,分别用Annexin V-FITC/PI法、DCFH-DA法、JC-1法检测细胞凋亡、ROS及线粒体膜电位,生化法检测细胞ATP含量。结果与对照组相比,模型组细胞存活率明显降低,线粒体膜电位及ATP含量显著降低,ROS水平增加,凋亡率升高。与模型组相比,3个EGCG干预组均可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率;EGCG-M组及EGCG-H组可以降低ROS水平,提高线粒体膜电位,增加ATP含量,且EGCG-H组改变更显著。结论 EGCG可降低Aβ1-42诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与降低细胞ROS水平,...     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/mlPBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况。结果与对照组相比,1μg/ml和2μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P<0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P<0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P<0.05)、尾矩显著上升(P<0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P<0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P<0.05)、SOD活力明显低于对照组(P<0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P<0.05)。结论PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤中起重要作用。     

花色苷对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞保护作用的研究

目的观察花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)对Aβ_(25-35)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用,并初步探讨相关机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞。实验分组:首先进行Aβ_(25-35)损伤浓度的筛选,将细胞分为对照组和不同浓度Aβ_(25-35)处理组(浓度为5、10、15、20、25μmol/L);在确定Aβ_(25-35)的损伤浓度基础上进行Cy-3-G干预浓度的筛选,将细胞分为对照组、Aβ_(25-35)处理组和不同浓度Cy-3-G预孵育组(浓度为10、25、50、100μmol/L);而后进行Cy-3-G干预时间的筛选,将细胞分为对照组、Aβ_(25-35)处理组和不同时间Cy-3-G预孵育组(时间为3、6、12、24h)。MTT法测定细胞活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,10μmol/L Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞时,细胞活力显著降低(P0.05);Cy-3-G对Aβ_(25-35)处理SH-SY5Y细胞保护作用的适宜浓度和适宜作用时间分别为100μmol/L和12h;Aβ_(25-35)处理组细胞凋亡率较对照组明显升高(P0.05),而Cy-3-G预孵育可明显抑制Aβ_(25-35)细胞凋亡。结论适宜剂量的Cy-3-G对Aβ_(25-35)损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤细胞自噬水平的影响

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞,分别以终浓度为0(溶剂对照)、1、5、10μmol/L的PBDE-47染毒处理24 h后,采用透射电子显微镜观察细胞内双层膜自噬体结构;以自噬囊泡示踪剂单丹黄酰尸胺(MDC)染色检测自噬囊泡生成情况;采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平。结果电镜超微结构观察结果显示,对照组细胞内未见异常变化,1μmol/L染毒组细胞内可见轻微的线粒体扩张但未见明显的双层膜自噬体结构,5μmol/L染毒组细胞内可见明显的线粒体空泡及双层膜自噬体结构,10μmol/L染毒组细胞内观察到的双层膜自噬体结构最多;与对照组相比,5、10μmol/L PBDE-47染毒组MDC荧光强度升高,MDC阳性细胞比例增加;此外,5、10μmol/L PBDE-47染毒组自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平与对照组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 PBDE-47可诱导SH-SY5Y细胞自噬水平的增加。     

竹荪多糖对亚砷酸钠致人肝细胞毒性的拮抗作用

目的探讨竹荪多糖对亚砷酸钠致人胎肝(L-02)细胞毒性的拮抗作用。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于含不同浓度[0(对照)~80μmol/L]亚砷酸钠和[0(对照)~160μg/ml]竹荪多糖+10μmol/L亚砷酸钠的培养液中暴露24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。将处于对数生长期的L-02细胞分设对照(培养基)组、亚砷酸钠(10μmol/L)组、竹荪多糖(80μg/ml)组和联合处理(10μmol/L亚砷酸钠+80μg/ml竹荪多糖)组,暴露24 h后,检测细胞培养液中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽(GSH)、细胞色素C(Cyt-C)水平和天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的活力及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X(Bax)蛋白的表达水平。结果与对照组比较,除2.5和5μmol/L亚砷酸钠染毒组外,10~80μmol/L亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,40、80和160μg/ml竹荪多糖联合处理组L-02细胞的存活率均升高,差异有统计学意义(P0.05);其中,以80μg/ml竹荪多糖的拮抗效果最好。与对照组比较,亚砷酸钠组和联合处理组L-02细胞培养液中MDA和Cyt-C的水平升高,T-SOD、CAT及GSH的水平降低,差异均有统计学意义(P0.05);而竹荪多糖组L-02细胞培养液中上述指标均无明显变化。与亚砷酸钠组比较,联合处理组和竹荪多糖组L-02细胞培养液中MDA和Cyt-C的水平降低,T-SOD、CAT及GSH的水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,亚砷酸钠组和联合处理组L-02细胞胞内Caspase-3的活力升高,差异具有统计学意义(P0.05);而竹荪多糖组L-02细胞细胞内Caspase-3的活力无明显变化。与亚砷酸钠组比较,联合处理组和竹荪多糖组L-02细胞内Caspase-3的活力均降低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,亚砷酸钠组和联合处理组L-02细胞胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达水平升高,Bcl-2/Bax比值降低,差异均有统计学意义(P0.05);而竹荪多糖组L-02细胞上述指标均无明显变化。与亚砷酸钠组比较,联合处理组和竹荪多糖组L-02细胞胞内Bax蛋白的表达水平降低,Bcl-2/Bax比值升高;竹荪多糖组L-02细胞内Bcl-2蛋白的表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可以诱导L-02细胞氧化应激,通过激活线粒体途径的细胞凋亡发挥毒性作用;竹荪多糖可以通过抑制上述机制,拮抗亚砷酸钠所致L-02细胞的毒性作用。     

姜黄素对中波紫外线损伤HaCaT细胞保护作用

目的通过姜黄素(Cur)影响中波紫外线(UVB)辐射HaCaT细胞线粒体膜电位(Δψ)及其相关因子,探讨其对UVB损伤细胞的保护作用及其机制。方法HaCaT细胞经UVB辐射后,加入不同剂量姜黄素继续培养,通过罗丹明123和Fluo-3/AM荧光强度检测细胞Δψ电位和细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]i),以流式细胞术检测caspase-3和细胞色素c(Cytc)凋亡相关蛋白的表达。结果UVB辐射HaCaT细胞后,低线粒体膜电位的细胞数为(80.8±2.23)%,[Ca²⁺]i为(71.9±1.61)%,caspase-3和Cytc蛋白表达量分别为(29.00±1.60)%和(27.5±1.60)%,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);加入姜黄素后与UVB组比较,细胞线粒体膜电位、[Ca²⁺]i及Cytc和caspase-3蛋白表达均呈剂量-效应关系,即随着药物浓度的增加,具有低细胞线粒体膜电位的细胞数、Cytc和caspase-3蛋白表达均显著减少,[Ca²⁺]i显著降低。结论姜黄素可能通过提高细胞线粒体膜电位,降低[Ca²⁺]i含量,减弱Cytc和caspase-3的级联反应,达到其抑制UVB辐射引起的HaCaT细胞凋亡,具有对UVB损伤HaCaT细胞的保护作用。