非酶糖基化抑制剂的体外筛选方法

目的:建立非酶糖基化抑制剂(NEGI)的体外筛选模型并筛选NEGI.方法:依据非酶糖基化(NEG)致衰老假说,用酶基糖基化终产物(AGE)多克隆抗体建立体外NEGI筛选模型.采用竞争性AGE-ELISA方法定量测定AGE的含量.结果:从60余种中草药组分、合成化合物中筛选得到了3种NEGI,AG2070为化学合成的化合物,INEG-1和INEG-2都属于中药多糖,在结构上与其他NEGI都不同.这3种抑制剂在体外实验中均显示出明显的抑制AGE形成的能力.结论:NEGI的体外筛选模型是可行的.     

LTB4R1抑制剂筛选方法的建立及评价

6脂肪酸代谢产物白三烯B4 (LTB4)的受体白三烯B4受体1 (LTB4R1)属于G蛋白耦联受体(GPCR)家族,是胰岛素抵抗、慢性炎症和2型糖尿病的潜在药物作用靶点。本文根据GPCR家族蛋白激活后可以引起细胞质内钙离子升高的原理,建立了96孔板体系LTB4R1抑制剂筛选模型。胞质内钙离子探针Fluo-8可以表征细胞质内的钙离子变化,当共转染LTB4R1和G蛋白α亚基16 (Gα16)的仓鼠卵巢癌细胞(CHO)受到LTB4刺激后,胞浆钙离子浓度升高, Fluo-8的荧光信号随之增强。LTB4R1抑制剂处理细胞后, Fluo-8的荧光信号减弱。本文以0.2%DMSO为阴性对照, LTB4R1抑制剂cp-105696为阳性对照建立筛选模型。经LTB4刺激后, 0.2%DMSO处理的细胞Fluo-8信号上升约2倍后缓慢回落,而cp-105696处理组则抑制LTB4的作用。LTB4和抑制剂cp-105696浓度梯度实验表明, Fluo-8的荧光信号升高幅度和抑制剂的浓度成反比,可以作为评价待测化合物的抑制效果的指标。多次重复实验计算所得阳性与阴性对照Z’因子为0.777,证明该筛选模型稳定可...     

半乳糖凝集素-3与脑卒中:从病理生理学到临床的研究进展

半乳糖凝集素-3(galectin-3,gal-3)与脑卒中的关系近年来被越来越多的研究者关注.该综述通过从脑卒中后gal-3在颅内炎症反应中的作用到参与颅内组织重塑的过程来阐述其对脑卒中病理生理变化产生的影响.同时,回顾了gal-3与脑卒中发病率及预后之间的关系,进一步分析了gal-3对临床的指导意义,提出既往研究的...     

半乳糖凝集素-3多糖类抑制剂的研究进展

半乳糖凝集素-3是近年来抗肿瘤药物研发的热门靶蛋白之一.目前,以半乳糖凝集素-3为靶点的多糖类抑制剂作为抗肿瘤药物的相关研究较多.多糖具有来源广且毒副作用小等特点,具有广阔的医药应用前景.本文综述了以半乳糖凝集素-3为靶点的多糖类抑制剂的研究进展.     

Galectin-3、C-erbB-2和E-cadherin在胃癌中的表达及意义

目的 研究半乳糖凝集素3 (galectin-3)、C-erbB-2和上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)在胃癌中表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测44例原发性胃癌组织及其癌旁组织galectin-3、C-erbB-2及E-cadherin的表达.结果 胃癌中galectin-3阳性率为84.1%,显著高于对照组的40.0%;有淋巴结转移组的表达率为93.5%,显著高于无淋巴结转移组的61.5% (P＜0.05).胃癌中C-erbB-2的阳性率为61.4%,显著高于对照组的10.0%;浸润全层组为69.4%,显著高于仅浸润黏膜、肌层组的25.0% (P＜0.05).胃癌中E-cadherin阳性率为68.2%,显著低于对照组的95.0%(P＜0.05),有淋巴结转移组的表达率58.1%,明显低于无淋巴结转移组的92.3%(P＜0.05).结论 Galectin-3、C-erbB-2和E-cadherin的异常表达和胃癌的发生、进展及转移有关.     

卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3、VEGF的表达及意义

目的检测卵巢上皮性肿瘤中半乳糖凝集素-3(Galectin-3)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,探讨二者在卵巢上皮性肿瘤的发生发展中的作用及相关性。方法采用免疫组化SP法检测良性卵巢上皮性肿瘤组45例,交界性卵巢上皮性肿瘤组50例及恶性卵巢上皮性肿瘤组61例中Galectin-3、VEGF的表达情况。结果恶性卵巢上皮性肿瘤组中Galectin-3、VEGF的阳性表达率为67.2.%和70.5%,明显高于良性组及交界性卵巢上皮性肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。在恶性卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3、VEGF的表达与肿瘤分期、组织分化程度及转移密切相关(P<0.05)。而与肿瘤的类型及肿瘤患者患病年龄状况无关(P>0.05)。Galectin-3与VEGF在恶性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达呈正相关(r=0.739,P<0.05)。结论卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3及VEGF的表达情况,在一定程度上反映卵巢肿瘤的恶性程度,与肿瘤的分期及预后密切相关,可能成为判断卵巢上皮性肿瘤性质及预后的参考指标。     

半乳糖凝集素-3及其相关抑制剂的研究进展

目的半乳糖凝集素-3(galectin-3)是近年来肿瘤诊断和治疗的新靶点。目前,galectin-3相关抑制剂作为抗肿瘤药物的研究活跃,并取得了一定的研究成果。本文综述了galectin-3在肿瘤细胞凋亡、转移中的作用和近年来galectin-3抑制剂的研究进展。     

半乳糖凝集素-3对心力衰竭的临床价值

半乳糖凝集素-3(galeetin-3,Gal-3)是一种糖结合蛋白,作为生物标志对心力衰竭(heart failure,HF)诊治价值的临床研究逐年增多.本文总结了近年有关临床试验,就Gal-3对HF的临床价值做一综述.这些研究显示Gal-3对于HF有一定的临床价值,有望成为继脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)和N-末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP)后HF的又一个重要的生物标志.Gal-3在HF预后方面是一个很强的预测因子,对于HF的诊断也可以作为NT-proBNP的重要补充.在患者与治疗的选择上,没有足够的证据显示其可以作为某种特定治疗的选择标志.而在纵向研究及治疗效果方面,Gal-3没有显示什么重要价值.作为生物标志,Gal-3当前尚不能作为临床决策的常规而写入指南.在以后的临床研究中尚需扩大人群样本,深入研究Gal-3与HF的病理生理过程的关联机制,以明确Gal-3如何指导HF的临床决策,药物和治疗方法的研发.     

乳腺癌组织中Galectin-3和基质金属蛋白酶-9的表达及临床意义

<正>Galectin-3是半乳糖凝集素家族的一员。很多研究表明它与细胞的黏附、分化和血管形成有关。有研究发现它与甲状腺癌、前列腺癌、结肠癌及胃癌等的侵袭转移有关[1]。本文旨在探讨Galectin-3与乳腺癌可能存在的关系。报告如下。1材料与方法1.1标本来源:收集山西医科大学第一医院2007年6月至     

Galectin-3 和β-catenin 在子宫内膜异位症中的表达及二者的相关性

目的探讨半乳糖凝集素-3（Galectin-3）和β连环素（β-catenin）在子宫内膜异位症（EMs）患者的异位内膜和在位内膜中的表达及其在EMs 发病中的作用及关系。方法应用免疫组织化学法检测34 例EMs 患者（EMs 组）的异位内膜和在位内膜及30 例非子宫内膜异位症（正常对照组）的在位子宫内膜中的半乳糖凝集素-3 和β连环素的表达情况,并分析二者的相关性。结果半乳糖凝集素-3 在EMs 组异位内膜、在位内膜及正常对照组在位内膜的阳性表达率分别为88.2%、85.3%、50.0%;β连环素在上述3 组的异常表达率分别为55.9%、52.9%、26.7%。EMs 异位内膜组、在位内膜组的半乳糖凝集素-3 的阳性表达率和β连环素的异常表达率均高于正常对照组（P＜0.05）。EMs 组异位内膜、在位内膜中的半乳糖凝集素-3 的阳性表达和β连环素的异常表达呈正相关（rs 分别为0.512、0.428,P＜ 0.01）。结论半乳糖凝集素-3 和β连环素可能在EMs 的发病中共同起着重要作用。     

建立稳定表达人有机阴离子转运体OAT1细胞的活性检测方法及抑制剂的筛选

摘 要 目的：建立稳定表达人有机阴离子转运体OAT1的细胞（hOAT1）中6-羧基荧光素浓度测定的荧光分析方法,并用于hOAT1细胞活性的测定及其抑制剂的筛选。方法：采用荧光分光光度法,检测波长为激发波长485 nm,发射波长520 nm,BCA法检测样品蛋白浓度。以6-羧基荧光素的荧光强度对蛋白浓度的比值作为衡量转运体OAT1活性的指标。结果：在hOAT1细胞中,6-羧基荧光素检测浓度的线性范围为0.08～3.2 μmol·L－1（r ＝ 0.999 1）,低、中、高浓度6-羧基荧光素溶液测定的日内RSD分别为6.08%、 2.66%、0.86%,日间RSD分别为7.83%、3.73%、0.72%,绝对回收率分别为（111.35 ± 9.8）%、（86.61 ± 3.89）%、（100.15 ± 1.10）%。抑制剂筛选结果显示 1 mmol·L－1缬沙坦、奥美沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、辛伐他汀、瑞舒伐他汀对hOAT1抑制率分别为103.45%、110.34%、93.41%、90.33%、79.84%、95.22%。结论：本方法简单易行,可用于hOAT1细胞活性测定,缬沙坦、奥美沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、辛伐他汀、瑞舒伐他汀对hOAT1存在抑制作用。     

选择性环氧合酶-2抑制剂体外筛选模型的建立

目的:建立选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂筛选模型。方法:以脂多糖(LPS)为刺激剂刺激大鼠腹腔巨噬细胞产生前列腺素E2(PGE2),采用放免法确定最佳刺激浓度和时间,以选择性COX-2抑制剂戊地昔布和达布非隆(darbufelone)为阳性对照药验证实验模型。结果:达布非隆和戊地昔布对COX-2和COX-1的半数抑制浓度(IC50)的比值分别为3．175×10-4和3．576×10-3。结论:本实验建立的COX-2抑制剂筛选模型比较灵敏,可靠,可用于选择性COX-2抑制剂的筛选。     

卵巢癌患者血清Galectin-3水平及诊断价值研究

目的 观察卵巢癌患者血清半乳糖苷酶-3(Galectin-3)水平,并探讨其用于卵巢癌诊断的临床价值.方法 纳入2010年6月至2015年12月就诊的初治卵巢癌患者92例,并设置良性卵巢肿瘤组(n=44)及健康对照组(n=43).患者初次就诊时收集一般情况并检测血清CA125及HE4,收集剩余血清检测Galectin-3水平.分析Ga-lectin-3与临床检测指标的相关性,并使用ROC曲线评估其用于卵巢癌的诊断价值.结果 卵巢癌患者Galectin-3[(1&.64±0.68)ng/ml]显著高于良性卵巢肿瘤组[(0.86±0.42)ng/ml]及健康对照组[(0.69±0.20)ng/ml],临床分期较高及存在远处转移患者Galectin-3水平更高.卵巢癌组中,Galectin-3与CA125(r=0.431,P<0.001)、HE4(r=0.331,P=0.001)及临床分期(rs=0.431,P<0.001)显著正相关.Galectin-3单独诊断卵巢癌的AUC为0.861(95%CI:0.804~0.918),其联合CA125及HE4的AUC为09.16(95%CI:0.871~0.961).结论 卵巢癌患者血清Galectin-3显著升高,且与临床分期显著相关.Galectin-3联合CA125及HE4可提高对卵巢癌的诊断效能.     

芳香化酶抑制剂筛选模型的建立

目的　建立筛选特异性芳香化酶抑制剂的筛选模型。方法　用胎盘的微粒体作为芳香化酶的酶源 ,以 [1β 3 H]雄烯二酮作为反应底物 ,通过测得产物3 H2 O的放射能来检测芳香化酶的活性。结果　建立了通过测定产物3 H2 O的放射能来检测芳香化酶活性的3 H2 O法。对该方法的反应动力学研究发现底物雄烯二酮的Vmax=33 3pmol·(min·mgpro tein) -1,Km=113nmol·L-1。用此方法作为芳香化酶抑制收稿日期 :2 0 0 4-0 3 -19,修回日期 :2 0 0 4-0 4-19资金项目 :国家重大科技专项“创新药物和中药现代化”资助项目作者简介 :全海天 ( 1980 -) ,男 ,博士生 ,研究方向 :肿瘤药理 ,Tel:0 2 1 5 0 80 660 0 2 5 17,E mail:haitianquan @hotmail.com ;楼丽广 ( 1967-) ,男 ,研究员 ,通讯作者 ,研究方向 :肿瘤药理 ,Tel:0 2 1 5 0 80 60 5 6,Fax :0 2 1 5 0 80 70 88,E mail:lglou @mail.shcnc .ac .cn剂的筛选模型 ,测得抗肿瘤药物exemestane对酶的抑制为不可逆抑制 ,其IC50 =70nmol·L-1,与文献报道相当。结论　此方法可以作为芳香化酶抑制剂的筛选模型 ,用来筛选以芳香化酶为靶点的药物。     

外周血半乳糖凝集素-3及脑钠肽与急性心肌梗死患者预后的关系

目的探讨急性心肌梗死患者外周血循环中Galectin-3及BNP浓度变化与其危险度及预后的关系。方法选取确诊为急性心肌梗死患者80例,入院后24 h内检测外周血Galectin-3浓度,所有患者均定期随访6个月,观察外周血Galectin-3及BNP浓度与急性心肌梗死预后的关系。结果与健康对照组(40例)相比较,AMI组外周血Galectin-3及BNP浓度明显升高(P<0.01),且Galectin-3表达水平高的患者心血管事件发生率高(P<0.05)。结论 AMI组外周血半乳糖凝集素-3及BNP的表达水平可反映AMI的严重程度,可作为心血管事件预测指标。     

半乳糖凝集素-3在慢性心肾综合征中的诊断及其对预后判断的价值

目的 探讨血浆半乳糖凝集素-3(Gal-3)水平在慢性心肾综合征(CRS)患者中的诊断及其对预后判断的价值。方法 选取2013年8月至2014年1月池州市人民医院心血管内科因慢性心力衰竭而住院的患者104例,记录入选者一般临床资料,将纽约心功能分级(NYHA)Ⅲ~Ⅳ级并且肾小球滤过率(c-aGFR)<60 mL·min^-1·1.73 m^-2分为CRS组(21例)和非CRS组(83例),均空腹检测血浆Gal-3、血清氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、血清肌酐(Scr)以及血红蛋白(HGB)等水平,随访出院后3个月的再住院以及心血管终点事件的发生情况。结果 CRS组lgGal-3水平为(2.17±0.42)ng/L,非CRS组lgGal-3水平(1.58±0.39)ng/L,两组差异有统计学意义(P<0.05)。lgGal-3与lgNT-proBNP(r=0.520,P<0.05)、lgScr(r=0.506,P<0.05)均呈正相关。多因素logistic回归分析显示,Gal-3为慢性CRS的独立危险因素(P<0.05)。CRS组随访3个月的再住院以及心血管终点事件发生率均明显高于非CRS组,差异有统计学意义(P<0.05)。根据ROC曲线,Gal-3诊断慢性CRS的曲线下面积为0.842,最佳的界值为79.84 ng/L,敏感性为81.0%,特异性为80.7%。结论 血浆Gal-3在慢性CRS中具有一定的诊断价值,并可用于预测慢性CRS患者的短期预后。     

冠心病患者血清 Gal-3检测的临床价值分析

目的：通过测定冠心病（coronary heart disease,CHD）患者血清半乳糖凝集素-3（Galectin-3,Gal-3）水平,分析其与高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、单核细胞趋化因子-1（MCP-1）的相关性,探讨 Gal-3在 CHD 患者中的临床价值。方法收集经冠状动脉造影确诊的 CHD 患者194例作为 CHD 组,其中稳定型心绞痛组62例,不稳定型心绞痛组70例,急性心肌梗死组62例,并收集冠脉造影正常的非 CHD 患者30例作为对照组。采集入选病例一般临床资料,检测其血清 Gal-3、MCP-1及血浆 hs-CRP 浓度。结果CHD 组血清 Gal-3水平明显高于对照组（P ＜0．05）,不稳定型心绞痛组和急性心肌梗死组血清 Gal-3水平显著高于稳定性型心绞痛组（P ＜0．05）,而急性心肌梗死组血清 Gal-3水平高于不稳定型心绞痛组,但差异无统计学意义（P ＞0．05）;CHD 患者血清 Gal-3水平与 hs-CRP、MCP-1水平显著正相关（P ＜0．05）。结论CHD 患者血清 Gal-3水平明显增高,血清 Gal-3有望成为急性冠脉综合征新的生化标志物,具有重要的临床意义。联合检测 Gal-3、hs-CRP 及 MCP-1对 CHD 的早期诊断、危险分层及预后具有重要临床意义。     

HIV-1核衣壳蛋白NCp7抑制剂体外筛选方法的建立

目的表达HIV-1核衣壳蛋白(nucleocapside proteinp7,NCp7),并建立抑制剂筛选方法。方法从pBRU2/ADP202质粒经PCR得到HIV-1NCp7编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1NCp7表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,以IPTG诱导,细胞裂解液经Q SepharoseH.P和SP Sepharose H.P纯化后纯度达到90%以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和2,2′-联硫基二吡啶(2,2′-di-thiodipyridine,AT-2)与NCp7作用,用锌离子特异的荧光染料检测。用该方法检测KIZ-CM系列化合物。结果可以检测H2O2和AT-2的锌离子逐出活性,经该方法筛选,KIZ-CM10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性。结论在国内首次建立了HIV-1NCp7锌离子逐出方法,该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。     

3-氧葡萄糖醛酮体外生成AGEs模型的建立

目的:建立可用于药物筛选的体外蛋白质非酶糖基化模型.方法:37℃孵育l周后用流动注射法于波长(λEx/Em);370/440 am处测定糖基化终产物(AGEs). 结果:反应l周后,反应体系内3-脱氧葡萄糖醛酮(3-DG)浓度与AGEs的吸收度值呈线性关系,y=22.946x 22.846;r=0.998 5. 结论:随着各反应体系中底物3-DG浓度的增加及反应时间的延长.蛋白质非酶糖基化反应增强3-DG为底物与牛血清白蛋白组成反应系统,能较可靠地反映AGEs的生成变化,有望成为体外蛋白质非酶糖基化的1种新模型.     

3-脱氧葡萄糖醛酮体外生成AGEs模型的建立

目的：建立可用于药物筛选的体外蛋白质非酶糖基化模型。方法：37℃孵育1周后用流动注射法于波长（λ：Ex／Em）：370／440nm处测定糖基化终产物（AGEs）。结果：反应1周后，反应体系内3-脱氧葡萄糖醛酮（3．DG）浓度与AGEs的吸收度值呈线性关系，y=22．946x＋22．846；r^2=0．9985。结论：随着各反应体系中底物3-DG浓度的增加及反应时间的延长，蛋白质非酶糖基化反应增强3-DG为底物与牛血清白蛋白组成反应系统，能较可靠地反映AGEs的生成变化，有望成为体外蛋白质非酶糖基化的1种新模型。