地塞米松抑制转化生长因子β1对人α1(Ⅰ)前胶原基因的转录激活

目的探讨地塞米松与转化生长因子β1(TGFβ1)之间的相互作用及对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动转录的影响.方法人皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养.采用FuGENE转染试剂,分别瞬间转染含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列-2.5kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phCOL2.5至人皮肤及瘢痕成纤维细胞.ELISA法测定地塞米松及TGFβ1作用24h后,转染了phCOL2.5的2种成纤维细胞的报告基因CAT表达量.结果地塞米松能抑制转染了phCOL2.5重组体的人皮肤及瘢痕成纤维细胞CAT表达量,且能拮抗TGFβ1对转染了phCOL2.5重组体的2种成纤维细胞CAT表达的上调作用(P＜0.05).结论在正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中,地塞米松均能抑制人α1(Ⅰ)前胶原基因的启动转录,且能拮抗TGFβ1对人α1(Ⅰ)前胶原基因的转录激活.     

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β_1的影响

目的 :研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响 ,阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法 :用甲基噻唑基四唑MTT(methylthiazolyltetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF β1的表达。结果 :苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达而起到抗肝纤维化作用。     

地塞米松抑制转化生长因子βl对人αl（I）前胶原基因的转录激活

目的探讨地塞米松与转化生长因子β1(TGFβ1)之间的相互作用及对人α1(I)前胶原基因启动转录的影响。方法人皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养。采用FuGENE转染试剂，分别瞬间转染含人α1(I)胶原基因5’侧翼序列—2．5KB与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体phOOL2．5至人皮肤及瘢痕成纤维细胞。ELISA法测定地塞米松及TGFβ1作用24h后，转染了phOOL2.5的2种成纤维细胞的报告基因CAT表达量。结果地塞米松能抑制转染了pHOOL2．5重组体的人皮肤及痴痕成纤维细胞CAT表达量，且能拮抗TGFβ1对转染了pHOOL2．5重组体的2种成纤维细胞CAT表达的上调作用(P＜0．05)。结论在正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中，地塞米松均能抑制人α1(I)前胶原基因的启动转录，且能拮抗冗TGFβ1对人α1(I)前胶原基因的转录激活。     

circ＿0007762通过miR-18a-5p调节肺成纤维细胞自噬的机制研究

目的 探索circ＿0007762和miR-18a-5p的相互作用及在肺成纤维细胞中的作用。方法 利用生物信息学分析circ＿0007762在特发性肺纤维化（IPF）患者的表达并筛选其miRNA靶标,在转化生长因子（TGF）-β1干预的肺成纤维细胞HFL1中验证其表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-18a-5p mimics与报告基因载体共转染后的荧光素酶活性。CCK-8法检测circ＿0007762、miR-18a-5p敲低及TGF-β1、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预后的细胞活力。Western blot检测circ＿0007762、miR-18a-5p敲低及TGF-β1、3-MA干预后的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、P62及微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)水平。结果 HFL1细胞中,TGF-β1组较Control组circ＿0007762表达水平上调,miR-18a-5p表达下调（P<0.05）。在circ＿0007762野生型载体中,过表达miR-18a-5p抑制了荧光素酶活性（P<0.05）。circ＿00077...     

胰岛素在培养的乳鼠心肌成纤维细胞对纤维连接蛋白、层粘连蛋白和转化生长因子β1表达的影响

目的 :研究胰岛素对心肌成纤维细胞胞外基质纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)、层粘连蛋白 (lami nin ,LN)及细胞因子转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响 ,探讨其在心肌肥厚中的作用。方法 :乳鼠心肌成纤维细胞的培养并鉴定 ;用Streptavidin Peroxi dase (SP)染色方法 ,比较胰岛素实验组和对照组乳鼠心肌成纤维细胞FN、LN及TGFβ1的表达。结果 :培养的细胞经形态学观察和波形蛋白 (vimentin)SP染色 ,证实为心肌成纤维细胞 ;10 -8mol·L-1胰岛素实验组细胞膜上FN和细胞浆内TGFβ1的表达明显强于对照组 (P <0 .0 1) ;LN在培养的心肌成纤维细胞上基本不表达。结论 :在体外 ,胰岛素具有促进心肌成纤维细胞胞外基质FN堆积的作用 ,可能参与了心肌肥厚的发生和发展 ,其机制可能与胰岛素促进心肌成纤维细胞TGFβ1的合成与分泌有关。     

细胞生长抑制因子对体外培养创面成纤维细胞的生物学作用

目的探讨γ-干扰素(IFN-γ)、转化生长因子β-(TGFβ3)对体外培养的创面成纤维细胞生物学作用的影响。方法采用体外细胞培养技术,通过MTT测定法、^3H—TdR掺入法、成纤维细胞胶原凝胶模型研究IFN-γ、TGFβ3对不同时期创面来源的成纤维细胞的增殖、DNA合成及其在胶原凝胶中收缩的变化。结果IFN-γ和TGF侵在体外对正常皮肤真皮和烧伤后不同时期创面来源的成纤维细胞的生物学作用不同：(1)相同浓度的两种因子均能明显抑制正常真皮和伤后10、14d创面成纤维细胞,对伤后28、35d的创面成纤维细胞γ-干扰素的抑制作用较弱、TGF岛作用则不明显;(2)对成纤维细胞在胶原凝胶中的收缩能力,两种因子均有明显的抑制作用,而最强的作用均表现在对伤后21d的创面成纤维细胞上。结论γ-干扰素和转化生长因子β3可能参与了调节创面成纤维细胞的表型转化与调控而影响其生物学特征,进一步的研究有利于为临床用生物学方法在创面愈合过程中控制瘢痕增生或挛缩提供参考依据。     

雷公藤红素药理作用分子靶点的研究进展

雷公藤红素是从传统中药雷公藤中提取分离得到的一种醌甲基三萜,具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等药理活性。雷公藤红素几个特殊的分子靶点大多会抑制IKK-NF-κB信号通路,包括:①抑制IKKα/β激酶;②失活热休克蛋白90的分子伴侣蛋白细胞分裂周期蛋白37及P23;③抑制蛋白酶体的功能;④激活热激因子1诱导热休克蛋白反应;⑤影响肿瘤细胞的增殖;⑥影响细胞凋亡;⑦影响丝裂原活化蛋白激酶;⑧影响Akt/mTOR信号级联;⑨影响血管生成和转移;⑩抗炎作用。本文对其药理作用分子靶点研究进展做一综述。     

LncRNA-ZFAS1对心肌纤维化调控作用研究

目的探究lncRNA-ZFAS1对心肌纤维化的调控作用。方法采用结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支的方式建立心肌缺血诱发的心肌纤维化模型;利用CRISPR/Cas9技术构建心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠;利用Masson染色检测小鼠心脏组织心肌纤维化情况;利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导原代培养的小鼠心肌成纤维细胞,建立离体心肌纤维化模型,并转染siRNA(siZFAS1)用于敲减lncRNA-ZFAS1;利用MTT法检测心肌成纤维细胞增殖情况;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测lncRNA-ZFAS1、转化生长因子β1(TGFβ1)、Ⅰ型胶原(Col1a1)和Ⅲ型胶原(Col3a1)的表达情况。利用Western blot实验检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMΑ)的表达情况。结果在心肌纤维化模型小鼠的心脏组织中,lncRNA-ZFAS1的表达显著升高,AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞中敲减lncRNA-ZFAS1后,Col3a1和TGFβ1的表达显著降低;心脏特异性过表达lncRNA-ZFAS1的转基因小鼠心脏组织中出现胶原沉积,并且α-SMA、Col1a1和Col3a1的表达显著升高。结论lncRNA-ZFAS1在心脏组织中的高表达会诱导心肌纤维化,敲减lncRNA-ZFAS1可以缓解心肌纤维化。     

小白菊内酯对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响

目的探讨小白菊内酯(PNT)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响。方法选择12周龄健康SD大鼠12只,组织块法体外培养大鼠肺成纤维细胞,免疫细胞化学染色,观察不同浓度PNT对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。结果 TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞,表达α-SMA增强(P<0.05),20μmol/L的PNT部分抑制TGF-β1的诱导作用(P<0.05);50μmol/L的PNT可完全抑制TGF-β1的诱导作用。结论 PNT有抑制TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化的作用。     

大鼠肺纤维化过程中转化生长因子-β1在不同肺组织中的表达变化及意义

目的观察转化生长因子-β(TGFβ-1)在博莱霉素(BLM)所诱导的肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中的动态变化及其意义。方法 BLM制成大鼠肺间质纤维化模型,观察组13只大鼠气管注入BLM 0.2~0.3m l,对照组5只大鼠气管注入等量生理盐水,并将各组动物处死后提取肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)进行病理定量分析,检测BALF中TGFβ-1的水平变化。结果观察组TGFβ-1水平高于对照组,第7、14天比较差异有统计学意义(P<0.01)。TGFβ-1在观察组成纤维细胞(Fb)和肺泡巨噬细胞(AM)中表达于实验第7天显著增强,于实验第14天达到高峰,至第28天有所降低,但明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 TGFβ-1在肺纤维化中及其病理发生发展过程中均发挥重要作用。     

PDTC抑制TGF-β1对肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞的诱导作用

目的:通过核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),观察NF-κB在转化生长因子(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)及向肌成纤维细胞(MF)分化中的作用。方法:一次性气管内滴注博莱霉素-A5复制肺纤维化模型,取肺组织培养肺成纤维细胞,细胞分为Sham组、TGF-β1组、PDTC TGF-β1组和PDTC组。采用免疫细胞化学技术、流式细胞术检测PDTC对TGF-β1诱导的成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CTGF的影响。结果:TGF-β1组和Sham组比较,肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA明显增加,PDTC TGF-β1组肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA低于TGF-β1组,单独PDTC对肺成纤维细胞无影响。结论:NF-κB促进TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF及肺成纤维细胞向MF分化。     

Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。     

黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的观察黄芩素(黄芩苷元,baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法体外培养人胚胎肺成纤维细胞(WI-38),TGF-β1诱导后,通过Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)相关蛋白表达的变化,同时采用免疫组化法观察细胞形态变化。TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38成肌成纤维细胞模型,再给予不同剂量的黄芩素,检测转化过程中相关蛋白α-SMA、collagen 1、Smad 2、p-Smad 2的表达变化。结果与模型组相比,黄芩素2 000nmol.L-1～125 nmol.L-1对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有抑制作用。黄芩素组以剂量依赖性下调α-SMA(P<0.01)、collagen 1(P<0.01)、Smad 2(P<0.05)、p-Smad 2(P<0.05)蛋白的表达。结论黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程中有一定的抑制作用,该作用与下调α-SMA,抑制细胞内胶原合成及干预TGF-β/Smads信号通路有关。     

定量蛋白组学揭示雷公藤红素抗卵巢癌的作用机制

目的 探讨雷公藤红素对卵巢癌细胞的增殖和迁移能力的抑制作用及其分子机制。方法 通过细胞增殖及迁移实验,明确雷公藤红素抗卵巢癌细胞增殖及迁移的能力;利用定量蛋白组学结合生物信息学分析差异表达蛋白,解析雷公藤红素对卵巢癌的作用机制;通过体外分子生物学技术,检测雷公藤红素对卵巢癌细胞EMT标志物（Cadherin）、细胞迁移关键蛋白（CD44与HMGB）的表达水平,以及对细胞活性氧（ROS）诱导水平的影响。结果 雷公藤红素显著抑制SKOV3及OVCAR3细胞增殖及迁移的能力。通过蛋白组学研究发现,经过雷公藤红素处理后,共有396个DEPs被鉴定出来（126个上调,270个下调）。GO和KEGG通路富集分析均显示雷公藤红素多靶点的抗肿瘤活性与细胞迁移、炎症、缺氧等生物过程密切相关。雷公藤红素下调N-cadherin,上调E-cadherin的表达抑制EMT,抑制CD44与HMGB1、HMGB2的表达来抑制卵巢癌细胞伤口愈合。此外,雷公藤红素诱导ROS的产生。结论 雷公藤红素具有多靶向抗卵巢癌活性,其可通过抑制EMT过程并诱导ROS的产生,抑制细胞迁移与增殖,发挥抗卵巢癌的作用。     

基于网络药理学初探雷公藤干预狼疮性肾炎的效-毒作用

目的 运用网络药理学方法探讨雷公藤对狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)的效-毒作用。方法 通过TCMSP平台检索雷公藤活性成分和作用靶点;在CoolGeN、OMIM和Gene Cards数据库中收集LN的疾病基因;借助Cytoscape软件绘制药物-成分-靶点-疾病作用网络,利用STRING数据库进行蛋白相互作用网络分析;运用DAVID数据库对作用靶点进行GO和KEGG富集分析,结合文献探讨预测雷公藤对LN的效-毒作用及其机制。结果 筛选得到雷公藤52个活性成分和与LN相关的38个靶点,大部分成分可通过NOD样受体、p53、TOLL样受体等信号通路调控免疫炎症、细胞增殖和细胞凋亡等过程而对LN起治疗作用,但雷公藤甲素(triptolide)、雷公藤红素(tripterine)、山萘酚(kaempferol)和β-谷甾醇(beta-sitosterol)等可能不利于LN病情好转。结论 雷公藤的大部分成分对LN具有治疗作用,但部分有效成分可能同时存在促进足细胞凋亡、加速肾脏纤维化的副作用。     

微小RNA-199a对人胚肺成纤维细胞表型转化的抑制作用机制研究

目的 探讨微小RNA-199a(miR-199a)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)向肌成纤维细胞转化的作用及机制.方法 将细胞分为6组:对照组、模型组(5 ng·mL-1的TGF-β1诱导HELF细胞72 h)、第1转染组(转染150 nmol·L-1的inhibitor NC质粒...     

雷公藤红素联合tPA在大鼠脑缺血再灌注损伤时的作用研究

目的 探讨雷公藤红素(celastrol)联合tPA治疗急性脑缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血90 min后再灌注并即刻干预,随机分为生理盐水干预组、tPA干预组和雷公藤红素联合tPA干预组,生理盐水和tPA剂量均为2 mg/kg,雷公藤红素的浓度为5 mg/kg,以红四氮唑(TTC)染色观察再灌注后24 h脑梗死体积,以及梗死灶炎症因子IL-1β含量(ELISA法检测)、细胞凋亡(TUNEL法)以及小胶质细胞活化反应(CDllb免疫组织化学染色)评价各组疗效.结果 与生理盐水干预组比较,tPA干预组大鼠脑梗死体积、IL-1β含量、细胞凋亡率和小胶质细胞活化数均明显增加(P＜0.05);与tPA干预组比较,雷公藤红素联合tPA干预组大鼠的各项指标均明显减少(P＜0.05).结论 雷公藤红素与tPA联合应用时,雷公藤红素可以明显减轻tPA引起的神经毒性作用,且作用机制可能与抗炎性反应、抑制细胞凋亡以及抑制小胶质细胞活化有关.     

雷公藤红素通过抑制PAK1抗胰腺癌作用及其机制研究

P21活化蛋白激酶1 (p21-activated kinases 1, PAK1)是P21活化蛋白激酶家族成员之一,在胰腺癌细胞增殖和肿瘤形成过程中起着十分重要的作用,是胰腺癌治疗的重要靶点。目前,靶向PAK1的激酶抑制剂尚处于临床前研究阶段。因此,筛选开发出新的PAK1激酶抑制剂对于胰腺癌治疗具有重要的意义。本研究发现天然产物雷公藤红素(celastrol)对PAK1具有显著的抑制作用,其IC50约为3.614μmol·L-1。分子对接结果显示,雷公藤红素与PAK1激酶结构域的ATP结合口袋结合。MTT实验结果表明,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3、PANC-1的增殖均具有抑制作用。进一步机制研究显示,干扰PAK1后,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3的抑制作用发生逆转。同时,雷公藤红素可以抑制PAK1及其下游信号通路蛋白的表达,从而激活凋亡信号通路引发胰腺癌细胞发生凋亡。上述研究结果表明,雷公藤红素可以通过靶向抑制PAK1激酶信号通路诱导胰腺癌细胞的凋亡,具有用于治疗胰腺癌的潜在价值。     

雷公藤红素通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响

目的研究雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及其对胃癌MFC细胞增殖的抑制和促凋亡作用机制。方法分别设置对照组和雷公藤红素低、中、高剂量(5、10、20 mmol/L)组,采用MTT法检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞周期的影响及MFC细胞凋亡的情况;Western blotting检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和PI3K、AKT和mTOR蛋白表达的影响;实时定量PCR检测雷公藤红素对胃癌MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA表达的影响。结果与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制胃癌MFC细胞的增殖(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著引起MFC细胞G2/M期阻滞(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著促进MFC细胞的凋亡(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白和PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达(P0.05),显著促进MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达(P0.05);与对照组比较,雷公藤红素能够呈剂量相关性地显著抑制MFC细胞内PI3K、AKT和mTORm RNA的表达(P0.05)。结论雷公藤红素能够抑制胃癌MFC细胞的增殖并促进胃癌MFC细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制胃癌MFC细胞内PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR等蛋白的表达而抑制胃癌MFC细胞的增殖,进而促进胃癌MFC细胞内促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而促进胃癌MFC细胞凋亡。