肺出血新生大鼠肺表面活性蛋白A、B表达变化的研究

目的:探讨肺出血新生大鼠肺组织肺表面活性蛋白A、B(SP-A和SP-B)表达的变化及其发生机制。方法:腹腔注射脂多糖(LPS)5mg/kg致新生大鼠肺出血,生理盐水(NS)对照组注射等量NS,观察不同时间点肺组织的病理改变,采用免疫组化、ELISA、Western blot和RT-PCR的方法分别检测肺组织SP-B、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB抑制蛋白(IκBα)蛋白及SP-A、SP-B和TNF-αmRNA的表达。结果:LPS致新生大鼠肺出血时肺内可见多形核中性粒细胞浸润,Ⅱ型肺泡上皮细胞受损;注射LPS后,SP-B蛋白和SP-B、SP-A mRNA表达分别于用药后1h、2h和4h显著低于NS对照组;LPS作用后,IκBα蛋白表达于0.5h显著低于NS对照组,而TNF-αmRNA和蛋白表达于用药后0.5h和1h显著高于NS对照组。结论:肺出血致新生大鼠肺组织内SP-B蛋白和SP-A、SP-B mRNA表达显著降低,肺内IκBα的降解和TNF-α增加及多形核中性粒细胞浸润、Ⅱ型肺泡上皮细胞破坏可能是其重要机制。     

表皮生长因子和地塞米松对胎鼠肺表面活性物质蛋白表达的影响

目的:比较表皮生长因子(EGF)和地塞米松(DX)对胎鼠肺表面活性物质蛋白(SP)-A、B、C表达的影响。方法:采用SD大鼠21只,在妊娠15天分别静脉注射DX(DX组)、EGF(EGF组)和生理盐水组,每组7只。于妊娠18d和21d处死妊娠鼠取胎肺。采用westernblot检测胎肺SP-A、SP-B、SP-C的表达。结果:Westernblot检测显示,早产鼠胎肺SP-B蛋白表达在EGF和DX组比对照组增加,差异具有明显的显著性(P<0.05),但EGF组和DX组比较,差异无明显的显著性(P>0.05)。结论:EGF和DX均可促进胎鼠肺SP-B的表达。     

被动吸烟孕鼠胎盘的病理学改变

目的 :检查被动吸烟对孕鼠胎盘的影响。方法 :选择健康、成熟SD大鼠 ,均于妊娠第 1～ 2 0d ,仿Younoszai法制造被动吸烟模型 ,观察被动吸烟妊娠大鼠胎盘形态结构和胎仔情况。结果 :孕鼠被动吸烟可引起动物胎盘出现下列病理改变 :①胎盘周缘呈现不同程度的苍白带 ;②绒毛间有血细胞渗出 ,上皮细胞水肿变性 ;③血管内、组织间出现纤维素沉积和微血栓形成 ;④滋养层细胞微绒毛明显变短、变粗、变形 ,并发生脱落、坏死。结论 :孕期大鼠被动吸烟会造成胎盘明显受损     

先天性异常与优生学

041 78 5　孕期被动吸烟对新生儿大鼠肺SP -A和SP -BmRNAs表达影响的研究 /蔡栩栩…∥中国现代医学杂志 — 2 0 0 4 ,1 4( 1 1 ) — 1 0～ 1 3研究孕期被动吸烟对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B(SP -A ,SP -B)基因表达的影响 ,探讨产前被动吸烟对新生大鼠肺损伤的机制。方法 :分     

孕期吸烟对SD大鼠胚胎心脏发育的影响

目的探讨孕期吸烟对SD大鼠胚胎心脏发育的影响及分子机制。方法将24只怀孕SD母鼠随机分为4组:正常对照组、10支烟/d组、20支烟/d组、40支烟/d组,每组6只,并于孕期0.5 d(GD 0.5)后开始给予吸烟处理直至分娩。采用超声多普勒Vevo2000检测出生后1 d的新生乳鼠的左心结构及其心脏功能;采用Color-Doppler检测心室血流方向,以确认室间隔的发育是否异常。心功能检测完毕后,收集各组新生乳鼠心脏组织,采用Western-blot检测心肌特异转录因子GATA4的表达量。结果各组新生乳鼠心脏重量无明显差异,40支烟/d处理组乳鼠体重显著下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.001)。孕期持续给予40支烟/d被动吸烟处理能显著降低左心室重量、左心室舒张/收缩末期前壁厚度和左心室舒张/收缩末期后壁厚度,差异均有统计学意义(P0.05)。孕期给予20支烟/d和40支烟/d处理后,新生乳鼠的GATA4蛋白表达呈剂量依赖性下调,40支烟/d组与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论母鼠在怀孕期间接受被动吸烟后,引发后代新生乳鼠的心功能受损,其机制可能与下调心肌特异转录因子GATA4表达相关。     

孕期染毒PFOS对雄性胎鼠生殖系统的影响

目的评价孕鼠染毒全氟辛烷磺酸盐(PFOS)对胚鼠生殖系统的影响。方法取孕鼠16只随机分为4组:0.05%TW-20(对照组)、5 mg/(kg.d)低剂量灌胃组、10 mg/(kg.d)中剂量灌胃组、20 mg/(kg.d)高剂量灌胃组,各4只。SD大鼠从怀孕第11天开始灌胃给予PFOS,第19天结束灌胃,第20天处死孕鼠取组织。观察测量平均妊娠胎鼠数、胎鼠雌雄比例和雄性胎鼠体质量、睾丸重量,采用real-time聚合酶链反应法测定睾丸Cyp17α1的相对表达量。结果四组孕鼠平均妊娠胎鼠数、雄性胎鼠体质量、睾丸重量比较差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组比较,各给药组睾丸内Cyp17α1 mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论孕期染毒PFOS对胚胎发育和雄性生殖系统有毒性作用,不同剂量具有不同的效应。     

颈动脉负压分流制作大鼠全脑缺血/再灌注模型

为观察被动吸烟大鼠肺泡灌洗液炎性细胞及呼吸道病理形态学改变,将清洁级SD大鼠随机分成两组,吸烟组(n=13)置于隔离器内被动吸烟2 h/d,共20 d,对照组置隔离器内2 h/d,无被动吸烟.20 d后行支气管肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞计数及分类,并作右总支气管气道表面电镜下的病理形态学观察及肺组织学检查.结果显示吸烟组大鼠BALF中炎性细胞计数为(46.1±28.3)×106/L,较对照组(17.7±9.9)×106/L明显增高(P《0.05).光镜检查示吸烟组小气道和肺组织炎性细胞浸润,扫描电镜观察见柱状上皮细胞纤毛倒伏凌乱,部分脱落;对照组未见明显异常.烟雾刺激导致大鼠呼吸道炎性细胞增多,炎症反应增强及纤毛功能减退,因而被动吸烟可能是引起呼吸道损伤的重要因素.     

川芎嗪对被动吸烟孕鼠的子代大脑皮质环氧化酶-2表达的影响

目的:探讨孕期母鼠被动吸烟对仔鼠大脑皮层环氧化酶-2(COX-2)的表达的影响和川芎嗪的治疗作用。方法:孕鼠随机分为对照组、被动吸烟未治疗组和被动吸烟川芎嗪治疗组;被动吸烟未治疗组和被动吸烟川芎嗪治疗组于孕8 d至分娩(约相当于孕中晚期)被动吸烟,且治疗组在被动吸烟后给予川芎嗪40 mg/kg腹腔注射;免疫组织化学方法检测仔鼠大脑皮质中COX-2的表达。结果:被动吸烟组仔鼠大脑皮质内COX-2的表达较对照组明显增多,被动吸烟川芎嗪治疗组COX-2表达较被动吸烟未治疗组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:孕鼠被动吸烟可致仔鼠大脑皮质内COX-2表达增多,表明脑组织受到损伤,而川芎嗪对被动吸烟引起的脑损伤具有保护功能。     

Altered surfactant protein A gene expression and protein homeostasis in rats with emphysematous changes

Background The decrease of surfactant protein （SP） secreted by the alveolar type Ⅱ cell is one of the important causes of limiting air of pulmonary emphysema. However, the SP-A gene and protein changes in this disease are rarely studied. This study was undertaken to investigate alterations in SP-A gene activity and protein, and to explore their roles in the pathogenesis of emphysematous changes.
Methods Twenty Wistar rats were divided randomly into a normal control group （n=10） and a cigarette smoking （CS） ＋ lipopolysaccharide （LPS） group （n=10）. Ultra-structural changes were observed under an electron microscope. The number of cells positive for SP-A was measured by immunohistochemistry. The mRNA expression and protein level of SP-A in the lung tissues were determined by quantitative polymerase chain reaction （qPCR） and Western blot separately. The protein level of SP-A in lavage fluid was determined by Western blot.
Results The number of cells positive for SP-A of the CS＋LPS group （0.35±0.03） was lower than that of the blank control group （0.72±0.06, P 〈0.05）. The level of SP-A in the lung tissues of rats in the CS＋LPS group （0.2765±0.0890） was lower than that in the blank control group （0.6875±0.1578, P 〈0.05）. The level of SP-A in the lavage fluid of rats in the CS＋LPS group （0.8567±0.1458） was lower than that in the blank control group （1.3541±0.2475, P 〈0.05）. The lung tissues of rats in the CS＋LPS group showed an approximate increase （0.4-fold） in SP-A mRNA levels relative to β-actin mRNA （P 〈0.05）.
Conclusions The changes of SP-A may be related to emphysematous changes in the lung. And cigarette smoke and LPS alter lung SP-A gene activity and protein homeostasis.     

围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B基因表达的影响

目的：研究围产期缺血缺氧对新生大鼠肺表面活性蛋白A、B（SP－A，SP－B）基因表达的影响，探讨产期缺血缺氧新生大鼠肺损伤机制。方法；通过结扎孕鼠一侧子宫角血管（其另一侧宫内胎鼠作为对照），建立围产期缺血缺氧动物模型。采用RT－PCR半定量分析法观察不同程度缺血缺氧新生大鼠肺组织SP－A，SP－B,mRNA的表达。结果：正常21d胎鼠肺组织SP－A，SP－BmRNA已的明显的表达，宫内缺血缺氧20min时，新生大鼠肺组织SP－A，SP－B mRNA表达减弱，并随缺血缺氧时间的延长而逐渐加生。结论：围产期缺血缺氧致新生大鼠SP－A，SP－B mRNA表达减弱可能是新生大鼠肺损伤的重要机制。     

高原RDS表面活性物质相关蛋白A、B、C mRNA表达的变化

目的：观察高原ＲＤＳ时ＳＰ－Ａ,ＳＰ－Ｂ和ＳＰ－Ｃ ｍＲＮＡ表达与影响因素,了解其变化情况,并探讨其在急性肺损伤中的作用机制及意义。方法：采用高原ＲＤＳ动物模型,利用分子生物学技术观察肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞表面活性蛋白及其基因的表达。     

肺表面活性物质相关蛋白B在人胎肺发育中的表达及意义

目的 检测肺表面活性物质相关蛋白B（SP-B）在人胎肺发育过程中的表达特征,探讨其在胎肺上皮细胞发育、分化及其肺功能建立中的作用。方法 由孕妇自愿捐献的胎龄为10周～34周胎肺组织37例及生后28d的内正常肺组织2例．用免疫组织化学技术检测SP-B的表达。结果 SP-B在胎肺发育第16周已开始表达,定位于上皮细胞胞浆,发育早期主要表达于高柱状的未分化的上皮细胞,随着支气管的发育分化,由呼吸道的近端逐渐向远端迁移;到原始肺泡期稳定表达于AECⅡ及其前体细胞,其反应强度增加不明显,出生后SP-B阳性反应较出生前明显增强;纤毛细胞和AECI无表达。结论 在胎肺发育的过程中,SP-B的分泌反映着肺泡上皮细胞发育成熟,与适应出生后执行功能的需要密切相关。     

吸入异氟烷对大鼠肺表面活性蛋白-A的影响

目的:观察大鼠在吸入不同浓度异氟烷后,肺表面活性蛋白-A(surfactant protein-A,SP-A)的含量及其基因表达的改变.方法:雄性Wistar大鼠32只随机分为对照组(Control),0.7%(体积分数)异氟烷组,1.5%异氟烷组和2.0%异氟烷组,每组8只.各组分别吸入40%(体积分数)O2和设定浓度的异氟烷8 h,对照组只吸入40%O2 8 h,然后迅速处死大鼠.取肺组织用透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞结构变化.检测支气管肺泡灌洗液中和Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量以及肺组织中SP-AmRNA的表达.结果:吸入异氟烷后,1.5%异氟烷组和2.0%异氟烷组的肺泡Ⅱ型上皮细胞可见明显形态学改变.各吸入异氟烷组的支气管肺泡灌洗液中SP-A的含量均较对照组显著下降(Control组,437 112±25 654;0.7%异氟烷组,355 789±28 116;1.5%异氟烷组,238 554±31 531;2.0%异氟烷组,223 632±25 710;P＜0.01);1.5%异氟烷组和2.0%异氟烷组较0.7%异氟烷组下降更明显(P＜0.01).免疫组化显示:1.5%异氟烷组与2.0%异氟烷组与对照组肺泡Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量明显下降,而0.7%异氟烷组较对照组无明显变化.吸入异氟烷的各组SP-A mRNA的表达均有降低趋势,1.5%异氟烷与2.0%异氟烷组与对照组比较差异有统计学意义(Control组,1.47±0.18;1.5%异氟烷组,1.19±0.13;2.0%异氟烷组,1.13±0.12;P＜0.01).结论:吸入1.5%或更高浓度的异氟烷8 h,可降低大鼠肺组织SP-A的基因表达和蛋白合成,并可能影响其分泌和再摄取.     

干细胞动员对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺表面活性物质的保护作用及其机制研究

目的 探讨干细胞动员对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺表面活性物质的保护作用与机制。 方法 将40只Wistar大鼠随机分2组:COPD组、COPD-rhG-CSF组各20只;均采用熏烟加气管注入脂多糖(LPS)制备COPD大鼠模型;此外,COPD-rhG-CSF组尾静脉注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF),COPD组注射等体积生理盐水。于模型制备成功后当天(0 d)、14 d、28 d观察肺组织病理,并分别采用免疫组化实验、RT-PCR实验及WB实验检测CC16和肺表面活性蛋白A (SP-A)表达水平。 结果 模型制备成功后,2组肺组织病理切片肺泡数减少、肺泡腔不规则扩大,肺泡间隔断裂,随着时间延长,COPD组持续加重,但COPD-rhG-CSF组较COPD组有所缓解。免疫组化实验结果显示COPD-rhG-CSF组在0 d、14 d、28 d的CC16和SP-A表达强度高于COPD组,组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。RT-PCR和WB实验结果显示COPD-rhG-CSF组在0 d、14 d、28 d的CC16和SP-A表达水平高于COPD组,组间差异有统计学意义(均P<0.05)。 结论 干细胞动员能够提高COPD大鼠肺表面CC16和SP-A表达,促进肺组织修复,可能为其发挥肺保护作用的重要机制之一。      

博莱霉素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的损伤

目的探讨博莱霉素(BLM)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)功能的损伤作用.方法向SD大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,对照组注人生理盐水,分别于7、14和28 d在1.5%戊巴比妥钠麻醉下行支气管肺泡灌洗,膜天平法测定肺表面物质(PS).活性.不同浓度博莱霉素直接刺激培养正常成年大鼠的AT-Ⅱ,荧光定量(FQ)PCR检测AT-Ⅱ表面活性物质蛋白(SP)A、B及水通道蛋白(AQP2)mRNA的表达.结果7 d模型组动物出现低氧血症及PS活性明显降低;14 d逐渐好转,但仍然低于正常;28 d基本恢复正常.BLM刺激AT-Ⅱ组与空白对照组比较,SP-A、SP-B及AQP1 mRNA表达均明显降低(P＜0.001).结论博莱霉素具有细胞毒性,可降低AT-Ⅱ分泌的SP-A、SP-B及AQP1 mRNA的表达,使PS系统功能异常,从而导致低氧血症及肺水肿的发生.     

抑制SCD1对被动吸烟小鼠肺部炎症的影响

目的 研究硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1）对被动吸烟小鼠肺部炎症水平的影响。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照（CON）组、SCD1抑制剂（CAY）组、吸烟（Smoke）组及吸烟加抑制剂（Smoke+CAY）组,每组11~14只,记录各组小鼠体重及肝脏系数。RT-qPCR及Western blot检测CON组与Smoke组内SCD1表达水平。肺组织HE病理染色、肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）蛋白浓度测定及细胞计数比较肺部炎症损伤水平。ELISA检测BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。电化学发光法检测血浆中IL-4、IL-10、IL-13水平。结果 被动吸烟小鼠肺内SCD1水平升高。给予SCD1抑制剂后,小鼠体重减轻、肝脏系数降低。Smoke+CAY组小鼠较其他组肺部炎症改变明显,BALF中蛋白浓度、细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显升高。各组血浆中IL-4、IL-10、IL-13水平变化不明显。结论 吸烟后小鼠肺内SCD1水平升高,且抑制SCD1会加重被动吸烟小鼠肺部炎症损伤。